专利名称：逆向蒸发法制备石榴皮多酚脂质体的方法
技术领域：
本发明属于食品、药品加工领域中多酚类物质脂质体技术领域，具体涉及以纯化后的石榴皮多酚为原料，逆向蒸发法制备石榴皮多酚脂质体。
背景技术：
石榴皮多酚为石榴科植物石榴果皮的主要活性成分，是石榴皮中所含的一类多羟基酚类化合物的总称。其组成成分包括安石榴苷、没食子酸、儿茶素、绿原酸、表儿茶素、咖啡酸、芦丁等多种化合物。石榴皮多酚具有抗氧化、清除自由基活性、抗突变和抗肿瘤、防癌、抑菌消炎、抗病毒活性、防治心脑血管疾病、降血脂作用，还具有养肝护肾、调节免疫、抗疲劳等多种药理功能。石榴皮多酚作为一种天然的功能性成分，其应用领域十分广阔，已在医药、食品、保健品、动物饲料和化妆品等领域拥有突出优势。但是，石榴皮多酚稳定性差， 易受光、热、氧气、PH等因素影响，极易失去生理活性功能和营养价值，极大地限制了其应用。因此，石榴皮多酚的稳定性及生物利用率成为现在研究的焦点。脂质体是由磷脂双分子层构成的脂质微囊，粒径可从几十纳米到几微米，分散性和生物相溶性均较为理想。同时，脂质体作为药物或保健食品载体，具有天然无毒及生物可降解性，提高了药物的稳定性，促进药物吸收，延长药物作用时间，对局部病变部位有靶向作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种操作简便、生产成本低、包封率高、产物粒度均勻、稳定性好的石榴皮多酚脂质体的制备方法。解决上述技术问题所采用的技术方案是用氯仿溶解大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为1 5 1的混合物，加入浓度为lmg/mL的石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液，胆固醇与石榴皮多酚的质量比为1 0.025，氯仿与石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液的体积比为1 5 1， 超声至混合物形成均勻单相体系，蒸除氯仿，用PH值为4. 5 8. 5的磷酸盐缓冲溶液溶解脂质膜，充分水合，用孔径为0. 45 μ m滤膜过滤，制备成石榴皮多酚脂质体。上述浓度为lmg/mL的石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液是由石榴皮干粉末与pH值为 6. 5的磷酸盐缓冲液配制成。本发明优选大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为2 4 1，氯仿与石榴皮多酚磷酸盐缓冲液的体积比为2 4 1，磷酸盐缓冲液的pH值为5. 5 7. 5。本发明最佳选择大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为3. 08 1、氯仿与石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液的体积比为4 1、磷酸盐缓冲溶液的pH值为6. 17。本发明采用脂质体对石榴皮多酚进行包埋处理，采用逆向蒸发法制备石榴皮多酚脂质体，并通过响应曲面法优化工艺条件，制备出包封率较高的脂质体，经对制备的脂质体进行质量评价，所制备的石榴皮多酚脂质体质量良好。
图1是大豆卵磷脂与胆固醇的质量比、氯仿与石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液的体积比两个因素对石榴皮多酚脂质体包封率的交互作用影响图。图2是石榴皮多酚脂质体的光学显微镜照片。图3是石榴皮多酚脂质体透射显微镜照片。图4是石榴皮多酚脂质体的粒径分布图。图5是石榴皮多酚脂质体的kta电位图。
具体实施例方式下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。实施例1将大豆卵磷脂308mg、胆固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入IOmL氯仿溶解大豆卵磷脂和胆固醇，加入浓度为lmg/mL的石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液2. 5mL，超声5 8分钟，混合物形成均勻单相体系，40°C旋转蒸发除去氯仿，使脂质体在瓶壁成膜，用30mL pH值为6. 17 的磷酸盐缓冲溶液溶解脂质膜，充分水合，用孔径为0. 45 μ m滤膜过滤，制备成石榴皮多酚脂质体，其包封率为54. 87%。本实施例浓度为lmg/mL的石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液是由石榴皮干粉末与pH值为6. 5的磷酸盐缓冲液配制而成。实施例2将大豆卵磷脂300mg、胆固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入7. 5mL氯仿溶解大豆卵磷脂和胆固醇，加入浓度为lmg/mL的石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液2. 5mL，超声5 8分钟， 混合物形成均勻单相体系，40°C旋转蒸发除去氯仿，使脂质体在瓶壁成膜，用30mL pH值为 6. 5的磷酸盐缓冲溶液溶解脂质膜，充分水合，用孔径为0. 45 μ m滤膜过滤，制备成石榴皮多酚脂质体，其包封率为53.对％。本实施例石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液的配制方法与实施例1相同。实施例3将大豆卵磷脂lOOmg、胆固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入2. 5mL氯仿溶解大豆卵磷脂和胆固醇，加入浓度为lmg/mL的石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液2. 5mL，超声5 8分钟， 混合物形成均勻单相体系，40°C旋转蒸发除去氯仿，使脂质体在瓶壁成膜，用30mL pH值为 4. 5的磷酸盐缓冲溶液溶解脂质膜，充分水合，用孔径为0. 45 μ m滤膜过滤，制备成石榴皮多酚脂质体。本实施例石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液的配制方法与实施例1相同。实施例4将大豆卵磷脂500mg、胆固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入12. 5mL氯仿溶解大豆卵磷脂和胆固醇，加入浓度为lmg/mL的石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液2. 5mL，超声5 8分钟， 混合物形成均勻单相体系，40°C旋转蒸发除去氯仿，使脂质体在瓶壁成膜，用30mL pH值为 8. 5的磷酸盐缓冲溶液溶解脂质膜，充分水合，用孔径为0. 45 μ m滤膜过滤，制备成石榴皮多酚脂质体。本实施例石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液的配制方法与实施例1相同。
实施例5将大豆卵磷脂200mg、胆固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入5. OmL氯仿溶解大豆卵磷脂和胆固醇，加入浓度为lmg/mL的石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液2. 5mL，超声5 8分钟， 混合物形成均勻单相体系，40°C旋转蒸发除去氯仿，使脂质体在瓶壁成膜，用30mL pH值为 5. 5的磷酸盐缓冲溶液溶解脂质膜，充分水合，用孔径为0. 45 μ m滤膜过滤，制备成石榴皮多酚脂质体。本实施例石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液的配制方法与实施例1相同。实施例6将大豆卵磷脂400mg、胆固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入10. OmL氯仿溶解大豆卵磷脂和胆固醇，加入浓度为lmg/mL的石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液2. 5mL，超声5 8分钟， 混合物形成均勻单相体系，40°C旋转蒸发除去氯仿，使脂质体在瓶壁成膜，用30mL pH值为 7. 5的磷酸盐缓冲溶液溶解脂质膜，充分水合，用孔径为0. 45 μ m滤膜过滤，制备成石榴皮多酚脂质体。本实施例石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液的配制方法与实施例1相同。为了确定本发明的最佳工艺条件，发明人进行了大量的实验室研究试验，每种试验重复三次，试验结果为三次重复试验的平均值，各种试验情况如下实验仪器XW_80A型漩涡混合器，由海门市其林贝尔仪器有限责任公司提供； 3k30超高速低温离心机，由美国Sigma公司提供；TU-1810型紫外可见分光光度计，由北京普析通用仪器有限责任公司提供；NAN04S型激光粒度和kta电位仪，由英国Malvern公司提供；H-600型透射式电子显微镜，由日本日立公司提供。1、大豆卵磷脂与胆固醇的质量比对脂质体包封率的影响向5个25mL梨形瓶中均加入胆固醇lOOmg、大豆卵磷脂、7. 5mL氯仿、2. 5mL浓度为 lmg/mL的石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液，大豆卵磷脂与胆固醇的质量比分别为1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1，超声至混合物形成均勻单相体系，40°C旋转蒸发除去氯仿，使脂质体在瓶壁成膜，用30mL pH值为6. 5的磷酸盐缓冲溶液溶解脂质膜，充分水合，用孔径为0. 45 μ m 滤膜过滤，制备成石榴皮多酚脂质体。研究大豆卵磷脂与胆固醇的质量比对脂质体包封率的影响。制作标准曲线精确称取石榴皮多酚标准品6. 25mg，加入25mL的棕色容量瓶中， 用二次蒸馏水定容，配制成质量浓度为250 μ g/mL的石榴皮多酚标准溶液；精密移取O、 0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5,3. 0,3. 5,4. OmL质量浓度为250 μ g/mL的石榴皮多酚标准溶液于 25mL的棕色容量瓶中，用二次蒸馏水定容，配制成质量浓度分别为0、5、10、15、20、25、30、 35,40 μ g/mL的石榴皮多酚工作溶液，在最佳波长260nm处用紫外可见分光光度计分别测定石榴皮多酚工作溶液的吸光度值，以石榴皮多酚的质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，并进行回归分析，得到线性回归方程y = 0. 0249x+0. 0095式中χ为石榴皮多酚的质量浓度，y为吸光度值，相关系数R2 = 0. 9997。高速冷冻离心法测定脂质体包封率取石榴皮多酚脂质体、空白脂质体溶液各 3mL于离心管中，分别加入3mL无水乙醇，置于漩涡混合器中涡旋破乳3分钟，4°C条件下 15000转/分钟离心30分钟，取上清液ImL分别置于25mL容量瓶中，用无水乙醇定容，以空白脂质体溶液作为对照，在最佳波长260nm处测定吸光度，代入线性回归方程，得到石榴皮多酚的质量浓度X，经计算，得到总药物量Ct ；另取石榴皮多酚脂质体、空白脂质体溶液各 3mL于离心管中，4°C条件下15000转/分钟离心30分钟，取上清液ImL定容至25mL容量瓶中，以空白脂质体溶液作为对照，在最佳波长260nm处测定吸光度，代入线性回归方程，得到石榴皮多酚的质量浓度X，经计算，得到游离石榴皮多酚的量Cf。根据下式计算脂质体的包封率
权利要求
1.一种逆向蒸发法制备石榴皮多酚脂质体的方法，其特征在于用氯仿溶解大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为1 5 1的混合物，加入浓度为lmg/mL的石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液，胆固醇与石榴皮多酚的质量比为1 0.025，氯仿与石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液的体积比为1 5 1，超声至混合物形成均勻单相体系，蒸除氯仿，用pH值为4. 5 8. 5的磷酸盐缓冲溶液溶解脂质膜，用0. 45 μ m滤膜过滤，制备成石榴皮多酚脂质体；上述浓度为lmg/mL的石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液是由石榴皮干粉末与pH值为6. 5的磷酸盐缓冲液配制成。
2.根据权利要求1所述的逆向蒸发法制备石榴皮多酚脂质体的方法，其特征在于大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为2 4 1。
3.根据权利要求1所述的逆向蒸发法制备石榴皮多酚脂质体的方法，其特征在于氯仿与石榴皮多酚磷酸盐缓冲液的体积比为2 4 1。
4.根据权利要求1所述的逆向蒸发法制备石榴皮多酚脂质体的方法，其特征在于磷酸盐缓冲液的pH值为5. 5 7. 5。
5.根据权利要求1所述的逆向蒸发法制备石榴皮多酚脂质体的方法，其特征在于用氯仿溶解大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为3. 08 1的混合物，加入浓度为lmg/mL的石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液，胆固醇与石榴皮多酚的质量比为1 0.025，氯仿与石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液的体积比为4 1，超声至混合物形成均勻单相体系，蒸除氯仿，用pH值为 6. 17的磷酸盐缓冲溶液溶解脂质膜，用0. 45 μ m滤膜过滤，制备成石榴皮多酚脂质体。
全文摘要
一种逆向蒸发法制备石榴皮多酚脂质体的方法，采用脂质体对石榴皮多酚进行包埋处理，通过调节大豆卵磷脂与胆固醇的质量比、氯仿与石榴皮多酚磷酸盐缓冲溶液的体积比、磷酸盐缓冲液的pH值制备成包封率高的石榴皮多酚脂质体。经质量评价，所得石榴皮多酚脂质体粒度均匀，具有良好的体外缓释性和稳定性。本发明制备方法操作简单、生产成本低，可应用于石榴皮多酚脂质体的制备。
文档编号A61K9/127GK102204939SQ20111012473
公开日2011年10月5日 申请日期2011年5月13日 优先权日2011年5月13日
发明者李建科, 杜丹丹 申请人:陕西师范大学