专利名称：一种鸦葱总提取物及其在制备治疗肝炎或保肝药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物领域，特别涉及一种鸦葱总提取物及其在制备治疗肝炎或保肝药物中的用途。
背景技术：
肝脏是人体最大、机能最复杂的重要代谢器官，其对于糖、脂质、蛋白质、维生素、 激素、胆汁等物质代谢中，均有重要作用；同时肝脏还有分泌、排泄、生物转化等方面的功能；肝脏也是机体重要的屏蔽器官，其解毒功能对机体有重要保护作用，因此当肝功能损伤时会导致代谢障碍，并影响其他脏器功能，严重时则危及生命。肝炎是严重危害人类健康的疾病之一，它主要是由以侵害肝脏为主的一组病原体所致。目前，以病毒性肝炎为主，已明确病毒性肝炎至少有五个型，其中乙型病毒性肝炎是全球病毒性肝炎中的重点防治传染病，尤其在发展中国家，也包括中国，不仅其发病率和流行率高，而且造成的影响特别严重，病人预后差，大多数病人转为慢性，可能发展成肝硬化、 肝癌等。其中乙型肝炎具有广泛的传染性，是全球性感染性疾病。肝炎特别是乙肝，目前难以根治，治疗上还没有特效药。现有技术中对于肝炎的治疗一般采用中、西医药品治疗的方法进行，西医比较好的办法是使用干扰素等药物治疗，但其成本高，一般患者承受不了，另外药物存在明显的毒副作用；我国传统中医中药对肝炎的治疗目前也有比较好的药物，其优点是价格比较低廉，患者容易接受，同时这类药物的毒副作用比较小，但其治疗周期长，效果缓慢。除肝炎以外，在我国患有其他肝脏疾病的患者罹患率同样甚高，据国家统计资料显示，慢性肝病及肝硬化为是大死亡原因的第六位，且每年死亡人数在三千人以上，且该数值仍在继续攀升中。因此研发出可有效保护肝脏并可应用于预防或治疗肝脏相关疾病的药物，实为当务之急。鸦葱为菊科植物korzonera austriaca Wild的干燥全草。五月 六采挖、晒干。 本品全长10 40厘米。根粗壮，倒圆锥状，直径约3厘米。茎多数，簇生于根颈顶端，不分枝，光滑无毛，茎基被稠密褐色的纤维状撕裂的鞘状残遗。基生叶线形，基部鞘状扩大，鞘内被稠密的棉毛，边缘平，基部边缘有棉毛；茎生叶少数，1 3枚，鳞片状。头状花序单生茎顶。其在中药上的功能与主治为消炎散肿、解毒接骨、利尿；主治痈疮、淋病、妇女带下、乳腺炎等症。鸦葱作为传统藏药(藏名巴多拉)，全草入药，文献报道鸦葱全草含有倍半萜类，三萜类，香豆素类，黄酮类等化合物。李泉妙、王广树等人研究了鸦葱中黄酮苷类化合物的提取分离及其结构鉴定(李泉妙，王广树；鸦葱中黄酮苷类成分的提取分离与结构鉴定 [J]；吉林大学学报(医学版)；2010年01期)，但未对其有效部位总提取物的药理作用做出进一步阐述。另外在其他相关文献中，也未见对鸦葱总提取物在治疗肝炎和保肝作用中的报道和说明。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种用于制备治疗肝炎和保护肝脏药物的鸦葱总提取物。为了解决上述技术问题，本发明所提供的技术方案为一种鸦葱总提取物，总黄酮质量百分含量为50% 80%，制备方法为步骤1)将鸦葱全草碎成粉末，用30% 95%乙醇提取，浓缩得到乙醇浸膏；步骤2、将所述乙醇浸膏上大孔树脂柱进行层析；步骤幻用蒸馏水洗脱后，再用30% 95%的醇水溶液洗脱树脂柱得到洗脱液，收集并浓缩干燥洗脱液至粉末状，得到鸦葱总提取物。在本发明的实施例中采用大孔吸附树脂对鸦葱全草进行分离纯化，得到鸦葱总提取物。大孔吸附树脂(macroporou absorption resin)是由聚合单体和交联剂、致孔剂、 分散剂等添加剂经聚合反应制备而成的一类有机高聚物吸附剂。从吸附性能来说，它具有理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂，选择性较好，不受无机物影响众多优点。就自身特性而言，它具有比表面积较大、交换速度较快、机械强度高、对被提取物污染小、热稳定好等特点。与其它分离技术相比，它具有提高有效成分的相对含量、产品不吸潮、生产周期短、树脂再生方便、可重复使用等优点，因而近几年在天然产物的分离纯化中被广泛应用。该大孔吸附树脂预处理方法为取一定量的大孔树脂，用95%乙醇浸泡24h ^h，湿法装柱，用95%醇洗脱，至洗脱液与蒸馏水混合不显浑浊为止，用蒸馏水洗去乙醇， 将大孔树脂倒出，室温晾干。本发明利用30% 95%的醇水溶液洗脱树脂柱，收集并浓缩醇洗液得到鸦葱总提取物。利用30% 95%的醇水溶液提取和洗脱树脂柱的两个过程，所得到的物质中鸦葱总提取物的含量基本一致，其差别在于浓度越高所需要的制备时间越短，因此其药效也
基本一致。作为优选，本发明采用70%的乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集并浓缩乙醇洗液得到鸦葱总提取物。本发明将所得到的鸦葱总提取物经真空干燥，与医学上可接收的载体按常规方法制成固体或液体药物剂型。在本发明的实施例中，发明人对制备的鸦葱总提取物进行了小鼠急性毒性试验。 在预备试验中，小鼠灌胃大剂量鸦葱总提取物亦不致死，不能测出半数致死量。为了了解小鼠对鸦葱总提取物的毒性反应情况，为进一步的保肝试验提供安全用药参考数据，采用最大耐受量试验。发明人进行了小鼠的急性最大剂量耐受试验，观察鸦葱总提取物给予小鼠后所产生的毒性反应和死亡情况，为安全用药提供一定的参考资料。实验结果表明，在试验期内其小鼠活动正常，毛发色泽，摄食及排泄正常，七日内各组小鼠都无死亡，七日后剖杀小鼠，肉眼观察小鼠脏器，未见异常现象。在本发明的一个实施例中，发明人建立了四氯化碳急性肝损伤模型，考察了四氯化碳致小鼠急性肝损伤和四氯化碳致大鼠急性肝损伤的生化指标。实验分六个组正常组、 四氯化碳模型组、阳性药物组(联苯双酯)、低剂量组、中剂量组、高剂量组，对实验数据采
4用组间T检验，结果表明鸦葱总提取物具有明显的保肝活性。模型组与正常组有极显著性差异，说明造模成功。而中剂量组、高剂量组与模型组相比较，均有极显著性差异。中剂量组、高剂量组与阳性药物组比较，发现鸦葱总提取物的保肝活性明显优于联苯双酯阳性药物组。因此，鸦葱具有显著的保肝活性，具有极大的开发价值。在本发明的一个实施例中，发明人检测了鸦葱总提取物对DPPH自由基的清除作用。DPPH是1，1- 二苯基_2_苦胼基自由基的简称。它在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其乙醇溶液呈深紫色，具有单一电子，故能够接受一个电子或是氢离子，在波长为 517nm处附近有强吸收峰。有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅， 在517nm处的吸光度值下降，且下降程度呈线性关系，因此可借紫外-可见分光光度仪来检测DPPH自由基被捕捉的情形，从而评价试验样品的抗氧化能力。实验结果表明，鸦葱总提取物对DPPH自由基的清除作用IC5tl为30ug/ml，说明鸦葱提取物的自由基清除能力强，证明了鸦葱总提取物的保肝活性。在本发明的一个实施例中，发明人检测了鸦葱总提取物对细胞内HBV DNA合成的抑制作用。鸦葱总提取物在乙型肝炎病素(HBV)DNA克隆传染人肝癌细胞的2. 2. 15细胞中培养8天。实验结果表明，其对HBV DNA的半数抑制浓度为IC5tl为3. (Mug^mL-1。阳性药 Iumol -L"1的拉米夫定(3TC)对HBV DNA的抑制率为70. 2士4. 5%。证明了鸦葱总提取物对乙型肝炎病素有较好的抑制作用。
图1为对照品鸦葱黄酮苷B的标准曲线。
具体实施例方式本发明公开了一种鸦葱总提取物及其在制备治疗肝炎或保肝药物中的用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本发明提供的技术方案为一种鸦葱总提取物，总黄酮质量百分含量为50% 80%，制备方法为步骤1)将鸦葱全草碎成粉末，用30% 95%乙醇提取，浓缩得到乙醇浸膏；步骤2、将所述乙醇浸膏上大孔树脂柱进行层析；步骤幻用蒸馏水洗脱后，再用30% 95%的醇水溶液洗脱树脂柱得到洗脱液，收集并浓缩干燥洗脱液至粉末状，得到鸦葱总提取物。为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。实施例1 鸦葱总提取物的制备取一定量的大孔树脂，用95%乙醇浸泡Mh，湿法装柱，用95%醇洗脱，至洗脱液与蒸馏水(1 幻混合不显浑浊为止。用蒸馏水洗去乙醇，将大孔树脂倒出，室温晾干。
将鸦葱全草粉碎成粉末，用50%的乙醇提取，即得鸦葱乙醇浸膏。将鸦葱乙醇浸膏上预处理过的大孔树脂柱，先用蒸馏水冲洗蛋白质、多糖等水溶性杂质，再用70%的乙醇水溶液洗脱，收集并浓缩干燥洗脱液至粉末状，得到总提取物。实施例2 鸦葱总提取物的制备取一定量的大孔树脂，用95%乙醇浸泡Mh，湿法装柱，用95%醇洗脱，至洗脱液与蒸馏水(1 幻混合不显浑浊为止。用蒸馏水洗去乙醇，将大孔树脂倒出，室温晾干。将鸦葱全草粉碎成粉末，用70 %的乙醇提取，即得鸦葱乙醇浸膏。将浸膏分散于水中，用乙醚萃取，水层挥去乙醚后将鸦葱乙醇浸膏上预处理过的大孔树脂柱，先用蒸馏水冲洗蛋白质、多糖等水溶性杂质，再用30%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液并浓缩干燥至粉末状，得总提取物。实施例3 鸦葱总提取物的制备取一定量的大孔树脂，用95%乙醇浸泡Mh，湿法装柱，用95%醇洗脱，至洗脱液与蒸馏水(1 幻混合不显浑浊为止。用蒸馏水洗去乙醇，将大孔树脂倒出，室温晾干。将鸦葱全草粉碎成粉末，用95 %的乙醇提取，即得鸦葱乙醇浸膏。将浸膏分散于水中，用石油醚萃取，水层挥去乙醚后将鸦葱乙醇浸膏上预处理过的大孔树脂柱，先用蒸馏水冲洗蛋白质、多糖等水溶性杂质，再用95 %的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液并浓缩干燥至粉末状，得总提取物。实施例4 鸦葱总提取物的制备取一定量的大孔树脂，用95%乙醇浸泡Mh，湿法装柱，用95%醇洗脱，至洗脱液与蒸馏水(1 幻混合不显浑浊为止。用蒸馏水洗去乙醇，将大孔树脂倒出，室温晾干。将鸦葱全草粉碎成粉末，用30 %的乙醇提取，即得鸦葱乙醇浸膏。将浸膏分散于水中，用石油醚萃取，水层挥去乙醚后将鸦葱乙醇浸膏上预处理过的大孔树脂柱，先用蒸馏水冲洗蛋白质、多糖等水溶性杂质，再用50%的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液并浓缩干燥至粉末状，得总提取物。实施例5 鸦葱总提取物的制备取一定量的大孔树脂，用95%乙醇浸泡Mh，湿法装柱，用95%醇洗脱，至洗脱液与蒸馏水(1 幻混合不显浑浊为止。用蒸馏水洗去乙醇，将大孔树脂倒出，室温晾干。将鸦葱全草粉碎成粉末，用60 %的乙醇提取，即得鸦葱乙醇浸膏。将浸膏分散于水中，用石油醚萃取，水层挥去乙醚后将鸦葱乙醇浸膏上预处理过的大孔树脂柱，先用蒸馏水冲洗蛋白质、多糖等水溶性杂质，再用60%的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液并浓缩干燥至粉末状，得总提取物。实施例6 鸦葱总提取物中黄酮的含量测定1鸦葱有效部位总黄酮含量测定方法1.1仪器、试剂及材料1. 1. 1 仪器AR1530电子天平(美国)101-L-S电热恒温鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械厂)TP150超声提取器(天鹏电子新技术(上海)有限公司)8302型恒温水浴锅巩义市英峪予华仪器厂
Agilent8453紫外可见分光光度计(美国)紫外分光光度仪UVmini-1240(日本岛津)RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)SHB-IIIA循环水式多用真空泵(上海豫康科教仪器设备有限公司)1.1. 2试剂及材料本实验药材采于通化地区。经吉林大学药学院生药教研室张静敏教授鉴定为鸦葱对照品鸦葱黄酮苷B(自制)，如式I所示，
权利要求
1.一种鸦葱总提取物，其特征在于，总黄酮质量百分含量为50% 80%，制备方法为步骤1)将鸦葱全草碎成粉末，用30% 95%乙醇提取，浓缩得到乙醇浸膏；步骤2、将所述乙醇浸膏上大孔树脂柱进行层析；步骤幻用蒸馏水洗脱后，再用30% 95%的醇水溶液洗脱树脂柱得到洗脱液，收集并浓缩干燥洗脱液至粉末状，得到鸦葱总提取物。
2.根据权利要求1所述的鸦葱总提取物，其特征在于，步骤1)所述乙醇为50%乙醇。
3.根据权利要求1所述的鸦葱总提取物，其特征在于，步骤幻所述乙醇浸膏还包括上一步骤之后经过乙醚或石油醚萃取过程得到的乙醇浸膏。
4.根据权利要求1所述的鸦葱总提取物，其特征在于，步骤幻所述大孔树脂柱为经过预处理后的大孔树脂柱。
5.根据权利要求3所述的鸦葱总提取物，其特征在于，所述预处理包括取大孔树脂，用 95%乙醇浸泡24h ^h，湿法装柱，用95%醇洗脱，至洗脱液与蒸馏水混合不显浑浊为止， 用蒸馏水洗大孔树脂，室温晾干。
6.根据权利要求1所述的鸦葱总提取物，其特征在于，步骤幻所述醇水溶液为70%的乙醇水溶液。
7.如权利要求1所述鸦葱总提取物在制备治疗肝炎药物中的用途。
8.如权利要求1所述鸦葱总提取物在制备保护肝脏药物中的用途。
9.一种药物制剂，其特征在于，包含权利要求1 6任意一项所述鸦葱总提取物以及医学上可以接受的载体。
全文摘要
本发明公开了一种鸦葱总提取物及其在制备治疗肝炎或保肝药物中的用途，该总提取物的制备方法为1)将鸦葱全草碎成粉末，用30％～95％乙醇提取，浓缩得到乙醇浸膏；2)将所述乙醇浸膏上大孔树脂柱进行层析；3)用蒸馏水洗脱后，再用30％～95％的醇水溶液洗脱树脂柱得到洗脱液，收集并浓缩干燥洗脱液至粉末状，得到鸦葱总提取物。本发明还详细阐述了鸦葱总提取物在制备治疗肝炎和保肝药物中的新用途，为这两类治疗药物的制备上市提供了可能。
文档编号A61K36/28GK102274262SQ20111025523
公开日2011年12月14日 申请日期2011年8月31日 优先权日2011年8月31日
发明者刘银燕, 周小平, 孙薇, 张沐新, 杨晓虹, 杨锦竹, 王广树, 王艳, 陈滴 申请人:吉林大学