专利名称：一种人工合成的g4噬菌体及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及噬菌体领域，尤其是关于一种人工合成的噬菌体。
背景技术：
随着微生物抗药性的不断增强，抗生素的发展已经越来越不能满足要求，因此，开发一种新的抗菌疗法已经变得越来越迫切。噬菌体对一些细菌具有高度的专一性，当噬菌体侵染细菌时，可在细菌中繁殖并杀死细菌；而对动植物没有毒性。因此，噬菌体以其特有的自然特征有望成为较好的抗菌药。
合成生物学“后基因组时代”生命科学研究的新兴领域。该学科通过对多种天然的或人工设计的生物学元件进行合理、系统的组装，实现生命系统的重构。该技术将“结构基因时代”的DNA建构发展为“后基因组时代”的生命建构。由于它以解决人类社会中的重大问题为出发点，具有不可估量的潜在价值。许多国家对其非常看好，并正在投入巨大力量进行研发。发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种能够治疗大肠埃希菌引起的感染性疾病的人工合 成的G4噬菌体及其应用。
为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案一种人工合成的G4噬菌体，所述 G4噬菌体的DNA序列为SEQ ID NO :1所示的第一序列。
进一步的，所述第一序列由SEQ ID NO :2所示的第二序列突变而成，所述突变位点位于所述第二序列从5’端起的第3016个核苷酸、第3328个核苷酸、第3358个核苷酸，其突变结果分别为由t突变为a、由t突变为C、由t突变为C。
一种所述的G4噬菌体在治疗大肠埃希菌引起的感染性疾病上的应用。
一种所述的G4噬菌体在防控食品中大肠埃希菌污染上的应用。
一种所述的G4噬菌体在消杀大肠埃希菌病原菌上的应用。
一种组合物，包括所述的G4噬菌体作为活性成分。
进一步的，所述组合物被用作抗生素。
一种食品添加剂，包括所述的G4噬菌体作为活性成分。
一种清洁剂或消毒剂，包括所述的G4噬菌体作为活性成分。
本发明的有益效果是基于G4噬菌体特异性裂解细菌的特性，可以杀死具有耐药性的大肠埃希菌，同时能够防止菌株进化和耐药毒株的产生，进而能够有效增加大肠埃希菌的致死率。
图1是本发明G4噬菌体基因组的环化结构图2显示本发明G4噬菌体感染大肠杆菌形成的噬菌斑；
图3是本发明G4噬菌体颗粒电镜图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式
结合附图对本发明作进一步详细说明。
发明人利用现有G4 噬菌体基因([NCBI Reference Sequence NC_001420. 2])突变后得到本发明G4噬菌体基因，现有G4噬菌体基因的DNA序列如SEQ ID NO :2所示的第二序列，本发明G4噬菌体基因的DNA序列如SEQ ID NO :2所示的第一序列。第二序列的突变位点分别是位于第二序列从5’端起的第3016个核苷酸、第3328个核苷酸和第3358个核苷酸，其突变结果分别是由t突变为a、由t突变为c和由t突变为C。
如图1所示，第一序列具有EcoRl、Kpnl、Ncol限制性内切酶位点，该三个内酶切位点分别对应上述的第3328个、3358、3016个位点，该三个内酶切位点的序列分别为 gaattc、ggtacc、ccatgg。合成得到的本发明G4卩遼菌体能够感染大肠埃希菌(即大肠杆菌) 形成噬菌斑，该噬菌斑为类圆形透明斑及大片融合斑，如图2所示。合成得到的本发明G4 噬菌体颗粒如图3中箭头所示，该颗粒的直径约40nm。设计酶切位点的目的是为了区别于野生型，表示本发明是用人工化学合成的方法制造的，而不是克隆别人的或天然的。
本发明G4噬菌体具有如下应用
I)人造G4噬菌体可以替代抗生素或与抗生素联合使用治疗人类大肠埃希菌感染性疾病。由此，可以以该G4噬菌体作为活性成分，制作出含有该活性成分的组合物，通过该组合物起到治疗或预防大肠埃希菌引起的感染性疾病的作用，该组合物可以用作抗生素。
2)可以作为食品添加剂防控食品中的烈性大肠埃希菌污染。由此，可以以该G4噬菌体作为活性成分，制作出含有该活性成分的食品添加剂，通过该食品添加剂起到防止大肠埃希菌污染的作用。
3)在一定环境条件下，对水体、土壤、物体表面进行大肠埃希菌病原菌的杀灭。由此，可以以该G4噬菌体作为 活性成分，制作出含有该活性成分的消毒剂或清洁剂，通过该消毒剂或清洁剂起到消杀大肠埃希菌病原菌的作用。
以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
序列表<110>蔡志明杨锐林唐爱发刘宇辰韩永华叶艺旺段永刚<120>一种人丄合成的G4噬菌体及其应用 <130〉DHC1110326<160>2<170>PatentIn version 3.3<210>I<211>5577<212>DNA<213>G4噬菌体突变基因序列<400>
权利要求
1.一种人工合成的G4噬菌体，其特征在于所述G4噬菌体的DNA序列为SEQ ID NO:1所示的第一序列。
2.如权利要求1所述的G4噬菌体，其特征在于所述第一序列由SEQID N0:2所示的第二序列突变而成，所述突变位点位于所述第二序列从5’端起的第3016个核苷酸、第3328个核苷酸、第3358个核苷酸，其突变结果分别为由t突变为a、由t突变为C、由t突变为C。
3.—种权利要求1或2所述的G4噬菌体在治疗大肠埃希菌引起的感染性疾病上的应用。
4.一种权利要求1或2所述的G4噬菌体在防控食品中大肠埃希菌污染上的应用。
5.一种权利要求1或2所述的G4噬菌体在消杀大肠埃希菌病原菌上的应用。
6.一种组合物，其特征在于包括权利要求1或2所述的G4噬菌体作为活性成分。
7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于所述组合物被用作抗生素。
8.一种食品添加剂，其特征在于包括权利要求1或2所述的G4噬菌体作为活性成分。
9.一种清洁剂或消毒剂，其特征在于包括权利要求1或2所述的G4噬菌体作为活性成分。
全文摘要
本发明公开了一种人工合成的G4噬菌体及其应用，所述G4噬菌体的DNA序列为SEQ ID NO1所示的第一序列。所述第一序列由SEQ ID NO2所示的第二序列突变而成，所述突变位点位于所述第二序列从5’端起的第3016个核苷酸、第3328个核苷酸、第3358个核苷酸，其突变结果分别为由t突变为a、由t突变为c、由t突变为c。基于G4噬菌体特异性裂解细菌的特性，可以杀死具有耐药性的大肠埃希菌，同时能够防止菌株进化和耐药毒株的产生，进而能够有效增加大肠埃希菌的致死率。
文档编号A61P1/00GK102994457SQ201110273749
公开日2013年3月27日 申请日期2011年9月15日 优先权日2011年9月15日
发明者蔡志明, 杨锐林, 唐爱发, 刘宇辰, 韩永华, 叶艺旺, 段永刚 申请人:蔡志明, 杨锐林, 唐爱发, 刘宇辰, 韩永华, 叶艺旺, 段永刚