专利名称：具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物及其制备方法
技术领域：
本发明提供一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物及其制备方法，尤其是含有 甾体皂苷类和倍半萜葡萄糖苷类成分的短葶山麦冬提取物，以及该提取物的制备提纯方 法。
背景技术：
短葶山麦冬(Liriope musacarli (Decne. )Bailey)属于百合科山麦冬属植物，其 块根历来一直作为麦冬药材的替代品使用；《中国药典(一部)》收载短葶山麦冬作为山麦 冬的药材来源之一。短葶山麦冬皂苷C是从短葶山麦冬中提取的一种单体化合物，已有研究表明，其 具有良好的抗S180实体瘤和艾氏腹水癌的活性。短葶山麦冬皂苷C的提取方法是将短葶山麦冬药材粗粉先用甲醇提取，再依次经 乙醚、正丁醇萃取，正丁醇萃取物经kphadex LH-20和硅胶柱层析后得到的单体化合物。技术人员发现，短葶山麦冬皂苷C的出率低，制备成本高，应用到医药领域的市场 直接导致患者的治疗成本大幅增加，因此降低应用成本是药品进入市场流通的必然。但是 最可行的降低成本的有效路径就是不提纯单体，将其改为提取有效部位是业内公知的并且 通用的技术手段。有效部位，主要指的是提取物相对于单体出率高，制备成本低，适合临床 使用，并能有效降低治疗成本，患者顺应性也很好。但是医药用途的有效部位并非简单的有 效成分等的混合，而是必须针对特定的目的(治疗效果)经过特殊工艺手段去芜存菁的、精 制后的混合物，这是需要大量的工作以及娴熟的技艺才能胜任的。目前，医学发现并研究的肿瘤是人体中正在发育的或成熟的正常细胞，在某些不 良因素的长期作用下，某部的细胞群，出现的过度增生或异常分化而生成的新生物，在局部 形成肿块。但它与正常的组织和细胞不同，不按正常细胞的新陈代谢规律生长，而变得不受 约束和控制，导致了细胞呈现异常的形态、功能和代谢，以致可以破坏正常的组织器官的结 构并影响其功能。恶性肿瘤细胞还能向周围浸润蔓延，甚至扩散转移到其他器官组织，继续 成倍增生，造成对人体或生命极大的威胁。人体在生长的过程中虽常有肿块形成，但肿块不 一定都是肿瘤。因此，必须鉴别肿块的性质，才能做到正确诊断、正确治疗。肿瘤在临床上 有实体瘤和非实体瘤之分，实体瘤及有形瘤可通过临床检查如X线摄片、CT扫描、B超或触 诊扪及到的有形肿块称实体瘤。而X线、CT扫描、B超及触诊无法看到或扪及到的肿瘤如血 液病中的白血病就属于非实体瘤。癌症的分类血癌(白血病)、骨癌、淋巴癌(包括淋巴细胞瘤)、肠癌、肝癌、胃癌、 盆腔癌(包括子宫癌，宫颈癌)、肺癌(包括纵隔癌)、脑癌、神经癌、乳腺癌、食道癌、肾癌。由此可见，简单地用S180的实验结果不能在临床上定位于人体的任何准确位置 的癌症/肿瘤，况且单体对某种肿瘤的瘤株有效并不能证明有效部位同样有效，本发明将 用详实的数据证明这一论点，而医学治疗癌症/肿瘤是严格按照肿瘤在人体的生长部位或 器官进行医治的，因此，现有技术中关于短葶山麦冬皂苷C以及关于短葶山麦冬的文献对癌症治疗的临床研究仅仅起到引路的作用，而很难认为其作为临床依据或者起到教导的作用。因此，本领域急需发明一种可以分离出包括短葶山麦冬皂苷C单体在内(但不一 定是主要的有效成分)的提取物及其制备方法，目的是可以得到具有确实成分的、治疗效 果明确的短葶山麦冬提取物，使得到的提取物可以直接用于医药领域的治疗目的明确的各 种制剂，明确规范该植物提取物的医学用途，降低含有短葶山麦冬提取物的产品的副作用 以及降低其医药用途风险。
发明内容
本发明经过大量的实验，研制出一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物及其制 备方法，该方法简单、高效，分离度高，使得提取物的活性更加有效、准确和针对性强。本发明目的在于提供一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物，该提取物具有抗 肿瘤、抗癌方面的活性，该效果更正了现有技术中公认的短葶山麦冬皂苷具有治疗实体瘤 的医学疗效方面的偏差和误区，颠覆了现有的部分理论，对短葶山麦冬的进一步研究以及 短葶山麦冬提取物对肿瘤的治疗具有可贵的指导意义。所述的具有抗肿瘤作用既包括抗肿 瘤作用也包括辅助抗肿瘤作用。本发明的目的在于提供上述短葶山麦冬提取物抗肿瘤，如肺癌、肝癌和宫颈癌等 恶性肿瘤方面的治疗作用。本发明目的还在于提供一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物的制备方法，其 在现有的常规技术得到的短葶山麦冬粗提物，进一步经过精制，从而提纯了活性成分，使其 有益的活性效果更加明确。本发明还提供了一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物，该提取物是按照以下 方法制得以短葶山麦冬根(块根或须根)为原料，以乙醇提取，提取液用正丁醇萃取，得粗 提物；取粗提物加水溶解后，使其通过非极性大孔树脂柱，先以水洗脱至洗脱液无色，再以 体积浓度51 95%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液至洗脱液无色，得所述的短葶山麦冬提取 物。以上述方法得到的短葶山麦冬提取物的重量为100%作为基准进行计算，其中，留体皂 苷类成分含量为2 30% wt，优选5 15% wt，该留体皂苷类成分包括短葶山麦冬皂苷C。本发明的短葶山麦冬提取物中，标识性成分为短葶山麦冬皂苷C，其为单体化 合物，中文名鲁斯考皂甙元-l_0-[i3-D-吡喃葡萄糖苷(1 — 2)] [β-D-吡喃木糖基 (1 — 3)]-β -D-吡喃岩藻糖苷，简称Lm-3 ；该单体的色谱峰的保留时间为10 55分钟。 经过验证，本发明所述的短葶山麦冬提取物中还含有短葶山麦冬皂苷A、短葶山麦冬皂苷B 等同样属于皂苷类的成分。经过进一步的验证，惊奇的发现本发明的短葶山麦冬提取物中还含有含量为2 20% wt，优选为2 10%的倍半萜葡萄糖苷类成分，特别是除了 Liriopeoside A(山麦 冬糖苷A)外的4个倍半萜葡萄糖苷类成分是首次在短葶山麦冬中发现，他们分别是: Liriopeoside B (山麦冬糖苷 B)、liriopeoside C(山麦冬糖苷 C)、Liriopeoside D (山麦 冬糖苷D)、liriopeoside E(山麦冬糖苷E)，色谱峰的保留时间在5 30分钟。本发明提取物中的倍半萜葡萄糖苷类成分多为新化合物，本领域内尚没有统一、 公认的中文名称，因此参照结构相似且国际公认的Liriopeoside A(在本文中将其中文名称暂译为山麦冬糖苷A或山麦冬属糖苷A成分名称来命名其他几个倍半萜葡萄糖苷 类新成分，其名称分别为iiriopeoside B(暂译为山麦冬糖苷B或山麦冬属糖苷B)、 Iiriopeoside C(山麦冬糖苷C或山麦冬属糖苷C)、Liriopeoside D (山麦冬糖苷D或山 麦冬属糖苷D)、liriopeoside E (山麦冬糖苷E或山麦冬属糖苷E)。
短葶山麦冬皂苷 A β-sitosterol β-D-glucopyranoside ( β -谷甾醇 β-D-批 喃葡萄糖苷，简称 Lm-1)、短葶山麦冬皂苷 B :ruscogenin 1-0- β -D-glucopyranosyl (1 — 2) - β -D-fucopyranoside (罗斯考皂甙元O- β -D-吡喃葡萄糖苷(1 — 2) - β -D-吡喃岩藻 糖苷，简称 Lm-2)和短葶山麦冬皂苷 C :ruscogenin 1-0-[ β -D-glucopyranosyl (1 — 2)] [β -D-xylopyranosyl (1 — 3) ] - β -D-fucopyranoside (鲁斯考皂甙元 1_0_ [ β -D-吡喃葡 萄糖苷(1 — 2) ] [ β -D-吡喃木糖基(1 — 3) ] - β -D-吡喃岩藻糖苷，简称Lm-3)结构和分析 具体参见 Yu B Y，Hirai Y，Shoji J，et al. Comparative studies on the constituents of ophiopogonis tuber and itscongeners. VI. Studies on the constituents of the subterranean part of Liriope spicata var. prolifera andL. muscari. (1).Chem Pharm Bull. 1990 ；38 (7) :1931_1935。上述短葶山麦冬皂苷C的结构式如下
权利要求
1.一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物，该提取物以下述方法制得以短葶山麦 冬根为原料，用乙醇提取，得到的提取液用正丁醇萃取，得粗提物；该粗提物加水溶解后，使 其通过非极性大孔树脂柱，先以水洗脱至洗脱液无色，再以体积浓度51 95%的乙醇溶液 洗脱至洗脱液无色，收集乙醇洗脱液，得所述的短葶山麦冬提取物。
2.如权利要求1所述的短葶山麦冬提取物，其中，所述的短葶山麦冬提取物中含有2 30% wt的留体皂苷类成分和2 20% wt的倍半萜葡萄糖苷类成分，以该短葶山麦冬提取 物的重量100% wt为基准计。
3.如权利要求2所述的短葶山麦冬提取物，其中，所述的留体皂苷类成分包括短葶山 麦冬皂苷C，该短葶山麦冬皂苷C的结构式为
4.如权利要求2所述的短葶山麦冬提取物，该倍半萜葡萄糖苷类成分中含有以下成分，其结构式为
5.如权利要求1所述的短葶山麦冬提取物，其中，所述的粗提物通过下述方法制得以 短葶山麦冬根为原料，以短葶山麦冬根重量至少4倍量的体积浓度51 95%的乙醇提取， 得到的提取液回收溶剂至无醇味，再加水分散，用正丁醇萃取，得粗提物；取该粗提物加水 溶解，过滤，滤液通过非极性大孔树脂柱，先以水洗脱至洗脱液无色，再以乙醇的水溶液洗 脱，收集洗脱液至洗脱液无色，得所述短葶山麦冬提取物。
6.权利要求1所述的短葶山麦冬提取物的制备方法，包括短葶山麦冬根为原料，以乙 醇提取，得到的提取液用正丁醇萃取，得粗提物；该粗提物加水溶解后，使其通过非极性大 孔树脂柱，以水洗脱至洗脱液无色，再以体积浓度51 95%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液至洗脱液无色，得所述短葶山麦冬提取物。
7.如权利要求6所述的制备方法，其中，在所述的以乙醇提取的步骤中，乙醇的用量为 所述短葶山麦冬根重量的4 20倍。
8.如权利要求6所述的制备方法，其中，所述的收集洗脱液至洗脱液无色后，得到的短 葶山麦冬提取物中短葶山麦冬皂苷C的含量为2 30 %，倍半萜葡萄糖苷含量为2 20 %， 以所述的短葶山麦冬提取物的重量为100%计。
9.如权利要求6所述的制备方法，其中，所述的粗提物通过下述方法制得以短葶山麦 冬根为原料，以相对于短葶山麦冬根的原料重量的至少4倍量的体积浓度51 95%的乙醇 提取，得到的提取液回收溶剂至无醇味，再用水分散，用正丁醇萃取，取正丁醇层萃取液，干 燥，得所述的粗提物。
10.如权利要求9所述的制备方法，其中，在所述提取液回收溶剂至无醇味，再用水分 散，用正丁醇萃取的步骤中，水的用量为短葶山麦冬根重量的0. 1 10倍，正丁醇的用量为 水的重量的0. 5 5倍。
11.权利要求1所述的短葶山麦冬提取物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
12.权利要求1所述的短葶山麦冬提取物在制备肿瘤治疗辅助用药物中的用途。
全文摘要
本发明提供了一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物，该提取物用以下方法制得以短葶山麦冬根为原料以乙醇提取，提取液用正丁醇萃取得粗提物；取粗提物加水溶解，使该粗提物溶液通过非极性大孔树脂柱，先以水洗脱至洗脱液无色，再以乙醇的水溶液洗脱，收集洗脱液至洗脱液无色，得所述的短葶山麦冬提取物；本发明还提供了上述短葶山麦冬提取物的制备方法。
文档编号A61K31/7048GK102085293SQ20111000785
公开日2011年6月8日 申请日期2011年1月14日 优先权日2011年1月14日
发明者丁锐, 杜树山, 林瑞超, 王钢力, 聂黎行, 谢文利 申请人:中国食品药品检定研究院