专利名称：具有增强的酶活性的酶学伤口清创组合物的制作方法
技术领域：
本发明总体涉及局部用酶学伤口清创组合物和用于治疗需要清创的伤口的方法。
背景技术：
伤口愈合是一个复杂的过程，其经常因为伤口区域中无活力坏死组织的存在而进一步复杂化。清创是从伤口移除无活力组织的过程，以阻止或减少感染并利于愈合。含有如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、舒替兰酶和胶原蛋白酶等蛋白水解酶的局部用组合物已经用于酶学伤口清创。通常，护理标准是每天一次地(每24小时一次)在需要清创的伤口上应用组合物，或者如果组合物被污染，要更加频繁。因为许多蛋白水解酶在水基组合物中容易降解，所以许多伤口清创组合物是使用无水、疏水基质制备的， 所述基质例如US 3，821，364和US 6，479，060公开的凡士林、矿物油和/或植物油，这两个专利通过引用的方式并入。然而，基于疏水基质的酶学伤口清创组合物在伤口床的水性环境中通常是不混溶的，因此，蛋白水解酶与伤口床的接触通常会受阻。一些其它组合物是使用无水、亲水基质制造的，所述基质如US 6，548，556、US 2003/0198631、US 2003/0198632 中公开的丙二醇或泊洛沙姆，这三个专利通过引用的方式并入本文。
发明内容
本发明涉及具有增强的酶活性的局部用酶学伤口清创组合物。这些组合物包含含有至少一种蛋白水解酶和至少一种亲水多元醇的分散相；以及含有疏水基质的连续相。本发明的伤口清创组合物比现有技术的伤口清创组合物具有增强的酶活性。本发明一方面揭示了一种伤口清创组合物，其包含含有液态亲水多元醇和至少一种蛋白水解酶的分散相；以及含有疏水基质的连续相；其中液态亲水多元醇的量在液态亲水多元醇最佳量的±10% w/w内。例如，如果最佳量是约30% w/w，可以使用的液态亲水多元醇的量在总配方约20% w/w到约40% w/w之间，以获得配方的增强的酶活性。另一方面，液态亲水多元醇的量在液态亲水多元醇最佳量的±9%、8%、7%或6% w/w范围内。再一方面，液态亲水多元醇的量在液态亲水多元醇最佳量的±5%、4%、3%、2%、1%、0.5% 或O. I % w/w范围内。在包含(a)含有液态亲水多元醇和至少一种蛋白水解酶的分散相；以及(b)含有疏水基质的连续相的组合物中，“液态亲水多元醇的最佳量”可由本说明书具体实施方式
部分的A部分中描述的方法确定，其通过引用的方式并入该部分。在本说明书具体实施方式
部分的B部分中描述了用于确定组合物是否在液态亲水多元醇的最佳量±10% w/w之内的方法，其通过引用的方式并入。
对于具有不同蛋白水解酶的组合物，液态亲水多元醇的最佳量亦不同。另外，对于具有特定蛋白水解酶的组合物，其液态亲水多元醇的最佳量可以根据组合物的成分而不同。比如，在含有PEG-400和凡士林的胶原蛋白酶组合物中的液态亲水多元醇的最佳量可不同于在含有PEG-600和凡士林的胶原蛋白酶组合物中的液态亲水多元醇的最佳量，或者不同于含有泊洛沙姆-124和凡士林的胶原蛋白酶组合物。术语“亲水多元醇”意指含有至少两个羟基基团的水溶性、极性脂肪醇，包括但不限于聚合物多元醇(例如聚乙二醇和泊洛沙姆)。在描述“亲水多元醇”、“聚乙二醇”或“泊洛沙姆”的语境中，术语“液态”意指25°C 时材料处于液态。在描述“亲水多元醇”、“聚乙二醇”或“泊洛沙姆”的语境中，术语“固态”意指25°C 时材料处于固态。根据本发明的另一方面，公开了一种治疗需要清创的伤口的方法，包括在伤口上应用组合物，所述组合物包含含有液态亲水多元醇和具有有效清创浓度的至少一种蛋白水解酶的分散相；以及含有疏水基质的连续相；其中液态亲水多元醇的量在最佳量±10% w/ w内。另一方面，液态亲水多元醇的量在所述最佳量的±9%、8%、7%或6% /^范围内。再一方面，液态亲水多元醇的量在所述最佳量的±5%、4%、3%、2%、1%、0. 5%或O. 1% w/w 范围内。在某些实施例中，蛋白水解酶为金属蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、丝氨酸蛋白酶或天门冬氨酸肽酶。通常，对于包括金属蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶或丝氨酸蛋白酶的组合物，亲水多元醇的最佳量从约 10% ,11% >12% ,13% ,14% ,15% ,16% ,17% ,18% ,19%,20%, 21 22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 32%,33%,34%,35%, 36%,37%,38%,39% w/w到约40% w/w，或从中可推导的任何范围或数值量。对于包括天门冬氨酸肽酶的组合物，亲水多元醇的最佳量从约48 %、49 %、50 %、51 %、52 %、53 %、 54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61%,62%,63%,64%,65%,66%,67% w/w 到约 68% w/w或从中可推导的任何范围或数值量。在一实施例中，金属蛋白酶为胶原蛋白酶。 在另一实施例中，金属蛋白酶为胶原蛋白酶且亲水多元醇的最佳量从约10 %、11 %、12 %、 13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20%,21 %,22%,23%,24%,25%,26%,27%, 28%,29%,30%,31%,32%,33%,34%,35%,36%,37%,38%,39% w/w 到约 40% w/w 或从中可推导的任何范围或数值量。在一实施例中，金属蛋白酶为嗜热菌蛋白酶。在另一实施例中，金属蛋白酶为嗜热菌蛋白酶且亲水多元醇的最佳量从约19^^20^^21^^22 %、 23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 %,32%,33%,34%,35%,36%,37%, 38 % w/w到约39 % w/w或从中可推导的任何范围或数值量。在一实施例中，半胱氨酸蛋白酶为木瓜蛋白酶。在另一实施例中，半胱氨酸蛋白酶为木瓜蛋白酶且亲水多元醇的最佳量从约 19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、 34 %、35 %、36 %、37 %、38 % w/w到约39 % w/w或从中可推导的任何范围或数值量。在一实施例中，丝氨酸蛋白酶为胰蛋白酶。在另一实施例中，丝氨酸蛋白酶为胰蛋白酶且亲水多元醇的最佳量从约 4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16% 17%,18%,19%,20%,21%,22%,23% w/w到约24% w/w或从中可推导的任何范围或数值量。在一实施例中，天门冬氨酸肽酶为胃蛋白酶。在另一实施例中，天门冬氨酸肽酶为胃蛋白酶且亲水多元醇的最佳量从 48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、 58%,59%,60%,61%,62%,63%,64%,65%,66%,67% w/w 到约 68% w/w 或从中可推导
的任何范围或数值量。在某些实施例中，蛋白水解酶悬浮于分散相中。在其它实施例中，蛋白水解酶溶解于分散相中。在某些实施例中，液态亲水多元醇为液态聚乙二醇或液态泊洛沙姆，或其混合物。本发明的某些实施例中，分散相可进一步包括固态亲水多元醇以协助物理性地稳定该组合物或者降低或防止相分离。在某些实施例中，固态亲水多元醇为固态泊洛沙姆或固态聚乙二醇或其混合物。在本发明的各种实施例中，疏水基质包含凡士林、矿物油或植物油、或其混合物。 在一实施例中，所述基质包含凡士林。在另一实施例中，疏水基质包含植物油。在另一实施例中，疏水基质包含矿物油。在另一实施例中，疏水基质包含凡士林和矿物油、凡士林和植物油、矿物油和植物油、或凡士林、矿物油和植物油。还在另一实施例中，疏水基质包含植物油，其中植物油是蓖麻油。 在一实施例中，组合物为半固态。在另一实施例中，组合物为液态。在其它实施例中，组合物注入到垫子、纱布、或海绵中。在一实施例中，组合物是无菌的或无水的或者既无菌又无水。组合物可被包装成适合分配伤口清创剂的任何包装。组合物可以包装成多用途、 单剂量、或计量剂量的包装。非限制性例子包括管子、瓶子、罐子、泵式容器、压力式容器、气囊式容器、气溶胶容器、气溶胶喷雾容器、非气溶胶喷雾容器、注射器、小囊、或小袋。本发明的另一实施例中，公开了一种确定加到目标组合物中液态亲水多元醇的最佳量的方法，所述目标组合物包含含有蛋白水解酶的分散相以及含有疏水基质的连续相， 所述方法包括(I)获得包含分散相和连续相组成的一系列组合物，其中所述分散相进一步包含液态亲水多元醇，其中该系列组合物中的每一种组合物包含相同量的蛋白水解酶和不同量的液态亲水多元醇；(2)确定所述一系列组合物中的每一组合物的酶活性；(3)确定图上的最高点，所述图绘出相对于包含在所述一系列组合物的每一种组合物中的液态亲水多元醇的量的酶活性，其中图上的最高点与加到目标组合物中的液态亲水多元醇的最佳量相关。一方面，所述一系列组合物的酶活性可通过利用如本说明书中描述的体外人工焦痂测试模型测定。本发明的另一方面公开了一种增强目标组合物中酶活性的方法，所述目标组合物包含含有蛋白水解酶的分散相和含有疏水基质的连续相，所述方法包括(I)获得包含分散相和连续相的一系列组合物，其中所述分散相进一步地含有液态亲水多元醇，其中该系列组合物的每一种组合物都含有相同量的蛋白水解酶和不同量的液态亲水多元醇；(2)确定这一系列组合物中每一种组合物的酶活性；(3)确定图上的最高点，所述图绘出酶活性对对于包含在所述系列组合物的每一种组合物中的液态亲水多元醇的量，其中图上的最高点与加到目标组合物中的液态亲水多元醇的最佳量相关；(4)将液态亲水多元醇最佳量的 +10 % w/w加到目标组合物中，由此增加目标组合物中的酶活性。一方面，该系列组合物的酶活性可通过利用如本说明书中描述的体外人工焦痂测试模型测定。所述系列组合物中的多元醇的量可随机地或按选择的量在每种组合物间变化。在一实施例中，所述系列组合物的每一种组合物中的多元醇的量可以是组合物重量或体积计的 0%、0· 1%,O. 2%,O. 3%,O. 4%,0. 5%,0. 6%,0. 7%,0. 8%,0. 9%U%>2%,3%,4%, 5%,6%,7%,8%,9%U0%U1 %>12%,13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20%, 21 %,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,31 %,32%,33%,34%,35%, 36%,37%,38%,39%,40%,41 %,42%,43%,44%,45%,46%,47%,48%,49%,50%, 51 %,52%,53%,54%,55%,56%,57%,58%,59%,60%,61 %,62%,63%,64%,65%, 66%,67%,68%,69%,70%,71 %,72%,73%,74%,75%,76%,77%,78%,79%,80%, 81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,88%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%, 96%,97%,98%,99%,99. I % ,99. 2 % ,99. 3 % ,99. 4 % ,99. 5 % ,99. 6 % ,99. 7 % ,99. 8 %, 99. 9%、或 100%。术语“无水的”意指组合物含有相对于总组合物少于 约5% w/w、或少于约3% w/ W、或少于约1% w/w、或少于约O. 5% w/w、或少于约O. 1% w/w的，或0%的游离水或添加的水，不考虑水合水、结合水、或在任何的组合物原始成分中存在的一般湿度水平。除非另有说明，这里表达的百分值是重量比重量，并且是相对于总组合物而言的。当与权利要求书和/或说明书中的术语“包括”或“含有”联合使用时，单词 “一” (“a”或“an”)的使用意指“一个”，但是其也与“一个或多个”、“至少一个”、“一个和多于一个”的意思相一致。在整个本申请中，术语“约”用于表明数值包括对于获得该数值的装置、用来测定该数值的方法来说，误差的固有变化，或者在评估对象中存在的变化。如在本说明书和权利要求书中所使用，单词“包含”(和“包含“的任意形式)、“具有”(和“具有”的任意形式)、“包括”(和“包括”的任意形式)或“含有”(和“含有”的任意形式)是包含性的或开放式的，不排除另外的未说明的成分或方法步骤。当用于权利要求书和/或说明书时，术语“治疗”、“抑制” “防止”或“减少”、或这些术语的任何变化包括任何可测量的降低或完全抑制，以取得期望的结果。当在说明书和/或权利要求书中使用时，术语“有效的”意指足够获得期望的、预期的、或预设的结果。组合物和方法针对其应用可以“包含”整个说明书中公开的任何成分或步骤”或者 “基本上由其组成”或“由其组成”。关于过渡词语(transitional phase) “基本上由...组成”，在一非限制性方面，在本说明书中公开的组合物和方法的基本且新颖的特征包括组合物的增强的酶活性。本发明的其它目的、特征和优点会从以下详细说明中变得明显。然而应当理解的是，当表明本发明的具体实施方案时，具体实施方式
和具体的实例仅通过示例性的方式提供，因为在本发明精神和范围内所作的各种改变和变动对于本领域的技术人员是显而易见的。
图I. 一系列组合物的体外胶原溶解活性(mg/mL) (y-轴)相对于包含在所述系列组合物中的PEG-400百分比(X-轴)的图，所述组合物包含含有胶原蛋白酶和PEG-400的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。图2. —系列组合物的体外胶原溶解活性(mg/mL) (y-轴)相对于包含在所述系列组合物中的PEG-600百分比(X-轴)的图，所述组合物包含含有胶原蛋白酶和PEG-600的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。图3. —系列组合物的体外胶原溶解活性(mg/mL) (y-轴)相对于包含在所述系列组合物中的泊洛沙姆-124百分比(X-轴)的图，所述组合物包含含有胶原蛋白酶和泊洛沙姆-124的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。图4. 一系列组合物的体外胶原溶解活性(mg/mL) (y-轴)相对于包含在所述系列组合物中的PEG-400百分比(X-轴)的图，所述组合物包含含有胰蛋白酶和PEG-400的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。图5. —系列组合物的体外胶原溶解活性(mg/mL) (y-轴)相对于包含在所述系列组合物中的PEG-400百分比(X-轴)的图，所述组合物包含含有木瓜蛋白酶和PEG-400的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。图6. —系列组合物的体外胶原溶解活性(mg/mL) (y-轴)相对于包含在所述系列组合物中的PEG-400百分比(X-轴)的图，所述组合物包含含有嗜热菌蛋白酶和PEG-400 的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。图7. —系列组合物的体外胶原溶解活性(mg/mL) (y-轴)相对于包含在所述系列组合物中的PEG-400百分比(X-轴)的图，所述组合物包含含有胃蛋白酶和PEG-400的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。 图8.来自一系列组合物的胶原蛋白酶的物理释放(mg) (y-轴)相对于包含在该系列组合物中的PEG-400百分比(X-轴)的图，所述组合物包含含有胶原蛋白酶和PEG-400 的分散相，所述分散相分散到含有白凡士林的疏水相中。图9.与水包油乳霜相比，白凡士林包PEG分散体中的酶稳定性。图10.在猪烧伤伤口中，移除焦痂的清创功效。
具体实施例方式本发明一方面提供了具有增强的酶活性的局部用酶学伤口清创组合物。这些组合物包含含有至少一种蛋白水解酶和亲水多元醇的分散相；以及含有疏水基质的连续相。本发明的一方面，所述亲水多元醇是液态亲水多元醇。发现，本发明组合物即，疏水基质中的亲水多元醇和蛋白水解酶的分散体的酶活性(例如体外胶原溶解)，不仅高于仅基于蛋白水解酶和疏水基质组合(例如，没有如亲水多元醇的亲水相)的酶组合物的酶活性，而且令人惊讶地高于那些仅基于蛋白水解酶和亲水基质组合(例如，没有如凡士林的疏水相)的酶组合物的酶活性。由于酶在水存在时被激活，因此预期在只基于蛋白水解酶和亲水基质组合的组合物中出现最高的酶活性，在此， 所述基质在水中将完全混溶，并且此条件最有利于酶的释放和活化。然而，本发明的亲水和疏水相的分散体组合物具有与亲水多元醇的最佳量相关的最高酶活性，所述最佳量高于组合物中亲水多元醇的0%并低于100%。期望地发现，在单一基于亲水载体的组合物中的物理性酶释放高于在单一基于疏水载体的组合物中的酶释放，也高于本发明的组合物。从在图8中所示，酶释放曲线通常随增高的亲水多元醇(PEG-400)百分比而增高，在100%时具有最高的释放，在0%时具有最低的释放。然而，令人惊讶地是，本发明的分散体组合物的酶活性更高(参看图1-7)。因此，这些分散体组合物的酶活性曲线并不像预期的那样与物理性酶释放曲线相关。本发明的组合物适于通过将组合物应用到伤口从而治疗需要清创的伤口，所述组合物包含含有亲水多元醇和有效清创浓度的至少一种蛋白水解酶的分散相；以及含有疏水基质的连续相；其中，亲水多元醇的量在最佳量的±10% w/w范围内，或最佳量的±9%、 8%、7%或6%w/w范围内，或亲水多元醇最佳量的±5%、4%、3%、2%、1%、0. 5%或O. 1% w/w范围内。在以下部分进一步详细讨论本发明的这些及其它非限制性方面。A.确定液态亲水多元醇最佳量的方法以下方案可用于制备一系列的组合物(称为“系列组合物”)，随后确定可用于本发明的分散体中的液态亲水多元醇的最佳量。i^一 (11)种组合物可用于生成系列组合物。注意蛋白水解酶的量w/w)在系列组合物中保持恒定。以下步骤可用来制备这十一(11)种组合物(i)确定用于系列组合物的成分(例如，液态亲水多元醇、蛋白水解酶、疏水基质) 并选择要使用的蛋白水解酶的量。举例来说，液态亲水多元醇(如PEG 400)、蛋白水解酶 (如1% w/w的胶原蛋白水解酶)和疏水基质(如白凡士林)。 (ii)对于系列组合物中的组合物一，使用0%的液态亲水多元醇，使用选择量的蛋白水解酶，用疏水基质补足混合物至100%。例如，参考上面的步骤(i)，系列组合物的组合物一将具有PEG 4000% w/w、白凡士林99% w/w和胶原蛋白酶I % w/w。(iii)对于系列组合物的组合物二，使用10% w/w的液态亲水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基质补足混合物至100%。(注意，允许在液态亲水多元醇的组成中，作为必要使用一些固态亲水多元醇，使得对于系列组合物中的组合物产生物理性稳定的分散体)。(iv)对于系列组合物的组合物三，使用20% w/w的液态亲水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基质补足混合物至100%。(V)对于系列组合物中的组合物四，使用30% w/w的液态亲水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基质补足混合物至100%。(vi)对于系列组合物的组合物五，使用40% w/w的液态亲水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基质补足混合物至100%。(vii)对于系列组合物的组合物六，使用50% w/w的液态亲水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基质补足混合物至100%。(viii)对于组合物系列中的组合物七，使用60% w/w的液态亲水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基质补足混合物至100%。(ix)对于组合物系列中的组合物八，使用70 % w/w的液态亲水多元醇和相同份额的蛋白水解酶，用疏水基质补足混合物至100%。(X)对于组合物系列中的组合物九，使用80% w/w的液态亲水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基质补足混合物至100%。(xi)对于系列组合物的组合物十，使用90% w/w的液态亲水多元醇和相同量的蛋白水解酶，用疏水基质补足混合物至100%。(xii)对于系列组合物的组合物i^一，使用0%的疏水基质和相同量的蛋白水解酶，用亲水多元醇补足混合物。(xiii)如本说明书具体实施方式
的部分H所述，使用体外人工焦痂测试模型，针对以下样品米集时间6、12、18和24小时,测定系列组合物中的^ 种组合物的每一种组合物的酶活性。(ivx)累积各数据采集时间，绘制针对每种组合物的酶活性相对于系列组合物的每一种组合物中存在的液态亲水多元醇的相关量曲线。对于累积24小时数据收集时间，曲线上的最高点与可用于分散体的液态亲水多元醇的最佳量相关。进一步地，如果在系列组合物中可以包含多种成分(例如，一或多种多元醇、一或多种蛋白水解酶、疏水基质、分散相内的附加成分和/或连续疏水相内的附加成分)，系列组合物可以通过如下步骤生成(I)对于系列组合物的每一种组合物，如以上讨论改变亲水多元醇的量，(2)使用确定量的蛋白水解酶，(3)用包括疏水基在内的附加成分的量补足混合物至100%;组合物i^一例外，其用包括亲水多元醇在内的附加成分的量补足至100%。
B.确定组合物是否含有液态亲水多元醇最佳量的+/-10% w/w的方法通过使用下述方案，可以确定包含(a)含有液态亲水多元醇及至少一种蛋白水解酶的分散相；(b)含有疏水基质的连续相的组合物(称为“兴趣组合物”)是否在液态亲水多元醇最佳量的±10%范围内步骤一获得包含(i)含有液态亲水多元醇和蛋白水解酶的分散相以及(ii)含有疏水基质的连续相的兴趣组合物。步骤二 基于兴趣组合物制备一系列的组合物(称为“系列组合物”)。注意系列组合物中蛋白水解酶的量(％ w/w)保持不变，和存在于兴趣组合物中的量(*% w/w)相冋。 可使用以下步骤制备系列组合物(i)确定兴趣组合物中所有成分的量(％ w/w)。(ii)确定兴趣组合物中连续相的总量w/w)。举例来说，如果兴趣组合物包括液态亲水多元醇(如聚乙二醇400) 15% w/w、蛋白水解酶(如胶原蛋白酶)I % w/w、疏水基质(如白凡士林)84% w/w,那么兴趣组合物会是连续相84% w/w和分散相16% w/w。步骤三依照在本说明书部分A中上述的方式，制备系列组合物(例如，这将包括依照在本说明书部分A所述方式制备11种组合物)。步骤四如本说明书具体实施方式
的部分H所述，使用体外人工焦痂测试模型，针对以下每个样品采集时刻6、12、18和24，确定系列组合物中^^一种组合物的每一种的酶活性。步骤五累积各数据采集时间，绘制针对每种组合物的酶活性相对于系列组合物的每一种组合物中存在的液态亲水多元醇的相关量曲线。对于累积24小时数据收集时间， 曲线上的最高点与针对兴趣组合物的液态亲水多元醇的最佳量相关。步骤六比较存在于兴趣组合物内的液态亲水多元醇的量，以确定其是否在针对兴趣组合物的液态亲水多元醇最佳量的±10% w/w范围内。C.蛋白水解酶对伤口清创有用的任何蛋白水解酶均适用本发明。蛋白水解酶(蛋白酶)通过水解蛋白质肽链中将氨基酸连接在一起的肽键来打断蛋白质。基于催化机理，它们可分为四个主要的群丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、金属蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶。已经确定某些蛋白酶在活性位点具有其它的催化性氨基酸，如苏氨酸和谷氨酸；然而它们没有形成主要的组。I.丝氨酸蛋白酶丝氨酸蛋白酶依赖丝氨酸残基的羟基作为亲核试剂攻击肽键。在人身上发现的主要家族包括类胰凝乳蛋白酶、类枯草杆菌蛋白酶、α/β水解酶、信号肽家族。在进化史中， 丝氨酸蛋白酶最初是消化酶。在哺乳动物中，它们通过基因复制进化以在血液凝固、免疫系统、炎症中行使功能。这些蛋白酶具有广泛的底物特异性，能在宽的PH范围内起作用。丝氨酸蛋白酶的非限制性例子包括胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)、 舒替兰酶、纤溶酶和弹性蛋白酶。2.半胱氨酸蛋白酶结合易断开肽键的亲和试剂位于半胱氨酸残基的巯基的肽酶被称为半胱氨酸蛋白酶。半胱氨酸蛋白酶通常存在于包括木瓜、菠萝和猕猴桃的水果中。半胱氨酸蛋白酶具有广泛的特异性，并在生理条件下广泛使用。在这个家族中，木瓜蛋白酶已长期广泛用于伤口清创。其它半胱氨酸蛋白酶，如菠萝蛋白酶(bromelain)和安奈林(analain),也已研究用于伤口清创。半胱氨酸蛋白酶的其它非限制性例子包括钙蛋白酶(calpain)、半胱天冬酶 (caspases)、木瓜凝乳蛋白酶(chymopapain)和梭菌蛋白酶(clostripain)。3.金属蛋白酶金属蛋白酶属于水分子介导的亲核结合肽键的蛋白酶，同时二价金属阳离子激活水分子，所述金属离子通常为锌，有时为钴、锰、镍或铜。金属离子对于活性非常重要。具有与金属离子相互作用一螯合或氧化-潜力的任何化合物都会影响酶的活性。本家族金属蛋白酶的非限制例子包括嗜热菌蛋白酶(thermolysin)、胶原蛋白酶、基质金属蛋白酶 (MMPs)、枯草杆菌蛋白酶(bacillolysin)、分散酶(dispase)、弧菌溶血素(vibriolysin)、 假单胞菌素(pseudolysin)、基质溶素(stromelysin)和各种来自细菌的中性金属蛋白酶。4.天冬氨酸肽酶天冬氨酸肽酶如此命名是因为天冬氨酸残基是活化的水分子的配体。在本家族大多数酶中，一对天冬氨酸残基共同作用以结合并激活催化性水分子。全部或大部分天冬氨酸肽酶是肽键内切酶。大多数天冬氨酸肽酶具有广泛的特异性。然而，大多数天冬氨酸肽酶的最佳PH值在酸性范围内。天冬氨酸肽酶非限制性例子包括胃蛋白酶、凝乳酶、β -分泌酶、痕原虫天冬氨酸蛋白酶(plasmepsin)、植物酸性蛋白酶、逆转录病毒蛋白酶。5.胶原蛋白酶对伤口清创合适的蛋白水解酶是金属蛋白酶胶原蛋白酶。胶原蛋白酶可实质上纯净，或者它可含有可检测水平的其它蛋白酶。胶原蛋白酶的效价测定和在此所用的“胶原蛋白酶单位”的含义基于pH7.2、37°C、 24小时下，来源于(牛跟腱)的未变性胶原蛋白的消化。通过与茚三酮反应测定裂解的肽键数量。减去由胰蛋白酶消化对照释放的氨基基团。一个净胶原蛋白酶单位将溶解相当于每分钟I纳摩尔亮氨酸等价物的茚三酮反应性物质。
本发明组合物中胶原蛋白酶的量(效价或浓度)处于伤口清创的有效水平。通常，基于产品中使用的胶原蛋白酶的活性，组合物中胶原蛋白酶的效价可以从每克产品约 I至约10000胶原蛋白酶单位变化。在各种实施例中，以每克产品中胶原蛋白酶单位表示的效力为从约 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、 85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、160、170、180、190、200、210、 220、230、240、250、260、270、280、290、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、 850、900、950、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、 7500、8000、8500、9000、9500至约10000，或从中可推导的任何范围或数值。组合物中胶原蛋白酶的浓度一般可从约O. 001% w/w至约8% w/w变化。在各种实施例中，以重量百分比表示的胶原蛋白酶的浓度为从约O. 001,0. 002,0. 003,0. 004,0. 005、 O. 006,0. 007,0. 008,0. 009,0. 010,0. 015,0. 020,0. 025,0. 030,0. 035,0.040,0.050、 O. 055,0. 060,0. 065,0. 070,0. 075,0. 080,0.085,0.090,0.095,0. 100,0. 125,0. 150、 O. 175、0· 20、0· 25、0· 30、0· 35、0· 40、0· 45、0· 50、0· 55、0· 60、0· 65、0· 70、0· 75、0· 80、0· 85、 O. 90,0. 95、1、2、3、4、5、6、7至约8，或从中可推导的任何范围或数值。在一个实施例中，胶原蛋白酶来源于溶组织梭菌(Clostridium histolyticum)； 然而，在其它实施例中，胶原蛋白酶可以从其它来源获得。用于制备合适的胶原蛋白酶的方法在美国专利 3，705，083,3, 821，364,5, 422，261,5, 332，503,5, 422，103,5, 514，370、 5，851，522,5, 718，897和6，146，626中公开，所有这些专利通过引用并于此。6.胰蛋白酶对伤口清创合适的另一个蛋白水解酶是丝氨酸蛋白酶胰蛋白酶。通常，胰蛋白酶来自健康的牛或猪动物的胰腺或两者的胰腺。胰蛋白酶也可从重组体来源获得。药用级 (USP/NF)胰蛋白酶被称为结晶的胰蛋白酶(Crystallized Trypsin)。它含有以干燥基础计算的不低于每mg 2500 USP胰蛋白酶单位,不低于90. 0%且不高于110. 0%的标记效价。 胰蛋白酶的效价测定及USP胰蛋白酶单位的定义可在USP 31(2008年8月I日官方版)的结晶胰蛋白酶专论中找到，其通过引用结合于此。本发明组合物中胰蛋白酶的量(效价或浓度)处于伤口清创的有效水平。通常，组合物中胰蛋白酶的效价可从每克产品约90至约60，000USP胰蛋白酶单位变化。在各种实施例中，以每克产品USP胰蛋白酶单位表示的胰蛋白酶效价为从约90、100、150、200、250、 300、320、350、375、400、500、600、675、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、10000、 20000,30000,40000,50000至约60000，或从中可推导的任何范围或数值。组合物中胰蛋白酶的浓度一般可从约O. 0025% w/w至约1% w/w变化。在各种实施例中，以重量百分比表示的胰蛋白酶的浓度为从约O. 0025,0. 0050,0. 010,0. 015,0. 020、 O. 025,0. 030,0. 035,0. 040,0. 045,0. 050,0. 055,0. 060,0.065,0.070,0.075,0.080、 O.085、0·090、0·095、0·10、0· 15、0· 20、0· 25、0·30、0·35、0·40、0·45、0·50、0·55、0·60、 O. 65,0. 70,0. 75,0. 80,0. 85,0. 90,0. 95至约1，或从中可推导的任何范围或数值。D.亲水多元醇本发明的亲水多元醇是具有至少有两个羟基的水溶性极性脂肪醇，包括聚合物多元醇，如聚乙二醇和泊洛沙姆。本发明的一方面，分散相中的亲水多元醇是液态亲水多元醇。在一些实施例中，液态亲水多元醇是液态聚乙二醇或液态泊洛沙姆，或它们的混 合物。 固态亲水多元醇如固态聚乙二醇或固态泊洛沙姆也可以添加到本发明的分散相中，以助于物理稳定分散体。液态亲水多元醇的其它例子包括但不仅限于丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、甘油、己二醇、甲氧基聚乙二醇、丙烯碳酸酯和乙氧基二甘醇，这些也可以加到分散相中。I.聚乙二醇聚乙二醇是乙二醇和水的均聚物，代表式为H(OCH2CH2)nOH其中η表示氧乙烯基的平均数目。取决于它们的分子量，聚乙二醇在25°C可以是液体或固体。使用USP命名法说明以下液态聚乙二醇的合适的非限制性例子:聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇500和聚乙二醇600。使用USP命名法说明以下固态聚乙二醇的合适的非限制性聚乙二醇700、聚乙二醇800、聚乙二醇900、聚乙二醇1000、聚乙二醇1100、聚乙二醇1200、聚乙二醇1300、聚乙二醇1400、聚乙二醇1450、聚乙二醇1500、聚乙二醇1600、聚乙二醇1700、聚乙二醇1800、 聚乙二醇1900、聚乙二醇2000、聚乙二醇2100、聚乙二醇2200、聚乙二醇2300、聚乙二醇 2400、聚乙二醇2500、聚乙二醇2600、聚乙二醇2700、聚乙二醇2800、聚乙二醇2900、聚乙二醇3000、聚乙二醇3250、聚乙二醇3350、聚乙二醇3750、聚乙二醇4000、聚乙二醇4250、 聚乙二醇4500、聚乙二醇4750、聚乙二醇5000、聚乙二醇5500、聚乙二醇6000、聚乙二醇 6500、聚乙二醇7000、聚乙二醇7500和聚乙二醇8000。从DOW化学公司以商品名称CARB0WAX 以及从BASF公司以商品名称 LUTROL E和PLURACARE E可商业获得液态和固态聚乙二醇。对于本发明，药用级 (USP/NF)和化妆品级聚乙二醇都是合适的。2.泊洛沙姆泊洛沙姆是环氧乙烷和环氧丙烷的合成嵌段共聚物，代表式HO (C2H4O) a (C3H6O) b (C2H4O) aH其中a和b代表重复单元的数目。取决于特定的泊洛沙姆，通常a从2到150，b 从15到70。依据它们的分子量，泊洛沙姆在25°C可以是液态或固态。使用CTFA/INCI命名法说明以下液态泊洛沙姆的合适的非限制性例子泊洛沙姆101、泊洛沙姆105、泊洛沙姆122、泊洛沙姆123、泊洛沙姆124、泊洛沙姆181、泊洛沙姆182、泊洛沙姆183、泊洛沙姆184、泊洛沙姆212、泊洛沙姆231、泊洛沙姆282、泊洛沙姆 331、泊洛沙姆401和泊洛沙姆402。使用CTFA/INCI命名法说明以下固态泊洛沙姆的合适的非限制性例子泊洛沙姆108、泊洛沙姆188、泊洛沙姆217、泊洛沙姆237、泊洛沙姆238、泊洛沙姆288、泊洛沙姆338、泊洛沙姆407、泊洛沙姆185、泊洛沙姆215、泊洛沙姆234、泊洛沙姆235、泊洛沙姆 284、泊洛沙姆333、泊洛沙姆334、泊洛沙姆335和泊洛沙姆403。 从BASF公司以商品名称PLIJRONIC 和LUTROL 以及从UNIQEMA公司以商品名称SYNPERONIC 可以商业获得液态和固态泊洛沙姆。药用级(USP/NF)泊洛沙姆是泊洛沙姆124、泊洛沙姆188、泊洛沙姆237、泊洛沙姆338和泊洛沙姆407。对于本发明，药用级和化妆品级泊洛沙姆都是合适的。E.疏水基质本发明的疏水基质可包括但不限于植物、动物、石蜡和合成来源的脂肪、黄油、油月旨、蜡、溶剂和油；矿物油、植物油、凡士林、水溶性有机酯和甘油三酯、聚硅氧烷或氟化化合物；或其混合物。在本发明的一实施例中，疏水相包含凡士林。植物源材料包括但不限于落花生(花生)油、秘鲁香脂油、巴西棕榈蜡、小烛树蜡、 蓖麻油、氢化蓖麻油、可可脂、椰子油、玉米油、棉花籽油、霍霍巴油、马卡达姆(macadamia) 籽油、橄榄油、橙油、橙腊、棕榈仁油、菜籽油、红花油、芝麻籽油、牛油树脂(shea butter)、 大豆油、葵花籽油、茶树油、植物油和氢化植物油。动物源材料的非限制性例子包括蜂蜡、鱼肝油、鸸鹋油、猪油、貂油、鲨鱼肝油、角鲨烷、角鲨烯、牛脂。石蜡材料的非限制性例子包括异链烷烃(isoparaffin)、微晶蜡、重矿物油、轻矿物油、地蜡、凡士林和石蜡。有机酯和甘油三酯的合适的非限制性例子包括C12-15烷基苯甲酸酯、豆蘧酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、中链甘油三酯、甘油三月桂酸酯、三羟硬脂精。聚硅氧烷的非限制性例子为聚二甲基硅氧烷和环聚甲基硅氧烷。氟化化合物的一个非限制性例子是聚四氟乙烯(PTFE)。I.凡士林凡士林是从石油中获得的纯化的半固态碳氢化合物混合物，其颜色从深琥珀色到淡黄色变化。白凡士林是完全 或几乎脱色的凡士林，其颜色从奶油白到雪白变化。凡士林和白凡士林也可在熔点、粘度和密度变化。从PENREC0公司以下述商品名可商业获得各种等级的产品
PENRECO UlriMA 、 PENRECO SUPER 、 PENRECO SNOW 、
PENRECOe-REGENT 、 PENRECO LILY 、 PENRECO CREAM 、 PENRECO ROYAL、 PENRECO BLOND 和 PENRECO AMBER。
从S0NNEB0RN公司以下述商品名也可商业获得各种等级ALBA 、 SUPERWHITE PROTOPET , SUPER WHITE FONOLINE 、WHITE PR0T0PET IS 、WHITE protopet 2L 、white PROTOPET 3C 、wmn· FONOLINE气 PERFECTA 、yellow protopet 2A 、yellow FONOLINE .PROTOLINE , sonojell #4 、sonojell #9 、
MINERAL JELLY #10 、 MINERAL JELLY #14 、 MINERAL JELLY #17^ 和 CARNATION TROUGH GREASE 。可获得化妆品级和药物(USP/NF)级凡士林和白凡士林，二个级别都适用于本发明。F.局部用组合物本发明的局部用组合物是在疏水连续相中包含亲水分散相的分散体。分散相包含蛋白水解酶和亲水多元醇。在本发明的一方面，亲水多元醇是液态亲水多元醇。在某些实施例中，液态亲水多元醇是液态聚乙二醇或液态泊洛沙姆、或其混合物。连续相包括疏水基质。疏水基质可以是凡士林。这些组合物对于治疗需伤口清创的伤口是有用的。如此处定义，组合物可以是无水的。组合物可以是半固态或液态。组合物可注入到垫子、纱布或海绵中。组合物还可以是无菌的。组合物可包括适合这种性质的局部用组合物的本领域已知的附加材料，如吸收剂、除臭剂、表面活性剂、溶剂、流变改性剂、成膜剂、稳定剂、润肤剂(emoIlients) >保湿剂、 防腐剂、抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂、香味剂和着色剂。组合物还可以包含适合这种性质的局部用组合物的本领域已知的附加药用活性组分，比如抗菌剂、伤口愈合剂、麻醉剂、医伤剂和止血剂。医伤剂的一个非限制性例子是秘鲁香脂(balsam Peru)。组合物可被包装成适合分配伤口清创剂的任何包装。组合物可被包装成多用途、 单剂量或计量剂量的包装。非限制性例子包括管子、瓶子、罐子、泵式容器、压力式容器、气囊式容器、气溶胶容器、气溶胶喷雾容器、非气溶胶喷雾容器、注射器、小囊或小袋。G.制备工艺本发明的组合物可利用本领域普通技术人员已知的技术和方法，通过将蛋白水 解酶溶解或悬浮在部分或全部的可用亲水多元醇中制备。形成的溶液或悬浮液可与疏水基质混合形成分散体，其中疏水基质成为连续相而亲水多元醇/酶相变为分散相。这些组合物可利用由本领域普通技术人员已知的加工设备如混合器、搅拌器、研磨机、均质器、分散器、 溶解器等制备。H.体外人工焦痂测试模型通过使用如以下和在通过引用并于此的出版物“Study on the debridement efficacy of formulated enzymatic wound debriding agents by in vitro assessment using artificial wound eschar and by an in vivo pig model”，Shi 等，Wound Repair Regen, 2009,17 (6) :853中说明的体外人工焦痂模型来测试组合物，确立了组合物酶活性的增强。使用牛胶原蛋白(I型)、牛血纤蛋白和弹性蛋白制备人工伤口焦痂(AWE)基质 (substrate)。FITC标记胶原蛋白，弹性蛋白-罗丹明和血纤蛋白-香豆素是用于产生AWE 基质的原料。为了制备Ig AWE基质，称取胶原蛋白-FITC 650mg、弹性蛋白-罗丹明和纤维蛋白原-香豆素各IOOmg至50mL的试管中，在IOmL Tris缓冲盐溶液中混均。在一单独试管中，用Tris缓冲盐溶液制备15mg/mL的纤维蛋白原溶液10mL。将这两组溶液结合彻底混合。加入凝血酶溶液(50U/mL，0. 25mL)，快速混合，将溶液倾倒入含有一 90mm非反应性膜过滤器的派崔氏培养皿(Petri dish)中。由于凝血酶诱导的纤维蛋白原聚合，通过使染色蛋白质凝结成固态基质，材料开始在膜过滤器的顶部形成软的薄片。使凝结的AWE基质固化 30分钟，然后用水漂洗15分钟以出去凝血酶。AWE基质进一步脱水至75%的水分含量，备用。在AWE基质依旧附着在膜上时，利用打孔器冲压出直径为35mm的片。将AWE基质冲压片放到Franz扩散池系统(Hanson Research, Chatsworth, CA)的顶部平面,在顶部放一TEFLO#样品架。将清创药膏样品载到样品架的中心，刮去任何多余的样品。对于含有胶原蛋白酶、木瓜蛋白酶、嗜热菌蛋白酶或胰蛋白酶的样品，受体池中的溶液是pH 7. 4 的Tris缓冲液；对于含有胃蛋白酶的样品，受体池中的溶液是pH 2的醋酸钠缓冲液。受体池中的溶液以ImL的增量按照如下样品收集时间取样0、1、2、3、6、12、18和24小时。一旦完成，使用FITC染料的荧光测试以485nm (激发波长)和520nm (发射波长)分析样品从而确定以mg/mL报告的胶原蛋白的消化(胶原溶解)。I.体外物理性酶释放测试通过Franz池扩散研究，利用PVDF (0. 45微米)过滤器确定酶从组合物中的释放。该研究在35°C下进行并持续6小时。接收池中的溶液样品进行总蛋白分析。蛋白质浓度由BCA分析(Peirce)确定并使用相同的胶原蛋白酶做参考标准。细节描述如下BCA蛋白分析将熟知的碱性介质中蛋白质对Cu2+到Gu1+的还原与利用二喹啉甲酸对亚铜阳离子(Cu1+)的高灵敏性和选择性的比色检测结合起来。第一步是碱性环境下用蛋白质螯合铜形成蓝色络合物。被称为双缩脲反应的该反应中，在含有酒石酸钠钾的碱性环境中，含有两个或三个氨基酸残基的肽与亚铜离子形成有色的螯合物。该反应称为双缩脲反应是因为利用有机化合物双缩脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)与亚铜离子形成了相似的络合物。 双缩脲，过量尿素和热形成的产物，与铜反应形成浅蓝色四配位基络合物。在显色反应的第二步中，BCA，一种高灵敏性和选择性的比色检测试剂，与第一步生成的亚铜阳离子(Gu1+) 反应。两分子的BCA与一个亚铜离子螯合形成紫色反应产物。BCA/铜络合物是水溶性的， 并在562nm处随着蛋白质浓度的增加表现出强的线性吸收。紫色可在550nm到570nm之间的任一波长下以最小的信号损失(少于10% )进行测量。参照通过引用结合于此的以下参考Smith, P. K. , Krohn, R. I. , Hermanson, G. T. , Mallia, A. K. , Gartner, F. H. , Provenzano, M. D. , Fujimoto, Ε. K. , Goeke, N. Μ. , Olson, B. J. and Klenk, D. C. (1985). Measurement of protein using bicinchoninic acid. Anal. Biochem. 150,76-85.
实施例 以下实例用来证明本发明的某些非限制性方面。本领域的技术人员应该理解，以下实例中公开的技术代表由申请人发现的技术，在本发明实践中适当地起作用。然而，根据本发明，本领域的技术人员应当理解，在所公开的具体实施方式
中可作许多变动，在不脱离本发明的精神和范围的条件下仍能获得同样或类似的结果。实例I :凡士林中胶原蛋白酶/PEG 400的分散体表I中的分散体由分散在凡士林中不同浓度的聚乙二醇400(PEG_400)制备。表I
分散体 PEG 400 PEG-1450 白凡士林泊洛沙姆407胶原蛋白酶
__%w/w__%w/w__%w/w__%w/w__%w/w
A0 ~ 0 ~ 99.800.2 ~
BIO-O- 89.800.2
C15 ~ 0 ~ 84.800.2
I)20 ~ 0 ~ 79.9 " 0.40.2 ~
E30 " 069 — 0.90.2
F50 ~ Q ~ 49.3 " 1.20.2
(.68 ~ 0 ~ 29.8 " 2.00.2 —
H* — 8312.54.5 ~ 00.2
I* I 70 29.8 I 0 I 0 I 0.2*PEG_1450加到PEG-400中形成半固态，分别产生约96%和100%的总PEG。通过上述的体外人工焦痂模型确定每一种分散体的酶学清创活性，结果在图I中绘出。如从图I的结果可看出，基于24小时曲线，PEG-400的最佳量为约20%w/w PET-400。实例2 :凡士林中胶原蛋白酶/PEG 600的分散体表2中的分散体由分散在凡士林中不同浓度的聚乙二醇600(PEG_600)制备。表权利要求
1.ー种伤ロ清创组合物，包含 (a)含有液态亲水多元醇和至少ー种蛋白水解酶的分散相；以及 (b)含有疏水基质的连续相； 其中液态亲水多元醇的量在液态亲水多元醇最佳量的±10% w/w范围内。
2.根据权利要求I所述的组合物，其中液态亲水多元醇的量在液态亲水多元醇最佳量的±7% w/w范围内。
3.根据权利要求I所述的组合物，其中液态亲水多元醇的量在液态亲水多元醇最佳量的±5% w/w范围内。
4.根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其中蛋白水解酶是金属蛋白酶。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中金属蛋白酶是胶原蛋白酶。
6.根据权利要求4所述的组合物，其中金属蛋白酶是嗜热菌蛋白酶。
7.根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其中蛋白水解酶是半胱氨酸蛋白酶。
8.根据权利要求7所述的组合物，其中半胱氨酸蛋白酶是木瓜蛋白酶。
9.根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其中蛋白水解酶是丝氨酸蛋白酶。
10.根据权利要求9所述的组合物，其中丝氨酸蛋白酶是胰蛋白酶。
11.根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其中蛋白水解酶是天冬氨酸肽酶。
12.根据权利要求11所述的组合物，其中天冬氨酸肽酶是胃蛋白酶。
13.根据权利要求1-12任一项所述的组合物，其中液态亲水多元醇是液态聚こニ醇、液态泊洛沙姆或它们的混合物。
14.根据权利要求1-13任一项所述的组合物，其中蛋白水解酶悬浮于分散相中。
15.根据权利要求1-13任一项所述的组合物，其中蛋白水解酶溶解于分散相中。
16.根据权利要求1-15任一项所述的组合物，其中疏水基质包括凡士林。
17.根据权利要求1-16任一项所述的组合物，其中分散相进ー步地包含固态亲水多元醇。
18.根据权利要求17所述的组合物，其中固态亲水多元醇是固态聚こニ醇、固态泊洛沙姆或它们的混合物。
19.根据权利要求1-18任一项所述的组合物，其中组合物是半固态。
20.根据权利要求1-19任一项所述的组合物，其中组合物是无水的。
21.根据权利要求1-20任一项所述的组合物，其中组合物是无菌的。
22.ー种用于治疗需要清创的伤ロ的方法，包括在伤口上应用组合物，所述组合物包含含有液态亲水多元醇和有效清创浓度的至少ー种蛋白水解酶的分散相；以及含有疏水基质的连续相；其中液态亲水多元醇的量在最佳量的±10% w/w范围内。
23.根据权利要求22所述的方法，其中组合物是权利要求1-21所述的组合物的任一种。
24.一种确定加到目标组合物的液态亲水多元醇的最佳量的方法，所述目标组合物包含含有蛋白水解酶的分散相以及含有疏水基质的连续相，该方法包括 (I)获得包含所述分散相以及所述连续相的一系列组合物，其中所述分散相进ー步包含液态亲水多元醇，其中所述系列组合物中各组合物包含相同量的蛋白水解酶和不同量的液态亲水多元醇；(2)确定所述系列组合物中各组合物的酶活性； (3)在图上确定最高点，所述图绘出相对于包含在系列组合物的各组合物中的液态亲水多元醇的量的酶活性， 其中图上的最高点与加到所述目标组合物中的液态亲水多元醇的最佳量相关。
25.根据权利要求24所述的方法，进ー步包括将液态亲水多元醇的最佳量的±10%w/w加入到目标组合物中。
26.根据权利要求24所述的方法，其中所述系列组合物包括至少五种组合物。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述系列组合物中的多元醇的量以至少10%w/w的增量变化。
28.根据权利要求27所述的方法，其中第一种组合物包含10%w/w的液态亲水多元醇，第二种组合物包含30% w/w的液态亲水多元醇，第三种组合物包含50% w/w的液态亲水多元醇，第四种组合物包含70% w/w的液态亲水多元醇，以及第五种组合物包含90% w/w的液态亲水多元醇。
29.根据权利要求26所述的方法，其中第一种组合物包含O至30%w/w的液态亲水多元醇，第二种组合物包含10到50% w/w的液态亲水多元醇，第三种组合物包含20到60%w/w的液态亲水多元醇，第四种组合物包含30至80% w/w的液态亲水多元醇，以及第五种组合物包含40至100% w/w的液态亲水多元醇。
30.根据权利要求24-29任一项所述的方法，其中目标组合物是权利要求1-21中所述组合物的任ー种。
31.ー种提高目标组合物中酶活性的方法，所述目标组合物包含含有蛋白水解酶的分散相以及含有疏水基质的连续相，该方法包括 (1)获得包含分散相和连续相的一系列组合物，其中分散相进ー步含有液态亲水多元醇，其中所述系列组合物中的各组合物含有相同量的蛋白水解酶和不同量的液态亲水多元醇； (2)确定所述系列组合物中各组合物的酶活性； (3)在图上确定最高点，所述图绘出相对于包含在系列组合物的各组合物中的液态亲水多元醇的量的酶活性，其中图上的最高点与加到目标组合物的液态亲水多元醇的最佳量相关；以及 (4)将液态亲水多元醇最佳量的±10%w/w加入到目标组合物中，由此提高目标组合物中的酶活性。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述系列组合物包括至少五种组合物。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述系列组合物中多元醇的量以至少10%w/w的增量变化。
34.根据权利要求33所述的方法，其中第一种组合物含有10%w/w的液态亲水多元醇，第二种组合物含有30% w/w的液态亲水多元醇，第三种组合物含有50% w/w的液态亲水多元醇，第四种组合物含有70% w/w的液态亲水多元醇，以及第五种组合物含有90% w/w的液态亲水多元醇。
35.根据权利要求32所述的方法，其中第一种组合物含有O至30%w/w的液态亲水多元醇，第二种组合物含有10至50% w/w的液态亲水多元醇，第三种组合物含有20至60%w/w的液态亲水多元醇，第四种组合物含有30至80% w/w的液态亲水多元醇，以及第五种组合物含有40至100% w/w的液态亲水多元醇。
36.根据权利要求31-35任一项所述的方法，其中目标组合物是权利要求1-21中所述组合物的任ー种。
全文摘要
本发明涉及到具有增强酶活性的局部用酶学伤口清创组合物。这些组合物包含含有至少一种蛋白水解酶和至少一种亲水多元醇的分散相，以及含有疏水基质的连续相。
文档编号A61L15/38GK102711808SQ201080055918
公开日2012年10月3日 申请日期2010年12月8日 优先权日2009年12月8日
发明者A·乔瓦诺维奇, D·奥斯特, 磊·石 申请人:海尔斯波因特公司