专利名称：一种具有抗癌活性的熊果酸衍生物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种熊果酸衍生物及其制备方法，具体说是一种具有抗肿瘤活性的熊果酸衍生物及其制备方法。熊果酸⑴rsolic acid，UA)，又名乌索酸、乌苏酸，属五环三萜类化合物，化学名 (3 β ) -3-Hydroxyurs-12-en-28-oic acid,其相对分子量为 456. 68，分子式为 C3tlH48O3,它以游离或糖苷的形式，广泛分布于自然界中。药理学研究发现，熊果酸具有广泛的生物学效应，熊果酸具有多种生物学活性，如抗癌、抗HIV、抗肝损伤、抗疟、抗炎抑菌等，其中尤以抗癌活性最为显著，其抗癌谱广，不仅对多种致癌、促癌物有抵抗作用，而且对多种肿瘤细胞体内、外均有抑制作用。其副作用小，毒性低，显示出较大的临床应用潜力。熊果酸的化学结构式为
权利要求
1. 一种熊果酸衍生物，其特征在于所述熊果酸衍生物为Ν-[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺-叶酸，结构式如式I所示
2. 一种如权利要求1所述的熊果酸衍生物的制备方法，其特征在于 (1)熊果酸与醋酸酐反应，生成3-0-乙酰基熊果酸；3-0-乙酰基熊果酸的结构式如式 II所示，
3.根据权利要求2所述的熊果酸衍生物的制备方法，其特征在于所述制备方法具体步骤如下(1)1重量份的熊果酸搅拌溶解于40-50重量份的吡啶中，滴加入2-3重量份的醋酸酐，加入0. 001-0. 02重量份的DMAP，室温下搅拌16-18 h，反应结束后，用2 N HCl调节pH 3-4，蒸除溶剂，抽滤，水洗滤饼至中性，干燥，干燥后的产物干法上样，柱层析纯化，无水乙醇热溶，冷却重结晶，得白色粉末状的3-0-乙酰基熊果酸；(2)1重量份3-0-乙酰基熊果酸溶解于30-35重量份CH2Cl2中，逐滴加入1_2重量份的草酰氯，室温下搅拌反应12-Mh，蒸除溶剂及反应产生的气体，得3-0-乙酰基UA酰氯中间体的粗品，直接进入下一步反应；在上述中间体的粗品中加入20-30重量份的CH2Cl2，三乙胺调节溶液PH 8-9，加入1-2重量份的乙二胺，室温下搅拌反应12-Mh，反应结束后，反应液中加5-10重量份的水，以2N HCl调节pH3-4，过滤，水洗滤饼至滤液pH为中性，干燥；干燥后的产物干法上样，柱层析纯化，无水乙醇热溶，冷却重结晶，得白色粉末状Ν-[3 β -乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺；(3)1重量份Ν-[3 β -乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺溶解于20-30 重量份的无水二甲基亚砜中，加入1-2重量份的叶酸，室温搅拌30-60min，然后加入1_2重量份的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1-2重量份的N-羟基丁二酰亚胺， 室温避光反应20-30 h;反应结束后，蒸除溶剂，然后加入5-10重量份的水，以2N HCl调节 PH3-4，过滤，水洗滤饼至滤液pH为中性，干燥；干燥后的产物干法上样，反相柱纯化，无水乙醇热溶，冷却重结晶，得黄色粉末状N-[3 β -乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺-叶酸。
4.一种熊果酸衍生物，其特征在于所述熊果酸衍生物为Ν-[3β-羟基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺，结构式如式IV所示
5. 一种如权利要求4所述的熊果酸衍生物的制备方法，其特征在于 (1)熊果酸与醋酸酐反应，生成3-0-乙酰基熊果酸；3-0-乙酰基熊果酸的结构式如式II所示；(2)3-0-乙酰基熊果酸与草酰氯反应，再与乙二胺反应得Ν-[3 β -乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺，结构式如式III所示；(3)Ν-[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺与NaOH水解反应，得到 Ν-[3β-羟基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺，结构式如式IV所示。
6.根据权利要求5所述的熊果酸衍生物的制备方法，其特征在于所述制备方法具体步骤如下(1)1重量份的熊果酸搅拌溶解于40-50重量份的吡啶中，滴加入2-3重量份的醋酸酐， 加入少量的DMAP，室温下搅拌16-18 h，反应结束后，用2 N HCHfpH 3_4，蒸除溶剂，抽滤， 水洗滤饼至中性，干燥，干燥后的产物干法上样，柱层析纯化，无水乙醇热溶，冷却重结晶， 得白色粉末状的3-0-乙酰基熊果酸；(2)1重量份3-0-乙酰基熊果酸溶解于30-35重量份CH2Cl2中，分批次、逐滴加入1_2 重量份的草酰氯，室温下搅拌反应12-24 h，蒸除溶剂及反应产生的气体，得3-0-乙酰基UA 酰氯中间体的粗品，直接进入下一步反应；在上述中间体中加入20-30重量份的CH2Cl2，三乙胺调节溶液PH 8-9，加入1-2重量份的乙二胺，室温下搅拌反应12-24 h，反应结束后，反应液中加5-10重量份的水，以2N HCl调pH3-4，过滤，水洗滤饼至滤液pH为中性，干燥，干燥后的产物干法上样，柱层析纯化，无水乙醇热溶，冷却重结晶，得白色粉末状Ν-[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺；(3)称取1-2重量份的Ν-[3β -乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺，溶于20-30重量份的CH3OH-THF中，所述CH3OH与THF的体积比为1 :1. 5-2. 5 ；加入4-8重量份的4N NaOH，室温下搅拌反应3- ，向反应液中加入5-10重量份的水，2 N HCl调节pH 3-4，减压蒸除溶剂，水洗沉淀至中性，干燥；干燥后的产物干法上样，柱层析纯化，无水乙醇热溶，冷却重结晶，得Ν-[3 β -羟基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺。
7.—种如权利要求2或5所述的熊果酸衍生物，其特征在于所述乙二胺用丙二胺、丁二胺、戊二胺或己二胺代替，得到一系列对应的熊果酸衍生物。
8.—种如权利要求1或4所述的熊果酸衍生物或由权利要求2、3、5或6所述制备方法制备的熊果酸衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种熊果酸衍生物，所述熊果酸衍生物为N-[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺-叶酸，本发明对天然产物熊果酸进行结构改造，得N-[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺-叶酸(Ⅰ)、N-[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺(Ⅲ)和N-[3β-羟基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺(Ⅳ)，体外细胞增殖抑制实验表明，化合物Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ对所测肿瘤细胞株HepG2、BGC823、A-375、Hela等的增殖抑制作用优于熊果酸，而对人胚肺成纤维细胞HELF的毒性作用则低于熊果酸。其中化合物Ⅲ的体外抗肿瘤效果最好，化合物Ⅰ具有一定的靶向性。
文档编号A61P35/00GK102516351SQ20111037356
公开日2012年6月27日 申请日期2011年11月22日 优先权日2011年11月22日
发明者王继闯, 邵敬伟 申请人:福州大学