专利名称：一种对酒精性肝损伤具有保护作用的透骨草提取物的制作方法
一种对酒精性肝损伤具有保护作用的透骨草提取物技术领域
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种对酒精性肝损伤具有保护作用的透骨草提取物。
背景技术：
透骨草(Phrymaleptostachya L. var. asiatica Hara)又称老婆子针线、接生草等，属于透骨草科(Phrymaceae)透骨草属(Phryma)多年生草本植物，生长于山坡、林下、路旁、沟岸及草地的阴湿处。透骨草味苦、归心经。我国很多地区都有分布。透骨草全草均可药用，具有清热利湿、活血消肿、催产等功效，能治跌打损伤、湿疹、骨折、黄水疮等疾病。透骨草还具有抗肿瘤作用、抗菌活性、杀虫活性。目前，药典并没有收录有关透骨草科透骨草属透骨草的相关记载，但是民间常用它来治疗“风湿痹痛”等疾病。透骨草富含丰富的木脂素类化合物。日本学者Eiji Tan-iguchi和^suyoshi Oshima先后从北美透骨草根中分离得到了透骨草灵-I (phrymalin-I)、透骨草灵-II (phrymalin-II)和乙酰透骨草脂素 (leptostachyol acetate)。随后，Eiji Taniguchi 禾口 Fumito Ishibashi 合成了透骨草灵-I和透骨草灵-II及其立体异构体。Eiji Taniquchi和Fumito Ishibashi等人还从北美透骨草根中分离得到倍半木脂素haedoxao A，并对haedoxan A进行了合成，但该合成的方法包括20个反应步骤，且反应条件苛刻，合成效率低。韩国学者SangMyimg Zee等从北美透骨草干燥地上部分的乙酸乙酯提取物中分离出了透骨草灵-II和熊果酸；此外，韩国学者IL-kwon park等从亚洲透骨草干燥根的氯仿提取液中分离得到乙酰透骨草脂素和去甲氧基乙酰透骨草脂素。从透骨草中分离得到的化合物，除熊果酸为三萜类化合物外，其余均为木脂素类化合物。发明内容
1、一种对酒精性肝损伤具有保护作用的透骨草提取物，其特征在于该提取物的制备包括以下过程
步骤(1)称取透骨草全草干燥粗粉，加入以粗粉8-10倍量的水浸泡他-lOh，煎煮 1. 5h-2h,煎煮后真空抽滤，收集滤液；
步骤O)将步骤(1)中的透骨草全草干燥粗粉的滤渣再加水煎煮lh-1. 5h，煎煮后真空抽滤，收集滤液；
步骤(3)将步骤⑴和O)中的滤液合并，将滤液浓缩至浸膏状，烘干浸膏，粉碎，得到透骨草提取物。
2、该提取物用于制备对酒精性肝损伤具有保护作用的制剂。
根据本发明，本发明中的“ ％，，是重量百分比。
具体实施方式
本发明所述的一种对酒精性肝损伤具有保护作用的透骨草提取物包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
1、一种对酒精性肝损伤具有保护作用的透骨草提取物，其特征在于该提取物的制备包括以下过程
步骤(1)称取透骨草全草干燥粗粉100g，加入以粗粉8倍量的水浸泡他，煎煮 1. 5，煎煮后真空抽滤，收集滤液；
步骤O)将步骤(1)中的透骨草全草干燥粗粉的滤渣再加水煎煮lh，煎煮后真空抽滤，收集滤液；
步骤(3):将步骤(1)和O)中的滤液合并，将滤液浓缩至浸膏状，烘干浸膏，粉碎，得到透骨草提取物8. 6g。
2、该提取物用于制备对酒精性肝损伤具有保护作用的制剂。
实施例2:
1、一种对酒精性肝损伤具有保护作用的透骨草提取物，其特征在于该提取物的制备包括以下过程
步骤(1)称取透骨草全草干燥粗粉200g，加入以粗粉10倍量的水浸泡10h，煎煮 2h,煎煮后真空抽滤，收集滤液；
步骤O)将步骤(1)中的透骨草全草干燥粗粉的滤渣再加水煎煮1. 5h，煎煮后真空抽滤，收集滤液；
步骤(3):将步骤(1)和O)中的滤液合并，将滤液浓缩至浸膏状，烘干浸膏，粉碎，得到透骨草提取物17g。
2、该提取物用于制备对酒精性肝损伤具有保护作用的制剂。
透骨草提取物对小鼠酒精性肝损伤保护作用的实验
1实验材料、试剂及仪器
1. 1实验材料
1. 1. 1实验药材与试剂
透骨草采自吉林省临江市三公里基地，经吉林农业大学园艺学院胡全德教授鉴定为透骨草禾斗植物透骨草(Phryma leptostachya L. var. asiatica Hara)全草。
丙氨酸转氨酶(ALT)试剂盒、天冬氨酸转氨酶(AST)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒 (南京建成生物工程研究所)；56% (V/V)北京二锅头白酒(北京红星公司)；冰醋酸、无水乙醇(北京化工厂)；护肝片(吉林修正药业)。
1. 1. 2实验动物
美国国立肿瘤研究所(Institute for Cancer Research, ICR)品系小鼠，雌雄各半，体重(20 士 l)g，购自吉林大学基础医学院实验动物中心，合格证号 SCXK(吉)2011-0001。
1.1.3 仪器
LPZ5-2型离心机北京医用离心机厂
型号76新世纪紫外可见分光光度计北京普析通用仪器有限责任公司
百灵LA114型电子天平(110g/0.0001g) 常熟市百灵天平仪器有限公司
KQ-250DB型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司
高速冷冻离心机GI-20B上海安亭科学仪器厂
微量进样器(50μ 1X2 ;100μ 1X2)。
2实验方法
2. 1透骨草提取物的制备
步骤(1)称取透骨草全草干燥粗粉100g，加入以粗粉8倍量的水浸泡他，煎煮 1. 5，煎煮后真空抽滤，收集滤液；
步骤O)将步骤(1)中的透骨草全草干燥粗粉的滤渣再加水煎煮lh，煎煮后真空抽滤，收集滤液；
步骤(3)将步骤⑴和O)中的滤液合并，将滤液浓缩至浸膏状，烘干浸膏，粉碎，得到透骨草提取物8. 6g，用水溶解，使其每克相当于Ig原药材(透骨草粗粉)。
2. 2动物分组及给药
2. 2. 1动物分组
小鼠60只适应性喂养3d后，随机分为正常组、阴性(模型)对照组、阳性对照组， 透骨草水提物高、中、低剂量组，每组10只，雌雄各半，按鼠体重给药。
2. 2. 2给药设计
正常组正常喂食、喂水。
阴性(模型)对照组只给酒精，不给药。
阳性对照组将阳性药护肝片的成人剂量，按成人体重与小鼠体重的比例折合成小鼠的剂量。每天给小鼠灌胃。
透骨草低剂量每天按5g透骨草提取物/kg小鼠的给药量给小鼠灌胃。
透骨草中剂量每天按IOg透骨草提取物/kg小鼠的给药量给小鼠灌胃。
透骨草高剂量每天按20g透骨草提取物/kg小鼠的给药量给小鼠灌胃。
2. 2. 3动物给药
除正常对照组外，其余各组每日均于给药Ih后灌胃56% (V/V) 二锅头白酒16mL/ kg(阴性对照组只给酒精，不给药)，连续7d。自造模第1日起，每日给酒4h前灌胃相应的水煎液1次，共7d。末次给酒24h后(禁食不禁水12h)，摘除小鼠眼球取血，静置Ih后， 3500r/min离心IOmin分离血清，检测血清ALT、AST活性。小鼠脱臼处死，迅速取出肝脏， 勻浆，3500r/min离心lOmin，取肝脏上清液，测定MDA活性。
2. 3 测定
2. 3. 1透骨草提取物对小鼠体重的影响
检查透骨草提取物对小鼠体重的影响与初始体重相比，3d后正常组和阳性对照组小鼠体重。
2. 3. 2ALT、AST 活性测定
小鼠眼球取血后，静置lh，3500r/min离心IOmin分离血清，测定管用移液枪加入待测血清0. Iml加入试管中，对照管不加待测血清。将试剂盒中的基质液先于37°C的水浴锅中预热5min后，取出0. 5ml加入测定管和对照管中，充分混勻后，于37°C水浴30min。然后测定管和对照管同时加入0.5ml的2，4-二硝基苯胼液，混勻。再取0. Iml待测血清只加入对照管中，混勻后于37°C水浴20min。最后在测定管和对照管中都加入5ml0. 4mol/l的氢氧化钠液混勻。室温放置lOmin，于505nm处，蒸馏水调零，测定对照管和测定管的OD值。每组重复三次。
绝对OD值=测定管OD值-对照管OD值
查标准曲线，通过拟合公式求得相应的AST、ALT活性
2.3.3MDA 活性测定
将试管分为标准管、标准空白管、测定管及测定空白管四组。首先取试剂盒中的 lOnmol/ml的标准品0. Iml加入标准管中，取0. Iml无水乙醇加入标准空白管中，在测定管和测定空白管中同时加入0. Iml的肝勻浆上清液，最后在标准管、标准空白管、测定管及测定空白管都加入0. Iml试剂一，充分混勻。再在标准管、标准空白管、测定管及测定空白管都加入3ml试剂二后，取Iml试剂三分别加入标准管、标准空白管及测定管，而测定空白管加入lml50%冰醋酸1ml，充分混勻后，试管口用保鲜薄膜扎紧，用针头刺一小孔，95°C水浴 45min，取出后流水冷却，然后3500r/min离心lOmin，取上清液，于532nm处，蒸馏水调零，测定各管的OD值。
组织中MDA含量的计算公式
组织中MDA含量=(测定管吸光度-测定空白管吸光度/标准管吸光度-标准空白管吸光度)X标准品浓度+待测样本蛋白浓度
2. 4统计学方法
数据应用SPSS 10. O软件包进行处理。各项数据以χ士s表示，用方差分析及t检验比较组间差异的显著性，P < 0. 05表示差异显著，有统计学意义。
3实验结果
3. 1透骨草提取物对小鼠体重的影响，见表1。
表1透骨草水煎液对小鼠体重的影响
组别 η 初始体重(g) 3d后体重正常组 10 25.60 + 1.32 26.56 ±1.84 阴性对照组 10 M.29±2.74 U.87±2.54 透骨草低剂量组 10 24.58±3.75 24.37±1.96 透骨草中剂量组 10 25.07±2.53 24.96±2.75 透骨草高剂量组 10 24.57±1.73 23.28±2.45 _阳性对照组__25.53 士 2.34_26.38±1.62
由表1知透骨草提取物对小鼠体重的影响与初始体重相比，3d后正常组和阳性对照组小鼠体重分别增加了 3. 75%,3. 32%，酒精阴性对照组，透骨草低、中、高剂量组小鼠体重分别减少了 1.72%,0. 85%,0. 44%,5. 25%,20. 33%，组间比较未见统计学差异(P > 0.05)，表明透骨草对小鼠的食欲和体重无明显影响(表1)。
3. 2ALT、AST含量测定结果，见表2。
表2ALT、AST含量测定结果
权利要求
1.一种对酒精性肝损伤具有保护作用的透骨草提取物，其特征在于该提取物的制备包括以下过程步骤(1)称取透骨草全草干燥粗粉，加入以粗粉8-10倍量的水浸泡他-lOh，煎煮 1. 5h-2h,煎煮后真空抽滤，收集滤液；步骤⑵将步骤⑴中的透骨草全草干燥粗粉的滤渣再加水煎煮lh-1. 5h，煎煮后真空抽滤，收集滤液；步骤(3)将步骤(1)和O)中的滤液合并，将滤液浓缩至浸膏状，烘干浸膏，粉碎，得到透骨草提取物。
2.如权利要求1所述的对酒精性肝损伤具有保护作用的透骨草提取物的用途，其特征在于该提取物用于制备对酒精性肝损伤具有保护作用的制剂。
全文摘要
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种对酒精性肝损伤具有保护作用的透骨草提取物。称取透骨草全草干燥粗粉，加入以粗粉8-10倍量的水浸泡8h-10h，煎煮1.5h-2h，煎煮后真空抽滤，收集滤液；将滤渣再加水煎煮1h-1.5h，煎煮后真空抽滤，收集滤液；将滤液合并，浓缩至浸膏状，烘干浸膏，粉碎，得到透骨草提取物。该提取物用于制备对酒精性肝损伤具有保护作用的制剂。
文档编号A61P1/16GK102512464SQ201210009880
公开日2012年6月27日 申请日期2012年1月1日 优先权日2012年1月1日
发明者侯欣池, 关键, 张崇禧, 张成城, 郑友兰 申请人:山东大学威海分校