专利名称：夏枯草酸的制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及夏枯草酸的制备方法和应用，特别是以熊果酸为原料制备夏枯草酸的方法及其产品应用，属于药物化学技术领域。
背景技术：
肝细胞损伤是各型肝病共同的病理基础，其中包括病毒、酒精和化学物质三大因素所引起的肝损伤。肝损伤性疾病已成常见病、多发病，发病率越来越高。我国是肝病的高发地区，因此研究保肝药物意义重大。当前，我国虽然在临床上广泛应用甘草甜素、联苯双酯、当飞利肝宁和黄芪注射液等保肝、抗肝损伤中药有效成分或复方，但经国际认可的该类药物均不是我国自主发明的 (刘平，理论联系实际，基础结合临床，促进中西医结合肝脏病学科发展，中西压结合学报， 2003，1 (2) 81-83)。因此，如何从传统中药中挖掘具有自主知识产权的保肝类药物，一直是我们努力的目标。普遍存在于植物中的熊果酸对乙醇、硫代乙酰胺、氨基半乳糖和CCL4S 导的小鼠肝损伤有保护作用(Liu J. Pharmacology of oleanolic acid and ursolic acid.JEthnopharmacol 1995 ;49 :57-68 ;Jeong HG. Inhibition of cytochrome P450 2Elexpression by oleanolic acidHepatoprotective effects against carbontetrachIoride-induced hepatic injury. Toxicol Lett 1999 ； 105 :215-222 ；ShuklaB, Visen PKS, PatnaikGK, Tripathi SC, SrimalRC, DayalR, DobhalPC.Hepatoprotective activity in rat of ursolic acid isolated from Eucalyptushybrid. Phytother Res 1992 ；6 (2) :74-79.)。本发明人在开展熊果酸和齐墩果酸的结构衍生物及生物活性筛选研究(白育军，杨小生，康文艺等，熊果酸的结构修饰物及其抗肿瘤活性，华西药学杂志，2003，18 (2) 87 90 ；陈磊，杨小生，杨娟等，五环三萜衍生物的合成和对α-葡萄糖苷酶的抑制活性，中国药科大学学报，2010，41 (3) :222-225)时发现，五环三萜类化合物的A环多氧特别是1，2，3-三羟基取代物具有较强的保肝活性。因此，本发明对熊果酸类衍生物的合成工艺以及生物活性进行了研究，以筛选出高保肝活性的A环不同三羟基取代构型的衍生物。
发明内容
本发明的目的在于提供夏枯草酸的制备方法和应用。本发明以熊果酸为原料合成夏枯草酸，并对其进行了 CCl4所致肝细胞损伤的保护活性筛选，发现夏枯草酸及其盐对四氯化碳诱导体外肝细胞损伤和体内肝损伤具有很好的保护作用，夏枯草酸对四氯化碳诱导小鼠肝损伤有很好的保护作用，可应用于保肝药物的制备中。本发明的技术方案夏枯草酸的制备方法一取熊果酸U-1，经Jones 试剂氧化得化合物U-2，U-2经苄溴(即溴化苄)苄基化得化合物U-3, U-3 经^ 氧化得α，β不饱和酮Se-1，Se-I在过氧化氢的作用下得U_15，
权利要求
1.夏枯草酸的制备方法，其特征在于取熊果酸υ-1，经Jones试剂氧化得化合物U-2， U-2经苄溴苄基化得化合物U-3，U_3经SeO2氧化得α，β不饱和酮Se-I，Se-I在过氧化氢的作用下得U-15，硼氢化钠还原U-15得R-10-1中间体，再经高氯酸水解开环得FU-16-1， 钯碳催化氢化后得1 α，2 α - 二羟基熊果酸，即夏枯草酸；其反应路线如下
2.根据权利要求1所述夏枯草酸的制备方法，其特征在于具体制备过程为①取1摩尔份的熊果酸，用丙酮溶解，置于冰水浴中搅拌15min，缓慢滴加1. 14摩尔份的Jones试剂， 在N2保护下搅拌反应5h，用NaOH水溶液调节pH至中性，减压蒸去溶剂，用乙酸乙酯萃取，所得残余物经硅胶柱层析纯化得U-2 ；②取1摩尔份的U-2，加入丙酮溶解，再加10摩尔份的 K2CO3，室温下搅拌30min，再加1. 17摩尔份的溴化苄，在N2保护下反应18h，减压除去丙酮， 用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥，减压除去溶剂，残留物经硅胶柱层析得U-3 ；③取1摩尔份的U-3和1. 5摩尔份的SeO2，加入乙酸酐，在N2保护下回流反应5h，用2N氢氧化钠水溶液终止反应，加入适量水后用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤、无水MgSO4干燥，减压除去溶剂，残余物经硅胶柱层析得Se-I ；④取1摩尔份 Se-I，加入甲醇溶解，再加入含1.5摩尔份NaOH的10% NaOH水溶液，搅拌30min后，加入 10摩尔份30 % H2O2，在N2保护下回流反应3h，用盐酸水溶液调节pH至中性，回收甲醇，残余物加水分散，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥，减压回收溶剂， 残余物经硅胶柱层析得U-15 ；⑤取1摩尔份U-15，加入甲醇溶解，在0 5°C下搅拌15min 后，分2 3次加入10摩尔份NaBH4,在N2保护下反应2h，用盐酸水溶液调节pH至中性， 回收甲醇，残余物加水分散，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥， 减压回收溶剂，残余物经硅胶柱层析得R-10-1 ；⑥取1摩尔份R-10-1，加入丙酮溶解，加入.1. 5摩尔份高氯酸，再加入蒸馏水两滴，在队保护下反应18h，用氢氧化钠水溶液调节pH至中性，回收丙酮，残余物加水分散，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤、无水MgSO4 干燥，减压回收溶剂，残余物经硅胶柱层析得FU-16-1 ；⑦取FU-16-1溶解于无水甲醇中，加入0. 1倍于FU-16-1摩尔量的钯碳作为催化剂，室温下氢化还原，即得1 α，2 α - 二羟基熊果酸，即夏枯草酸。
3.夏枯草酸的制备方法，其特征在于取熊果酸U-1，经Jones试剂氧化得化合物U-2， U-2经^3 氧化得α，β不饱和酮Se，Se在过氧化氢的作用下得U_15_l，硼氢化钠还原 U-15-1得R-10-20中间体，再经高氯酸水解开环得1 α，2 α - 二羟基熊果酸，即夏枯草酸； 其反应路线如下
4.根据权利要求3所述夏枯草酸的制备方法，其特征在于具体制备过程为①取1摩尔份的熊果酸，用丙酮溶解，置于冰水浴中搅拌15min，缓慢滴加1. 14摩尔份的Jones试剂， 在N2保护下搅拌反应5h，用NaOH水溶液调节pH至中性，减压蒸去溶剂，用乙酸乙酯萃取，所得残余物经硅胶柱层析纯化得U-2 ；②取1摩尔份的U-2和2摩尔份的，加入乙酸酐，在氮气保护下回流反应证，用2N氢氧化钠水溶液终止反应，加入适量水后用乙酸乙酯萃取， 有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥，减压回收溶剂，残余物经硅胶柱层析得％ ；③取1摩尔份的％，加入甲醇溶解，再加入含1. 5摩尔份NaOH的10% NaOH水溶液，搅拌30min后，加入5摩尔份30% H2O2，在队保护下回流反应池，用盐酸水溶液调节PH至中性，回收甲醇，残余物加水分散，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥，减压回收溶剂，残余物经硅胶柱层析得U-15-1 ； ④取1摩尔份的U-15-1，加入甲醇溶解，在0 5°C下搅拌15min后，分2 3次加入5摩尔份的NaBH4,在N2保护下反应池，用盐酸水溶液调节pH至中性，回收甲醇，残余物加水分散， 用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥，减压回收溶剂，残余物经硅胶柱层析得R-10-20 ；⑤取1摩尔份的R-10-20，加入丙酮溶解，加入 1. 5摩尔份的高氯酸，再加入蒸馏水一滴，在N2保护下反应18h，用氢氧化钠水溶液调节pH 至中性，回收丙酮，残余物加水分散，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和NaHCO3水溶液洗涤、饱和食盐水洗涤、无水MgSO4干燥，减压回收溶剂后，残余物经硅胶柱层析得Ια，2 α-二羟基熊果酸，即夏枯草酸。
5.如权利要求1-4中任一项所述制备方法制得的夏枯草酸在制备保肝药物中的应用， 其特征在于将夏枯草酸或者夏枯草酸溶解在氢氧化钠、氢氧化钾或氨水溶液中制得的夏枯草酸盐与适当辅料制成保肝药物制剂。
6.根据权利要求5所述夏枯草酸在制备保肝药物中的应用，其特征在于所述的药物制剂为硬胶囊剂、片剂、口服液、软胶囊剂、颗粒剂或滴丸剂。
全文摘要
本发明公开了夏枯草酸的制备方法和应用，特别是以熊果酸为原料对其进行结构修饰制备夏枯草酸的方法及其产品应用。本发明采用科学合理的工艺方法制备1α，2α-二羟基熊果酸(即夏枯草酸)，该方法反应条件温和，无需特殊仪器设备，操作简单易行，易于扩大规模、实现工业化生产的目的；而且采用本发明方法制备的夏枯草酸及其盐(钠盐、钾盐或铵盐)对CCl4所致肝细胞损伤有显著的保护作用，对CCl4所致小鼠肝损伤有很好的保护活性，可作为保肝药物应用在急慢性肝炎，酒精、化学物质或药物致肝损相关疾病的药物制备中。
文档编号A61K31/56GK102153613SQ20111004784
公开日2011年8月17日 申请日期2011年2月28日 优先权日2011年2月28日
发明者时京珍, 朱海燕, 杨小生, 郝小江, 马琳 申请人:贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室