专利名称：含有大环内酯菌素a及其衍生物作为有效成分的具有抗血管生成效果的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有抗血管生成效果的组合物，其含有具有抗血管生成作用的大环内酯菌素A (macrolactin A,以下称为MA)、7_0-丙二酸大环内酯菌素A (7-0-malonylmacrolactin A,以下称为 MMA)及 7_0_ 丁二酸大环内酯菌素 A(7-0_succinyl macrolactinA，以下称为SMA)等大环内酯类化合物作为有效成分。利用本发明的具有抗血管生成效果的组合物，可以提供一种以预防或治疗由血管生成引起的疾病为目的的药物组合物。
背景技术：
血管生成(angiogenesis)是指由现有的微血管生成新的毛细血管的过程。正常 的血管生成发生在胚胎发育(embryonic development)、组织再生、伤口处理及作为女性生殖系统的周期性变化的黄体成熟时期,此时也被严格调节而进行(Folkman J et al.，Int. Rev. Exp. Pathol.，16pp207_248,1976 (Folkman J 等人，国际实验病理学评论，16 第207-248 页，1976))。在成人中，血管内皮细胞的生长非常缓慢，与其它类型的细胞相比，相对不易分裂。血管生成的过程如下。一般是依靠血管生成促进因子的刺激，通过依靠蛋白酶引起的血管基底膜的分解、血管内皮细胞的迁移、增殖，以及由血管内皮细胞分化引起的管形成使血管重建，从而生成新的毛细血管。一些疾病是由于血管生成不能得到自我调节，导致血管异常生长而引起的。在病理条件下发生的与血管生成相关的疾病有血管瘤、血管纤维瘤、血管畸形，以及动脉硬化、血管粘附、硬肿症等心血管疾病；由血管生成引起的眼科疾病有角膜移植性血管生成、新生血管性青光眼、糖尿病视网膜病变、新生血管性角膜疾病、斑点退化、翼状胬肉、视网膜变性、晶状体后纤维组织增生和颗粒性结膜炎等。关节炎等慢性炎症性疾病，牛皮癣、毛细血管扩张症、化脓性肉芽肿、脂溢性皮炎、痤疮等皮肤疾病，阿尔茨海默氏症和肥胖也与血管生成有关，此外，癌的生长和转移必须依赖于血管生成(D’Amato. RJ et al.,Ophthalmology,102 (9), ppl261-1262,1995 ；Arbiser JL,J.Am. Acad. Dermatol. , 34 (3)，pp486_497,1996 ;0’Brien KD et al. Circulation,93(4),pp672-682,1996 ；Hanahan D etal.，Cell，86，pp353-364，1996 (D，Amato. RJ 等人，眼科学，102 (9)，第 1261-1262 页，1995 ；Arbiser几，美国皮肤病学会杂志，34 (3)，第486-497页，1996 ;0’Brien KD等人，循环杂志，93 (4)，第 672-682 页，1996 ；HanahanD 等人，细胞，86，第 353-364 页，1996))。特别是癌症的情况下，血管生成在癌细胞的生长和转移中起着重要的作用。肿瘤通过新生血管得到生长和增殖所需的营养和氧气，此外，渗透到肿瘤的新生血管给转移的癌细胞提供进入血液循环系统的机会，使癌细胞转移(metastasis) (Folkman and Tyler,Cancer Invasionand metastasis, Biological mechanism and Therapy (S.B. Day ed.)Ravenpress, New York,pp94-103, 1977 ；Polverini PJ,Crit.Rev. Oral. Biol. Med. ,6 (3)，pp230-247，1995 (福克曼和泰勒，癌的侵袭及转移，生物学机制及治疗(S. B. Day ed. )Raven出版社，纽约，第94-103页，1977 ；Polverini PJ, 口腔生物医学与医学鉴定性评论，6 (3)，第230-247页，1995))。目前在临床上对癌症患者所使用的化学疗法或免疫疗法无法提高癌症患者的生存率的主要原因为癌症的转移。关节炎作为典型的炎症性疾病，自身免疫失调是其主要原因，随着病情的发展，关节之间的滑膜囊内的慢性炎症会诱导血管生成并破坏软骨。即，借助于诱导炎症的细胞因子，滑膜细胞和血管内皮细胞在滑膜囊内增殖，随着血管生成的进行，在软骨部形成结缔组织层一关节醫后，对起到缓冲作用的软骨进行破坏(Koch AE et al. , Arthritis. Rheum.,29,pp471_479,1986 ;Stupack DG et al. ,Braz J. Med. Biol. Res. ,32(5),pp578_581,1999 ;KochAE, Atrhritis. Rheum.，41 (6), pp951_962,1998 (KochAE 等人，关节炎与风湿病，29,第471-479页，1986 ;Stupack DG等人，巴西医学及生物学杂志，32 (5)，第578-581页，1999 ;KochAE，关节炎与风湿病，41 (6)，第 951-962 页，1998)。每年使全世界数以百万计的人失明的眼科疾病，其原因也是血管生成(JeffreyMI et al.，J. Clin.1nvest.，103，ppl231_1236,1999 (JeffreyMI 等人，临床研究杂志， 103，第1231-1236页，1999))。具有代表性的例子有发生在老年人上的黄斑变性(maculardegeneration)、糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy)、早熟儿的视网膜病、新生血管性青光眼、新生血管性角膜疾病等，这些疾病都是由血管生成引起的(Adamis AP etal.，Angiogenesis, 3, pp9_14,1999 (Adamis AP 等人,血管生成，3,第 9-14 页，1999 年))。其中，糖尿病性视网膜病变作为糖尿病的并发症，其是因视网膜中的毛细血管侵入到玻璃体而导致失明的疾病。以红色斑点和鳞片状皮肤为特征的牛皮癣也是一种发生在皮肤上的慢性增生性疾病，其难以治愈且伴随疼痛和变形。与正常状态下的角质细胞每月增殖一次相比，牛皮癣患者至少每周增殖一次。对于这样的快速增殖，需要提供丰富的血液，因此无法避免活跃的血管生成(Folkman J, J.1nvest. Dermatol. , 59, pp40-48,1972 (Folkman J，研究性皮肤病学杂志，59，第 40-48 页，1972))。抗血管生成抑制剂可以适用于治疗这些各种血管生成相关的疾病。由于患者通常需要长期服用这些抗血管生成抑制剂，因此毒性低且能够口服的药物最为理想。因此，需要开发一种毒性低的抗血管生成抑制剂。本发明的发明人对以大环内酯菌素A为首的大环内酯衍生物的药理活性进行了长期研究，它们为含有24-环内酯环的大环内酯类抗菌素物质。大环内酯类化合物是从未分类的海洋细菌、放线菌和芽孢杆菌菌株中产生(Wiliam Fenical et al.，J AmChem Soc. ,111, pp7519_7524,1989 ;Ik Dong Yoo et al. , J Microbiol Biotechnol.,
7,pp429_434,1997 ;Gabriella Molinari et al. , Antimicrob AgentsChemother. ,50,ppl701-1709，2006 (Wiliam Fenical 等人，美国化学学会志，111，第 7519-7524 页，1989 ；Ik Dong Yoo等人,微生物学与生物技术杂志,7,第429-434页，1997 ；Gabriella Molinari等人，抗微生物剂与化疗，50，第1701-1709页，2006))。到目前为止已有23种化合物在结构上得到确认。现有的针对大环内酯类化合物药理活性的研究如下。在1989年首次分离出的MA具有以下作用，其抑制小鼠黑素瘤癌细胞(murinemelanoma cancer cell)和单纯性疱疫病毒(Herpessimplex virus)的增殖，保护因艾滋病毒(HIV)而受损的T-淋巴母细胞(Wiliam Fenical et al. , J Am Chem Soc.,111，PP7519-7524,1989 (Wiliam Fenical 等人，美国化学学会志，111，第 7519-7524 页，1989))。此外，还具有抑制S烯合酶(squalene synthase) (Sung WonChoi et al. , CanJ Microbiol. , 49, pp663-668, 2003 (Sung Won Choi 等人，加拿大微生物杂志,49,第663-668页,2003)),保护因谷氨酸盐(glutamate)而受损的脑细胞(Ik Dong Yoo et al.,J MicrobiolBiotechnol. ,7, pp429-434,1997 (Ik Dong Yoo 等人，微生物学与生物技术杂志，7，第429-434，1997))的作用，还对包括超级细菌在内的各种病原菌表现出了抗菌活性(Gabriella Molinari et al. ,Antimicrob Agents Chemother. ,50,ppl701-1709,2006(GabriellaMolinari等人，抗微生物剂与化疗，50，第1701-1709，2006)。此外，本发明人确认了 MA及其衍生物具有以下作用，其可抑制由脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的炎症介质的形成，并对此申请了专利(PCT申请号PCT/KR2010/003239)。本发明人确认了从聚酵素芽孢杆菌KJS-2 (Bacilluspolyfermenticus KJS-2,KCCM10769P,以下简称“BP2”)菌株的发酵液或培养液中可以产出 作为主要产物的MA、MMA和SMA，并确定了它们的结构。并且，通过液相色谱-质谱联用(LC/Mass)，确认了从上述菌的发酵液或培养液的粗提物中还生产出了上述三种大环内酯类化合物以外的物质，即，被推定为大环内酯菌素B (macrolactinB)、大环内酯菌素C (macrolactin C)、大环内酯菌素D (macrolactinD)、大环内酯菌素E (macrolactin E)、大环内酯菌素F(macrolactinF)、大环内酯菌素 G (macrolactin G)、大环内酯菌素H (macrolactinH)、大环内酯菌素I (macrolactin I)、大环内酯菌素J (macrolactin J)、大环内酯菌素K(macrolactin K)、大环内酯菌素 L (macrolactin L)、大环内酯菌素 M (macrolactin M)、大环内酯菌素N (macrolactin N)、异大环内酯酸(isomacrolactinic acid)及大环内酯酸(macrolactinicacid)(韩国专利授权号10-0895908)。但本发明人没有证实大环内酯菌素 O (macrolactin 0)、大环内酷菌素 P (macrolactin P)、大环内酷菌素 Q (macrolactinQ)、大环内酷菌素R (macrolactin R)及大环内酷菌素S (macrolactin S)产自BP2菌。大环内酯类化合物具有与它们的各种结构相对应的各种药理活性。然而，目前还没有关于大环内酯类化合物抑制血管生成方面的研究报道。为此，本发明人使用中压液相色谱(middle pressure liquidchromatography, MPLC)对含有各种大环内酯类化合物的BP2菌的发酵液或培养液中产出的粗提物进行分别提取，并对各流分的血管生成抑制活性进行研究。结果发现含有大环内酯类化合物的流分具有抑制血管生成的作用，特别是含有MA、MMA, SMA的流分可强烈抑制新生血管的形成。由此,本发明人通过对含有上述三种大环内酯化合物的中压液相色谱流分进行精制，获得高纯度的各物质(PCT申请号PCT/KR2010/003239)，并分别对精制获得的三种大环内酯化合物的血管生成抑制活性进行了研究。
发明内容
要解决的技术问题本发明人通过确认MA、MMA及SMA具有强烈抑制血管生成的作用，从而完成了本发明。因此，本发明以预防或治疗由血管生成引起的疾病为目的，旨在提供一种含有上述大环内酯类化合物作为有效成分的药物组合物。技术方案
为了实现上述目的，本发明提供一种用于抑制血管生成的组合物，其含有化学式f化学式3所示的化合物作为有效成分。此外，为了实现本发明的另一个目的，本发明提供一种用于预防或治疗与血管生成相关的疾病的组合物，其含有化学式广化学式3所示的化合物中的任意一种作为有效成分。化学式I
权利要求
1.一种具有抑制血管生成效果的药物组合物，其含有选自大环内酯菌素A、7-0-丙二酰大环内酯菌素A及7-0- 丁二酰大环内酯菌素A中的一种以上作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的具有抑制血管生成效果的药物组合物，其特征在于，其含有大环内酯菌素A作为有效成分。
3.根据权利要求1所述的具有抑制血管生成效果的药物组合物，其特征在于，其含有 7-0-丙二酰大环内酯菌素A作为有效成分。
4.根据权利要求1所述的具有抑制血管生成效果的药物组合物，其特征在于，其含有 7-0- 丁二酰大环内酯菌素A作为有效成分。
5.根据权利要求广4中任一项所述的具有抑制血管生成效果的药物组合物，其特征在于，由血管生成引起的疾病选自类风湿性关节炎、骨关节炎、脓毒性关节炎、牛皮癣、角膜溃疡、老年性黄斑变性、糖尿病视网膜病变、增殖性玻璃体视网膜病变、未成熟视网膜病变、 眼科炎症、圆锥形角膜、干燥综合征、近视眼肿瘤、角膜移植排斥、异常伤口粘连、骨病、蛋白尿、腹主动脉瘤、外伤性关节损伤导致的退行性软骨损失、神经系统的脱髓鞘疾病、肝硬化、 肾小球疾病、未成熟胚胎胎膜破裂、炎症性肠病、牙周疾病、动脉硬化症、再狭窄、中枢神经系统的炎症性疾病、阿尔茨海默氏病、皮肤衰老和癌的浸润及转移中的一种以上。
全文摘要
本发明涉及一种具有抗血管生成效果的组合物，其含有大环内酯菌素A、7-O-丙二酰大环内酯菌素A及7-O-丁二酰大环内酯菌素A等大环内酯类化合物作为有效成分。本发明提供的所述大环内酯类化合物在活体内实验中强烈抑制新生血管的生成，可以用作预防或治疗由血管生成引起的疾病的药物组合物。
文档编号A61P19/00GK103002892SQ201180035102
公开日2013年3月27日 申请日期2011年2月23日 优先权日2010年7月16日
发明者池龙勳, 金桐熙, 金贞爱, 姜在璿, 郑星旭, 黄星宇, 姜憬娈, 姜友拉 申请人:大宇制药株式会社