专利名称：桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及桔梗总皂苷在药物中的应用。
背景技术：
解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)是性传播疾病-非淋菌性尿道炎的
主要病原体之一，发病率较高。可引起的非淋菌性尿道炎、子宫内膜炎、输卵管炎、前列腺炎等泌尿生殖系统炎症，并可引起男、女不孕、不育及孕妇胎儿宫内感染、流产等并发症。UU引起的非淋菌性尿道炎临床上具有非典型性，顽固复发性和迁延不愈等特点， 且近些年有上升的趋势。治疗以抗生素为主，首选药物为四环素类、大环内酯类和喹诺酮类。近年来由于UU对抗生素的耐药株逐渐增多，耐药率逐年上升，抗生素的疗效显著下降， 例如UU对四环素耐药率1996年仅为8. 6%，2000年则上升为46. 4%, 2006年12月上升为68. 3%。环丙沙星的耐药率为80%，对左氧氟沙星耐药率也在26. 8%-48. 3%之间。对大环内酯类药物如红霉素通常维持在30% -50%的水平；同类药物罗红霉素和阿奇霉素的疗效如今也不容乐观，据文献表明，对罗红霉索耐药水平最高达到77.8%，而阿奇霉素为 66. 7%，而且在治疗方面出现的多重耐药更令人棘手。临床上持续性、复发性泌尿生殖道感染及耐药问题已经成为日益常见和棘手的问题。因此，开发能够治疗UU感染且耐药率低的新型抗菌素是目前治疗UU尤其是耐药UU感染的最有效途径。但是，随着化学合成新抗菌素难度和成本的增加，国内、外研究人员开始青睐于从天然植物是寻找具有抗菌活性的成分。桔梗为桔梗科植物桔梗Platycodon grandiflorum(Jacq. )A. DC.的根,是我国的传统中药。其味苦、辛，性平。主归肺经。具有宣肺化痰，利咽，排脓的功效，临床主要用于咳嗽痰多，胸闷不畅，咽痛音哑，肺痈吐脓等症的治疗。桔梗的现代研究始于20世纪40年代，其主要成分为齐墩果酸型五环三萜皂苷，其他尚含有多糖、黄酮、聚炔、留体、酚酸、脂肪酸、无机元素、挥发油等类型的化合物。现代药理研究表明，桔梗具有抗炎镇痛、祛痰镇咳、抗肿瘤、免疫调节、促进外分泌腺分泌、抑制胰脂肪酶、改善胰岛素抵抗、抗RSV(呼吸道合细胞病毒)活性等广泛的药理作用。但目前国内外尚无关于桔梗皂苷抗UU作用的相关文献报道。
发明内容
本发明目的是提供桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用。桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用桔梗总皂苷作为治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的活性成分，桔梗总皂苷为桔梗酸类、远志酸类、 桔梗二酸类、桔梗酸A内酯类皂苷中的一种或几种的组合物。桔梗作为药食同源植物，其市场需求量极大，是用于清上焦之火的主要药材之一， 但目前尚未见桔梗单味药或其有效部位用于治疗下焦淋症的报道。
本发明发现了其新的药理活性，将进一步扩大其药用范围及市场需求。同时本发明将打破解脲脲原体治疗市场抗生素的垄断局面，避免了抗生素对人体的毒副作用及耐药性。本发明桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用中，桔梗总皂苷作为治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的活性成分，发现具有抗解脲脲原体作用;体外试验表明，其抗UU的MIC值为16-32 μ g/ml ;MBC为32-64 μ g/ml ；32μ g/ml能够明显抑制UU在液体培养基内的生长繁殖速度；64μ g/ml能完全抑制UU的生长繁殖；并可快速起效。体内试验证明，桔梗皂苷栓经阴道给药后能够降低UU感染小鼠的阴道分泌物UU 培养阳性率，改善阴道炎症的病理组织学表现，对UU感染阴道炎具有治疗作用。本发明中桔梗总皂苷作为治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的活性成分， 将桔梗总皂苷制备成常规剂型后，对UU引起的感染性疾病是有效的。
图I为具体实施方式
一中桔梗总皂苷体外抗UU时效曲线图，其中 表示空白对照组，■表不桔梗总阜苷浓度为16 μ g/ml, ▲表不桔梗总阜苷浓度为32 μ g/ml, X表不桔梗总皂苷浓度为64 μ g/ml ；图2为具体实施方式
一中桔梗总皂苷对UU生长的快速抑制作用，其中■表示红霉素,▲表不桔梗总阜苷；图3为具体实施方式
一中小鼠阴道病理组织学观察中空白对照组的情况图；图4为具体实施方式
一中小鼠阴道病理组织学观察中模型对照药组的病变情况图；图5为具体实施方式
一中小鼠阴道病理组织学观察中阳性对照药组的病变情况图；图6为具体实施方式
一中小鼠阴道病理组织学观察中桔梗低剂量组的病变情况图；图7为具体实施方式
一中小鼠阴道病理组织学观察中桔梗高剂量组的病变情况图。
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用桔梗总皂苷作为治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的活性成分，桔梗总皂苷为桔梗酸类、远志酸类、桔梗二酸类、桔梗酸A内酯类皂苷中的一种或几种的组合物。桔梗总皂苷为两种或两种以上物质组成时按任意比混合。 桔梗总皂苷体外抗MP试验如下I实验材料解脲脲原体国际标准株(ATCC 27816)，购自美国菌种保藏中心。桔梗总皂苷，实验室提取，提取物总皂苷含量在80%以上。PPLO培养基、96孔板、加样器、恒温培养箱。
2方法和结果2. I桔梗总皂苷的提取及含量测定2. I. I桔梗总皂苷的提取a、取桔梗饮片(市售)，加8倍体积75%乙醇，加热回流提取3次，每次》1，滤过，合并滤液山、滤液减压回收乙醇至稠膏状，得桔梗提取物；C、再将桔梗提取物加生药量10倍量的水溶解，上于AB-8大孔吸附树脂柱，依次以4倍柱体积的水、20%、30%、40%、50%乙醇洗脱，合并40%、50%乙醇洗脱液，减压回收至无醇味，即得桔梗有效部位；d、将该桔梗有效部位以水溶解，依次以石油醚、乙酸乙酯萃取3次，弃萃取液，再用水饱和正丁醇萃取5 次，合并正丁醇液，减压回收，蒸干，即得桔梗总皂苷。2. 2桔梗总皂苷的含量测定2. 2. I对照品溶液的制备称取经60°C减压干燥至恒重的桔梗皂苷D8. OOmg，加 70 %甲醇适量溶解，置50mL容量瓶中，用70 %甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。2. 2. 2供试品溶液的制备称取桔梗总皂苷5. Omg,加70%甲醇适量溶解，置IOmL 容量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。2. 2. 3检测波长的选择量取对照品溶液I. 5mL及供试品溶液lmL，于70°C水浴蒸发至干，加入5%香草醛-冰醋酸(临用新配)O. 20mL,高氯酸O. 80mL,于60°C水浴显色 15min后冰水冷却lOmin。加入冰醋酸5mL,摇勻。立即在紫外分光光度计下与400 800nm 波长下扫描，同时以空白溶液作参比。结果，对照品及供试品的最大吸收波长均在475nm，故选择475nm为检测波长。2. 2. 4线性关系考察量取对照品溶液O. 6、I. 5,2. 4,3. 3,4. 2mL,置具塞试管中， 于70°C水浴蒸发至干，加入5%香草醛-冰醋酸(临用新配)O. 20mL，高氯酸O. 80mL，于60°C 水浴显色15min后冰水冷却lOmin。各加入冰醋酸5mL,摇勻，以同法平行处理的空白溶剂为空白，在475nm处测定吸光度。结果见表I。表I吸光度A与对照品质量C (mg)的关系
对照品c (mg)O. 096O. 240O. 384O. 528O. 672吸光度AO. 235O. 587O. 949I. 284I. 673以对照品质量C(mg)为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线，的回归方程为 A = 2. 4812C-0. 0072 (r = O. 9998)，在 O. 096mg O. 672mg 范围内线性关系良好。2. 2. 5精密度试验吸取对照品溶液2. 4mL，照I. 4项下方法显色测定吸光度，连续测定5次，结果见表2。表2精密度试验结果
次数II345吸光度AO. 947O. 940O. 945O. 944O. 948结果计算5次吸光度测定结果的RSD为O. 33%，说明仪器精密度良好。2. 2. 6稳定性试验取对照品和供试品溶液，照I. 4项下方法显色，分别在显色后的第 l、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90min 测定吸光度，结果见表 3。表3稳定性试验结果表
权利要求
1.桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用，其特征在于桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用桔梗总皂苷作为治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的活性成分，桔梗总皂苷为桔梗酸类、远志酸类、桔梗二酸类、桔梗酸A内酯类皂苷中的一种或几种的组合物。
2.根据权利要求I所述桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用，其特征在于采用口服给药所用桔梗总皂苷片剂的制备如下一、称取50g桔梗总皂苷、 IOOg淀粉、50g糊精、20g微晶纤维素、40ml体积浓度为80%的乙醇溶液和8g羧甲基淀粉钠；二、称取的桔梗总皂苷过100目筛，然后与称取的淀粉、糊精、微晶纤维素和5g羧甲基淀粉钠混合，再加入称取的乙醇溶液，混合后制成软材，经制颗、干燥和整粒后加入余量的羧甲基淀粉钠混匀，然后压片，包薄膜衣，干燥即得。
3.根据权利要求I所述桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用，其特征在于采用口服给药所用桔梗总皂苷胶囊剂的制备如下一、称取50g桔梗总皂苷、IOOg淀粉、50g糊精、30ml体积浓度为80%的乙醇溶液和IOg微粉硅胶；二、称取的桔梗总皂苷过100目筛，然后与称取的淀粉和糊精混合，再加入称取的乙醇溶液，混合后制成软材，经制颗、干燥和整粒后加入称取的微粉硅胶混匀，装入胶囊即得。
4.根据权利要求I所述桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用，其特征在于采用口服给药所用桔梗总皂苷颗粒剂的制备如下一、称取50g桔梗总皂苷、800g蔗糖、IOOg糊精和180ml体积浓度为80%的乙醇溶液；二、称取的桔梗总皂苷过 100目筛，然后与称取的蔗糖和糊精混合，再加入称取的乙醇溶液，混合后制成软材，经制颗、干燥和整粒后即得。
5.根据权利要求I所述桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用，其特征在于采用口服给药所用桔梗总皂苷滴丸剂的制备如下一、称取IOOg桔梗总皂苷和800g聚乙二醇4000 ;二、称取的桔梗总皂苷过100目筛，然后与称取的聚乙二醇4000 混合，再滴入冷却的液体石蜡中，制成滴丸，包薄膜衣，干燥即得。
6.根据权利要求I所述桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用，其特征在于采用口服给药所用桔梗总皂苷微丸剂的制备如下一、称取IOOg桔梗总皂苷、400g糊精和50g淀粉；二、称取的桔梗总皂苷过100目筛，然后与称取的糊精混合，再加入称取的淀粉，混匀制得药丸坯料，然后再制丸机中制成中药微丸，干燥，整粒，包薄膜衣， 干燥即得。
7.根据权利要求I所述桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用，其特征在于采用口服给药所用桔梗总皂苷口服液的制备如下一、称取15g桔梗总皂苷、3g苯甲酸钠和Ig甜蜜素；二、称取的桔梗总皂苷过100目筛，然后与称取的苯甲酸钠和甜蜜素混合，加水至IOOOml，搅匀，灌装，灭菌，即得。
8.根据权利要求I所述桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用，其特征在于采用粘膜给药所用桔梗总皂苷栓剂的制备如下一、称取150g桔梗总皂苷、 350g聚乙二醇600和IOOOg聚乙二醇PEG6000 ;二、称取的桔梗总皂苷过100目筛，然后与 50°C熔融的聚乙二醇600、聚乙二醇PEG6000混合，浇膜，冷却，制成1000粒，即得。
9.根据权利要求I所述桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用，其特征在于采用皮肤给药所用桔梗总皂苷洗剂的制备如下一、称取IOOg桔梗总皂苷、3g苯甲酸钠和Ig香精；二、称取的桔梗总皂苷过100目筛，然后与称取的苯甲酸钠、香精混合，加纯化水至950ml，调节pH 6. 0-7. 0摇匀，加水至1000ml，分装，即得。
10.根据权利要求I所述桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用，其特征在于采用注射给药所用注射用桔梗总皂苷冻干粉的制备如下一、称取5g桔梗总皂苷；二、称取的桔梗总皂苷过100目筛，然后与950ml水混合，调节pH7.0，滤过，再加注射用水至1000ml，灭菌，冷藏，滤过，浓缩，冷冻干燥，制成粉末，分装，即得。
全文摘要
桔梗总皂苷在治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的应用，它涉及桔梗总皂苷在药物中的应用。应用桔梗总皂苷作为治疗和预防解脲脲原体感染性疾病药物中的活性成分，桔梗总皂苷为桔梗酸类、远志酸类、桔梗二酸类、桔梗酸A内酯类皂苷中的一种或几种的组合物。本发明中桔梗总皂苷具有抗解脲脲原体作用；体外试验表明，其抗UU的MIC值为16-32μg/ml；MBC为32-64μg/ml；对UU的抑制呈现明显的时效和量效关系。体内试验证明，小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇后，经阴道感染UU，造成小鼠阴道炎，桔梗皂苷栓经阴道给药后能够降低阴道分泌物UU培养阳性率，改善阴道炎症的病理组织学表现，对UU感染阴道炎具有治疗作用。
文档编号A61K36/34GK102579550SQ201210076228
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月21日 优先权日2012年3月21日
发明者姚琳, 张俊威, 王伟明, 许庆瑞, 高菲 申请人:黑龙江省中医研究院