专利名称：Fstl1的小干扰RNA抗肺纤维化的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及Fstll的小干扰RNA在预防 和治疗肺纤维化中的新用途，属于医药技术领域。
背景技术：
特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)是一种以寻常型间质型肺炎(ΠΡ)为特征性病理改变的慢性炎症性间质性肺疾病，病程一般呈进行性发展，预后差，确诊后平均存活时间为2-4年。其病因复杂、发病机制尚不明确，临床上缺乏有效的治疗手段。虽然对于特发性肺纤维化的发病机制研究已经从细胞、细胞因子、细胞外基质(ECM)、细胞信号转导途径等多方面深入展开，但是其确切发病机制尚未明确，因此其治疗也主要是从抑制肺纤维化和改善肺纤维化入手，从而也使其治疗上缺乏特异性和有效性。对IPF的发病机理及分子机制进行深入研究可为IPF的治疗及药物开发提供帮助。利用特定手段诱导动物发生肺纤维化建立肺纤维化疾病模型对于该疾病的研究有十分重要的意义，疾病动物模型可以帮助我们揭示在发病过程中涉及的分子及作用机理。目前用于诱发特发性肺纤维化制作动物模型的手段很多，博莱霉素作为最常用的诱导试剂因其造模方法较为简单成本较低因而得到了广泛应用。利用博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型可以帮助研究者更好地描绘IPF的病理学特征并为鉴定IPF新的治疗方法及新药的研制提供有力保障。TGF-β是肺纤维化的发展过程中的一个极其关键的因子。大量可影响TGF-β的药物已经开始用于博莱霉素小鼠模型的研究中，其中一些已显现出可喜的应用前景。而FstlKFollistatinlike I)是一种分泌型的细胞外糖蛋白。它最初从小鼠成骨细胞系MC3T3-E1中克隆获得，其表达量可由TGF-β I (转化生长因子β I)诱导上调。已有的研究表明Fstll与胚胎发育、肿瘤迁移及炎症反应有关。最近的microarray数据分析表明IPF患者肺中FSTLl的表达较正常组织显著升高(GE0_accession :⑶S1252)。这表明Fstll极可能对肺纤维化有影响。
发明内容
针对现有技术中存在的技术问题，尤其是肿瘤病人在药物治疗过程中经常出现的肺纤维化副作用，本发明提供了一种新的技术方案，即利用Fstll干扰小RNA用于预防和治疗肺纤维化。本发明通过系统的研究发现对于C57BL/6小鼠经气管注射博莱霉素(5U/Kg)造成肺纤维化的动物模型，在造模后3、7、11、15和19天分别经舌下气管喷雾Fstll的干扰小RNA和无义干扰小RNA。通过病理组织学分析研究博莱霉素灌注小鼠肺部损伤和纤维化的改变，发现减少Fstll的表达能显著降低博莱霉素处理小鼠的死亡率；减少Fstll的表达显著降低博莱霉素诱导的肺部损伤和肺纤维化程度。与现有技术相比，本发明的优点为TGF_i3是纤维化过程中最重要的细胞因子，可以增加Fstll的表达，而利用Fstll干扰小RNA减少Fstll表达后能明显抑制博莱霉素所致肺纤维化进程，大大降低其死亡率，减少博莱霉素的副作用，为病人赢得宝贵的治疗时间。
Sham :假手术组ScRNA :无义干扰小RNA组Si-Fstll =Fstll 干扰小 RNA 组η = 10-15**Ρ <0.01与假手术组相比
##Ρ < O. 01与模型组相比图I三组小鼠的生存率图2三组小鼠肺HE染色图3博莱霉素处理21天后三组小鼠肺Masson染色具体实施方案以下将结合实施例对发明作进一步说明，但并不限制本发明的范围。实施例I材料和方法主要试剂和实验动物实验中所使用的Fstll 干扰小 RNA 购自(Dharmacon RNAi Technologies,Thermo);无义小 RNA 购自(Dharmacon RNAi Technologies, Thermo);博莱霉素(Bleomycin)购自日本化药株式会社(批号Y91450)。Fstll干扰小RNA对博莱霉素所致肺纤维化实验中所使用的动物规格为SPF级C57BL/6J小鼠(雄性，8-10周，20_25g)，购自南京大学模式动物研究所，动物合格证号SCXK(苏)2010-0001。动物饲养于南京大学模式动物研究所，恒温恒湿，自由饮食。肺纤维化动物模型制备雄性C57BL/6J (周龄8-10周)小鼠，以7. 5 %水合氯醛按O. 6ml/100g腹腔(I. P.)注射麻醉小鼠，气管内注射博莱霉素(5U/kg)。具体方案如下称量体重并记录后将小鼠固定于操作台，颈部用70%酒精消毒，利用手术刀在小鼠颈部垂直划开大约Icm长，利用显微镊分离组织暴露气管，将注射器经气管软骨环间隙朝向心端刺入气管，然后按5U/kg的计量缓慢注入与其体重相适应体积的博莱霉素生理盐水溶液(5u/ml)，立即将动物直立并左右旋转，使药液在肺内均匀分布。假手术组气管内注射等量的注射用生理盐水。实验期间按照IOug/只标准给干扰小RNA，同时记录体重及动物的死亡率，至第21天结束实验。实验分组设计如下实验共分为对照组(Sham) ,Fstll干扰小RNA组、无义小RNA组。在博莱霉素造模的第3、7、11、15和19天经舌下气管喷雾10ug/20ul Fstll干扰小RNA、无义干扰小RNA和相应体积的生理盐水作为对照组。至第21天结束实验。详细的分组设计参见表I。表I. Fstll干扰小RNA对博莱霉素所致肺纤维化作用实验设计
权利要求
1.Fstll的小干扰RNA在制备预防和/或治疗肺纤维化药物中的应用。
2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于所述Fstll的小干扰RNA在制备预防、治疗特发性肺纤维化药物时的剂型为喷雾液济。
3.根据权利要求I或2所述的应用，其特征在于所述药物的注射途径为舌下气管喷雾。
全文摘要
本发明公开了Fstl1的小干扰RNA在抗纤维化中的用途。本发明经药理实验验证，Fstl1的小干扰RNA显著降低博莱霉素灌注小鼠的死亡率；减少Fstl1的表达能显著降低博莱霉素诱导的肺部损伤和肺纤维化。说明Fstl1的小干扰RNA能用于制备预防和/或治疗肺纤维化药物。
文档编号A61K31/7088GK102772425SQ20111012085
公开日2012年11月14日 申请日期2011年5月11日 优先权日2011年5月11日
发明者宁文, 朱敏生, 耿燕, 董莺莺 申请人:南京大学