专利名称:氯喹治疗和氯丙嗪预防肺感染和损伤的用途的制作方法
技术领域:
本发明涉及氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物在制备治疗和/或预防流感病毒引起的哺乳动物包括人的肺感染和/或肺损伤的药物中的用途。
背景技术:
流行性感冒病毒,简称流感病毒,分甲、乙、丙三型呈球形或丝状,直径80 120nm,三型病毒具有相似的生化和生物学特征,是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒。在分类学上,流感病毒属于正黏液病毒科,它会造成急性上呼吸道感染,并借由空气迅速的传播,在世界各地常会有周期性的大流行。流行性感冒病毒在免疫力较弱的老人与小孩及一些免疫失调的病人会引起较严重的症状,如肺炎或心肺衰竭等。甲型流感病毒为常见流感病毒,最容易发生变异,其根据H和N抗原不同,又分为许多亚型,H可分为15个亚型(Hl H15),N有9个亚型(NI N9)。其中仅HlNl、H2N2、H3N2主要感染人类,其它许多亚型的自然宿主是多种禽类和动物。甲型流感病毒的亚型则被人们称为禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV),其中对禽类危害最大的为H5、H7和H9亚型毒株。 禽流感病毒宿主范围非常广泛,自然界以禽类带毒者最多,野禽多为带毒或隐性感染,家禽以火鸡最为易感,鸡次之,鸭、鹅也可感染。一般情况下,禽流感病毒不会感染鸟类和猪以外的动物。但1997年香港首次报道发生18例H5N1人禽流感感染病例,其中6例死亡,引起全球广泛关注。1997年以后,世界上又先后几次发生了禽流感病毒感染人的事件。具有高致病性的H5N1、H7N7、H9N2、等禽流感病毒,一旦发生变异而具有人与人的传播能力,会导致人间禽流感流行。人禽流感的传染源主要是感染了禽流感病毒的鸡、鸭、鹅,特别是鸡。传播途径主要为接触传播或空气传播。至今,全球禽流感患者中发病人数最多,病死率最高的为H5N1型禽流感,死亡率高达60%。人感染H5N1型禽流感病毒后的临床特点为潜伏期较长,绝大多数患者以高热起病,伴有感冒样症状及下呼吸道症状,有时会有上呼吸道症状,极少出现像H7型流感病毒所致的结膜炎,部分患者早期会出现腹泻、呕吐、腹痛、肋痛、牙龈出血、鼻出血,与普通感冒相比,水样腹泻更为常见,随着感染时间延长,呼吸窘迫、呼吸急促和吸气时的爆裂音常见。痰量多少不定,有时为血性。几乎所有患者都出现临床肺炎;X线改变包括弥漫性、多发性或散在的渗出;组织间隙的渗出;部分融合或小叶融合伴支气管充气征。有研究表明放射学检查的异常通常出现的中位时间在发热以后7d(3 17d)。临床和病理学检查均提示重症患者病变主要在呼吸系统。病理学检查可见重症患者的肺部出现实变,常伴有出血、渗出、脓肿等病理改变。肺泡腔内可见浆液性或纤维素性渗出,伴有不同程度的透明膜形成,提示有弥漫性的肺组织损伤。目前认为,人感染H5N1型禽流感重症患者肺组织损伤基本病变和其他类型的流感、SARS和甲型HlNl流感病毒的肺基本病变相似,均为轻重不等的弥漫性肺组织损伤。截至目前仍未具有针对H5N1型禽流感病毒有效的治疗药物,且由于流感病毒的变异率高、耐药性也在升高,故仍然存在对新类型的流感治疗药物的需求。氯喹(chlOToquine)主要用于治疗疟疾急性发作,控制疟疾症状。不能阻止复发,但因作用较持久,故能使复发推迟,也不能作疟疾的预防和阻断传播。对恶性疟疾有根治效果,还可用于治疗肝阿米巴病、华支睾吸虫病、肺吸虫病、结缔组织病等。另可用于治疗光敏性疾患,如日盼红斑症。氯喹的药理作用为氯喹作用于红内期裂殖体,经48 72小时,血中裂殖体被杀灭。经氯喹作用,疟原虫的核碎裂,细胞浆出现空泡,疟色素聚成团块。氯丙嗪(Chlorpromazine)应用多为其磷酸盐,为白色或乳白色结晶性粉末;有微臭,味极苦;有引湿性;遇光渐变色;水溶液呈酸性反应。氯丙嗪药理作用为中枢多巴胺受体的阻断剂,具有镇静、抗精神病、镇吐、降低体温及基础代谢、α -肾上腺素能受体及m-胆碱能受体阻断、抗组织胺、影响内分泌等作用,临床用于控制精神分裂症或其它精神病的躁动、紧张不安、幻觉、妄想等症状;治疗各种原因引起的呕吐;亦用于低温麻醉及人工冬眠;与镇痛药合用,治疗癌症晚期病人的剧痛。目前将氯喹和氯丙嗪及其衍生物分别或联合使用用于治疗和/或预防流感还未见报道
发明内容
因此,本发明的技术方案为氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物在制备治疗和/或预防流感病毒引起的哺乳动物包括人的肺感染和/或肺损伤的药物中的用途。本发明的技术方案进一步涉及包含氯喹或氯丙嗪或它们的衍生物或它们的混合物的药物组合物在制备治疗和/或预防流感病毒引起的哺乳动物包括人的肺感染和/或肺损伤的药物中的用途。在本发明的一个实施方案中,所述氯喹的衍生物选自羟基氯喹、硫酸羟氯喹、二氯喹磷酸;所述氯丙嗪的衍生物选自乙酰普吗嗪、奋乃静、三氟拉嗪。在本发明的另一实施方案中,所述流感病毒为甲型流感病毒,优选地为甲型H1、H3、H5、H7或H9亚型毒株,更优选地为甲型H5亚型毒株,更优选为甲型H5N1流感病毒,最优选地为甲型H5N1流感病毒A/Ji I in/9/2004 (H5N1)株。在本发明的另一实施方案中,所述药物组合物包含治疗有效量的氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物,以及一种或多种药学上可接受的载体,所述载体包括但不限于稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂、吸附载体。在本发明的另一实施方案中,所述药物组合物还可以包含一种或多种与所述氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物起协同作用的治疗有效剂量的药物活性成分。在本发明的另一实施方案中,所述药物组合物可以被制成任何一种药学上可接受的剂型,所述剂型包括但不限于注射剂、喷雾剂、滴鼻剂、吸入剂或口服剂。本发明还涉及一种治疗和/或预防流感病毒引起的哺乳动物包括人的肺感染和/或肺损伤的方法,其包括给予感染流感病毒的患者治疗有效量的氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物。本发明进一步披露氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物用于治疗和/或预防流感病毒引起的哺乳动物包括人的肺感染和/或肺损伤。在本发明中,所述氯喹、氯丙嗪及其衍生物,可以单独或联合使用用于流感病毒引起的哺乳动物包括人的肺感染和/或肺损伤。本发明利用H5N1型禽流感病毒攻击小鼠证明氯喹或氯丙嗪在禽流感病毒A/Jilin/9/2005 (H5N1)株感染导致小鼠急性肺组织病理损伤、死亡的过程中发挥重要作用,针对氯喹或氯丙嗪的干预在预防禽流感病毒A/Jilin/9/2005 (H5N1)株感染所导致的损伤中发挥重要作用。因此,本发明第一次证明了氯喹或氯丙嗪可以阻止或减缓H5N1型禽流感病毒感染所造成的严重后果。同时,本领域技术人员熟知,当证实氯喹或氯丙嗪在禽流感病毒感染导致的病理损伤、死亡等过程中发挥重要的预防和/或治疗作用时,其相关衍生物或它们的混合物也能起到相同或类似的作用。本领域技术人员熟知,衍生物指母体化合物分子中的原子或原子团被其他原子或原子团取代所形成的化合物。同样地,包含本发明所述的氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物的药物组合物也能用于预防和/或治疗H5N1型禽流感病毒,特别是A/Jilin/9/2005 (H5N1)株。所述药物组合物的活性成分是氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物,同时也可以包括其他的可以与所述的氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物起协同作用的活性成分。
图1 :野生型BALB/c小鼠感染病毒对照或TCID5tl为IO6的H5N1型禽流感病毒,分别在感染后6小时,I天,2天,3天,4天和5天,腹腔注射溶剂对照或氯喹。记录其8天内存活情况,绘制的死亡率曲线。每组10只小鼠。图2 :野生型BALB/c小鼠感染病毒对照或TCID5tl为IO6的H5N1型禽流感病毒,分别在感染前2小时和O. 5小时,两次腹腔注射溶剂对照或氯喹。记录其8天内存活情况,绘制的死亡率曲线。每组10只小鼠。
图3 :野生型BAL B/c小鼠感染病毒对照或TCID5tl为IO6的H5N1型禽流感病毒,分别在感染前2小时和O. 5小时,两次腹腔注射溶剂对照或氯丙嗪。记录其8天内存活情况,绘制的死亡率曲线。每组10只小鼠。图4 :野生型BALB/c小鼠感染病毒对照或TCID5tl为IO6的H5N1型禽流感病毒,分别在感染后6小时,I天,2天,3天,4天和5天,腹腔注射溶剂对照或氯丙嗪。记录其8天内存活情况,绘制的死亡率曲线。每组10只小鼠。图5 :野生型BALB/c小鼠感染病毒对照或TCID5tl为IO6的H5N1型禽流感病毒,分别在感染后6小时,I天,2天,3天,4天和5天,腹腔注射溶剂对照或氯喹。在感染4天后,取小鼠肺组织进行肺组织湿干比检测图。每组4只小鼠。图6 :野生型BALB/c小鼠感染病毒对照或TCID5tl为IO6的H5N1型禽流感病毒,分别在感染前2小时和O. 5小时,两次腹腔注射溶剂对照或氯喹。在感染4天后,取小鼠肺组织进行肺组织湿干比检测图。每组4只小鼠。图7 :野生型BALB/c小鼠感染病毒对照或TCID5tl为IO6的H5N1型禽流感病毒,分别在感染前2小时和O. 5小时,两次腹腔注射溶剂对照或氯丙嗪。在感染4天后,取小鼠肺组织进行肺组织湿干比检测图。每组4只小鼠。
具体实施方式
下面将通过下述非限制性实施例进一步说明本发明,本领域技术人员公知,在不背离本发明精神的情况下,可以对本发明做出许多修改,这样的修改也落入本发明的范围。下述实验方法如无特别说明,均为常规方法,所使用的实验材料如无特别说明,均可容易地从商业公司获取。实施例实施例1 :氯喹、氯丙嗪降低H5N1型禽流感病毒感染致小鼠死亡率实验材料I)主要实验仪器三级生物安全实验室、三级生物安全柜、动物饲养柜、小鼠饲养笼、小动物手术器械、无菌注射器、移液器、移液管等。2)主要实验试剂氯喹(C6628,购自Sigma-Aldrich公司)、氯丙嗪(C8138,购自Sigma-Aldrich公司)、溶剂对照为PBS、1 % (W/V)戊巴比妥钠溶液、病毒稀释液、消毒剂(2. 5%碘酒和75%酒精)等。3)病毒H5N1 禽流感病毒 A/Ji I in/9/2004 (H5N1)4)实验动物SPF级野生型(WT)BALB/c小鼠(4周龄)购于中国药品生物制品检定所。实验方法1)分组病毒对照+溶剂对照组、病毒对照+药物组、病毒+溶剂对照组、病毒+药物组;2)小鼠腹腔注射溶剂对照或药物,每只小鼠每次腹腔注射氯喹(50mg/kg),氯丙嗪(15mg/kg),预防共注射2次,分别为感染前2h和O. 5h ;治疗共注射6次,分别为感染后6小时,I天,2天,3天,4天和5天;3)安全固定小鼠,用ImL无菌注射器腹腔注射1% (W/V)戊巴比妥钠溶液麻醉;4)保持麻醉小鼠头部向上向后倾斜姿势,使其鼻腔向上。用酒精消毒颈部,用剪刀剪开颈部皮肤,分离气管,用注射器注入滴度为106TCID5(iH5N1型禽流感病毒,每组感染10只小鼠;5)保持小鼠此体位5分钟,使病毒均匀分布于肺组织。将小鼠置于鼠笼内,待其恢复清醒后,给予水及食物;6)感染后观察,24小时内发生死亡的小鼠为非特异性死亡,在进行死亡率统计时不予计算在内;7)连续观察8天,每天记录每组小鼠死亡情况;8)用GraphPad Prism 5软件统计小鼠死亡率情况。实验结果1)野生型BALB/c小鼠经腹腔注射溶剂对照或氯喹、氯丙嗪两种药物后,感染病毒滴度为IO6TCID5tl的H5N1型禽流感病毒后的死亡率结果,如图1、图2、图3、图4所示。2)此结果说明,氯喹在治疗和氯丙嗪在预防H5N1型禽流感病毒感染导致小鼠死亡的过程中发挥重要作用,氯喹在治疗和氯丙嗪在预防H5N1型禽流感病毒感染所导致的损伤中发挥重要作用;氯喹在预防和氯丙嗪在治疗H5N1型禽流感病毒感染导致小鼠死亡的过程中无明确作用。实施例2氯喹、氯丙嗪缓解H5N1型禽流感病毒感染后小鼠的肺水肿
实验材料 1)主要实验仪器三级生物安全实验室、三级生物安全柜、动物饲养柜、小鼠饲养笼、小动物手术器械、无菌注射器、移液器、移液管等。2)主要实验试剂氯喹(C6628,购自Sigma-Aldrich公司)、氯丙嗪(C8138,购自Sigma-Aldrich公司)、溶剂对照为PBS、1 % (W/V)戊巴比妥钠溶液、病毒稀释液、消毒剂(2. 5%碘酒和75%酒精)等。3)病毒H5N1 禽流感病毒 A/Ji I in/9/2004 (H5N1)4)实验动物SPF级野生型(WT) BALB/C小鼠(4周龄)购于中国药品生物制品检定所。实验方法I)分组病毒对照+溶剂对照组、病毒对照+药物组、病毒+溶剂对照组、病毒+药物组;2)小鼠腹腔注射溶剂对照或药物,每只小鼠每次腹腔注射氯喹(50mg/kg),氯丙嗪(15mg/kg),预防共注射2次,分别为感染前2h和O. 5h ;治疗共注射6次,分别为感染后6小时,I天,2天,3天,4天和5天;3)安全固定小鼠,用ImL无菌注射器腹腔注射1% (W/V)戊巴比妥钠溶液麻醉;4)保持麻醉小鼠头部向上向后倾斜姿势,使其鼻腔向上。用酒精消毒颈部,用剪刀剪开颈部皮肤,分离气管,用注射器注入滴度为106TCID5(iH5N1型禽流感病毒,每组感染4只小鼠;5)保持小鼠此体位5分钟,使病毒均匀分布于肺组织。将小鼠置于鼠笼内,待其恢复清醒后,给予水及食物;6)感染后观察,24小时内发生死亡的小鼠为非特异性死亡,在进行死亡率统计时不予计算在内;7)感染病毒后第4天,用腹腔注射过量麻醉剂的方法使小鼠死亡;8)将小鼠固定于小动物手术台,移除胸部皮肤及骨骼,暴露胸腔,将小鼠完整肺脏取出,去除表面血液及多余结缔组织,称量并记录肺脏湿重;9)肺脏置于55°C高温组织干燥器中干烤,24小时后取出,待温度降至室温进行肺脏干重的称量并记录;10)计算小鼠肺脏湿重/干重比值(Wet/Dry Ratio),进行统计分析。实验结果I)野生型BALB/c小鼠经腹腔注射溶剂对照或氯喹、氯丙嗪两种药物后,感染病毒滴度为106TCID50的H5N1型禽流感病毒后的湿干比结果,如图5、图6、图7所示。2)此结果说明,氯喹在治疗和氯丙嗪在预防H5N1型禽流感病毒感染导致小鼠肺水肿的过程中发挥重要作用。
权利要求
1.氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物在制备治疗和/或预防流感病毒引起的哺乳动物包括人的肺感染和/或肺损伤的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途,其中所述氯喹的衍生物选自羟基氯喹、硫酸羟氯喹、二氯喹磷酸;所述氯丙嗪的衍生物选自乙酰普吗嗪、奋乃静、三氟拉嗪。
3.根据权利要求1所述的用途,其中所述流感病毒为甲型流感病毒,优选地为甲型H1、H3、H5、H7或H9亚型毒株,更优选地为甲型H5亚型毒株,更优选为甲型H5N1流感病毒,最优选地为甲型H5N1流感病毒A/Jilin/9/2004H5Nl株。
4.一种包含氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物的药物组合物在制备治疗和/或预防流感病毒引起的哺乳动物包括人的肺感染和/或肺损伤的药物中的用途。
5.根据权利要求4所述的用途,其中所述氯喹的衍生物选自羟基氯喹、硫酸羟氯喹、二氯喹磷酸;所述氯丙嗪的衍生物选自乙酰普吗嗪、奋乃静、三氟拉嗪。
6.根据权利要求4所述的用途,其中所述流感病毒为甲型流感病毒,优选地为甲型Hl、H3、H5、H7或H9亚型毒株,更优选地为甲型H5亚型毒株,更优选为甲型H5N1流感病毒,最优选地为甲型H5N1流感病毒A/Ji I in/9/2004株。
7.根据权利要求4-6任意一项所述的用途,其中所述药物组合物包含治疗有效量的氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物,以及一种或多种药学上可接受的载体。
8.根据权利要求7所述的用途,其特征在于所述药物组合物还可以包含一种或多种与所述氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物起协同作用的治疗有效剂量的药物活性成分。
9.根据权利要求4-8任意一项所述的用途,其中所述药物组合物可以制成任何一种药学上可接受的剂型。
10.根据权利要求9所述的用途,其中所述药学上可接受的剂型为注射剂、喷雾剂、滴鼻剂、吸入剂或口服剂。
11.一种治疗和/或预防流感病毒引起的哺乳动物包括人的肺感染和/或肺损伤的方法,其包括给予感染流感病毒的患者治疗有效量的氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物。
12.氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物用于治疗和/或预防流感病毒引起的哺乳动物包括人的肺感染和/或肺损伤。
全文摘要
本发明涉及氯喹治疗和氯丙嗪预防肺感染和损伤的用途。特别地,本发明涉及氯喹或氯丙嗪或其衍生物或它们的混合物以及含有它们的药物组合物在制备治疗和/或预防流感病毒引起的哺乳动物包括人的肺感染和/或肺损伤的药物中的用途。
文档编号A61K31/4706GK103027915SQ20111030069
公开日2013年4月10日 申请日期2011年9月29日 优先权日2011年9月29日
发明者蒋澄宇, 金宁一, 孙阳, 邹镇, 李霄, 闫毅武 申请人:中国医学科学院基础医学研究所, 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所