专利名称：胞磷胆碱钠脂质体固体制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种胞磷胆碱钠脂质体固体制剂及其制法，属于医药技术领域。
背景技术：
胞磷胆碱钠为胞嘧啶核苷二磷酸胆碱的简称，是磷脂类磷脂酰胆碱的前体物质， 为卵磷脂合成的必要辅酶，其分子式为C14H25N4NaO11P2，结构式为胞磷胆碱是无定形的吸湿性粉末，具有治疗用途，例如作为脑保护剂或神经保护 剂。胞磷胆碱钠在临床上主要用于头部外伤及脑术后伴有意识障碍、脑梗塞急性意识障碍、 促进脑卒中偏瘫患者上肢功能恢复及急性胰腺炎等病症。具体而言，胞磷胆碱有益于缺血 性中风、脑创伤、以及可能的神经变性疾病的患者。另外，胞磷胆碱用于治疗由颅创伤、出 血、脑血栓以及动脉粥样硬化引发的脑疾病而产生的无意识(Secades JJ CDP-胆碱药理 学禾口临床综述(CDP—choline :pharmacologicai and clinical review)。Methods Find Exp Clin Pharmacol 19995 Oct ； 17 Suppl B :2-54)。目前，临床上使用以胞磷胆碱钠注射剂为主，口服制剂有胞磷胆碱钠口服液和胞 磷胆碱钠胶囊。胞磷胆碱制剂现多为注射剂，临床使用不便。普通制剂因其生物半衰期短， 故口服后在体内消除快，有效血药浓度维持时间短，日服用次数较多，因此给患者带来许多 不便，并且服用次数多往往造成体内血药浓度的较大波动。制成缓释、控释制剂后，可以减 少给药次数，提高患者的顺应性，使疗效更好，副作用更小。对于药物应用，胞磷胆碱已配制成溶液剂，适用于非胃肠道给药，通常是静脉给 药。但是，目前市售的固体形式的胞磷胆碱还有许多缺陷。市售形式的胞磷胆碱(或其盐， 通常为胞磷胆碱钠)的水含量不超过5重量％ (相对于胞磷胆碱)，其是通过干燥时水分 的丢失或者通过Karl Fischer湿度分析法测定的。正常情况下，市售形式的胞磷胆碱钠中 的水含量在2-4重量％之间。此等常规固体剂型的胞磷胆碱在暴露于空气湿度时是不稳定 的。由于分子的吸湿性，该不稳定性也存在于包含常规胞磷胆碱的固体剂型中，如片剂、胶 囊剂等。因为其对水分敏感，而且所述产品规格都涉及水含量，所以胞磷胆碱必须在特殊 的条件下处理，包括低湿度环境，以提供并维持相对较低的水含量。药物产品的制造商必须 能够表明他们的最终剂型是稳定的，而且仍在某些声明的规格范围内，包括水含量、硬度和 物理完整性。为在正常储存条件下保护该化合物免受湿气的侵害，必须使用特殊的包装材料，包括铝箔囊和装有干燥剂的双层聚乙烯袋。造成了工业成本的增加，另一方面不利于药 品的长期保存和患者的利用。脂质体(liposomes)是一种定向药物载体，属于靶向给药系统(targeting drug delivery systems)的一种新剂型。它具有类细胞结构，进入体内主药被网状内皮系统吞噬 而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布、使药物主药在肝、脾、肺和骨 髓等组织器官中蓄积，从而提高药物的治疗指数、减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。Frank Schuettauf 等人的文章"Citicoline and lithium rescue retinal ganglion cells following partial optic nerve crush in the rat”披露了胞憐胆减的 脂质体在治疗脑缺血中更佳有效。Massimo Fresta 等人的的文章“Biological effects of CDP-choline loaded long circulating liposomes on rat cerebral post-ischemic reperfusion，，披露了 CDP-choline (CDPc)包封在单层长循环脂质体中以提高生物利用度，其使用了胆固醇和 DPPC。CDP-choline (CDPc)溶解于50ml的磷酸盐缓冲液，调节ph至7. 4。期望量的磷脂溶 解于氯仿，避免使用氯仿-甲醇混合物，蒸发时引起相分类，有机溶剂在30度下旋转蒸发除 去，多层囊泡制成，冻干获得。Rao Muralikrishna Adibhatla 等人的文章“CDP-choline liposomes provide significant reduction in infarction over free CDP-choline in stroke”其中披露了， DPPC、DPPS、胆固醇禾口 GMl 神经节苷脂(7/4/7/1. 57 摩尔比或 35. 8/20. 4/35. 8/8. Omol % ) 构成了脂质体体系。Puglisi G 等人的文章"Liposomes as a potential drug carrier for citicoline (CDP-choline)and the effect of formulation conditions on encapsulation efficiency” 披露了采用 DPPA 和 DPPS 制备脂质体。现有技术虽然教导了胞磷胆碱可以通过制成脂质体的形式，促进通过血脑屏障， 但是其生物利用度仍然满足临床的实际需要，如何通过选用合适的赋形剂来提高胞磷胆碱 脂质体的生物利用度仍然是目前的迫切需要。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于研究一种临床适用的胞磷胆碱钠脂质体及其固体 制剂，不仅显著提高药物的脂溶性，而且还显著地提高药物的生物利用度；另外脂质体制剂 具有长效的作用，延长药物在血液的循环时间，减少病人的服药次数。本发明还要解决所述的胞磷胆碱钠脂质体及其固体制剂的可工业化生产的制备 方法。为解决上述问题，本发明提供如下技术方案本发明的目的是提供一种胞磷胆碱钠脂质体制剂，主要由胞磷胆碱钠、磷脂、附加 剂制成，基于重量份之比为胞磷胆碱钠1份、磷脂2-12份、附加剂0. 5-8份。优选的比例为 胞磷胆碱钠1份、磷脂4-10份、附加剂0. 6-3份。制备脂质体制剂常用的膜材料为磷脂和附加剂，其中磷脂通常可选用天然磷脂和 合成磷脂，所述天然磷脂为蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨 酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、大豆磷脂酰肌醇中的一种或几种；所述合成磷脂为二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、 二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、 二硬脂酸磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油 中的一种或几种。常用附加剂的膜材料有胆固醇、十八胺、磷脂酸、去氧胆酸钠和泊洛沙姆 188。用于制备脂质体制剂的膜材料还有磷脂酰乙醇胺、胆固醇乙脂、谷载醇、牛胆酸钠、磷 脂酰丝胺酸、硬脂酰胺、单硬脂酰磷脂酸、单硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二鲸蜡基磷酸盐(DCP)、 二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、单棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二豆蔻酰磷脂酰乙醇胺。附加剂一般用 来调节膜结构，改变荷电性质，如胆固醇能使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生 成，降低了氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。本发明优选的磷脂为蛋黄卵磷脂与二油酰磷脂酰甘油的组合，进一步优选是重量 份1 3的组合。本发明优选的附加剂为去氧胆酸钠与十八胺的组合，进一步优选是重量份2 1 的组合。本发明的目的之一是提供一种制备上述胞磷胆碱钠脂质体制剂的方法，其特征在 于包括以下步骤(1)将磷脂、附加剂溶于有机溶剂中，混合均勻，除去溶剂后制得磷脂膜；(2)加入溶有胞磷胆碱钠的缓冲溶液使磷脂膜完全水化，形成脂质体混悬液；进一步地，采用本领域的常规喷雾干燥的技术制备成脂质体粉末，冷冻干燥破坏 其晶体形式。上述所述的制备方法中，有机溶剂选自乙醇、异丙醇、甲醇、丁酮、丙酮、乙酸乙酯、 氯仿、二氯甲烷中的一种或几种，优选为体积比为1 1的丙酮和二氯甲烷的混合溶剂。上述所述的制备方法中，缓冲盐溶液可以为磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、醋酸 盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液中的一种，优选为PH值为5. 3的醋酸-醋酸钠缓冲 液。本发明还进一步提供一种制备胞磷胆碱钠脂质体制剂的方法，包括以下制备步 骤(1)将蛋黄卵磷脂与二油酰磷脂酰甘油以及去氧胆酸钠与十八胺溶解于有机溶剂 中，置于旋转薄膜蒸发仪上减压除尽有机溶剂，获得磷脂膜；(2)加入溶有胞磷胆碱钠的缓冲溶液使磷脂膜完全水化，溶液混合均勻，保温 50-70°C状态下超声处理40-60分钟；(3)将上述步骤( 所得溶液进行喷雾干燥，即得胞磷胆碱钠脂质体粉末。本发明的另一个目的是提供一种胞磷胆碱钠脂质体固体制剂，由上述所述的胞磷 胆碱钠脂质体制剂经喷雾干燥后与药学上可接受的其他赋形剂混合，制备成颗粒剂、片剂、 胶囊剂等固体制剂，且各赋形剂在药物组合物中的量可在本领域常规范围内变化。上述所述的胞磷胆碱钠脂质体固体制剂，其中所述的辅料没有特别限制，可以是 药剂学中常用的固体制剂的药剂辅料，具体由按重量份的下列组分制成胞磷胆碱钠脂质 体1份，填充剂0 2. 4份，崩解剂0 0. 2份，粘合剂0. 016 0. 1份，矫味剂0 11. 5 份，芳香剂0-0. 15份和润滑剂0 0. 08份。所述填充剂可以选自淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、优化微晶纤维素、粉状纤维素、糖类、糖衍生物、补钙剂以及它们的组合；补钙剂选自碳酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、枸橼酸 苹果酸钙、枸橼酸钙、苹果酸钙、乳酸钙或醋酸钙。所述崩解剂可以选自羧甲淀粉钠、交联聚维酮、淀粉羟乙酸钠、低取代羟丙纤维 素、交联羧甲基纤维素钠以及它们的组合。所述粘合剂可以选自聚维酮、羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素、淀粉以及它们的组 合；聚维酮优选为聚维酮K30。所述润滑剂可以选自二氧化硅、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硅酸钙、滑石粉以 及它们的组合。所述的矫味剂选自蔗糖、甘露醇、阿斯帕坦、糖精钠、三氯蔗糖、甜菊糖苷、甜菊素 中以及它们的组合。所述的芳香剂选自桔子香精、甜橙油、草莓香精、薄荷脑、奶油香精以及它们的组合 O本发明的另一个目的是提供一种制备上述胞磷胆碱钠脂质体固体制剂的方法，主 要包括下述步骤(1)将胞磷胆碱钠脂质体粉碎，过80目筛，备用；(2)将填充剂、崩解剂、矫味剂等粉碎，过80目筛，混合，备用；(3)将上述原辅料混合均勻，加入粘合剂、芳香剂制软材，过筛制粒，烘干，加入润 滑剂混合均勻，整粒；(4)将干燥的颗粒进行分装，压片或填充于胶囊中，即得胞磷胆碱钠脂质体固体制 剂。本发明提供的胞磷胆碱钠脂质体固体制剂，优点包括以下几个方面(1)大大提高了活性成分胞磷胆碱钠的稳定性，延长了产品的有效期。(2)本发明制得的胞磷胆碱钠脂质体固体制剂符合工业化大生产的要求，制备工 艺简单，成本低，脂质体包封率高。(3)提高了制剂的产品质量，减少了毒副作用。
图1患者口服受试制剂与参比制剂的平均血药浓度-时间曲线。图2基于动物模型的受试制剂与对比例1-3的平均血药浓度-时间曲线。
具体实施例方式实施例1胞磷胆碱钠脂质体的制备处方胞磷胆碱钠IOOg蛋黄卵磷脂IOOg二油酰磷脂酰甘油300g去氧胆酸钠40g十八胺20g制备工艺
(1)将IOOg蛋黄卵磷脂与300g 二油酰磷脂酰甘油以及40g去氧胆酸钠与20g十八 胺溶解于2000ml体积比为1 1的丙酮和二氯甲烷的混合溶剂中，置于旋转薄膜蒸发仪上 减压除尽有机溶剂，获得磷脂膜；(2)加入溶有IOOg胞磷胆碱钠的pH值为5. 3的醋酸-醋酸钠缓冲溶液IOOOml使 磷脂膜完全水化，溶液混合均勻，保温70°C状态下超声处理60分钟；(3)将上述步骤( 所得溶液进行喷雾干燥，即得胞磷胆碱钠脂质体粉末。麵列1胞遍日碱遍旨砠侧艦(拟職仿剛)胞磷胆碱钠IOOg蛋黄卵磷脂48g二油酰磷脂酰甘油146g去氧胆酸钠32g十八胺16g制备工艺同实施例1，制得胞磷胆碱钠脂质体。对比例2胞磷胆碱钠脂质体的制备(采用冻干方式制成)处方胞磷胆碱钠IOOg蛋黄卵磷脂IOOg二油酰磷脂酰甘油300g去氧胆酸钠40g十八胺20g制备工艺(1)将IOOg蛋黄卵磷脂与300g 二油酰磷脂酰甘油以及40g去氧胆酸钠与20g十八 胺溶解于2000ml体积比为1 1的丙酮和二氯甲烷的混合溶剂中，置于旋转薄膜蒸发仪上 减压除尽有机溶剂，获得磷脂膜；(2)加入溶有IOOg胞磷胆碱钠的pH值为5. 3的醋酸-醋酸钠缓冲溶液IOOOml使 磷脂膜完全水化，溶液混合均勻，保温70°C状态下超声处理60分钟；(3)将上述步骤( 所得溶液分装于不锈钢盘中，置于冷冻干燥机内进行冻干a、预冻将分装好的药液按3°C /分钟速度降温至_45°C，保温冷冻4小时；b、升华将预冻好的药液抽真空，然后在8小时内勻速缓慢升温至_15°C，保温2 小时，再在4小时内勻速升温至12°C ；c、干燥将升华完毕阶段结束后的药液在3小时内勻速升温至30°C，保温干燥3 小时，制得胞磷胆碱钠脂质体。实施例2胞磷胆碱钠脂质体的制备处方胞磷胆碱钠IOOg蛋黄卵磷脂250g二油酰磷脂酰甘油750g去氧胆酸钠200g十八胺IOOg
制备工艺(1)将250g蛋黄卵磷脂与750g 二油酰磷脂酰甘油以及200g去氧胆酸钠与IOOg 十八胺溶解于4000ml体积比为1 1的丙酮和二氯甲烷的混合溶剂中，置于旋转薄膜蒸发 仪上减压除尽有机溶剂，获得磷脂膜；(2)加入溶有IOOg胞磷胆碱钠的pH值为5. 3的醋酸-醋酸钠缓冲溶液2000ml使 磷脂膜完全水化，溶液混合均勻，保温50°C状态下超声处理60分钟；(3)将上述步骤( 所得溶液进行喷雾干燥，即得胞磷胆碱钠脂质体粉末。对比例3胞磷胆碱钠脂质体的制备(组分不同)处方胞磷胆碱钠IOOg大豆卵磷脂IOOOg胆固醇200g十八胺IOOg制备工艺同实施例2，制得胞磷胆碱钠脂质体。实施例3胞磷胆碱钠脂质体颗粒剂的制备处方(1000袋)胞磷胆碱钠脂质体(以胞磷胆碱钠计) IOOg蔗糖650g甘露醇500g桔子香精15g聚维酮K30IOg制备工艺(1)将含IOOg胞磷胆碱钠的脂质体粉碎，过80目筛，备用；(2)将蔗糖粉碎，过80目筛，混合，备用；(3)将650g蔗糖、500g甘露醇和IOOg胞磷胆碱钠脂质体混合均勻，加入含有15g 桔子香精的5%聚维酮K30的50%乙醇溶液200ml制软材，过20目筛制粒，60°C烘干，18目 筛整粒；
8
(4)将干燥的颗粒进行分装，即得胞磷胆碱钠脂质体颗粒剂。 实施例4胞磷胆碱钠脂质体片剂的制备 处方(1000片1
胞磷胆碱钠脂质体(以胞磷胆碱钠计)IOOg
淀粉IlOg
微晶纤维素130g
交联羧甲基纤维素钠20g
羟丙甲纤维素3g
硬脂酸镁4g
二氧化硅4g 制备工艺
(1)将含IOOg胞磷胆碱钠的脂质体粉碎，过80目筛，备用；
(2)将IOOg淀粉、130g微晶纤维素、20g交联羧甲基纤维素钠和IOOg胞磷胆碱钠 脂质体混合均勻，加入2%羟丙甲纤维素的20%乙醇溶液150ml制软材，过20目筛制粒， 60°C烘干，18目筛整粒，加入4g硬脂酸镁和4g 二氧化硅混合均勻；(3)压片，即得胞磷胆碱钠脂质体片剂。实施例5胞磷胆碱钠脂质体胶囊剂的制备处方(1000粒)胞磷胆碱钠脂质体(以胞磷胆碱钠计)IOOg微晶纤维素60g低取代羟丙纤维素8g羟丙甲纤维素1.6g滑石粉5g制备工艺(1)将含IOOg胞磷胆碱钠的脂质体粉碎，过80目筛，备用；(2)将60g微晶纤维素、8g低取代羟丙纤维素和IOOg胞磷胆碱钠脂质体混合均 匀，加入2%羟丙甲纤维素的20%乙醇溶液80ml制软材，过30目筛制粒，60°C烘干，20目筛 整粒，加入5g滑石粉混合均勻；(3)填充胶囊，即得胞磷胆碱钠脂质体胶囊剂。试验例1包封率的测定取实施例1-2和对比例1-3制备的脂质体，高效液相色谱法测定胞磷胆碱钠的总 含量为M，选用柱色谱法分离脂质体。取1. 5g葡聚糖凝胶G-50，用pH6. 8的磷酸盐缓冲液浸泡溶胀12h以上，装入层析 柱内O00X IOmm)，用上述磷酸盐缓冲液冲洗平衡，取实施例1_2和对比例1_3得到的胞磷 胆碱钠脂质体加水溶解，制成每Iml含胞磷胆碱钠约1. Smg的溶液，分别取溶液1. 8ml加 入层析柱顶部，用磷酸盐缓冲液50ml洗脱，流速1. lml/min，收集的洗脱液加入破膜剂(乙 醇苯甲醇=6 1) 50ml，混匀，高效液相色谱法检测胞磷胆碱钠的含量M1。包封率％= M1/M X 100%
权利要求
1.一种胞磷胆碱钠脂质体固体制剂，其特征在于主要由胞磷胆碱钠、磷脂、附加剂制 成，基于重量份之比为胞磷胆碱钠1份、磷脂2-12份、附加剂0. 5-8份；优选的比例为胞磷 胆碱钠1份、磷脂4-10份、附加剂0. 6-3份。
2.根据权利要求1所述的胞磷胆碱钠脂质体制剂，其特征在于磷脂为蛋黄卵磷脂与二 油酰磷脂酰甘油的组合，进一步优选是重量份1 3的组合；附加剂为去氧胆酸钠与十八胺 的组合，进一步优选是重量份2 1的组合。
3.一种制备权利要求2所述的胞磷胆碱钠脂质体制剂的方法，其特征在于包括以下步骤(1)将蛋黄卵磷脂与二油酰磷脂酰甘油以及去氧胆酸钠与十八胺溶解于有机溶剂中， 置于旋转薄膜蒸发仪上减压除尽有机溶剂，获得磷脂膜；(2)加入溶有胞磷胆碱钠的缓冲溶液使磷脂膜完全水化，溶液混合均勻，保温50-70°C 状态下超声处理40-60分钟；(3)将上述步骤( 所得溶液进行喷雾干燥，即得胞磷胆碱钠脂质体粉末。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于有机溶剂选自乙醇、异丙醇、甲醇、丁酮、丙 酮、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷中的一种或几种，优选为体积比为1 1的丙酮和二氯甲烷的 混合溶剂。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于缓冲盐溶液为磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐 缓冲液、醋酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液中的一种，优选为PH值为5. 3的醋 酸-醋酸钠缓冲液。
6.一种胞磷胆碱钠脂质体固体制剂，其特征在于由上述所述的胞磷胆碱钠脂质体制剂 经喷雾干燥后与药学上可接受的其他赋形剂混合，制备成颗粒剂、片剂、胶囊剂，且各赋形 剂在药物组合物中的量可在本领域常规范围内变化。
7.根据权利要求6所述的胞磷胆碱钠脂质体固体制剂，特征在于具体由按重量份的下 列组分制成胞磷胆碱钠脂质体1份，填充剂0 2. 4份，崩解剂0 0. 2份，粘合剂0. 016 0. 1份，矫味剂0 11. 5份，芳香剂0 0. 15份和润滑剂0 0. 08份。
8.一种制备权利要求6或7所述的胞磷胆碱钠脂质体固体制剂的方法，其特征在于主 要包括下述步骤(1)将胞磷胆碱钠脂质体粉碎，过80目筛，备用；(2)将填充剂、崩解剂、矫味剂等粉碎，过80目筛，混合，备用；(3)将上述原辅料混合均勻，加入粘合剂、芳香剂制软材，过筛制粒，烘干，加入润滑剂 混合均勻，整粒；(4)将干燥的颗粒进行分装，压片或填充于胶囊中，即得胞磷胆碱钠脂质体固体制剂。
9.权利要求1或2所述的胞磷胆碱钠脂质体制剂在制备脑保护剂或神经保护剂的药物 中的应用，其中胞磷胆碱钠脂质体制剂主要用于头部外伤及脑术后伴有意识障碍、脑梗塞 急性意识障碍、促进脑卒中偏瘫患者上肢功能恢复及急性胰腺炎等病症。
10.权利要求6或7所述的胞磷胆碱钠脂质体固体制剂在制备脑保护剂或神经保护剂 的药物中的应用，其中胞磷胆碱钠脂质体固体制剂主要用于头部外伤及脑术后伴有意识障 碍、脑梗塞急性意识障碍、促进脑卒中偏瘫患者上肢功能恢复及急性胰腺炎等病症。
全文摘要
本发明涉及一种胞磷胆碱钠脂质体固体制剂，主要由胞磷胆碱钠、磷脂、附加剂和其他药用辅料制成，基于重量份之比为胞磷胆碱钠1份、磷脂2-12份、附加剂0.5-8份。本发明制备的脂质体固体制剂大大提高了活性成分胞磷胆碱钠的稳定性，延长了产品的有效期，而且由于磷脂的吸收协同了胞磷胆碱钠的治疗活性，进一步提高了生物利用度高，提高了制剂的产品质量，减少了毒副作用。
文档编号A61P25/02GK102078299SQ20111000008
公开日2011年6月1日 申请日期2011年1月4日 优先权日2011年1月4日
发明者廖爱国 申请人:海南美大制药有限公司