专利名称：一种具有抗hiv潜伏作用的药物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明属医药领域，涉及治疗艾滋病的药物，具体涉及一种具有抗HIV潜伏作用的药物及其用途，尤其涉及As2O3抗HIV潜伏作用及其在制备治疗艾滋病药物中的应用。
背景技术：
获得性免疫缺陷综合征(AIDS)是由HIV感染引起的一种严重危害人们生命健康的传染性疾病。据WHO统计全球艾滋病患者已超过4000万，每年新增患者500万，而每年死亡约为300万。目前，艾滋病临床治疗方法主要采用高效抗逆传录病毒疗法(Highlyactive antiretroviral therapy, HAART),该疗法不仅有效控制HIV复制，并且能重建AIDS患者的免疫功能，为AIDS的治疗打开了希望之门。人们曾寄希望于凭借HAART完全清除体内的HIV，从而达到彻底治愈AIDS的目的。但随后的实践证明，虽然HAART可以最大限度地抑制患者体内病毒复制，使血浆病毒载量(virus load)降低至现有常规检测方法测不出的水平，但感染者体内仍有病毒持续存在，一旦停止药物治疗，病毒载量又会反弹到治疗前水平(Ho, D. D. Toward HIV eradication or remission the tasks ahead. Science，1998. 280:1866 1867.)。研究显示，HIV难以在体内被完全清除的一个重要原因是HIV-I能够潜伏在静息的记忆CD4+T细胞中，该潜伏感染细胞是由一小部分HIV感染的活化CD4+T细胞转化而产生的，其整合的前病毒缺乏转录活性，因而，不会被免疫系统和抗逆转录酶病毒的药物攻击。尽管感染个体携带潜伏感染细胞数量较少，但衰减率是如此之慢，以至于欲在个体生存期内仅靠HAART治疗将其彻底清除是不可能的。因此，HIV潜伏感染的静息CD4+T细胞是构成机体内病毒储藏库(reservoir)的主要部分，同时也是目前临床治疗不能彻底清除HIV的巨大障碍[Finzi,D. et al. Latent infection of CD4+T cells providesa mechanism for lifelong persistence of HIV-1, even in patients on effectivecombination therapy. Na ture Med. 1999,5,512517]。一般认为 HIV-1 潜伏感染细胞形成的分子机制与整合位点处的染色质状态，抑制性核小体nuc-1的存在，以乙酰化为代表的表观遗传修饰，宿主转录因子如NF-K B以及病毒转录活化因子Tat等因素有关[Coiras，M. , M. R. et al. Understanding HIV-I latency provides clues for the eradicationof long-term reservoirs. Nat. Rev. Microbiol. . 2009. , 7 :798-812. ] 据此机制，有研究提出了清除潜伏病毒储存库的治疗策略，即试图通过药物诱导HIV潜伏感染细胞的前病毒表达，使其潜伏病毒再次激活，同时结合高效抗逆传录病毒疗法及在人免疫系统作用下，来杀死激活的潜伏感染的细胞，以此加速病毒库的清除(Richman et al. The Challenge ofFinding a Cure for HIV Infection, Science, 2009,1304, 323)。尽管，该策略已在临床上已有几个治疗方案，但其结果仍未尽人意，不是激活剂无效，就是虽有效但其毒副作用大，因而，研发安全有效于一体的能消除病毒储藏库的免疫激活剂及相应的治疗方案已是当务之急.中药作为我国所特有的医药资源，以其种类繁多、临床应用广泛、作用温和、副作用少等优点而越来越受到现代医药学的关注。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抗HIV潜伏作用的药物，尤其涉及三氧化二砷(As2O3)抗HIV潜伏作用及其在制备治疗艾滋病药物中的应用。本发明的抗HIV潜伏作用的药物能使感染细胞内潜伏的HIV表达，最终达到杀灭HIV的目的。As2O3为常用中药，现代主要集中于白血病治疗等方面。本发明涉及的三氧化二砷(As2O3) (Sigma, Product Number A 1010),英文名称Arsenic trioxide Arsenic oxide,通用或商品名称:白石比;亚砷酸；舭霜；其分子量197.84 ；
外观无色菱形结晶(三聚物、白砷石);相对密度无色菱形结晶4. 15 ;无色立方体3. 86 ；熔点无色菱形结晶278°C ;无色立方体309°C ；沸点460°C;蒸汽压13.33kPa(332. 5°C )；溶解性溶于乙醇，水中溶解度为1. 82/100 (20°C )。本发明目的的解决方案是基于建立的特有筛选模型本发明采用HIV潜伏细胞模型进行活性筛选试验，结果显示了具有抗HIV潜伏作用的As2O3,并用相应的赋型剂，按照常规的方法制成适用剂型，进行抗HIV潜伏作用试验，结果证实，所述的As2O3使感染细胞内潜伏的HIV表达，具有干预HIV潜伏的作用，与抗逆传录病毒药物联合使用，可清除被激活的潜伏感染的细胞，以此加速潜伏病毒储藏库的清除。本发明涉及的HIV潜伏细胞模型，包括一个携带绿色荧光蛋白基因的人T细胞
10.6克隆株克隆株(J-Lat Full Length Clone 10. 6)，由美国国家健康卫生研究院AIDS参考试剂计划部提供，被加洲大学Eric Verdin博士建立。该细胞小，球形细胞被悬浮培养。由携带绿色荧光蛋白基因HIV-R7/E-/GFP反转录病毒载体转染人T细胞Jurkat精细胞分选而来(Jordan A,Bisgrove D, Verdin E. HIV reproducibly establishes a latentinfection after acute infection of T cells in vitro. EMBO J 22:1868-1877,2003)；另一个建立的HIV潜伏筛选模型Cll克隆，由HIV慢病毒感染T细胞经2次分选和激活而获得(中国专利:20081003885LX)。本发明提供了一种抗HIV潜伏作用的药物，其特征在于，所述的药物中所含主要成分为As2O3原料药和药剂学上必要的辅料；该药物采用相应的赋型剂，按照常规的方法制成适用剂型。本发明中，作为抗HIV潜伏作用的药物，As2O3的用量可以为成年人每日0. I IOOmg,优选I 5mg/天,每日服用I 5次；儿童的用量和次数需在成人的基础上酌情递减。本发明中，抗HIV潜伏作用的药物可以制成口服和非口服制剂。口服制剂可制成片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等常用剂型，所用的赋型剂可以为淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羟甲基纤维素等中的一种或几种；崩解剂可以为马铃薯淀粉、羟甲基纤维素等中的一种或几种；粘合剂可以为阿拉伯胶、玉米淀粉、明胶、糊精等中的一种或几种；所述的口服制剂除上述剂型外，还可以制成乳剂、糖浆剂等。
非口服制剂可以制成注射剂，可以与注射用水、生理盐水、葡萄糖水制成注射剂，也可以在其中加入一定比例的乙醇、丙醇、乙二醇等。本发明所述的As2O3可进一步制备新型的抗艾滋病的药物，将为艾滋病的彻底治愈提供新的途径。
本发明的进一步目的是提供一种治疗艾滋病药物的制备方法，采用所述的As2O3为药物原料，用相应的赋型剂，按照常规的方法制成口服和非口服制剂，其中的As2O3的用量可以为成年人每日0. I IOOmg,优选I 5mg/天,每日服用I 5次；儿童的用量和次数需在成人的基础上酌情递减。本发明的抗HIV潜伏作用的药物的优点有1，提出了 As2O3的新用途，所述的As2O3在低浓度时即能明显使感染细胞内潜伏的HIV表达。2，所述的As2O3可作为活性成分，制备抗H IV潜伏作用的药物，且制备工艺简单实用。3，可进一步制备治疗艾滋病药物，将为艾滋病的彻底治愈提供新的途径。为了便于理解，以下将通过具体的附图和实施例对本发明的抗HIV潜伏作用的药物进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例和附图仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本发明的范围内。
图IAs2O3对HIV潜伏诱导激活荧光显微镜下观察结果，未加As2O3组(图1-1为荧光照片，图1-2为同一视野白光照片)，加As2O3 (图1_3为荧光照片，图1-4为同一视野白光照片，图1-5为As2O3处理后流式细胞图，图1-6为未加As2O3处理的流式细胞图，)；为了便于在打印文本上识别，荧光照片经去色处理后，其荧光细胞为白色。
具体实施例方式实施例IAs2O3对HIV潜伏诱导激活的影响按每孔2X10E4个细胞将Cll细胞种植于96孔板，每孔加入100 yl含10 %FBS(Gibco)的1640培养基(Gibco)。24小时后，加As 203至终浓度I U g/mL。每个浓度至少3个复孔，每个实验重复3次。药物处理细胞72小时后，在荧光显微镜下观察细胞GFP表达情况，并收集细胞进行流式细胞术检测，分析荧光细胞所占比例。本发明以终浓度为I ii g/mL的As2O3处理HIV潜伏感染细胞模型，在As2O3处理后的3天，通过对报告基因绿色荧光蛋白的荧光显微镜观察和流式细胞术检测，分析HIV潜伏感染细胞的激活效率，从而获得药物作用的剂量效应关系。结果显示，HIV潜伏感染细胞经As2O3处理后绿色荧光阳性的细胞比例达高达33% ;未加As2O3处理的HIV潜伏感染细胞，其荧光阳性的细胞比例仅有不到1%背景激活，结果提示，As2O3具有对HIV潜伏感染细胞的干预作用。
权利要求
1.一种具有抗HIV潜伏作用的药物，其特征在于，所述的药物中以三氧化二砷为原料，以及药剂学上必要的辅料。
2.按权利要求I所述的具有抗HIV潜伏作用的药物，其特征在于，所述的三氧化二砷的剂量为成人每日0. I IOOmg,
3.按权利要求I所述的具有抗HIV潜伏作用的药物，其特征在于，所述的三氧化二砷的剂量为成人I 5mg/天。
4.按权利要求I所述的具有抗HIV潜伏作用的药物，其特征在于，所述的药物剂型为口服给药或非口服给药剂型。
5.按权利要求4所述的具有抗HIV潜伏作用的药物，其特征在于，所述的口服给药剂型是片剂、散剂、颗粒剂或胶囊剂，或乳剂或糖浆剂。
6.按权利要求4所述的具有抗HIV潜伏作用的药物，其特征在于，所述的非口服给药剂型是注射剂。
7.权利要求I的具有抗HIV潜伏作用的药物在制备治疗艾滋病药物中的用途。
8.按权利要求7所属的用途，其特征在于，所述的药物使感染细胞内潜伏的HIV表达。
全文摘要
本发明属医药领域，涉及一种抗HIV潜伏作用的药物，尤其涉及As2O3抗HIV潜伏作用及其在制备治疗艾滋病药物中的应用。本发明采用HIV潜伏细胞模型进行活性筛选试验，结果显示As2O3使感染细胞内潜伏的HIV表达，具有抗HIV潜伏作用，与抗逆传录病毒药物联合使用，可清除被激活的潜伏感染的细胞，以此加速潜伏病毒储藏库的清除。本发明以As2O3为原料，制成抗HIV潜伏作用的各种制剂。本发明可进一步制备新型的抗艾滋病的药物，将为艾滋病的彻底治愈提供新的途径。
文档编号A61P31/18GK102727523SQ20111008447
公开日2012年10月17日 申请日期2011年4月2日 优先权日2011年4月2日
发明者朱焕章, 马忠俊 申请人:复旦大学