专利名称：荨麻提取物的提取方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，特别涉及荨麻提取物的提取方法。
技术背景
荨麻是荨麻科荨麻多年野生草本植物，该植物为传统的药食同用的野生植物，其富含蛋白质、多糖、黄酮类化合物、氨基酸等成分。该植物幼嫩时可做山野菜食用，花期后具有药用价值。荨麻具有祛风定惊，消食通便的功效，用于风湿关节痛，产后抽风，小儿惊风， 小儿麻痹后遗症，高血压，消化不良，大便不通；外用治荨麻疹初起，蛇咬伤。现代研究证明， 荨麻对男性前列腺良性增生有很好的疗效。临床治疗上，荨麻早已被应用于治疗荨麻疹、风湿关节痛，采用现代科学技术深加工，将其所含的多糖活性成分提取出来，用于前列腺炎， 前列腺肥大，前列腺良性增生，高血压等方面的治疗，有很好的疗效。
目前的提取工艺获得的荨麻提取物收率不高，因此，提供一种荨麻提取物的提取方法，具有现实意义。发明内容
有鉴于此，本发明提供一种荨麻提取物的提取方法。该提取方法获得的荨麻提取物的收率为46. 5 49. 6%，可以用于制备治疗前列腺炎、前列腺肥大、前列腺良性增生或高血压药物。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案
本发明提供了一种荨麻提取物的提取方法，包括如下步骤
步骤1 取荨麻加过量水在300 500MPa、15 35°C的条件下超高压提取8 lOmin，过滤后收集滤液，经第一浓缩至相对密度为1. 12 1. 15(70 80°C )，获得第一浸膏；
步骤2 取所述第一浸膏在3 5°C透析后，收集保留液，与氯仿和正丁醇的混合溶液经sevage法脱蛋白，收集水层，经第二浓缩至相对密度为1. 12 1. 15 (70 80°C )，获得第二浸膏；
步骤3 取所述第二浸膏加入浓度为80 95%的乙醇醇沉20 Mh，离心后收集沉渣，加入水搅拌溶解，经第三浓缩至相对密度为1. 12 1. 18(70 80°C )，获得第三浸膏，过滤后收集滤液，即得；以g/mL计，所述第二浸膏与乙醇的质量体积比为1 3，所述沉渣与水的质量体积比为1 3 7。
所述相对密度为物质在70 80°C的密度和水在70 80°C的密度的比值。
Sevage法利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点，将提取液与kvage 试剂[氯仿正丁醇=5 1(V/V)]按照体积比为1 1混合，振荡，离心，变性后的蛋白质介于提取液与kvage试剂交界处。此法的优点是条件温和，不会引起多糖的变性。
在本发明提供的实施例中，本发明提供的荨麻提取物的提取方法，步骤1中，以g/ HiL计，所述荨麻与水的质量体积比为1 10 15。
在本发明提供的实施例中，本发明提供的荨麻提取物的提取方法，所述透析选用 22mm半透膜。
在本发明提供的实施例中，本发明提供的荨麻提取物的提取方法，所述第一浓缩、 第二浓缩或第三浓缩为在70 80°C，真空度为0. 06MPa的条件下浓缩。
在本发明提供的实施例中，本发明提供的荨麻提取物的提取方法，所述混合溶液中氯仿和正丁醇的体积比为5 1。
在本发明提供的实施例中，本发明提供的荨麻提取物的提取方法，步骤2中所述保留液与所述混合溶液的体积比为1 1。
在本发明提供的实施例中，本发明提供的荨麻提取物的提取方法，步骤2中所述收集水层后、所述第二浓缩前还包括经300目滤布过滤的步骤。
在本发明提供的实施例中，本发明提供的荨麻提取物的提取方法，步骤3中所述离心为在3000rpm的条件下离心15min。
在本发明提供的实施例中，本发明提供的荨麻提取物的提取方法，步骤3过滤收集滤液后，还包括喷雾干燥的步骤；喷雾干燥的进风温度为120°C，出风温度为80°C。
本发明还提供了上述提取方法获得的荨麻提取物。
本发明还提供了上述提取方法获得的荨麻提取物在制备治疗前列腺炎、前列腺肥大、前列腺良性增生或高血压药物中的应用。
本发明提供了一种荨麻提取物的提取方法。该提取方法获得的荨麻提取物的收率为46. 5 49. 6%，可以用于制备治疗前列腺炎、前列腺肥大、前列腺良性增生或高血压药物。本发明提供的荨麻提取物能够有效治疗前列腺炎、前列腺肥大、前列腺良性增生或高血压。其对急性前列腺炎的有效率为93. 33%，对慢性前列腺炎的有效率为90. 33%，对前列腺肥大的有效率为89. 0%，对前列腺良性增生的有效率为90. 67%，对高血压的有效率为 91. 0%。
具体实施方式
本发明公开了一种荨麻提取物的提取方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容， 适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的荨麻提取物的提取方法中，所用原料及试剂均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明
实施例1荨麻提取物的制备
取狭叶荨麻药材100g，粉碎后加15倍量水，超高压力为300MPa，15°C提取10分钟，提取液过滤，在温度为70°C，真空度为0. 06MPa的条件下浓缩至相对密度1. 12 (70°C )， 将浓缩液放凉后，装入22mm半透膜的透析袋中，置于盛有磷酸缓冲液的不锈钢桶中，在5°C 下进行透析，除去盐分及一些小分子杂质，期间更换缓冲液3-4次。取透析袋中的保留液， 用sevage法脱蛋白，除去中间白色絮状沉淀，取水层在温度为70°C，真空度为0. 06MPa的条件下浓缩至相对密度为1. 12 (700C )，获得浸膏52g，加入1倍量95%乙醇醇沉，静置20小时，收集沉渣离心，回收乙醇，再加入3倍量水搅拌溶解，在温度为70°C，真空度为0. 06MPa 的条件下浓缩至相对密度1. 12 (700C )，过滤，喷雾干燥，即得荨麻提取物5. lg。
对获得的荨麻提取物进行检测，结果如下
荨麻多糖的鉴别鉴别方法为苯酚-硫酸试剂反应(阳性)，本发明提供的荨麻提取物中含有荨麻多糖。
荨麻多糖含量46. 5% (用苯酚-硫酸法测定)
荨麻多糖分子量测定53010Da (参考2010年药典二部附录VH)。
实施例2荨麻提取物的制备
取荨麻药材100g，粉碎后加10倍量水，超高压力为500MPa，35°C提取8分钟，提取液过滤，在温度为80°C，真空度为0. 06MPa的条件下浓缩至相对密度1. 15 (80°C )，将浓缩液放凉后，装入22mm半透膜的透析袋中，置于盛有磷酸缓冲液的不锈钢桶中，在;TC下进行透析，除去盐分及一些小分子杂质，期间更换缓冲液3-4次。取透析袋中的保留液，用sevage 法脱蛋白，除去中间白色絮状沉淀，取水层在温度为80°C，真空度为0. 06MPa的条件下浓缩至相对密度为1. 15 (80°C )，获得浸膏Mg，加入3倍量80%乙醇醇沉，静置M小时，收集沉渣离心，回收乙醇，再加入7倍量水搅拌溶解，在温度为80°C，真空度为0. 06MPa的条件下浓缩至相对密度1. 18 (80°C )，过滤，喷雾干燥，即得荨麻提取物5. 5g。
对获得的荨麻提取物进行检测，结果如下
荨麻多糖的鉴别鉴别方法为苯酚-硫酸试剂反应(阳性)，本发明提供的荨麻提取物中含有荨麻多糖。
荨麻多糖含量47. 1 % (用苯酚-硫酸法测定)
荨麻多糖分子量测定51980Da (参考2010年药典二部附录VH)。
实施例3荨麻提取物的制备
取荨麻药材100g，粉碎后加13倍量水，超高压力为400MPa，25°C提取9分钟，提取液过滤，在温度为73°C，真空度为0. 06MPa的条件下浓缩至相对密度1. 13 (70°C )，将浓缩液放凉后，装入22mm半透膜的透析袋中，置于盛有磷酸缓冲液的不锈钢桶中，在4°C下进行透析，除去盐分及一些小分子杂质，期间更换缓冲液3-4次。取透析袋中的保留液，用sevage 法脱蛋白，除去中间白色絮状沉淀，取水层在温度为73°C，真空度为0. 06MPa的条件下浓缩至相对密度为1. 13 (700C )，获得浸膏50g，加入1. 5倍量90%乙醇醇沉，静置22小时，收集沉渣离心，回收乙醇，再加入5倍量水搅拌溶解，在温度为73°C，真空度为0. 06MPa的条件下浓缩至相对密度1. 15 (700C )，过滤，喷雾干燥，即得荨麻提取物4. 9g。
对获得的荨麻提取物进行检测，结果如下
荨麻多糖的鉴别鉴别方法为苯酚-硫酸试剂反应(阳性)，本发明提供的荨麻提取物中含有荨麻多糖。
荨麻多糖含量46. 8% (用苯酚-硫酸法测定)
荨麻多糖分子量测定56850Da (参考2010年药典二部附录VH)。
实施例4荨麻提取物的制备
取狭叶荨麻药材100g，粉碎后加12倍量水，超高压力为350MPa，30°C提取8分钟， 提取液过滤，在温度为78°C，真空度为0. 06MPa的条件下浓缩至相对密度1. 14 (80°C )，将浓缩液放凉后，装入22mm半透膜的透析袋中，置于盛有磷酸缓冲液的不锈钢桶中，在5°C下进行透析，除去盐分及一些小分子杂质，期间更换缓冲液3-4次。取透析袋中的保留液，用 sevage法脱蛋白，除去中间白色絮状沉淀，取水层在温度为78°C，真空度为0. 06MPa的条件下浓缩至相对密度为1. 14 (80°C )，获得浸膏g，加入2. 3倍量85%乙醇醇沉，静置23小时， 收集沉渣离心，回收乙醇，再加入4倍量水搅拌溶解，在温度为78°C，真空度为0. 06MI^的条件下浓缩至相对密度1. 16 (80°C )，过滤，喷雾干燥，即得荨麻提取物5. 3g。
对获得的荨麻提取物进行检测，结果如下
荨麻多糖的鉴别鉴别方法为苯酚-硫酸试剂反应(阳性)，本发明提供的荨麻提取物中含有荨麻多糖。
荨麻多糖含量49. 6% (用苯酚-硫酸法测定)
荨麻多糖分子量测定57140Da (参考2010年药典二部附录VH)。
实施例5药效评价
试验组本发明实施例1至4提供的荨麻提取物，对前列腺炎、前列腺肥大、前列腺良性增生、高血压各300名患者进行治疗；每天服用三次，每次服用2 4g ；
阳性药物对照组阳性药物对前列腺炎、前列腺肥大、前列腺良性增生、高血压各 300名患者进行治疗；每天三次，每次服用4 8片，每片0. 5g。
急性前列腺炎
治愈症状消失，局部肿胀消退，无触痛，连续3次以上前列腺液检查均为正常；
有效症状改善，但前列腺液常规检查仍达不到正常标准；
无效治疗1周后，症状体征仍无改善者。
慢性前列腺炎
治愈自觉症状消失；触诊时前列腺压痛消失，质地变软或改善；定位分段尿试验正常；前列腺液镜检白细胞数< 10个/HPF，细菌培养阴性，并连续检查2次以上正常。
有效自觉症状消失或部分症状改善、消失；触诊前列腺正常或改善；前列腺液镜检白细胞数仍> 10个/HPF，较治疗前有好转，或细菌培养仍阳性。
无效症状和前列腺液镜检均无改善。
前列腺肥大
痊愈主要临床症状消失，排尿通畅，尿流率参数正常或基本正常，残尿量 < 20ml，夜尿次数< 2次，前列腺体积接近正常或较前缩小1/4以上；
有效症状基本消失，排尿自觉通畅，尿流率参数接近正常，残尿量< 50ml或较前减少1/2，夜尿< 3次，前列腺体积有缩小；或尿流率参数较治疗前有改善，残尿量少于治疗前，夜尿次数较前减少；
无效症状无好转，尿流率、残尿量无改变。
前列腺良性增生(Benign Prostatic Hyperplasia, BPH)是一个组织学名词，指发生于前列腺尿道周围区、以基质和上皮细胞增生为特征的疾病过程。BPH是老年男性最常见的疾病之一。临床上通常表现为一系列令人烦恼的下尿路症状(Low urinary tract symptoms，LUTS)，包括尿频、尿急、夜尿、尿流无力、尿流中断和尿不尽感。这些症状可通过干扰病人的日常活动和夜间睡眠而影响其生活质量。
疗效判定标准
痊愈临床症状消失，体格检查、直肠指诊、尿液分析> 90%患者恢复正常。6
好转临床症状减轻，体格检查、直肠指诊、尿液分析> 60%患者趋于正常。
无效治疗前后，临床症状和体格检查、直肠指诊、尿液分析等检查无改善或无明显改善，< 30%患者趋于正常。
高血压
疗效判定标准
痊愈彡90%患者血压控制在140/90mmHg水平以下，无明显临床症状；
好转彡60%患者血压控制在140/90mmHg水平以下，临床症状减轻；
无效30%患者血压未达到140/90mmHg水平以下，临床症状无改善或无明显改善。
痊愈例数+好转例数有效率=-xlOO %总例数
结果见表1。
表1本发明提供的蛙皮提取物或蛙骨骼提取物药效试验
权利要求
1.一种荨麻提取物的提取方法，其特征在于，包括如下步骤步骤1 取荨麻加过量水在300 500MPa、15 35°C的条件下超高压提取8 lOmin， 过滤后收集滤液，经第一浓缩至相对密度为1. 12 1. 15，获得第一浸膏；步骤2 取所述第一浸膏在3 5°C透析后，收集保留液，与氯仿和正丁醇的混合溶液经 sevage法脱蛋白，收集水层，经第二浓缩至相对密度为1. 12 1. 15，获得第二浸膏；步骤3 取所述第二浸膏加入浓度为80 95 %的乙醇醇沉20 Mh，离心后收集沉渣， 加入水搅拌溶解，经第三浓缩至相对密度为1. 12 1. 18，获得第三浸膏，过滤后收集滤液， 即得；以g/mL计，所述第二浸膏与乙醇的质量体积比为1 3，所述沉渣与水的质量体积比为1 3 7。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤1中，以g/mL计，所述荨麻与水的质量体积比为1 10 15。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述透析选用22mm半透膜。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述第一浓缩、第二浓缩或第三浓缩为在70 80°C，真空度为0. 06MPa的条件下浓缩。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述混合溶液中氯仿和正丁醇的体积比为5 1。
6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤2中所述保留液与所述混合溶液的体积比为1:1。
7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤2中所述收集水层后、所述第二浓缩前还包括经300目滤布过滤的步骤。
8.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤3中所述离心为在3000rpm的条件下离心15min。
9.根据权利要求1至8提供的提取方法获得的荨麻提取物。
10.根据权利要求9所述的荨麻提取物在制备治疗前列腺炎、前列腺肥大、前列腺良性增生或高血压药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及医药技术领域，特别涉及荨麻提取物的提取方法。该提取方法获得的荨麻提取物的收率为46.5～49.6％，可以用于制备治疗前列腺炎、前列腺肥大、前列腺良性增生或高血压药物。本发明提供的荨麻提取物能够有效治疗前列腺炎、前列腺肥大、前列腺良性增生或高血压。其对急性前列腺炎的有效率为93.33％，对慢性前列腺炎的有效率为90.33％，对前列腺肥大的有效率为89.0％，对前列腺良性增生的有效率为90.67％，对高血压的有效率为91.0％。
文档编号A61P13/08GK102512463SQ20121000378
公开日2012年6月27日 申请日期2012年1月6日 优先权日2012年1月6日
发明者冯涛, 白凤英, 金爱玉 申请人:吉林省宏久生物科技股份有限公司