血管生成素样3表达的调节的制作方法

专利名称：血管生成素样3表达的调节的制作方法
技术领域：
本文提供的是减少血管生成素样3(ANGPTL3)mRNA和蛋白在动物中的表达的方法、化合物和组合物。同时，本文提供的是具有用于减少动物的ANGPTL3相关疾病或疾患的ANGPTL3抑制剂的方法、化合物和组合物。此类方法、化合物和组合物例如用于治疗、预防、延缓或减轻动物的ー种或多种心血管疾病或代谢综合征或 其症状。
背景技术：
糖尿病和肥胖症(有时统称为“糖尿病-肥胖症(diabesity)”)是相关的，因为已知肥胖症加重糖尿病的病理学并且大于60%的糖尿病是肥胖的。大多数人肥胖症与胰岛素抵抗和瘦素抵抗相关。实际上，已提出肥胖症可对胰岛素作用的影响比糖尿病本身更大(Sindelka等人，Physiol Res.，2002，51，85-91)。此外，市场上用于治疗糖尿病的数种化合物已知诱导体重増加，这对疾病的治疗而言是ー种极不受欢迎的副作用。心血管疾病也是与肥胖症和糖尿病相关。心血管疾病包括多种病因学并且具有同样广泛的致病因子和相关利益相关者。很多致病因子有助于症状例如升高的胆固醇(包括非-HDL胆固醇)血浆水平以及其它脂质相关病症。此类脂质相关病症(通常称为血脂障碍)除了包括其它适应症之外，还包括闻脂血症、闻胆固醇血症和尚甘油ニ酷血症。升闻的非-HDL胆固醇与动脉粥样硬化及其后遗症(包括心血管疾病例如动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗塞、缺血性休克及其它心脏病形式相关。这些在エ业化国家中是最普遍的疾病类型。实际上，美国中估计有1200万人罹患冠心病并且约3600万人需要用于升高胆固醇水平的治疗。流行病和实验证据已显示高水平的循环甘油三酯(TG)可有助于心血管疾病和多种代谢病症(Valdivielso 等人，2009, Atherosclerosis. 207 (2) : 573-8 ；Zhang 等人，2008,Circ Res. I ; 102 (2) :250-6)。在来自小肠的乳糜颗粒中或在来自肝的极低密度脂蛋白(VLDL)中并入且分泌从外源性或内源性来源衍生的TG。一旦在循环中，TG被脂蛋白脂酶(LpL)水解并且所得游离脂肪酸然后可被局部组织吸收并且用作能源。由于通常LpL对血浆TG和代谢具有极高的效应，发现和开发影响LpL活性的化合物是非常感兴趣。代谢综合征是增加个人患上心血管疾病和糖尿病的风险的医学病症的组合。症状(包括高血压、高甘油三酷、降低的HDL和肥胖症)在某些个体中趋向于一起出现。其以集聚方式影响许多人。在ー些研究中，在USA的患病率被计算成高达25%的人口。代谢综合征以各种其它名称广为人知，例如(代谢)综合征X、胰岛素抵抗综合征、Reaven综合征或CHAOS。在心血管病症和代谢病症的高患病率下，仍保持对治疗这些疾患的改进方法的需求。
血管生成素是分泌型生长因子的家族。与其相应内皮特异性受体一起，血管生成素在血管发生中起着重要的作用。一个家族成员血管生成素样3 (也称为ANGPT5、ANGPTL3或血管生成素5)主要在肝中表达，并且被认为在调节脂质代谢中起作用(Kaplan等人，J.脂质 Res.，2003，44，136-143)。作为检索组合的EST数据库的结果，血管生成素样3的人基因被鉴定且被克隆。全长人cDNA编码460氨基酸的多肽，该多肽具有血管生成素的特有结构特征信号肽、延长的螺旋状结构域、短接头肽和球状纤维蛋白原同源性结构域(FHD)。发现小鼠血管生成素样3cDNA编码与人多肽具有76%同一性的455氨基酸多肽。血管生成素的对准显示血管生成素样3不像其它家庭成员，不包含决定I丐结合位点的酸性残基的基序。Northern印迹分析揭示主要在成人组织的肝中的表达，而鼠胚胎Northern印迹显示早在第15天就存在转录物，表明血管生成素样3在肝发育期间的早期被表达且成年肝中维持表达。小鼠基因定位于染色体4，而人基因定位于lp31区域(Conklin等人，Genomics，1999，62，477-482)。KK肥胖小鼠具有中度肥胖症的多基因综合征和类似人遗传性2型糖尿病的糖尿 病表型。这些小鼠显不闻膜岛素血症、闻血糖症和闻脂血症的征兆。称为KK/San的KK小鼠品系具有显著低的血浆脂质水平，尽管具有高胰岛素血症和高血糖症的征兆。突变表型被隐性遗传，并且基因座被称为高脂质血症(hypl)。基因座定位于染色体4的中间，并且该基因通过定位克隆被鉴定为血管生成素样3。包含突变体KK/San小鼠中的全长小鼠或人血管生成素样3cDNA的重组体腺病毒的注射引起甘油三酯、总胆固醇和非酯化脂肪酸(NEFA)的血浆水平的增加。类似地，将重组血管生成素样3蛋白注射到突变体小鼠中增加了甘油三酯和非酯化脂肪酸的水平(Koishi等人，Nat. Genet.，2002，30，151-157)。在另一项专注于甘油三酯在KK/San小鼠中的代谢途径的研究中，血管生成素样3的过表达导致富集甘油三酯的极低密度脂蛋白(VLDL)的显著增加。肝VLDL甘油三酯分泌率的差异在野生型KK与KK/San小鼠之间不显著。然而，用标记VLDL的研究表明KK/San小鼠中的低血浆甘油三酯水平主要归因于增加的VLDL甘油三酯的酯解而不是增加的整颗粒摄取。KK/San小鼠的血浆apoBlOO和apoB48水平与野生型KK小鼠类似。ApoCIII缺陷型小鼠与KK/San小鼠具有类似的表型，并且认为ApoCIII通过抑制VLDL甘油三酯的脂酶介导的水解的调节VLDL甘油三酯代谢。重组蛋白的体外分析揭示，血管生成素样3直接抑制脂蛋白脂酶(LPL)活性(Shimizugawa 等人，J. Biol. Chem.，2002，277，33742-33748)。与脂质代谢中的作用一致，发现血管生成素样3mRNA在正常饲料饮食和4%胆固醇喂养的C57BL/6J小鼠和在用肝X受体(LXR)激动剂T0901317处理的鼠中上调。LXR是配体激活的转录因子，其在调节在肝和外周组织中支配胆固醇体内稳态的基因方面起作用。除胆固醇代谢之外，LXR还可在调节脂肪酸代谢的方面起作用。用激活LXR的天然或合成活性剂处理IfepG2细胞导致增加的血管生成素样3表达。发现人血管生成素样3基因的启动子含有LXR反应元件。此外，对于其它转录因子(包括HNF-1、HNF-4和C/EBP)而言，启动子包含数种蛋白结合位点(Kaplan等人，J. Lipid Res. , 2003,44,136-143)。用T0901317处理啮齿类动物与肝和血浆中的甘油三酯蓄积相关。肝甘油三酯蓄积通过增加的留醇调节元件结合蛋白_lc(SREBP Ic)和脂肪酸合酶(FAS)(两者均为LXR的靶)的表达来解释。T0901317未能增加血管生成素样3缺陷型小鼠中的血浆甘油三酯浓度，而经刺激的肝甘油三酯蓄积与在经处理的野生型小鼠中观察到的类似。用T0901317处理的野生型小鼠中的血浆甘油三酯的升高类似血管生成素样3mRNA在肝中的诱导和增加的蛋白血浆浓度(Inaba 等人，J. Biol. Chem.，2003，278，21344-21351)。更多的研究解决在用外源性血管生成素样3处理的KK/Snk小鼠中观察到的血浆游离脂肪酸(FFA)水平的増加。用荧光标记的血管生成素样3蛋白固定的人组织的探针证实，仅在脂肪组织上具有强结合。而且，在3T3-L1脂肪细胞中检查放射性标记的蛋白结合并且发现是可饱和的且特异性的。用血管生成素样3孵育3T3-L1脂肪细胞导致増加的FFA和甘油进入培养基中的释放(Shimamura 等人，Biochem. Biophys. Res. Commun. ,2003,301，604-609)。
在使用链脲霉素处理的小鼠(STZ)模拟胰岛素缺陷型状态并且使用db/db小鼠模拟胰岛素抗性糖尿病状态的研究中，相比于对照动物，在糖尿病小鼠中观察到大量肝血管生成素样3。糖尿病的两种模型显示高甘油三酯血症，且由增加的血管生成素样3表达则可至少部分地解释观察到的高脂血症。这些结果表明，血管生成素样3是糖尿病与血脂障碍之间的连接，升高将促进高脂血症(Inukai等人，Biochem. Biophys. Res. Commun. , 2004,317，1075-1079)。随后研究检查了瘦素和胰岛素对血管生成素样3的调节，两者均是代谢综合征的关键參与者。相比于对照，在瘦素抗性db/db和瘦素缺陷型ob/ob小鼠中的血管生成素样3表达和血浆蛋白水平増加。用瘦素补充ob/ob小鼠減少血管生成素样3水平。表达的变化与血浆甘油三酯和游离脂肪酸水平的变化相关。在胰岛素缺陷型的STZ处理的小鼠中的基因表达和血楽■蛋白水平也增加(Shimamura等人,Biochem Biophys Res Commun, 2004,322,1080-1085)。根据其血管生成素家族中的成员，发现重组血管生成素样3蛋白与av03整合素结合以及诱导的整合素a J3依赖性趋触性内皮细胞粘着和迁移。其也刺激对整合素激活特有的信号转导途径。血管生成素样3在大鼠角膜血管发生试验中強烈地诱导血管发生(Camenisch 等人，J. Biol. Chem.，2002，277，17281-17290)。通过数个组进行測量基因组的与HDL、LDL和甘油三酯的血浆浓度相关的共有变体的基因组相关性扫描(GWAS)。GWAS研究发现甘油三酯与邻近ANGPTL3的单核苷酸多态现象(SNP)之间的联系(Wilier 等人，Nature Genetics, 2008,40 (2) : 161-169)。U. S.专利 7，267，819、申请 USSN 12/128，545 和申请 USSN12/001, 012 通常描述血管生成素样3激动剂和拮抗剂。PCT 公布 W0/02101039(EP02733390)和 W0/0142499 (USSN10/164, 030)公开了与小鼠血管生成素样3互补的核酸序列(Ryuta，2002 ；Ryuta,2001)。目前缺乏用于治疗心血管和代谢病症的可接受的选择。因为，本文的目的是提供用于治疗此类疾病和病症的化合物和方法。血管生成素样3在脂质代谢中的潜在作用使其成为对于研究有吸引力的靶。反义技术作为用于减少某些基因产物的表达的有效方法出现并且由此可证明其可独特地用于多种调节血管生成素样3的治疗、诊断和研究应用。发明概述本文提供的是可用于经由作用反义机理例如RNA酶H、RNAi和dsRNA酶，以及其它基于靶降解或靶占有的反义机理来调节基因表达和相关途径的反义化合物。
本文提供的是用于抑制ANGPTL3表达并且治疗、预防、延缓或减轻ANGPTL3相关疾病、疾患或其症状的方法、化合物和组合物。在某些实施方案中，ANGPTL3相关疾病或疾患是心血管疾病或代谢疾病。在某些实施方案中，本发明的化合物和组合物包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸。ANGPTL3靶可具有选自SEQ ID NO :1_5中任一个的序列。靶向ANGPTL3的经修饰的寡核苷酸可具有包含与SEQ ID NO :1_5的等长部分互补的至少8个连续核碱基的核碱基序列。靶向ANGPTL3的经修饰的寡核苷酸可具有包含选自SEQID NO =34-182中任一个的核碱基序列的至少8个连续核碱基的核碱基序列。经修饰的寡核苷酸可具有包含选自SEQ ID NO :34-182中任一个的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基的核碱基序列。经修饰的寡核苷酸的连续核碱基部分可与选自SEQ ID NO :1-5中任一个的ANGPTL3区域的等长部分互补。ANGPTL3区域可选自以下区域的一个或多个22-52、116-145、637-720、953-983、1333-1469 和 1463-1489。某些实施方案提供了减少动物中ANGPTL3表达的方法，其包括向所述动物施用包 含靶向本文描述的ANGPTL3的经修饰的寡核苷酸的化合物。某些实施方案提供了减少动物中的apoC-III表达、甘油三酯水平、胆固醇水平、低密度脂蛋白(LDL)或葡萄糖水平的方法，其包括向所述动物施用包含靶向本文描述的ANGPTL3的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中经修饰的寡核苷酸减少动物中的ANGPTL3表达。某些实施方案提供了减轻动物中的心血管疾病或代谢疾病的方法，其包括向所述动物施用包含靶向本文描述的ANGPTL3的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中经修饰的寡核苷酸减少动物中的ANGPTL3表达。某些实施方案提供了用于治疗患有心血管疾病或代谢疾病的动物的方法，其包括1)鉴定患有代谢疾病或心血管疾病的所述动物，和2)向所述动物施用治疗有效量的包含经修饰的寡核苷酸的化合物，所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成并且具有与SEQ IDNO :1-5至少90%互补(如对经修饰的寡核苷酸的整体性所测量)的核碱基序列，由此治疗患有心血管疾病或代谢疾病的动物。在某些实施方案中，向动物施用的治疗有效量的化合物减少动物中的心血管疾病或代谢疾病。某些实施方案提供了通过施用包含经修饰的寡核苷酸的ANGPTL3抑制剂减少人中ANGPTL3水平、LDL水平、apoC-111水平、甘油三酯水平、胆固醇水平、葡萄糖水平、脂肪垫重、心血管疾病和代谢疾病中的一者或多者的方法。发明详述应理解，前述一般描述和以下详细描述仅仅是示例性的且说明性的，并不限制如要求保护的本发明。在本文，使用的单数包括复数，除非另有明确指出。如本文所用的，使用的“或”意指“和/或”，除非另有指出。而且，使用的术语“包括”以及其它形式例如“包括”和“被包括”并不是限制性的。同时，术语例如“要素”或“组分”包含要素和组分两者，包含一个单元和要素以及包含一个以上亚单元的组分，除非另有明确指出。本文所述的部分标题仅仅是为了组织的目的并不应理解为限制所述的主题。本申请引用的所有文件、或文件的一部分(包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍和书籍)据此通过引用清楚(针对本文所述的文件以及其整体)并入。
定义除非提供了明确定义，否则结合本文所述的分析化学、合成有机化学、以及医药和制药化学所用的命名法、以及它们的方法和技术是本领熟知且常用的。标准技术可用于化学合成以及化学分析。当允许时，所有专利、申请、公布的申请和其它公布、GENBANK登记号及可通过数据库例如National Center for Biotechnology Information (NCBI)和其它在本整个公开中提及的数据获得的相关序列信息通过引用(针对本文所论述的文件的部分以及其整体)并入本文。
除非另有指出，下列术语具有以下含义“2’ -0-甲氧基こ基”(也称为2’ -MOE和2’ -O(CH2)2-OCH3)是指呋喃糖基环的2’位的0-甲氧基-こ基修饰。2’ -0-甲氧基こ基修饰的糖是经修饰的糖。“2’ -0-甲氧基こ基核苷酸”意指包含2’ -0-甲氧基こ基修饰的糖部分的核苷酸。“3’靶位点”是指与特定反义化合物的3’最末端核苷酸互补的靶核酸的核苷酸。“5’靶位点”是指与特定反义化合物的5’最末端核苷酸互补的靶核酸的核苷酸。“ 5-甲基胞嘧啶”意指用与5 ’位连接的甲基修饰的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是经修饰的核碱基。“约”意指在值的土 10%内。例如，如果提及“标记可增加约50%”，则暗示标记可增加 45%-55%。“活性药用剂(Active pharmaceutical agent) ”意指当施用于个体时提供了治疗益处的药物组合物中的物质。例如，在某些实施方案中，靶向于ANGPTL3的反义寡核苷酸是活性药用剂。“活性靶区域”或“靶区域”意指靶向ー个或多个活性反义化合物的区域。“活性反义化合物”意指减少靶核酸水平或蛋白水平的反义化合物。“脂肪形成”意指脂肪细胞自前脂肪细胞的发展。“脂肪形成”意指脂肪的产生或形成，脂肪变性或脂肪浸润。“肥胖症”或“肥胖症”是指肥胖或与去脂肪体重有关的过度高量的体脂肪或脂肪组织的状态。体脂肪的量包括关心脂肪遍及身体的分布和脂肪组织沉积的大小和质量。体脂肪分布可通过皮肤褶测量、腰臀围比或技术例如超声、计算机断层摄影术或核磁共振成像来评价。根据疾病控制和预防中心，体重指数(BMI)为30或以上的个体被认为是肥胖的。本文所用的术语"肥胖症"包括由于在体内脂肪组织的过度积累而使体脂肪的増加超过身体需要的疾患。术语“肥胖症”包括但不限于以下疾患成年型肥胖症；营养性肥胖症；内源性或代谢肥胖症；内分泌性肥胖症；家族性肥胖症；胰岛功能亢进性肥胖症；增生性-肥大性肥胖症；性腺机能衰退性肥胖症；甲状腺功能減退性肥胖症；终身性肥胖症；病态肥胖症和外源性肥胖症。“伴随施用(Administered concomitantly) ”是指两种活性剂的药理学作用在患者中同时出现的任何方式两种活性剂的共施用。伴随施用不需要两种活性剂以单一药物组合物、以相同剂量形式或通过相同施用途径施用。两种活性剂的效应不需要同时显示它们自身。效应仅需要在一定时段内重叠并且不需要共存。“施用”意指给动物提供活性剤，并且包括但不限于通过医学专业人员施用和自身施用。
“活性剤(Agent) ”意指当施用于动物时可提供治疗益处的活性物质。“第一活性剂”意指本发明的治疗化合物。例如，第一活性剂可以是靶向ANGPTL3的反义寡核苷酸。“第ニ活性剤”意指本发明的第二治疗化合物(例如靶向ANGPTL3的第二反义寡核苷酸)和/或非-ANGPTL3治疗化合物。
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“减轻”是指减轻相关疾病、病症或疾患的至少ー个指标、症状或症候。指标的严重度可通过本领域技术人员已知的主观或客观量度来确定。“ANGPTL3 ”意指ANGPTL3的任何核酸或蛋白。“ANGPTL3表达”意指从编码ANGPTL3的基因转录的mRNA的水平或从mRNA翻译的蛋白的水平。ANGPTL3表达可通过本领域已知的方法例如Northern或Western印迹来测定。“ANGPTL3核酸”意指任何编码ANGPTL3的核酸。例如，在某些实施方案中，ANGPTL3核酸包括编码ANGPTL3的DNA序列、从编码ANGPTL3的DNA转录的RNA序列(包括包含内含子和外显子的基因组DNA)和编码ANGPTL3的mRNA序列。“ANGPTL3mRNA”意指编码ANGPTL3蛋白的mRNA。“动物”是指人或非-人动物，包括但不限于小鼠、大鼠、免、狗、猫、猪和非-人灵长类，包括但不限于猴和猩猩。“反义活性”意指归因于反义化合物与其靶核酸的杂交的任何可检测或可测量的活性。在某些实施方案中，反义活性是由此类靶核酸编码的把核酸或蛋白的量或表达的减少。“反义化合物”意指能够通过氢键合经受与靶核酸杂交的寡聚化合物。“反义抑制”意指在与靶核酸互补的反义化合物的存在下靶核酸水平或靶蛋白水平相比于在反义化合物存在下的靶核酸水平或靶蛋白水平的減少。“反义寡核苷酸”意指具有允许与相应的靶核酸区域或区段杂交的核碱基序列的单链寡核苷酸。如本文所用的，术语“反义寡核苷酸”包括本文所述的化合物的药学上可接受的衍生物。“含有ApoB的脂蛋白”意指具有载脂蛋白B作为其蛋白组分的任何脂蛋白，并且应理解为包括LDL、VLDL、IDL和脂蛋白，且可通常由脂质降低剂和疗法靶向。“含有ApoB-IOO的LDL”意指含有ApoB-IOO同种型的LDL。“动脉粥样硬化”意指影响大型和中型动脉的动脉的硬化并且其特征在于存在脂肪沉积物。脂肪沉积物被称为"动脉粥样化"或“斑块”，其主要由胆固醇和其它脂肪、钙和癜痕脂肪，以及动脉内层的损伤组成。“双环糖”意指通过两个非孪位环原子的桥接修饰的呋喃糖基环。双环糖是经修饰的糖。“双环核酸”或“BNA”是指核苷或核苷酸，其中该核苷或核苷酸的呋喃糖部分包括连接呋喃糖环上的两个碳原子的桥，由此形成双环系统。“帽结构”或“端帽部分”意指已在反义化合物的任一末端并入的化学修饰。“心血管疾病”或“心血管病症”是指ー组涉及心、血管或循环的疾患。心血管疾病的实例包括但不限于，动脉瘤、心绞痛、心律不齐、动脉粥样硬化、脑血管疾病(中风)、冠心病、高血压、血脂障碍、高脂血症和高胆固醇血症。
“化学上不同的区域”是指以某种方式化学上不同于同一反义化合物的另一区域的反义化合物的区域。例如，具有2’ -0-甲氧基乙基核苷酸的区域化学上不同于具有无2’ -0-甲氧基乙基修饰的核苷酸的区域。“嵌合反义化合物”意指具有至少两个化学上不同的区域的反义化合物。“共施用”意指给个体施用两种或更多种活性剂。两种或更多种活性剂可以在单一药物组合物中，或可以在分开的药物组合物中。两种或更多种活性剂中的每一种可通过相同或不同的施用路径施用。共施用包括平行或相继施用。“胆固醇”是存在于所有动物组织的细胞膜中的甾醇分子。胆固醇必须经由脂蛋白在动物的血浆中进行转运，所述脂蛋白包括极低密度脂蛋白(VLDL)、中等密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。“血浆胆固醇”是指存在于血浆或血清中的所有脂蛋白(VDL、IDL、LDL、HDL)酯化的和/或非酯化的胆固醇的总和。“胆固醇吸收抑制剂”意指抑制由饮食获得的外源性胆固醇的吸收的活性剂。“互补性”意指第一核酸与第二核酸的核碱基之间配对的能力。在某些实施方案中，第一核酸与第二核酸之间的互补性可在两条DNA链之间、在两条RNA链之间，或在DNA和RNA链之间。在某些实施方案中，一条链上的一些核碱基基于其它链与互补氢键合匹配。在某些实施方案中，一条链上的所有核碱基基于其它链与互补氢键匹配。在某些实施方案中，第一核酸是反义化合物且第二核酸是靶核酸。在某些此类实施方案中，反义寡核苷酸是第一核酸且靶核酸是第二核酸。“连续核碱基”意指彼此直接相邻的核碱基。“冠心病(CHD) ”意指供应血和氧至心脏的小血管的狭窄，其通常是动脉粥样硬化的结果。
“脱氧核糖核苷酸”意指在核苷酸的糖部分的2’位具有氢的核苷酸。脱氧核糖核苷酸可被多种取代基中的任一种修饰。“糖尿病(Diabetes mellitus) 〃或〃糖尿病〃是特征在于紊乱的代谢和异常高的血糖(高血糖症)的综合征，这是由胰岛素水平不足或胰岛素敏感性降低引起的。特有症状是由于高血糖水平导致的过量尿生成(多尿症)、过度口渴和试图补偿排尿增加的流体摄取的增加(烦渴)、由于高血糖对眼光学的效应导致的视力模糊、不明体重减轻和嗜睡。“糖尿病性血脂障碍”或“具有血脂障碍的2型糖尿病”意指特征在于2型糖尿病、减少的HDL-C、升高的甘油三酯和升高的小且致密LDL颗粒的疾患。“稀释剂”意指组合物中缺少药理学活性但是药学上必需或期望的成分。例如，注射型组合物中的稀释剂可以是液体，例如盐水溶液。“血脂障碍”是指脂质和/或脂蛋白代谢的病症，包括脂质和/或脂蛋白过度生成或缺乏。血脂障碍可表现为脂质例如胆固醇和甘油三酯以及脂蛋白例如低密度脂蛋白(LDL)胆固醇的升高。“剂量单位”意指提供药用剂的形式，例如丸剂、片剂或其它本领域中已知的剂量单位。在某些实施方案中，剂量单位是含有冻干的反义寡核苷酸的小瓶。在某些实施方案中，剂量单位是含有复原的反义寡核苷酸的小瓶。“剂量”意指在单个施用中或在指定时间内提供的指定量的药用剂。在某些实施方案中，剂量可在一个、两个或多个大丸剂(bolus)、片剂或注射剂中施用。例如,在某些实施方案中，当期望皮下施用时，所需剂量需要不易由单次注射调节的体积，因此，两个或更多个注射可用于实现所需剂量。在某些实施方案中，药用剂通过在延长的时段内或连续地输注来施用。剂量可被陈述为姆小时、姆天、姆周或姆月药用剂的量。剂量可以mg/kg或g/kg表不。“有效量”或“治疗有效量”意指足以在需要活性剂的个体中实现所需生理学结果的活性药用剂的量。有效量可在个体间变化，取决于待治疗个体的健康和身体条件、待治疗个体的分类群、组合物的制剂、个体的医疗条件的评价、以及其它相关因素。“完全互补”或“ 100%互补”意指第一核酸的核碱基序列的每个核碱基在第二核酸的第二核碱基序列中具有互补核碱基。在某些实施方案中，第一核酸是反义化合物且靶核酸是第二核酸。“缺ロ基体(Gapmer) ”意指其中具有多个支持RNA酶H切割的核苷的内部区域位于具有一个或多个核苷的外部区域的嵌合反义化合物，其中包含内部区域的核苷化学上不同于包含外部区域的核苷。内部区域可被称为“缺ロ区段”且外部区域可被称为“翼区段”。 “缺ロ加宽的”意指具有12或更多个连续2’ -脱氧核糖核苷的缺ロ区段的嵌合反义化合物的位置在具有I至6个核苷的5’和3’翼区段之间和与所述5’和3’翼区段直接相邻。“葡萄糖”是被细胞用作能量和代谢中间体的来源的单糖。“血浆葡萄糖”是指存在于血浆中的葡萄糖。“高密度脂蛋白-C(HDL-C) ”意指与高密度脂蛋白颗粒相关的胆固醇。HDL-C在血清(或血浆)中的浓度通常以mg/dL或nmol/L量化。“HDL-C”和“血浆HDL-C”是指分别在血清和血浆中的HDL-C。"HMG-CoA还原酶抑制剂”意指通过抑制酶HMG-CoA还原酶起作用的活性剤，例如阿托伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀。“杂交”意指互补核酸分子的退火。在某些实施方案中，互补核酸分子包括反义化合物和靶核酸。“高胆固醇血症”意指这样的疾患，其特征在于升高的胆固醇或循环(血浆)胆固醇、LDL-胆固醇和 VLDL-胆固醇，如根据 Expert Panel Report of the NationalCholesterol Educational Program(NCEP) of Detection, Evaluation of Treatment ofhigh Cholesterol in adults 的指南(參见，Arch. Int. Med. (1988) 148,36-39)。“高脂血症”或“血脂过多(hyperlipemia) ”是特征在于升高的血清脂质或循环(血浆)脂质的疾患。这种疾患显示异常高的脂肪浓度。循环血液中的脂质部分是胆固醇、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和甘油三酷。“高甘油三酯血症”意指特征在于升高的甘油三酯水平的疾患。“鉴定”或“选择患有代谢疾病或心血管疾病的受试者”意指鉴定或选择已诊断有代谢疾病、心血管疾病或代谢综合征的受试者；或，鉴定或选择患有代谢疾病、心血管疾病或代谢综合征的受试者包括但不限于高胆固醇血症、高血糖症、高脂血症、高甘油三酯血症、高血压、増加的胰岛素抵抗、減少的胰岛素敏感性、超过正常体重、和/或超过正常体脂肪含量或其任何组合。此类鉴定可通过任何方法实现，包括但不限于标准临床试验或评价，例如測量血清或循环(血浆)胆固醇、測量血清或循环(血浆)血液-葡萄糖、測量血清或循环(血浆)甘油三酷、測量血压、測量体脂肪含量、測量体重等。“鉴定”或“选择糖尿病受试者”意指鉴定或选择已被鉴定为糖尿病的受试者或鉴定或选择具有糖尿病(I型或2型)的任何症状例如但不限于空腹葡萄糖为至少110mg/dL、糖尿、多尿症、烦渴、増加的胰岛素抵抗和/或降低的胰岛素敏感性的受试者。“鉴定”或“选择肥胖受试者”意指鉴定或选择已被诊断为肥胖的受试者或鉴定或选择BMI超过30和/或腰围男性大于102cm或女性大于88cm的受试者。“鉴定”或“选择患有血脂障碍的受试者”意指鉴定或选择诊断有脂质和/或脂蛋白代谢的病症，包括脂质和/或脂蛋白过度生成或缺乏。血脂障碍可表现为脂质例如胆固醇和甘油三酯以及脂蛋白例如低密度脂蛋白(LDL)胆固醇的升高。 “鉴定”或“选择”患有増加的脂肪过多(adiposity)的受试者”意指鉴定或选择具有増加量的体脂肪(或脂肪过多)的受试者，包括关心脂肪遍及身体的分布和脂肪组织沉积物的大小与质量的一者或两者。体脂肪分布可通过皮肤褶测量、腰臀围比或技术例如超声、计算机断层摄影术或核磁共振成像来评价。根据疾病控制和预防中心，体重指数(BMI)为30或以上的个体被认为是肥胖的。“提高的心血管結果”意指不良心血管事件或其风险发生的減少。不良心血管事件的实例包括但不限于死亡、再梗塞、中风、心源性休克、肺水肿、心跳停止和房性心律失常。“直接相邻”意指在直接相邻的要素之间没有插入要素。“个体”或“受试者”或“动物”意指对于治疗或疗法所选定的人或非-人动物。“抑制表达或活性”是指表达或活性的減少或阻断并且不一定指示表达或活性的完全消除。“胰岛素抵抗”被定义为其中正常量的胰岛素不足以从细胞例如脂肪细胞、肌细胞和/或肝细胞产生正常胰岛素响应的疾患。脂肪细胞中的胰岛素抵抗导致所存贮甘油三酯的水解，其升高血浆中的游离脂肪酸。肌肉中的胰岛素抵抗减少葡萄糖摄取而肝中的胰岛素抵抗減少葡萄糖存贮，两种效应用于升高血糖。胰岛素和葡萄糖的高血浆水平由于胰岛素抵抗而常引起代谢综合征和2型糖尿病。“胰岛素敏感性”是个体如何有效地加工葡萄糖的量度。具有高胰岛素敏感性的个体有效地加工葡萄糖，而具有低胰岛素敏感性的个体不能有效地加工葡萄糖。“核苷间键合”是指核苷之间的化学键。“静脉内施用”意指进入静脉的施用。“连接核苷”意指键合在一起的相邻核苷。“脂质降低”意指受试者中的一种或多种脂质的減少。脂质降低可用ー个或多个剂量随时间流逝而发生。“脂质降低剂”意指给受试者提供以实现受试者中脂质的降低的活性剂例如ANGPTL3-特异性调节剂。例如，在某些实施方案中，给受试者提供脂质降低剂减少受试者中的apoB、apoC3、总胆固醇、LDL-C, VLDL-C, IDL-C、非-HDL-C、甘油三酯、小且致密LDL颗粒和Lp(a)中的一者或多者。“降脂质治疗”意指给受试者提供以减少受试者中的ー种或多种脂质的治疗方案。在某些实施方案中，提供降脂质治疗以减少受试者中的apoB、apoC3、总胆固醇、LDL-C, VLDL-C, IDL-C、非-HDL-C、甘油三酷、小且致密LDL颗粒和Lp (a)中的一者或多者。
“脂蛋白”例如VLDL、LDL和HDL是指ー组存在于血清、血浆和淋巴且对于脂质转运重要的蛋白质。每种脂蛋白的化学组成不同，因为HDL具有较高的蛋白与脂质的比例，而VLDL具有较低的蛋白与脂质的比例。“低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C) ”意指低密度脂蛋白颗粒中携帯的胆固醇。LDL-C在血清(或血浆)中的浓度通常以mg/dL或nmol/L量化。“血清LDL-C”和“血浆LDL-C”是指分别在血清和血浆中的LDL-C。“主要风险因子”是指归因于特定疾病或疾患的高风险的因子。在某些实施方案中，冠心病的主要风险因子包括但不限于吸烟、高血压、低HDL-C、冠心病的家族史、年龄和其它本文公开的因子。“代谢病症”或“代谢疾病”是指特征在于代谢功能改变或紊乱的疾患。“代谢”和“新陈代谢”是本领域熟知的术语并且一般包括在活器官内发生的一系列生物过程。代谢病症包括但不限干，高血糖症、糖尿病前期、糖尿病(I型和2型)、肥胖症、胰岛素抵抗、代谢综 合征和由于2型糖尿病引起的血脂障碍。“代谢综合征”意指特征在于代谢来源的脂质和非-脂质心血管风险因子的聚类的疾病。在某些实施方案中，代谢综合征通过存在以下因素的任何3个来鉴定腰围男性大于102cm或女性大于88cm ;血清甘油三酷为至少150mg/dL ；HDL-C男性低于40mg/dL或女性低于50mg/dL ;血压为至少130/85mmHg ;和空腹葡萄糖为至少110mg/dL。这些决定子可在临床实践中容易测量(JAMA，2001，285 :2486-2497)。“错配”或“非-互补核碱基”是指当第一核酸的核碱基不能与第二靶核酸相应核碱基配对的情況。“混合型血脂障碍”意指特征在于升高的胆固醇和升高的甘油三酯的疾患。“经修饰的核苷间键合”是指来自天然存在核苷间键(即磷酸ニ酯核苷间键)的取代或任何变化。“经修饰的核碱基”是指不是腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸苷或尿嘧啶的任何核碱基。“未经修饰的核碱基”意指嘌呤碱基腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。“经修饰的核苷”意指独立地具有一个或多个经修饰的糖部分或经修饰的核碱基的核苷。“经修饰的核苷酸”意指不独立地具有一个或多个经修饰的糖部分、经修饰的核苷间键合或经修饰的核碱基的核苷酸。“经修饰的核苷”意指独立地具有ー个或多个经修饰的糖部分或经修饰的核碱基的核苷。“经修饰的寡核苷酸”意指包含至少ー个经修饰的核苷酸的寡核苷酸。“经修饰的糖”是指天然糖的取代或变化。“基序”意指反义化合物中化学上不同区域的模型。“MTP抑制剂”意指抑制酶、微粒体甘油三酯转移蛋白的活性剤。“天然存在核苷间键合”意指3’至5’磷酸ニ酯键合。“天然糖部分”意指发现于DNA (2’ -H)或RNA (2’ -0H)中的糖。“非酒精性脂肪肝疾病”或“NAFLD ”意指特征在于不是由于过度酒精(例如，超过20g/天的酒精消耗)使用引起的肝的脂肪炎症的疾患。在某些实施方案中，NAFLD与胰岛素抵抗和代谢综合征相关。NAFLD包括范围为肝细胞(肝脂肪变性)中的单一甘油三酯蓄积到具有炎症的肝脂肪变性(脂肪肝炎)、纤维化和肝硬化的疾病谱。“非酒精性脂肪肝炎”(NASH)从NAFLD的进展发生，迟于甘油三酯的沉积。能够诱导坏死、炎症和纤维化的“第二次打击(second hit) ”对于NASH的发展是必需的。用于第二次打击的候选可分为以下大类引起氧化性应激增加的因素和促进促炎性细胞因子的表达的因素。已提出增加的肝甘油三酯导致动物和人的肝细胞中增加的氧化应激，表明肝甘油三酯蓄积、氧化应激和肝脂肪变性向NASH的进展之间的潜在因果关系(Bix)Wning和Horton，J Clin Invest, 2004，114，147-152)。高甘油三酯血症和高脂肪酸血症可引起外周组织中的甘油三酯蓄积(Shimamura 等人，Biochem Biophys Res Commun, 2004, 322,1080-1085)。“核酸”是指由单体核苷酸组成的分子。核酸包括核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)、单链核酸、双链核酸、小干扰核糖核酸(siRNA)和微RNA(miRNA)。核酸还可以包含这 些要素在单个分子中的组合。“核碱基”意指能够与另一个核酸的碱基配对的杂环部分。“核碱基序列”意指不依赖于任何糖、键合或核碱基修饰的连续核碱基的次序。“核苷”意指与糖连接的核碱基。“核苷模拟物”包括用于替换糖或糖和碱基并且不一定在寡聚化合物的一个或多个位置连接的那些结构；例如具有吗啉代、环己烯基、环己基、四氢呋喃基、二环或三环糖模拟物例如非呋喃糖单元的核苷模拟物。“核苷酸”意指具有共价连接于核苷的糖部分的磷酸基的核苷。“核苷酸模拟物”包括用于替代核苷且寡聚化合物的一个或多个位置连接的那些结构，例如肽核酸或吗啉代(通过-N(H)-C(=0)-0-或其它非-磷酸二酯键合连接的吗啉代)。“寡聚化合物"或“寡聚物”是指包含两个或更多个子结构并且能够与核酸分子的区域杂交的聚合结构。在某些实施方案中，寡聚化合物是寡核苷。在某些实施方案中，寡聚化合物是寡核苷酸。在某些实施方案中，寡聚化合物是反义化合物。在某些实施方案中，寡聚化合物是反义寡核苷酸。在某些实施方案中，寡聚化合物是嵌合寡核苷酸。“寡核苷酸”意指连接核苷的聚合物，每个连接核苷可经修饰或未经修饰，彼此无关。“胃肠外施用”意指以除消化道之外的方式的施用。胃肠外施用包括局部施用、皮下施用、静脉内施用、肌内施用、动脉内施用、腹膜内施用或颅内施用，例如鞘内或脑室内施用。施用可以是连续的、或慢性的、或短期或间歇的。“肽”意指通过连接至少两个氨基酸经由酰胺键形成的分子。肽是指多肽和蛋白质。“药用剂”意指当施用于个体时提供治疗益处的物质。例如，在某些实施方案中，靶向于ANGPTL3的反义寡核苷酸是药用剂。“药物组合物”意指适用于给个体施用的物质的混合物。例如，药物组合物可包含一种或多种活性剂和无菌水溶液。“药学上可接受的载体”意指不干扰寡核苷酸的结构或功能的介质或稀释剂。某些此类载体能使药物组合物配制成例如片剂、丸剤、糖丸、胶囊、液体、凝胶剂、糖浆剂、浆液、混悬液和锭剂以给受试者ロ服摄入。某些此类载体能使药物组合物配制成注射或输注。例如，药学上可接受的载体可以是无菌水溶液。“药学上可接受的盐”意指反义化合物的生理学和药学上可接受的盐，即保留母体寡核苷酸的所需生物活性并且不赋予其不想要的毒理学效应的盐。“硫代磷酸酯键合”意指核苷之间的键合，其中磷酸ニ酯键通过用硫原子替代非桥接氧原子之一来修饰。硫代磷酸酯键合是经修饰的核苷间键合。“部分”意指核酸的确定数量的连续(即连接)核碱基。在某些实施方案中，部分是靶核酸的确定数量的连续核碱基。在某些实施方案中，部分是反义化合物的确定数量的连续核碱基。“预防”是指延缓或阻止疾病、病症或疾患的发作或发展达到从数分钟至无限期的时段。预防还意指減少疾病、病症或疾患发展的风险。
“前药”意指以无活性形式制备的治疗剂，其在体内或其细胞内通过内源性酶或其它化学品或条件的作用被转化为活性形式。“副作用”意指可归因于治疗而不是所需效应的生理学反应。在某些实施方案中，副作用包括注射部位反应、肝功能试验异常、肾功能异常、肝毒性、肾毒性、中枢神经系统异常、肌病和不适。例如，増加的血清氨基转移酶水平可指示肝毒性或肝功能异常。例如，增加的胆红素可包括肝毒性或肝功能异常。“单链寡核苷酸”意指不与互补链杂交的寡核苷酸。“特异性杂交”是指与靶核酸具有足够的互补性程度以诱导所需效应同时在体内測定和治疗性处理的情况下在需要特异性结合的条件即在生理学条件下对非-靶核酸表现出最低效应或无效应的反义化合物“抑制素(Statin) ”意指抑制HMG-CoA还原酶活性的活性剤。 “皮下施用”意指在皮肤正下方的施用。“靶向”或“被靶向”意指设计和选择与靶核酸特异性杂交并且诱导所需效应的反义化合物的方法。“靶核酸”、“靶RNA”和“靶RNA转录物”均是指能够通过反义化合物靶向的核酸。“靶区域”被定义为具有至少ー个可识别的结构、功能或特征的靶核酸的一部分。“靶区段”意指反义化合物所靶向的靶核酸的核苷酸的序列。“5’靶位点”是指靶区段的5’最末端核苷酸。“3’靶位点”是指靶区段的3’最末端核苷酸。“治疗有效量”意指给个体提供了治疗益处的活性剂的量。“治疗性生活方式变化”意指g在降低脂肪/脂肪组织质量/或胆固醇的饮食和生活方式变化。此类变化可减少发展心脏病的危险，并且可包括每天总卡路里、总脂肪、饱和脂肪、多不饱和脂肪、单不饱和脂肪、碳水化合物、蛋白质、胆固醇、不溶纤维的饮食摄取的推荐以及体力活动的推荐。“甘油三酷”意指由与三个脂肪酸分子组合的甘油的脂质或中性脂肪。“2型糖尿病”(也称为“2型糖尿病”或“糖尿病，2型”，并且之前称为“糖尿病2型”、“非-胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM) ”、“肥胖症相关性糖尿病”或“成人型糖尿病”)是主要特征在于胰岛素抵抗、相对胰岛素缺乏和高血糖症的代谢病症。
“治疗”是指施用药物组合物以实现疾病、病症或疾患的改变或提高。“未经修饰的核苷酸”意指由天然存在核碱基、糖部分和核苷间键合组成的核苷酸。在某些实施方案中，未经修饰的核苷酸是RNA核苷酸(即P -D-核糖核苷)或DNA核苷酸(即P -D-脱氧核糖核苷)。某些实施方案在某些实施方案中，本发明的化合物和组合物包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸。ANGPTL3靶可具有选自SEQ ID NO :1_5中任一个的序列。在某些实施方案中，本发明的化合物和组合物包含经修饰的寡核苷酸，所述经修饰的寡核苷酸由10至30个核苷组成并且具有包含与SEQ ID NO :1-5的等长部分互补的至少8个连续核碱基的核碱基序列。 本发明的化合物和组合物包含经修饰的寡核苷酸，所述经修饰的寡核苷酸由10至30个核苷组成并且具有包含选自SEQ ID NO :34-182中任一个的核碱基序列的至少8个连续核碱基的核碱基序列。本发明的化合物和组合物包含经修饰的寡核苷酸，所述经修饰的寡核苷酸由10至30个核苷组成并且具有包含选自SEQ ID NO :34-182中任一个所述的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基的核碱基序列。在某些实施方案中，本发明的化合物和组合物包含经修饰的寡核苷酸的盐。在某些实施方案中，本发明的化合物和组合物还包含药学上可接受的载体或稀释剂。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核碱基序列与SEQ ID NO :1-5中任一个至少70%、80%、90%、95%或100%互补，如对经修饰的寡核苷酸的整体性所测量的。在某些实施方案中，本发明的化合物由单链的经修饰的寡核苷酸组成。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸由8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个连接核苷组成。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成。在某些实施方案中，所述经修饰的寡核苷酸的至少一个核苷间键合是经修饰的核苷间键合。在某些实施方案中，每个核苷间键合是硫代磷酸酯核苷间键合。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的至少一个核苷包含经修饰的糖。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含至少一个经四氢吡喃修饰的核苷，其中四氢吡喃环代替呋喃糖环。在某些实施方案中，每一个经四氢吡喃修饰的核苷具有以下结构
I—
\F其中Bx是任选保护的杂环碱基部分。在某些实施方案中，至少一种经修饰的糖是双环糖。在某些实施方案中，至少一种经修饰的糖包含2 ’ -0-甲氧基乙基或4 ’ - (CH2) n-0-2 ’桥，其中n是I或2。在某些实施方案中，所述经修饰的寡核苷酸中的至少一个核苷包含经修饰的核碱基。在某些实施方案中，经修饰的核碱基是5-甲基胞嘧啶。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含a)由连接脱氧核苷组成的缺ロ区段；b)由连接核苷组成的5’翼区段；和c)由连接核苷组成的3’翼区段。缺ロ区段位于5’翼区段与3’翼区段之间并且每个翼区段中的每个核苷包含经修饰的糖。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成，缺ロ区段由10个连接脱氧核苷组成，5’翼区段由5个连接核苷组成，3’翼区段由5个连接核苷组成，每个翼区段的每个核苷包含2’ -0-甲氧基こ基糖并且每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合，在某些实施方案中，本发明的化合物和组合物包含经修饰的寡核苷酸，所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成并且具有包含与SEQ ID NO :1-5的等长部分互补的至少8个连续核碱基的核碱基序列，其中经修饰的寡核苷酸包含a)由10个连接脱氧核苷组成的缺ロ区段；b)由5个连接核苷组成的5’翼区段；和c)由5个连接核苷组成的3’翼区段。缺ロ区段位于5’翼区段与3’翼区段之间，每个翼区段的每个核苷包含2’ -0-甲氧基こ基糖，每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合且每个胞嘧啶残基是5-甲基胞嘧啶。 在某些实施方案中，本发明的化合物和组合物包含经修饰的寡核苷酸，所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成并且具有包含与SEQ ID NO =34-182中任ー个的至少8个连续核碱基的核碱基序列，其中经修饰的寡核苷酸包含a)由10个连接脱氧核苷组成的缺ロ区段；b)由5个连接核苷组成的5’翼区段；和c)由5个连接核苷组成的3’翼区段。缺ロ区段位于5’翼区段与3’翼区段之间，每个翼区段的每个核苷包含2’ -0-甲氧基こ基糖，每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合且每个胞嘧啶残基是5-甲基胞嘧啶。某些实施方案提供了用于抑制ANGPTL3表达的方法、化合物和组合物。某些实施方案提供了减少动物中的ANGPTL3表达的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物。某些实施方案提供了减少动物中的Ap0C-III表达的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸，由此减少动物中的ApoC-III表达。某些实施方案提供了减少动物中的甘油三酯水平的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸，由此减少动物中的甘油三酯水平。某些实施方案提供了减少动物中的胆固醇水平的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸，由此减少动物中的胆固醇水平。某些实施方案提供了减少动物中的低密度脂蛋白(LDL)水平的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸，由此减少动物中的低密度脂蛋白(LDL)水平。某些实施方案提供了减少动物中的葡萄糖水平的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸，由此减少动物中的葡萄糖水平。某些实施方案提供了减轻动物中的代谢疾病或心血管疾病的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸，由此减轻动物中的代谢疾病或心血管疾病。某些实施方案提供了用于治疗患有ANGPTL3相关疾病或疾患的动物的方法，包括a)鉴定患有ANGPTL3相关疾病或疾患的所述动物，和b)向所述动物施用治疗有效量的化合物，所述化合物包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，施用于动物的治疗有效量的化合物减轻动物中的ANGPTL3相关疾病或疾患。某些实施方案提供了用于治疗患有代谢疾病或心血管疾病的动物的方法，包括a)鉴定患有代谢疾病或心血管疾病的所述动物,和b)向所述动物施用治疗有效量的包含经修饰的寡核苷酸的化合物，所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成并且具有与SEQID NO :1-5至少90%互补(如对经修饰的寡核苷酸的整体性测量)的核碱基序列，由此治疗患有代谢疾病或心血管疾病的动物。在某些实施方案中，施用于动物的治疗有效量的化合物减轻动物中的代谢疾病或心血管疾病。某些实施方案提供了通过施用包含经修饰的寡核苷酸的ANGPTL3抑制剂减少人中ANGPTL3水平、LDL水平、apoC-111水平、甘油三酯水平、胆固醇水平、葡萄糖水平、脂肪垫重、心血管疾病和代谢疾病中的一者或多者的方法，所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成并且具有与SEQ ID NO :1-5至少90%互补的核碱基序列，如对所述经修饰的寡核苷酸的整体性所测量的。某些实施方案提供了本文所述的化合物和组合物用于抑制ANGPTL3表达的用途。某些实施方案提供了本文所述的化合物和组合物用于减少动物中的ANGPTL3表达。某些实施方案包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物。某些实施方案提供了本文所述的化合物和组合物用于减少动物中的ApoC-III表达的用途。某些实施方案包括向动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物，由此减少动物中的ApoC-III表达。某些实施方案提供了本文所述的化合物和组合物用于减少动物中的甘油三酯水平的用途。某些实施方案包括给动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物，由此减少动物中的甘油三酯水平。某些实施方案提供了本文所述的化合物和组合物用于减少动物中的胆固醇水平的用途。某些实施方案包括给动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物，由此减少动物中的胆固醇水平。某些实施方案提供了本文所述的化合物和组合物用于减少动物中的低密度脂蛋白(LDL)水平的用途。某些实施方案包括给动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物，由此减少动物中的低密度脂蛋白(LDL)水平。某些实施方案提供了本文所述的化合物和组合物用于减少动物中的葡萄糖水平的用途。某些实施方案包括给动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷、的经修饰的寡核苷酸的化合物，由此减少动物中的葡萄糖水平。某些实施方案提供了本文所述的化合物和组合物用于减轻动物中的代谢疾病或心血管疾病的用途。某些实施方案包括给动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物，由此减轻动物中的代谢疾病或心血管疾病。
某些实施方案提供了本文所述的化合物和组合物用于治疗的用途。某些实施方案提供了本文所述的化合物和组合物用于治疗患有ANGPTL3相关疾病或疾患的动物的用途。在某些实施方案中，ANGPTL3相关疾病或疾患是代谢疾病或心血管疾病。某些实施方案包括a)鉴定患有ANGPTL3相关疾病或疾患的所述动物，和b)向所述动物施用治疗有效量的化合物，所述化合物包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，施用于动物的治疗有效量的化合物减轻动物中的ANGPTL3相关疾病或疾患。某些实施方案提供了本文所述的化合物和组合物用于治疗患有代谢疾病或心血管疾病的动物的用途。包括a)鉴定患有代谢疾病或心血管疾病的所述动物，和b)向所述动物施用包含经修饰的寡核苷酸的化合物，由此治疗患有代谢疾病或心血管疾病的动物，所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成并且具有与SEQ ID NO :1-5至少90%互补的核碱基序列，如对所述经修饰的寡核苷酸的整体性所测量的。在某些实施方案中，施用于动物的治疗有效量的化合物减轻动物中的代谢疾病或心血管疾病。某些实施方案提供了本文所述的化合物和组合物用于减少人中ANGPTL3水平、LDL水平、apoC-III水平、甘油三酯水平、胆固醇水平、葡萄糖水平、脂肪垫重、心血管疾病和代谢疾病中的一者或多者的用途，通过施用包含经修饰的寡核苷酸的ANGPTL3抑制剂，所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成并且具有与SEQ ID NO :1-5至少90%互补的核碱基序列，如对所述经修饰的寡核苷酸的整体性所测量的。在某些实施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登记号BG400407. I中所述的mRNA序列(以SEQ ID NO :1并入本文)。在某些实施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登记号BG562555. I中所述的mRNA序列(以SEQ ID NO 2并入本文)。在某些实施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登记号BG562798. I中所述的mRNA序列(以SEQ ID NO 3并入本文)。在某些实施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登记号NM_014495. I中所述的mRNA序列(以SEQID NO 4并入本文)。在某些实施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登记号NT_032977. 5的核苷酸15511702至15521082中所述的序列(以SEQ ID NO 5并入本文)。在某些实施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登记号AF162224. I中所述的mRNA序列(以SEQ ID NO 6并入本文)。在某些实施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登记号Al 195524. I中所述的mRNA序列(以SEQ ID NO 7并入本文)。在某些实施方案中，ANGPTL3具有如GenBank登记号BB717501. I中所述的mRNA序列(以SEQ ID NO 8并入本文)。表I基因革巴名称和序列
权利要求
1.一种减少动物中的ANGP T L 3表达的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中减少所述动物中的ANGPTL3表达。
2.一种减少动物中的apoC-III表达的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中减少所述动物中的apoC-III表达。
3.—种减少动物中的甘油三酯水平的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中减少所述动物中的甘油三酯水平。
4.一种减少动物中的胆固醇水平的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中减少所述动物中的胆固醇水平。
5.一种减少动物中的低密度脂蛋白(LDL)水平的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中减少所述动物中的低密度脂蛋白(LDL)水平。
6.一种减少动物中的葡萄糖水平的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中减少所述动物中的葡萄糖水平。
7.一种减轻动物中的代谢疾病或心血管疾病的方法，其包括向所述动物施用包含靶向于ANGPTL3的长度为10至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中减轻所述动物中的代谢疾病或心血管疾病。
8.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述经修饰的寡核苷酸具有与SEQID NO:1-5至少90%互补的核碱基序列，如对所述经修饰的寡核苷酸的整体性所测量的。
9.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述经修饰的寡核苷酸具有包含SEQIDNO =34-182中任一个所述的序列的至少8个连续核碱基的核碱基序列。
10.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述动物是人。
11.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述化合物是第一活性剂，并且还包括施用第二活性剂。
12.权利要求11所述的方法，其中共施用所述第一活性剂和第二活性剂。
13.权利要求11中任一项所述的方法，其中所述第二活性剂是葡萄糖降低剂。
14.权利要求13所述的方法，其中所述葡萄糖降低剂是治疗性生活方式改变、PPAR激动剂、二肽基肽酶(IV)抑制剂、GLP-I类似物、胰岛素或胰岛素类似物、胰岛素促泌素、SGLT2抑制剂、人胰淀素类似物、双胍类、a -糖苷酶抑制剂或其组合。
15.权利要求13所述的方法，其中所述葡萄糖降低剂是二甲双胍、磺酰脲、罗格列酮或其组合。
16.权利要求13所述的方法，其中所述葡萄糖降低剂是选自以下的磺酰脲醋酸己脲、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲或格列奇特。
17.权利要求13所述的方法，其中所述葡萄糖降低剂是二甲双胍。
18.权利要求13所述的方法，其中所述葡萄糖降低剂是选自那格列奈或瑞格列奈的美格列奈。
19.权利要求13所述的方法，其中所述葡萄糖降低剂是选自吡格列酮或罗格列酮的噻唑烷二酮类。
20.权利要求13所述的方法，其中所述葡萄糖降低剂是选自阿卡波糖或米格列醇的a-糖苷酶抑制剂。
21.权利要求11所述的方法，其中所述第二活性剂是降脂质治疗。
22.权利要求21所述的方法，其中所述降脂质治疗是治疗性生活方式改变、HMG-CoA还原酶抑制剂、胆固醇吸收抑制剂、MTP抑制剂、靶向于ApoB的反义化合物或其任何组合。
23.权利要求21所述的方法，其中所述降脂质治疗是选自以下的HMG-CoA还原酶抑制剂阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、罗苏伐他汀或辛伐他汀。
24.权利要求21所述的方法，其中所述降脂质治疗是胆固醇吸收抑制剂依泽替米贝。
25.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中施用包含胃肠外施用。
26.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述化合物由单链经修饰的寡核苷酸组成。
27.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述经修饰的寡核苷酸具有与SEQIDNO :1-5中任一个至少95%互补的核碱基序列，如对所述经修饰的寡核苷酸的整体性所测量的。
28.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述经修饰的寡核苷酸具有与SEQIDNO :1-5中任一个至少100%互补的核碱基序列，如对所述经修饰的寡核苷酸的整体性所测量的。
29.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述经修饰的寡核苷酸的至少一个核苷间键合是经修饰的核苷间键合。
30.权利要求29所述的方法，其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯核苷间键合。
31.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述经修饰的寡核苷酸的至少一个核苷包含经修饰的糖。
32.权利要求31所述的方法，其包含至少一个经四氢吡喃修饰的核苷，其中四氢吡喃环代替呋喃糖环。
33.权利要求32所述的方法，其中至少一个经四氢吡喃修饰的核苷中的每一个具有以下结构
34.权利要求31所述的方法，其中至少一种经修饰的糖是双环糖。
35.权利要求31所述的方法，其中至少一种经修饰的糖包含2’-0-甲氧基乙基或,4’ -(CH2)n-0_2’ 桥，其中 n 是 I 或 2。
36.权利要求1-7中任一项所述的方法,其中经修饰的寡核苷酸的至少一个核苷包含经修饰的核碱基。
37.权利要求36所述的方法，其中所述经修饰的核碱基是5-甲基胞嘧啶。
38.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成。
39.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述经修饰的寡核苷酸包含 a.由连接脱氧核苷组成的缺口区段； b.由连接核苷组成的5’翼区段； c.由连接核苷组成的3’翼区段； 其中所述缺口区段位于5’翼区段与3’翼区段之间并且每个翼区段中的每个核苷包含经修饰的糖。
40.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成，具有包含选自SEQ ID NO :34-182中任一个的核碱基序列的至少8个连续核碱基的核碱基序列，并且包含 a.由10个连接脱氧核苷组成的缺口区段； b.由5个连接核苷组成的5’翼区段； c.由5个连接核苷组成的3’翼区段； 其中所述缺口区段位于5’翼区段与3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’ -O-甲氧基乙基糖，其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合，并且其中每个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
41.一种用于治疗患有代谢疾病或心血管疾病的动物的方法，其包括 a.鉴定患有代谢疾病或心血管疾病的所述动物， b.向所述动物施用治疗有效量的包含经修饰的寡核苷酸的化合物，所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成并且具有与SEQ ID NO :1-5至少90%互补的核碱基序列，如对经修饰的寡核苷酸的整体性所测量的， 其中患有代谢疾病或心血管疾病的所述动物被治疗。
42.权利要求41所述的方法，其中向所述动物施用所述治疗有效量的化合物减少所述动物中的代谢疾病或心血管疾病。
43.权利要求7或41的方法，其中所述代谢疾病或心血管疾病是肥胖症、糖尿病、动脉粥样硬化、血脂障碍、冠心病、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、高脂肪酸血症或代谢综合征或其组合。
44.权利要求43所述的方法，其中所述血脂障碍是高脂血症。
45.权利要求44所述的方法，其中所述高脂血症是高胆固醇血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症和高甘油三酯血症两者。
46.权利要求43所述的方法，其中所述NAFLD是肝脂肪变性或脂肪肝炎。
47.权利要求43所述的方法，其中所述糖尿病是2型糖尿病或具有血脂障碍的2型糖尿病。
48.权利要求I所述的方法，其中所述施用导致脂质水平减少，包括甘油三酯水平、胆固醇水平、胰岛素抵抗、葡萄糖水平或其组合。
49.权利要求48所述的方法，其中所述水平独立地减少5%、10%、20%、30%、35%或40%。
50.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述施用导致提高的胰岛素敏感性。
51.权利要求50所述的方法，其中所述施用导致提高的胰岛素敏感性。
52.一种通过施用包含经修饰的寡核苷酸的ANGPTL3抑制剂减少人中ANGPTL3水平、LDL水平、apoC-III水平、甘油三酯水平、胆固醇水平、葡萄糖水平、脂肪垫重、心血管疾病和代谢疾病中的一者或多者的方法，所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成并且具有与SEQ ID NO :1-5至少90%互补的核碱基序列，如对所述经修饰的寡核苷酸的整体性所测量的。
53.权利要求1-52中任一项所述的方法，其中所述施用导致动脉粥样硬化斑块、肥胖症、葡萄糖、脂质、葡萄糖抗性、胆固醇减少或胰岛素敏感性增加或其任何组合。
54.—种包含经修饰的寡核苷酸的化合物，所述经修饰的寡核苷酸由10至30个连接核苷组成并且具有包含选自SEQ ID NO :34-182中任一个的核碱基序列的至少8个连续核碱基的核喊基序列。
55.权利要求54所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸的核碱基序列与SEQIDNO :1-5至少95%互补。
56.权利要求54所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸的核碱基序列与SEQIDNO :1-5至少100%互补。
57.权利要求54所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸是单链寡核苷酸。
58.权利要求54所述的化合物，其中至少一个核苷间键合是经修饰的核苷间键合。
59.权利要求58所述的化合物，其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯核苷间键合。
60.权利要求54所述的化合物，其中至少一个核苷包含经修饰的糖。
61.权利要求60所述的化合物，其中至少一种经修饰的糖是双环糖。
62.权利要求60所述的化合物，其中至少一种经修饰的糖包含2’-0-甲氧基乙基或4’ -(CH2)n-0_2’ 桥，其中 n 是 I 或 2。
63.权利要求54所述的化合物，其中至少一个核苷包含经修饰的核碱基。
64.权利要求63所述的化合物，其中所述经修饰的核碱基是5-甲基胞嘧啶。
65.权利要求54所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含 由连接脱氧核苷组成的缺口区段； 由连接核苷组成的5’翼区段； 由连接核苷组成的3’翼区段； 其中所述缺口区段位于5’翼区段与3’翼区段之间，并且其中每个翼区段的每个核苷包含经修饰的糖。
66.权利要求54所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成并且包含 由10个连接脱氧核苷组成的缺口区段； 由5个连接核苷组成的5’翼区段； 由5个连接核苷组成的3’翼区段； 其中所述缺口区段位于5’翼区段与3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’ -0-甲氧基乙基糖；且其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合。
67.权利要求54所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成。
68.一种包含经修饰的寡核苷酸的化合物或其盐和药学上可接受的载体或稀释剂，所述经修饰的寡核苷酸由10至30个连接核苷组成并且具有包含选自SEQ ID NO :34-182中任一个所述的序列的核碱基序列的至少8个连续核碱基的核碱基序列。
69.权利要求68所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸是单链寡核苷酸。
70.权利要求68所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成。
71.—种包含经修饰的寡核苷酸的化合物，所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成，并且具有包含选自SEQ ID NO :34-182中任一个的核碱基序列的至少8个连续核碱基的核碱基序列，其中经修饰的寡核苷酸包含 由10个连接脱氧核苷组成的缺口区段； 由5个连接核苷组成的5’翼区段； 由5个连接核苷组成的3’翼区段； 其中所述缺口区段位于5’翼区段与3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’ -O-甲氧基乙基糖，其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合，并且其中每个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
全文摘要
本文提供的是用于减少动物中ANGPTL3mRNA和蛋白的表达的方法、化合物和组合物。本文还提供的是用于在动物中减少血浆脂质、血浆葡萄糖和动脉粥样硬化斑块的方法、化合物和组合物。此类方法、化合物和组合物可用于治疗、预防、延缓或减轻任何一种或多种心血管疾病或代谢疾病或其症状。
文档编号A61K31/7105GK102753186SQ201180008657
公开日2012年10月24日 申请日期2011年1月7日 优先权日2010年1月8日
发明者K·W·多比, M·J·格雷厄姆, R·M·克鲁克, R·李 申请人:Isis制药公司