专利名称：中草药木瓜提取物在制备减肥降脂药物或制备具有脂肪酶活性抑制作用的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及中草药木瓜提取物在制备减肥降脂药物或制备具有脂肪酶活性抑制作用的药物中的应用。
背景技术：
代谢综合征(Metabolic syndrome, MS)主要包括肥胖、糖耐量异常、血脂代谢紊乱、高血压等危险因素。MS患者糖尿病(Diabetes mellitus, DM)、心血管疾病的发病率常是正常人群的数倍。MS已严重危害人类的身心健康，成为世界性的公共卫生问题，但迄今我们对MS的认识却很有限。目前初步的研究证实，在众多病因中，肥胖与MS的关系尤为密切，是MS发病、发展的关键因素和核心环节。随着经济的发展、人们生活水平的提高以及生活方式的改变，肥胖已成为全球成年人最大的慢性疾病。目前，美国FDA只批准了 2种药物可以长期用于肥胖症治疗西布曲明 (Sibutramine)和奥利司他(Orlistat)。西布曲明是一种单胺类神经递质再摄取抑制剂， 它作用于中枢神经系统以减少摄食而降低体重，但该药可能引起患者血压升高、心率加快， 且不能用于冠心病、心率失常和卒中等病史的患者中，使该药应用受到限制。奥利司他是一种胰脂肪酶抑制剂，可抑制胃肠道中胰脂肪酶的活性，并使脂肪吸收减少约30%，其全身性副作用明显低于其他现有减肥药，是脂酶抑制剂的一个成功例子。中草药是我国独具优势的天然药物资源，古今中医典籍记载和临床应用都有大量的中草药减肥降脂的实例。但由于中草药活性成分不明确，药理机制不清楚等限制，使传统中草药无法走向世界，迄今我国还没有具有自主知识产权的减肥药物。因此从中草药中筛选具有脂肪酶活性抑制作用的有效成分，并进行减肥降脂药物的研制，是本发明的主要目的。
发明内容
本发明的目的在于公开中草药木瓜提取物在制备减肥降脂药物或制备具有脂肪酶活性抑制作用的药物中的应用。本发明目的是通过如下技术方案实现的下述中草药的水提取物或醇提取物均具有脂肪酶活性抑制作用黄芩、普洱茶、乌龙茶、铁观音茶、苦丁茶、红茶、绿茶、代代花、红花、花椒、芦荟、虎杖、番泻叶、葛根、丹参、白术、桃花、罗布麻、菊花、凌霄花、茉莉花、木蝴蝶、葡萄籽、金莲花、 丁香、金银花、白薇、苦参、水皂角、艾叶、人参、槐米、金荞麦、泽泻、枳壳、枳实、牛膝、诃子、 首乌藤、木香、银杏叶、贯众、杜仲、生蒲黄、瓜蒌、桑叶、桑白皮；上述中草药水提取物的制备方法如下取上述各单味中草药饮片，预制，粉碎；加 5-10体积倍的去离子水，煮沸30-60分钟，过滤或离心，取滤液或上清液即得提取物；上述中草药醇提取物的制备方法如下取上述各单味中草药饮片，预制，粉碎；加5-10体积倍的50% -95%乙醇，超声提取30-90分钟，过滤或离心，取滤液或上清液即得提取物，取上清液即得提取物；上述中草药水提取物的优选制备方法如下取上述各单味中草药饮片，预制，粉碎；加7体积倍的去离子水，煮沸45分钟，过滤或离心，取滤液或上清液即得提取物；上述中草药醇提取物的优选制备方法如下取上述各单味中草药饮片，预制，粉碎；加7体积倍的85%乙醇，超声提取60分钟，过滤或离心，取滤液或上清液即得提取物。下述中草药的醇提取物具有脂肪酶活性抑制作用大黄、甘草、川芎、木瓜、鸡血藤、厚朴、丹皮、绞股蓝、姜黄、羌活、何首乌、槟榔、桂枝；上述中草药醇提取物的制备方法如下取上述各单味中草药饮片，预制，粉碎；加 5-10体积倍的50% -95%乙醇，超声提取30-90分钟，过滤或离心，取滤液或上清液即得提取物；上述中草药醇提取物的优选制备方法如下取上述各单味中草药饮片，预制，粉碎；加7体积倍的85%乙醇，超声提取60分钟，过滤或离心，取滤液或上清液即得提取物。下述中草药的水提取物具有脂肪酶活性抑制作用枸杞子、荷叶、桔梗；上述中草药水提取物的优选制备方法如下取上述各单味中草药饮片，预制，粉碎；加5-10体积倍的去离子水，煮沸30-60分钟，过滤或离心，取滤液或上清液即得提取物；上述中草药水提取物的优选制备方法如下取上述各单味中草药饮片，预制，粉碎；加7体积倍的去离子水，煮沸45分钟，过滤或离心，取滤液或上清液即得提取物。本发明上述中草药提取物在制备减肥降脂药物的应用中均可单味使用，也可组合使用，减肥降脂药物可以由上述中草药的水、醇及有机溶剂提取物或其它方法纯化的有效成分制成；减肥降脂药物还可以包含如下一种或多种其它作用机理的减肥降脂活性成分糖苷酶抑制剂、脂肪酸合成酶抑制剂、胆固醇合成酶抑制剂、淀粉酶抑制剂；为了增加药效或减少副作用，减肥降脂药物还可以包含如下一种或多种其它药理作用的中草药山茱萸、麻黄、大青叶、蒲公英、熟地；减肥降脂药物还可以包含如下一种或多种赋形剂阿拉伯树胶、脱脂牛奶、甘露聚糖、葡甘露聚糖、魔芋粉、淀粉、亲脂性硬化剂；减肥降脂药物还可以包括如下一种或多种药用辅料或减少药物副作用的现有产品阿拉伯树胶、脱脂牛奶、甘露聚糖、葡甘露聚糖、魔芋粉、淀粉、亲脂性硬化剂、硬脂酸。上述脂肪酶尤其是指胰脂肪酶。本发明以胰脂肪酶活性为靶点，以胰脂肪酶活性被抑制的程度为指标，从大量的中草药中，筛选到上述中草药，其提取物均具有明显的抑制脂肪酶活性的作用，本发明解决了现有临床减肥药物(尤其是中药)有效率低，副作用大的缺点，提供一种机理明确、靶点科学，副作用小、临床有效率高的减肥降脂药物。下面实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1本发明中草药的水提取物和醇提取物对脂肪酶抑制作用实验
1、制备本发明中草药的水提取物或醇提取物水提取物制备取各单味中草药饮片，预制，粉碎；加5体积倍的去离子水，煮沸30 分钟，过滤或离心，取滤液或上清液即得提取物；乙醇提取物制备取各单味中草药饮片，预制，粉碎；加5体积倍的75%乙醇，超声提取60分钟，过滤或离心，取滤液或上清液即得提取物。2、脂肪酶活力抑制率的测定A.准备试剂、橄榄油乳液及测定酶液橄榄油乳化液的制备取橄榄油12ml与阿拉伯树胶22. 5g，研磨均勻，加水研磨至 300ml，用18000r/min的勻质机乳化2次，每次3分钟；取乳剂在显微镜下检查，90%乳粒的直径在3 μ m以下，并不得有10 μ m的乳粒，即可；牛胆盐溶液的制备精密称取牛胆盐8. 0g，置于50ml烧杯中，以水溶解，转移至 IOOml容量瓶中定容；0. lmol/L氢氧化钠溶液的制备精密称取氢氧化钠2. 0g，加水溶解定容至 500ml ；三羟甲基氨基甲烷缓冲液制备取三羟甲基氨基甲烷3.030g，用0. lmol/L盐酸溶液调PH值至8. 0，加水至500ml，摇勻，再调节pH值至8. 0 ；脂肪酶溶液的制备精密称取胰脂肪酶(SIGMA :L3126)于容量瓶中，用冷却至5°C 以下的三羟甲基氨基甲烷缓冲液溶解，制成每Iml中含胰脂肪酶100活力单位的溶液，作为酶原液备用；绘制标准曲线时，将酶原液用三羟甲基氨基甲烷缓冲液稀释至不同梯度90u/ ml、80u/ml、70u/ml、60u/ml、50u/ml、40u/ml、30u/ml、20u/ml、10u/ml 的测定酶液；Ou/ml 的测定酶液，即酶空白，是在水浴中煮沸15-30分钟的酶原液；B.建立脂肪酶测活体系1).水为样品空白溶液脂肪酶测活体系取橄榄油乳液25ml、8%牛胆盐溶液2ml 与水10ml，置100ml三角瓶中，加水^il，用0. lmol/L氢氧化钠溶液调节pH值至9. 0 ；2). 75%乙醇为样品空白溶液脂肪酶测活体系取橄榄油乳液25ml、8%牛胆盐溶液2ml与水10ml，置100ml三角瓶中，加75%乙醇溶液^il，用0. lmol/L氢氧化钠溶液调节 pH值至9. 0 ；3).样品溶液脂肪酶测活体系取橄榄油乳液25ml、8%牛胆盐溶液2ml与水 10ml，置100ml三角瓶中，分别加样品溶液^il，用0. lmol/L氢氧化钠溶液调节pH值至9. 0 ； 样品溶液可以是六十三种中草药的水提取物或醇提取物的一种。C.绘制脂肪酶抑制率“Y%”与pH变化幅度“ ΔρΗ”关系标准曲线绘制标准曲线时，先将不同梯度的测定酶液换算成对应的抑制率，抑制率换算公式Y(%) = (X0-Xn)A0Y(% )-表示脂肪酶抑制率X0-表示酶原液浓度(u/ml)fti-表示不同稀释度的酶液浓度(u/ml)；设定酶浓度为零时，抑制率为100%;设定酶原液浓度的抑制率为0，将酶原液按一定梯度稀释成 90u/ml、80u/ml、70u/ml、60u/ml、50u/ml、40u/ml、30u/ml、20u/ml、lOu/ml 的测定酶液，则对应的抑制率分别为10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%； 按照标准曲线绘制法绘制标准曲线，本发明的标准曲线绘制法如下将上述水或75%乙醇空白溶液脂肪酶测活体系在37°C水浴中保温10分钟，用 0. lmol/L氢氧化钠溶液调节pH值至9. 0 ；精密量取上述不同梯度浓度的测定酶液1体积份，分别加至空白溶液测活体系中，在37°C水浴中准确反应5分钟，同时记录反应前后pH 值，并计算反应前后PH差值；用酶浓度为lOOu/ml时反应前后的pH差值，分别减去酶浓度为 90u/ml、80u/ml、70u/ml、60u/ml、50u/ml、40u/ml、30u/ml、20u/ml、lOu/ml、Ou/ml 时反应前后的PH差值，即得到对应不同抑制率的pH变化幅度“ Δ pH”值；以抑制率为纵坐标， “ Δ pH”值为横坐标，绘制脂肪酶抑制率“Y% ”与pH变化幅度“ Δ pH”关系标准曲线，并得到水或75%为空白样品溶液的脂肪酶抑制率计算公式；D.测定方法及样品溶液脂肪酶抑制率的测定空白溶液测定将上述水或75%乙醇空白溶液脂肪酶测活体系在37°C水浴中保温10分钟，用0. lmol/L氢氧化钠溶液调节PH值至9. O ；精密量取酶原液Iml加至空白溶液测活体系中，在37°C水浴中准确反应5分钟，同时记录反应前后pH值，并计算空白溶液反应前后的PH差值，记为Al ；另取在水浴中煮沸15-30分钟的上述酶原液lml，照上述方法测定，作为酶空白对照，PH差值记为AO ；则空白溶液酶反应的pH变化值为ΔΑ = Al-AO ；样品溶液测定将样品溶液脂肪酶测活体系在37°C水浴中保温10分钟，用 0. lmol/L氢氧化钠溶液调节pH值至9. 0 ；精密量取酶原液Iml加至样品溶液测活体系中， 在37°C水浴中准确反应5分钟，同时记录反应前后pH值，并计算样品溶液反应前后的pH差值，记为Bl ；另取在水浴中煮沸20分钟的上述酶原液1ml，照上述方法测定，作为酶空白对照，PH差值记为BO ；则样品溶液酶反应的pH变化值为ΔΒ = B1-B0 ；样品溶液的脂肪酶抑制率用空白溶液酶反应的PH变化值(ΔΑ)减去样品溶液酶反应的PH变化值(ΔΒ)，即得到空白溶液与样品溶液酶反应的“ ΔρΗ”值，BP ΔρΗ = Δ A-Δ B，将此“ Δ pH”值代入上述相应的空白溶液的脂肪酶抑制率计算公式，即求得测定样品的脂肪酶抑制率，样品溶液的脂肪酶抑制率结果见表1 表1中草药提取物对脂肪酶活力抑制率
权利要求
1.一种中草药木瓜的醇提取物在制备减肥降脂药物或制备具有脂肪酶活性抑制作用的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中草药木瓜的醇提取物由如下方法制备取木瓜中草药饮片，预制，粉碎；加5-10体积倍的50%-95%乙醇，超声提取30-90分钟，过滤，或4000r/min离心10-20分钟，取过滤液或离心上清液即得所述醇提取物。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述中草药木瓜的醇提取物由如下方法制备取所述木瓜中草药饮片，预制，粉碎；加7体积倍的85%乙醇，超声提取60分钟，过滤，或4000r/min离心15分钟，取过滤液或离心上清液即得所述醇提取物。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述中草药木瓜的醇提取物由如下方法制备取所述木瓜中草药饮片，预制，粉碎；加5体积倍的75%乙醇，超声提取60分钟，过滤，取过滤液即得所述醇提取物。
5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述脂肪酶为胰脂肪酶。
6.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述减肥降脂药物中包含糖苷酶抑制剂、脂肪酸合成酶抑制剂、胆固醇合成酶抑制剂或淀粉酶抑制剂。
7.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述减肥降脂药物中包含山茱萸、麻黄、大青叶、蒲公英或熟地。
全文摘要
本发明公开了中草药木瓜的醇提取物在制备减肥降脂药物或制备具有脂肪酶活性抑制作用的药物中的应用。本发明解决了现有临床减肥药物，尤其是中药效率低，副作用大的缺点，提供了一种机理明确、靶点科学，副作用小、临床有效率高的减肥降脂药物。
文档编号A61K36/804GK102357136SQ20111031742
公开日2012年2月22日 申请日期2007年8月7日 优先权日2007年8月7日
发明者段震文, 郭树仁, 闫雪秋 申请人:北京北大维信生物科技有限公司