专利名称：原人参三醇组皂苷组合物及其在制备抗帕金森药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药及其应用，具体是以原人参三醇组皂苷为活性成分的药物组合物及其在制备抗帕金森药物中的用途。
背景技术：
帕金森病(PD)是以中脑黑质多巴胺能神经元渐进性死亡为病理特征的中枢神经系统退行性疾病。目前治疗手段主要以西药为主，但只改善症状，不能控制其进程，长期应用疗效减弱且毒性增大。而中药治疗具有毒副作用小、协 同作用强等优势而更具有开发前景。研究表明人参皂苷-Rgl、-Re、-Rg2及其代谢产物原人参三醇均具有抗帕金森作用(I.张均田.神经元-突触丢失与老年性痴呆.神经药理学报2011，1(1) : 1-14 ;
2.徐培培，曹颖琳，张万琴.人参皂苷Re对帕金森病小鼠保护作用一人参皂甙-Re抗黑质神经元凋亡的机制初探.中国天然药物2004,2(3) : 171-175.)。原人参三醇组皂苷(Protopanaxatriol, PPT)主要由人参阜苷-Re和-Rgl组成，根据总阜苷的来源不同，二者的比例不同。如来源于人参茎叶总皂苷制备的PPT组皂苷中，-Re的含量较高，而来源于三七根总皂苷的PPT组皂苷中，-Rgl的含量较高。PPT型皂苷包括人参皂苷-Re，-Rgl, Rg2, -Rhl等。我们的研究表明它们的水溶性都很小，生物利用度较低，限制了单体皂苷的临床开发与应用。人参皂苷-Re和-Rgl在水中的溶解度分别为I. 2mg/ml和O. 9mg/ml,而其它的PPT型皂苷的极性较-Re的极性弱，溶解度更小。而PPT组皂苷的在水中溶解度可达400mg/ml以上。与单体皂苷-Rgl和-Re比较，二者在PPT中的生物利用度较单体皂苷高。我们曾经发现PPT组皂苷在免疫增强方面的活性强于单体皂苷(窦德强，丘鹰昆，康廷国，徐为群，于君丽.人参三醇组皂苷组合物及其在制备免疫增强药物中的用途，专利号ZL200810228727.X)。单体皂苷一般毒性较大，而且制备工艺较复杂，成本较高。原人参三醇组皂苷较单体皂苷制备成本为低。以上提示我们由于单体皂苷之间的协同作用，PPT组合物是否具有更好抗帕金森病的作用。经过我们研究发现PPT组皂苷在抗帕金森病方面明显好于单体皂苷。因此PPT组皂苷由于成本、生物利用度及活性较强等因素，具有更好的成药性，更适合成为抗帕金森症的药物，形成了本专利。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中存在的问题而提供了一种原人参三醇组皂苷组合物，本发明中的原人参三醇组皂苷组合物在抗帕金森方面远远大于单体人参皂苷的活性。本发明的另一目的是提供了一种原人参三醇组皂苷组合物在抗帕金森药物中的用途。
为实现上述目的而采用的技术方案如下
原人参三醇组皂苷组合物，其特征在于该组合物中具有抗帕金森活性成份主要有人参皂苷-Re、人参皂苷-Rg1、人参皂苷-Rg2、人参皂苷-Rh1，其重量百分比为人参皂苷-Re
5-60%、人参皂苷-Rg1 5-60%、人参皂苷-Rg2 0_30%、人参皂苷-Rh1 0_30%，混合配制成。前述原人参三醇组皂苷组合物中，所述人参皂苷-Rg2,即可以是20 (S)-Rg2，又可以是20 (R)-Rg2，或者是上述两种组分的组合。上述原人参三醇组皂苷组合物中，所述人参皂苷-Rhl，即可以是ZO(S)-Rh1或20 (R) -Rh1,或者是上述两种组分的组合。 为了克服现有制剂的上述缺点，我们制备了前述重量配比的原人参三醇组皂苷组合物，并对其提取物的抗帕金森作用进行评价，我们发现，上述原人参三醇组皂苷组合物的抗帕金森活性显著强于原人参三醇型单体皂苷，说明原人参三醇组皂苷组合物在抗帕金森方面的作用显著强于人参皂苷单体。由于原人参三醇组皂苷的毒副作用较单体皂苷低，更适合帕金森患者的长期使用。本发明所述的原人参三醇组皂苷组合物还可以包括少量的其它组分如人参皂苷-Rd或者不影响本组合物抗帕金森效果的其它杂质。在本发明中，人参皂苷-Re、-Rg1、-Rf、20⑶-Rg2、20 (R) -Rg2、20 ⑶-Rh1、20 (R) -Rh1均可以通过市场购买获得，按照上述比例直接混合后制得上述组合物。本发明中的人参三醇组皂苷组合物还可以通过以下的方法获得
一种原人参三醇组皂苷组合物的制备方法，具体步骤如下
取人参茎叶(人参根、西洋参根和茎叶、三七根及茎叶)粗粉lOOOg，以10000毫升的水，提取2— 3次，分别过滤，合并滤液，静置24小时，取上清液，上大孔树脂柱DlOl或HPD700分离后(树脂生药量=2 :1)，分别用质量浓度为30— 40%的乙醇和质量浓度为70— 85%的乙醇洗脱，分别得到原人参三醇组皂苷洗脱液和原人参二醇组皂苷洗脱液。该人参三醇组皂苷洗脱液经浓缩至50°C下相对密相为I. 0-1. 30的浓缩液，喷雾干燥或减压干燥，干燥后即为成品。前述原人参三醇组皂苷组合物在制备抗帕金森药物中的应用。本发明中的上述比例的原人参三醇组皂苷组合物的抗帕金森病的活性远远大于人参单体皂苷，并提高了抗帕金森病作用的疗效，降低了毒副作用。另外，制备方法简单，生产成本低。
具体实施例方式实施例一原人参三醇型皂苷及原人参三醇组皂苷的水中溶解度
根据2010版药典(文献)，称取研成细粉的供试品，于25 °C ± 2 °C —定容量的溶剂中，每隔5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒或液滴时，即视为完全溶解。根据此法测定本实验室自制的原人参三醇组皂苷为易溶，溶解度约为429mg/ml，人参皂苷-Re、-Rgl、-Rg2和-Rhl在水中的溶解度约为I. 2mg/ml、0. 9mg/ml、
O.4mg/ml 和 O. 3mg/ml。实施例二
原人参三醇组皂苷组合物，是由50%人参皂苷-Re和50%人参皂苷-Rgl混合制成。
实施例三
原人参三醇组皂苷组合物，是由人参皂苷-Re 40%、人参皂苷-Rg1 35%、人参皂苷-Rg215%、人参皂苷-Rh1 10%混合配制成。实施例四
原人参三醇组皂苷组合物，是由40%人参皂苷-Re、40%人参皂苷-Rgl、10%人参皂苷-Rg2和10%人参皂苷-Rh1混合配制成。实施例五
原人参三醇组皂苷组合物，是由人参茎叶粗粉提取制成具体工艺 如下取人参茎叶粗粉lOOOg，以10000毫升的水，提取2— 3次，分别过滤，合并滤液，静置24小时，取上清液，上大孔树脂柱DlOl或HPD700分离后(树脂生药量=1:1)，分别用质量浓度为30— 40%的乙醇(洗脱剂为树脂体积的4倍量)和质量浓度为70— 85%的乙醇洗脱(洗脱剂为树脂体积的4倍量)，分别得到原人参三醇组皂苷洗脱液和原人参二醇组皂苷洗脱液。该人参三醇组皂苷洗脱液经浓缩至50°C下相对密相为I. 0-1. 30的浓缩液，喷粉干燥，干燥后即为成品。收率为3-5%，经HPLC含量测定(HPLC，ODS柱，流动相乙腈-水梯度，203nm检测)，该组合物含人参皂苷-Re 52. 3 %、人参皂苷-Rg1 12. 2 %、20 (S)-人参皂苷-Rg2 2. 1%、20(R)-人参皂苷-Rg2 I. 6%、人参皂苷-Rhi I. 2%、20 (R)-人参皂苷-Rh1 O. 6%，上述百分比为重量百分t匕，余量为人参茎叶中含有的原人参二醇型皂苷(2-3%)及其他成分。实验例I原人参三醇组皂苷和人参单体皂苷的抗帕金森作用比较
I.实验材料C57BL/6小鼠购自大连医科大学动物实验中心，所用原人参三醇组皂苷为采用上述工艺自制。2.动物分组将100只C57BL/6小鼠随机分为十组空白组、模型组、高低剂量三醇组和单体皂苷组-Re、-RgI、20 (S) -Rg2、20 (R) -Rg2、20 (S) -Rh I、20 (R) -Rh I (本实验室自制，纯度> 98%)，每组10只。2.造模及给药方法高低剂量原人参三醇组和单体皂苷组分别每天给药一次，连续给药13天。高低剂量原人参三醇组组阜苷分别给药25mg/kg、12. 5mg/kg,各单体阜苷组分别给药25mg/kg。与给药后第9天开始，模型组、高低剂量三醇组和各单体皂苷组皮下注射MPTP (购于Sigma公司，批号1001054803) 25 mg/kg，每天一次，连续5 d。空白组以腹腔注射等量生理盐水代替MPTP，每天一次。同时每天进行动物行为学实验考查。3.行为学考查
3.I 悬挂实验(Traction test)
目的是检测C57BL/6小鼠肢体运动协调情况。将受试小鼠悬挂于一水平电线上，电线直径约为0.2mm。从小鼠双前爪抓住电线开始计时，小鼠掉落则计时结束。25秒以上的记6分；20-25秒记5分；15-20秒记4分;10-15秒记3分；5-10s记2分;0_5s记I分。最后计算得分情况，并作统计学分析。分值越高，小鼠抓住电线越牢固；说明小鼠肢体运动协调情况越好，反之，则说明小鼠震颤、肌强直等情况严重。结果见表I。表 I悬挂实验得分结果(K ±s)
I剂量(mg/kg) I第9天 I第10天 I第11天I第12天|第13天
空白组 --_6.00±0.00 5.67±1.15 5.38±1.705.58±1.115.47±0.75
模型组 I--丨5.40±1.07 |3·50±1· 12 |2·00±1·41λλ |2·30±1·34λλ |ι·70±0·95λλ
权利要求
1.原人参三醇组皂苷组合物，其特征在于该组合物中具有免疫增强功能的活性成份主要有人参皂苷-Re、人参皂苷-Rg1、人参皂苷-Rg2和人参皂苷-Rh1，其重量百分比为人参皂苷-Re 5-60%、人参皂苷-Rg1 5_60%、人参皂苷-Rg2 0_30%、人参皂苷-Rh1 0-30%
2.根据权利要求I所述的原人参三醇组皂苷组合物，其特征是由50%人参皂苷-Re和50%人参皂苷-Rgl混合制成。
3.根据权利要求I所述的原人参三醇组皂苷组合物，其特征是由人参皂苷-Re40%、人参皂苷-Rg1 35%、人参皂苷-Rg2 15%、人参皂苷-Rh1 10%混合配制成。
4.根据权利要求I所述的原人参三醇组皂苷组合物，其特征是由40%人参皂苷-Re、40%人参皂苷-Rg1、10%人参皂苷-Rg2和10%人参皂苷-Rh1混合配制成。
5.根据权利要求I所述的原人参三醇组皂苷组合物，其特征是由人参茎叶粗粉提取制成取人参茎叶粗粉lOOOg，以质量浓度为70%的乙醇进行提取，收集提取液，静止24小时，取上清液回收乙醇至无醇味，上大孔吸附树脂柱AB-8分离，树脂生药量=5 :1，分离后先用40%质量浓度的乙醇洗脱，再用质量浓度为70%的乙醇洗脱得原人参三醇组皂苷洗脱液，原人参三醇组皂苷洗脱液经浓缩至相对密度为I. 0-1. 3的浓缩药液，再干燥得原人参三醇组皂苷提取物，收率为10%，经HPLC含量测定，HPLC, ODS柱，流动相乙腈-水梯度，203nm检测，该组合物含人参皂苷-Re 52.3 %、人参皂苷-Rg1 12.2 %、20 (S)-人参皂苷-Rg2 2.1%、20 (R)-人参皂苷-Rg2 I. 6%、人参皂苷-Rh1 I. 2%、20 (R)-人参皂苷-Rh1 O. 6%，上述百分比为重量百分比，余量为人参茎叶中含有的原人参二醇型皂苷(2-3%)、色素及其它成分。
6.根据权利要求1、2、3或4所述的原人参三醇组皂苷组合物，其特征是能用于制备抗帕金森病药物。
全文摘要
本发明公开了一种人参三醇组皂苷组合物、及其在制备免疫增强药物中的用途，该人参三醇组皂苷组合物至少包括重量百分比为5-60%的人参皂苷-Re，百分比为5-60%的人参皂苷-Rg1。本发明中的人参三醇组皂苷组合物在抗帕金森病方面比单体人参皂苷的活性强，生物利用度高，而且制备方法简单，价格便宜。
文档编号A61K36/258GK102631388SQ201210095498
公开日2012年8月15日 申请日期2012年4月2日 优先权日2012年4月2日
发明者康廷国, 李东微, 李冀, 窦德强 申请人:辽宁中医药大学