专利名称：制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素及其提取纯化方法
技术领域：
本发明涉及植物提取物纯化物及其应用于药物或保健品的技术领域，是一种制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素及其提取纯化方法。
背景技术：
在中国菊苣属植物有毛菊苣(Cichorium glafulosum boiss. et Huet)和菊苣(Cichorium intybus L. ) 2个品种,为维吾尔习用药材(维吾尔语名卡森)。菊苣喜温耐寒，对土壤要求不严，在中国西北、华北及东北等地均有分布，主要分布于中国新疆的南部(刘勇民.维吾尔药志(上)[M].乌鲁木齐.新疆人民出版社，1999:47)。中国新疆地区维吾尔医主要用菊苣的地上部分入药，味微苦，咸，性凉，具有清肝利胆，健胃消食，利尿消肿之功，用于湿热黄疸，胃痛食少，水肿尿少(李鹏，赵红，吴远芳，等，菊苣的生药鉴定[J].农垦医学，2001，23 (3) : 149 一 151)。菊苣作为一种宝贵的植物资源在保健食品、医 药及天然饲料添加剂等领域有较高的利用价值，研究开发前景广阔(吴洪新，呼天明.菊苣系列产品的开发研究评述[J].西北农林科技大学，2006, 34 (2) : 34 — 38)。菊苣主要含有香豆素、倍半職、三職、糖类等成分(Seto M, Miyase T, Umehara K,et al.Sesquiterpene lactones from Cichorium endivia L and C. intybus L andcytotoxic activity [ J ]· Chem Pharm Bull, 1988，36 (7) : 2423 — 2429.)，香豆素中的秦皮甲素、秦皮乙素具有保肝作用(Gilani AH, Janbaz KH, Shah BH. Esculetinprevents liver damage induced by paracetamol and CCl4 [J]. Pharmacol Res, 1998,37 (I) : 31-35.)。据统计，我国发病率及死亡率最高的疾病中，肝病名列榜首，大中城市中脂肪肝的发病率已达10%。维吾尔药清热卡森冲剂、护肝布祖热颗粒、炎消迪娜尔糖浆均是以菊苣为主要原料生产的抗肝炎及保肝制剂，长期临床实践证明，菊苣具有明显的抗肝炎及保肝疗效(中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册[M].乌鲁木齐.新疆科技卫生出版社，1999:136、159、189;买买提哈斯木 艾尔肯米吉提.维药清热卡森颗粒治疗脂肪肝41例观察[J].中国民族医药杂志，2000，6 (7) :11 一 12)。近几年来，虽然中国新疆各维吾尔药生产企业及各地区维吾尔医医院以毛菊苣作为主要药材生产了几十种制剂，但由于这些制剂普遍存在生产工艺落后(只进行水提，所含杂质多、服用量大)，无具体控制菊苣质量的含量测定方法和质量控制指标，且功能主治过于宽泛使临床上很难明确定位等问题，故无法达到国家新药标准的要求，更无法打入国际市场，大大影响了菊苣的利用及推广。目前对菊苣有效部位的研究主要采用乙醇、乙酸乙脂、正丁醇、正己烷、石油醚、氯仿等有机溶剂提取纯化，这些传统的提纯方法存在耗能、耗时、成本高、纯度低、污染大并造成有机溶剂残留等缺点(杜海燕，原思通，江佩芬.菊苣的化学成分研究.中国中药杂志，1998,23(11) :682 ;郑红梅，王大光.菊苣正己烷提取物对血糖、血脂的影响[J].中国中医药信息杂志，2000，4 (7) :38-39 ;徐雅梅，呼天明.菊苣根提取物的抑菌活性研究[J].西北植物学报，2006，26(3) :0615 — 0619)。
发明内容
本发明提供了一种制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素及其提取纯化方法，其克服了上述现有技术的不足，其首次以毛菊苣或菊苣为原料，采用乙醇提取技术、大孔吸附树脂富集技术、减压蒸发技术、超声波提取技术、制备型高效液相色谱纯化技术、真空冷冻干燥技术相结合，得到了纯度高、安全、有效、质量可控并具有保肝作用的菊苣香豆素，可应用于制备具有保肝作用的药物或保健品。本发明的技术方案之一是按以下技术措施来实现的一种制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素，其采用紫外分光光度法，以秦皮乙素为对照品，在350 nm处测定，菊苣香豆素纯度达到90% ;其中，该菊苣香豆素是通过以下方法得到的将毛菊苣或/和菊苣药材粉末用乙醇水溶液浸泡，超声波破壁，加热回流提取，提取液过滤，减压蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解，用大孔树脂吸附法除去多糖、有机酸杂质，富集菊苣香豆素，减压蒸发挥尽乙醇， 得菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，超声波提取助溶，溶液过滤，制备型高效液相色谱纯化，收集的纯化液经减压蒸发，真空冷冻干燥得菊苣香豆素粉末。下面是对上述技术方案之一的进一步优化或/和选择
所述菊苣药材主要来源于菊苣属植物毛菊苣(Cichorium glafulosum boiss. etHuet)或 / 和菊苣(Cichorium intybus L.)。将所述毛菊苣或/和菊苣药材粉末用体积浓度为50%至80%的乙醇水溶液浸泡6小时至12小时，超声波破坏细胞壁15分钟至30分钟，频率为30 kHz至50kHz，加热回流提取2次至3次，每次I小时至3小时，提取液经过滤，旋转蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解。所用树脂采用D-101或AB-8或NKA-9大孔吸附树脂，上样浓度为10 μ g · ml/1至50 μ g · mL—1，最大上样量为35倍柱体积，上样速度O. 05 BV · min—1至O. 15 BV · min—1，然后依次用2BV至10 BV的蒸馏水以O. 05 BV · mirT1至O. 15 BV · mirT1的流速洗脱，6BV至10 BV的体积浓度为30%乙醇水溶液以O. 02 BV · mirT1至O. I BV · mirT1的流速洗脱，弃去洗脱液，再用6BV至10 BV的体积浓度为70%至80%乙醇水溶液以O. 02 BV · mirT1至O. IBV-min-1的流速洗脱，收集洗脱液，从而除去多糖、有机酸等杂质，60°C减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品。所述制备型高效液相色谱纯化技术所用样品为大孔吸附树脂富集后的菊苣香豆素粗品，将该菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成O. 5 mg -mL-1至5 mg -πιΓ1的溶液，超声波提取10 min至20 min，频率为30 kHz至50 kHz，用O. 45 μ m的膜过滤后注入制备型高效液相色谱仪，进样量5 mL至10 mL，采用ODS色谱柱，流动相为乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脱，流速20 mL mirT1至50 mL mirT1,检测波长350 nm,根据紫外检测器的监测结果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的纯化液经减压蒸发挥干有机溶剂后，真空冷冻干燥，得到纯度达到90%的菊苣香豆素。本发明的技术方案之二是按以下技术措施来实现的一种制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素的提取纯化方法，其采用紫外分光光度法，以秦皮乙素为对照品，在350 nm处测定，菊苣香豆素纯度达到90%;其中，该菊苣香豆素是通过以下方法得到的将毛菊苣或/和菊苣药材粉末用乙醇水溶液浸泡，超声波破壁，加热回流提取，提取液过滤，减压蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解，用大孔树脂吸附法除去多糖、有机酸杂质，富集菊苣香豆素，减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，超声波提取助溶，溶液过滤，制备型高效液相色谱纯化，收集的纯化液经减压蒸发，真空冷冻干燥得菊苣香豆素粉末。下面是对上述技术方案之一的进一步优化或/和选择
所述菊苣药材主要来源于菊苣属植物毛菊苣(Cichorium glafulosum boiss. etHuet)或 / 和菊苣(Cichorium intybus L.)。将所述毛菊苣或/和菊苣药材粉末用体积浓度为50%至80%的乙醇水溶液浸泡6小时至12小时，超声波破坏细胞壁15分钟至30分钟，频率为30 kHz至50kHz，加热回流提取2次至3次，每次I小时至3小时，提取液经过滤，旋转蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解。所用树脂采用D-101或AB-8或NKA-9大孔吸附树脂，上样浓度为10 μ g · mL-1至50 μ g · mL—1，最大上样量为35倍柱体积，上样速度O. 05 BV · min—1至O. 15 BV · min—1，然后依次用2BV至10 BV的蒸馏水以O. 05 BV · mirT1至O. 15 BV · mirT1的流速洗脱，6BV至10 BV的体积浓度为30%乙醇水溶液以O. 02 BV · min—1至O. I BV · min—1的流速洗脱，弃去洗脱液，再用6BV至10 BV的体积浓度为70%至80%乙醇水溶液以O. 02 BV · min—1至O. I·BV-min-1的流速洗脱，收集洗脱液，从而除去多糖、有机酸等杂质，60°C减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品。所述制备型高效液相色谱纯化技术所用样品为大孔吸附树脂富集后的菊苣香豆素粗品，将该菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成O. 5 mg -mL-1至5 mg -πιΓ1的溶液，超声波提取10 min至20 min，频率为30 kHz至50 kHz，用O. 45 μ m的膜过滤后注入制备型高效液相色谱仪，进样量5 mL至10 mL，采用ODS色谱柱，流动相为乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脱，流速20 mL mirT1至50 mL mirT1,检测波长350 nm,根据紫外检测器的监测结果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的纯化液经减压蒸发挥干有机溶剂后，真空冷冻干燥，得到纯度达到90%的菊苣香豆素。本发明的技术效果首次以毛菊苣或菊苣为原料，采用乙醇提取技术，大孔吸附树脂富集技术，减压蒸发技术，超声波提取技术，制备型高效液相色谱纯化技术，真空冷冻干燥技术相结合，得到了一种纯度高、安全、有效、质量可控并具有保肝作用的菊苣香豆素，可应用于制备具有保肝作用的药物或保健品。
具体实施例方式本发明不受下述实施例的限制，可依据本发明的技术方案和实际情况来确定具体的实施方式。实施例I :该制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素采用紫外分光光度法，以秦皮乙素为对照品，在350 nm处测定，菊苣香豆素纯度达到90% ;其中，该菊苣香豆素是通过以下方法得到的将毛菊苣或/和菊苣药材粉末用乙醇水溶液浸泡，超声波破壁，加热回流提取，提取液过滤，减压蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解，用大孔树脂吸附法除去多糖、有机酸杂质，富集菊苣香豆素，减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，超声波提取助溶，溶液过滤，制备型高效液相色谱纯化，收集的纯化液经减压蒸发，真空冷冻干燥得菊苣香豆素粉末。实施例2 :与实施例I的不同之处在于实施例2的菊苣药材主要来源于菊苣属植物毛菊苣(Cichorium glafulosum boiss. et Huet)或 / 和菊苣(Cichorium intybus L.)。
实施例3 :与实施例I至实施例2的不同之处在于实施例3将所述毛菊苣或/和菊苣药材粉末用体积浓度为50%至80%的乙醇水溶液浸泡6小时至12小时，超声波破坏细胞壁15分钟至30分钟，频率为30 kHz至50kHz，加热回流提取2次至3次，每次I小时至3小时，提取液经过滤，旋转蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解。采用超声波提取技术，打破了细胞壁的屏障作用，增加并加速了植物细胞内有效成分向溶剂中的扩散。实施例4 :与实施例I至实施例3的不同之处在于实施例4所用树脂采用D-101或AB-8或NKA-9大孔吸附树脂，上样浓度为10 μ g · mL—1至50 μ g · mL—1，最大上样量为35倍柱体积，上样速度O. 05 BV · min—1至O. 15 BV · min—1，然后依次用2BV至10 BV的蒸馏水以O. 05 BV · mirT1至O. 15 BV · mirT1的流速洗脱，6BV至10 BV的体积浓度为30%乙醇水溶液以O. 02 BV · min—1至O. I BV · min—1的流速洗脱，弃去洗脱液，再用6BV至10 BV的 体积浓度为70%至80%乙醇水溶液以O. 02 BV IirT1至O. I BV ^mirT1的流速洗脱，收集洗脱液，从而除去多糖、有机酸等杂质，60°C减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品。经过以上大孔吸附树脂富集后得到的粗品中菊苣香豆素纯度可达40%(w/w)。实施例5 :与实施例I至实施例4的不同之处在于实施例5所述制备型高效液相色谱纯化技术所用样品为大孔吸附树脂富集后的菊苣香豆素粗品，将该菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成O. 5 mg · ml/1至5 mg · ml/1的溶液,超声波提取10 min至20 min,频率为30 kHz至50 kHz，用0.45 μ m的膜过滤后注入制备型高效液相色谱仪，进样量5 mL至10 mL，采用ODS色谱柱，流动相为乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脱，流速20 mL · mirT1至50 mL 检测波长350 nm，根据紫外检测器的监测结果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的纯化液经减压蒸发挥干有机溶剂后，真空冷冻干燥，得到纯度达到90%的菊苣香豆素。实施例6 :该制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素按下述步骤得到将菊苣药材粉末用体积浓度为50%乙醇浸泡6 h,超声波破坏细胞壁15 min，频率为30 kHz，加热回流提取2次，每次lh，提取液经过滤，旋转蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解。采用超声波提取技术，打破了细胞壁的屏障作用，增加并加速了植物细胞内有效成分向溶剂中的扩散。用D-101大孔吸附树脂，上样浓度为10 μ g mL'最大上样量为35 BV (35倍柱体积)，上样速度O. 05 BV · min—1，然后依次用2 BV的蒸馏水以O. 05 BV · min—1的流速洗脱，6 BV的体积浓度为30%乙醇水溶液以O. 02 BV · mirT1的流速洗脱，弃去洗脱液，再用6 BV的体积浓度为70%乙醇水溶液以O. 02 BV · mirT1的流速洗脱，收集洗脱液，从而除去多糖、有机酸等杂质，60°C减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品。将菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成O. 5 mg · mL·1的溶液，超声波提取10 min，频率为30 kHz，用O. 45 μ m的膜过滤后注入制备型高效液相色谱仪，进样量5 mL，采用ODS色谱柱，流动相为乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脱，流速20 mL ^irT1,检测波长350 nm，根据紫外检测器的监测结果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的纯化液经减压蒸发挥干有机溶剂后，真空冷冻干燥，得到菊苣香豆素。实施例7 :该制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素按下述步骤得到将毛菊苣药材粉末用体积浓度为80%乙醇水溶液浸泡8 h,超声波破坏细胞壁20 min，频率为40 kHz,加热回流提取3次，每次2h，提取液经过滤，旋转蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解。采用超声波提取技术，打破了细胞壁的屏障作用，增加并加速了植物细胞内有效成分向溶剂中的扩散。用AB-8大孔吸附树脂，上样浓度为20 μ g · mL—1，最大上样量为35 BV (35倍柱体积)，上样速度O. 06 BV -mirT1,然后依次用10 BV的蒸馏水以O. 15 BV -min^1的流速洗脱，10 BV的体积浓度为30%乙醇水溶液以O. I BV · mirT1的流速洗脱，弃去洗脱液，再用10 BV的体积浓度为80%乙醇水溶液以O. I BV · mirT1的流速洗脱，收集洗脱液，从而除去多糖、有机酸等杂质，60°C减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品。将菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成2 mg ^mL-1的溶液，超声波提取15 min，频率为35 kHz，用O. 45 μ m的膜过滤后注入制备型高效液相色谱仪，进样量10 mL，采用ODS色谱柱，流动相为乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脱，流速50 mL ^irT1,检测波长350 nm，根据紫外检测器的监测结果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的纯化液经减压蒸发挥干有机溶剂后，真空冷冻干燥，得到菊苣香豆素。实施例8 :该制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素按下述步骤得到将菊苣药材粉末用体积浓度为70%乙醇水溶液浸泡12 h,超声波破坏细胞壁25 min，频率为35 kHz,加热回流提取2. 5次，每次I. 5 h，提取液经过滤，旋转蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解。采用超声波提取技术，打破了细胞壁的屏障作用，增加并加速了植物细胞内有效成分向溶剂中 的扩散。用NKA-9大孔吸附树脂，上样浓度为35 μ g · mL—1，最大上样量为35 BV (35倍柱体积)，上样速度O. 15 BV然后依次用8 BV的蒸馏水以O. 15 BV ^mirT1的流速洗脱，8 BV的体积浓度为30%乙醇水溶液以O. I BV ^mirT1的流速洗脱，弃去洗脱液，再用8 BV的体积浓度为80%乙醇水溶液以O. I BV -min-1的流速洗脱，收集洗脱液，从而除去多糖、有机酸等杂质，60°C减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品。将菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成5 mg 的溶液,超声波提取20 min,频率为50 kHz,用O. 45 μ m的膜过滤后注入制备型高效液相色谱仪，进样量10 mL，采用ODS色谱柱，流动相为乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脱，流速50 mL ^irT1,检测波长350 nm，根据紫外检测器的监测结果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的纯化液经减压蒸发挥干有机溶剂后，真空冷冻干燥，得到纯度达到90%的菊苣香豆素。实施例9 :该制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素按下述步骤得到将毛菊苣药材粉末用体积浓度为60%乙醇水溶液浸泡8 h,超声波破坏细胞壁30min，频率为50kHz，加热回流提取2次，每次3h，提取液经过滤，旋转蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解。采用超声波提取技术，打破了细胞壁的屏障作用，增加并加速了植物细胞内有效成分向溶剂中的扩散。用AB-8大孔吸附树脂，上样浓度为25 μ g · mL—1，最大上样量为35 BV (35倍柱体积)，上样速度O. 08 BV · min—1，然后依次用6 BV的蒸馏水以O. 08 BV · min—1的流速洗脱，6 BV的体积浓度为30%乙醇水溶液以O. 03 BV · mirT1的流速洗脱，弃去洗脱液，再用6 BV的体积浓度为70%乙醇水溶液以O. 03 BV · mirT1的流速洗脱，收集洗脱液，从而除去多糖、有机酸等杂质，60°C减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品。将菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成5 mg .mL-1的溶液，超声波提取20 min，频率为50 kHz，用O. 45 μ m的膜过滤后注入制备型高效液相色谱仪，进样量10 mL，采用ODS色谱柱，流动相为乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脱，流速50 mL ^irT1,检测波长350 nm，根据紫外检测器的监测结果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的纯化液经减压蒸发挥干有机溶剂后，真空冷冻干燥，得到菊苣香豆素。实施例10 :该制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素按下述步骤得到将菊苣药材粉末用体积浓度为70%乙醇水溶液浸泡12 h,超声波破坏细胞壁30min，频率为40kHz，加热回流提取2次，每次I. 5h，提取液经过滤，旋转蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解。采用超声波提取技术，打破了细胞壁的屏障作用，增加并加速了植物细胞内有效成分向溶剂中的扩散。用NKA-9大孔吸附树脂，上样浓度为50 μ g ^厂1，最大上样量为35 BV (35倍柱体积)，上样速度O. 15 BV · min—1，然后依次用10 BV的蒸馏水以O. 15 BV · min—1的流速洗脱，10 BV的体积浓度为30%乙醇水溶液以O. I BV · mirT1的流速洗脱，弃去洗脱液，再用10 BV的体积浓度为80%乙醇水溶液以O. I BV -min-1的流速洗脱，收集洗脱液，从而除去多糖、有机酸等杂质，60°C减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品。将菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成5 mg -mr1的溶液，超声波提取20 min,频率为40 kHz，用O. 45 μ m的膜过滤后注入制备型高效液相色谱仪，进样量7 mL，采用ODS色谱柱，流动相为乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脱，流速25 mL ^irT1,检测波长350 nm，根据紫外检测器的监测结果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的纯化液经减压蒸发挥干有机溶剂后，真空冷冻干燥，得到菊苣香豆素。
在本发明中除另有说明外，百分比％—般是指质量百分比。BV为倍柱体积。下面是对上述实施例所得菊苣香豆素中香豆素的测定
以秦皮乙素为对照品，采用紫外分光光度法测定菊苣香豆素中香豆素的含量。I溶液的制备
对照品溶液的制备精密称取秦皮乙素对照品适量，加无水乙醇制成每I HiL含秦皮乙素O. 25 mg的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备精密称取菊苣香豆素提取纯化液2 mL，置25 mL容量瓶中，用无水乙醇定容后作为供试品溶液。2检测波长的选择
取上述对照品溶液，在910 nm 190 nm波长范围内进行波长扫描，确定对照品溶液的最大吸收波长为350 nm，并以此作为其测定波长。3线性关系的考察
分别精密吸取秦皮乙素对照品溶液O. 2、0.6、1.0、1.4、1.8 mL，分别置10 mL量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，在350 nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程，Y=O. 0384X-0. 0343，R2=O. 9989，结果表明秦皮乙素在O. 005 O. 045 mg · mL-1范围内线性良好。4稳定性试验
取供试品溶液分别于配制后0，2，4，6，8，24，72 h于最大波长处测定吸光度，计算RSD为O. 67%(n=7)，表明供试品溶液在72 h内稳定。5重复性试验
精密称取同一批号的供试品6份，按供试品溶液的制备和测定法进行操作，求得RSD=I. 66% (n=6)，表明该法重复性较好。6回收率试验
采用加样回收法，取重复性实验项下的已知含量的供试品，精密吸取I mL，再准确加入一定量的对照品溶液，混匀，定容至25 mL，于最大波长处测定吸光度，结果见表I。平均回收率为 100. 28%, RSD 为 I. 97%。
表I 回收率试验结果___
权利要求
1.一种制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素，其特征在于采用紫外分光光度法，以秦皮乙素为对照品，在350 nm处测定，菊苣香豆素纯度达到90% ;其中，该菊苣香豆素是通过以下方法得到的将毛菊苣或/和菊苣药材粉末用乙醇水溶液浸泡，超声波破壁，加热回流提取，提取液过滤，减压蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解，用大孔树脂吸附法除去多糖、有机酸杂质，富集菊苣香豆素，减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，超声波提取助溶，溶液过滤，制备型高效液相色谱纯化，收集的纯化液经减压蒸发，真空冷冻干燥得菊苣香豆素粉末。
2.根据权利要求I所述的菊苣香豆素，其特征在于所述菊苣药材主要来源于菊苣属植物毛菊苣或/和菊苣。
3.根据权利要求I或2所述的菊苣香豆素，其特征在于将所述毛菊苣或/和菊苣药材粉末用体积浓度为50%至80%的乙醇水溶液浸泡6小时至12小时，超声波破坏细胞壁15分钟至30分钟，频率为30 kHz至50kHz，加热回流提取2次至3次，每次I小时至3小时，提取液经过滤，旋转蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解。
4.根据权利要求I或2或3所述的菊苣香豆素，其特征在于所用树脂采用D-101或AB-8或NKA-9大孔吸附树脂，上样浓度为10 y g mL—1至50 y g mL—1，最大上样量为35倍柱体积，上样速度0. 05 BV mirT1至0. 15 BV mirT1，然后依次用2BV至10 BV的蒸懼水以0. 05 BV mirT1至0. 15 BV mirT1的流速洗脱，6BV至10 BV的体积浓度为30%乙醇水溶液以0. 02 BV mirT1至0. I BV mirT1的流速洗脱，弃去洗脱液，再用6BV至10 BV的体积浓度为70%至80%乙醇水溶液以0. 02 BV mirT1至0. I BV .mirT1的流速洗脱，收集洗脱液，从而除去多糖、有机酸等杂质，60°C减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品。
5.根据权利要求I或2或3或4所述的菊苣香豆素，其特征在于所述制备型高效液相色谱纯化技术所用样品为大孔吸附树脂富集后的菊苣香豆素粗品，将该菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成0. 5 mg ml/1至5 mg ml/1的溶液,超声波提取10 min至20 min,频率为30 kHz至50 kHz，用0.45 iim的膜过滤后注入制备型高效液相色谱仪，进样量5 mL至10 mL，采用ODS色谱柱，流动相为乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脱，流速20 mL mirT1至50 mL检测波长350 nm，根据紫外检测器的监测结果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的纯化液经减压蒸发挥干有机溶剂后，真空冷冻干燥，得到纯度达到90%的菊苣香豆素。
6.一种制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素的提取纯化方法，其特征在于采用紫外分光光度法，以秦皮乙素为对照品，在350 nm处测定，菊苣香豆素纯度达到90%;其中，该菊苣香豆素是通过以下方法得到的将毛菊苣或/和菊苣药材粉末用乙醇水溶液浸泡，超声波破壁，加热回流提取，提取液过滤，减压蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解，用大孔树脂吸附法除去多糖、有机酸杂质，富集菊苣香豆素，减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，超声波提取助溶，溶液过滤，制备型高效液相色谱纯化，收集的纯化液经减压蒸发，真空冷冻干燥得菊苣香豆素粉末。
7.根据权利要求6所述的菊苣香豆素的提取纯化方法，其特征在于所述菊苣药材主要来源于菊苣属植物毛菊苣(Cichorium glafulosum boiss. et Huet)或/和菊苣(Cichoriumintybus L.)。
8.根据权利要求6或7所述的菊苣香豆素的提取纯化方法，其特征在于将所述毛菊苣或/和菊苣药材粉末用体积浓度为50%至80%的乙醇水溶液浸泡6小时至12小时，超声波破坏细胞壁15分钟至30分钟，频率为30 kHz至50kHz，加热回流提取2次至3次，每次I小时至3小时，提取液经过滤，旋转蒸发除去乙醇，加蒸馏水溶解。
9.根据权利要求6或7或8所述的菊苣香豆素的提取纯化方法，其特征在于所用树脂采用D-101或AB-8或NKA-9大孔吸附树脂，上样浓度为IOug- mL—1至50 y g mL—1，最大上样量为35倍柱体积，上样速度0. 05 BV min—1至0. 15 BV min—1，然后依次用2BV至10 BV的蒸馏水以0. 05 BV min-1至0. 15 BV min-1的流速洗脱，6BV至10 BV的体积浓度为30%乙醇水溶液以0. 02 BV min—1至0. I BV min—1的流速洗脱，弃去洗脱液，再用6BV至10 BV的体积浓度为70%至80%乙醇水溶液以0. 02 BV mirT1至0. I BV mirT1的流速洗脱，收集洗脱液，从而除去多糖、有机酸等杂质，60°C减压蒸发挥尽乙醇，得菊苣香豆素粗品。
10.根据权利要求6或7或8或9所述的菊苣香豆素的提取纯化方法，其特征在于所述制备型高效液相色谱纯化技术所用样品为大孔吸附树脂富集后的菊苣香豆素粗品，将该菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成0. 5 mg* ml/1至5 mg mL4的溶液,超声波提取10 min至20 min，频率为30 kHz至50 kHz，用0. 45 y m的膜过滤后注入制备型高效液相色谱仪，进样量5 mL至10 mL，采用ODS色谱柱，流动相为乙腈-水或甲醇_水，梯度洗脱，流速20mL mirT1至50 mL mirT1,检测波长350 nm,根据紫外检测器的监测结果,收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的纯化液经减压蒸发挥干有机溶剂后，真空冷冻干燥，得到纯度达到90%的菊苣香豆素。
全文摘要
一种制备具有保肝作用药物的菊苣香豆素及其提取纯化方法，该菊苣香豆素，其特征在于采用紫外分光光度法，以秦皮乙素为对照品，在350nm处测定，菊苣香豆素纯度达到90%。本发明的技术效果首次以毛菊苣或菊苣为原料，采用乙醇提取技术，大孔吸附树脂富集技术，减压蒸发技术，超声波提取技术，制备型高效液相色谱纯化技术，真空冷冻干燥技术相结合，得到了一种纯度高、安全、有效、质量可控并具有保肝作用的菊苣香豆素，可应用于制备具有保肝作用的药物或保健品。
文档编号A61K36/28GK102697827SQ20121022314
公开日2012年10月3日 申请日期2012年7月2日 优先权日2012年7月2日
发明者朱金芳, 韩海霞 申请人:新疆农业大学