癌症的靶向免疫治疗的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种针对肿瘤的靶向集团和免疫调节剂的偶联复合物。此种复合物能在肿瘤微环境中激活针对肿瘤的免疫反应，特异性地杀伤肿瘤细胞，从而达到治疗肿瘤的目的。
【专利说明】癌症的靶向免疫治疗
[0001]发明背景:
[0002]治疗性抗体在临床上的应用已有二十多年的时间了，临床应用的抗肿瘤抗体药物现在已有十三种，包括 Rituxan(1997)，Herceptin(1998)，Mylotarg(2000)，Campath (2001)，Zeval in (2002), Bexxer (2003), Avastin (2004), Erbitux (2004)和Vectibix (2006) ；Arzerra (2009) ；Benlysta(2011) ；Yervoy (2011) ;Adcetris (2011)。革巴点主要集中在EGFR，Her2，CD20和VEGF四个分子上。
[0003]单纯的治疗性抗体的肿瘤细胞杀伤机制有三种(Scott AM，Wolchok JD, OldL1.Antibody therapy of cancer.Nat Rev Cancer.2012 Mar 22 ； 12 (4):278-87):1)抗体的直接作用即抗体使配体/受体信号的阻断或激动活性、诱导凋亡、呈递药物。抗体的受体激动活性可产生直接肿瘤细胞杀伤作用，比如，有些抗体可结合到肿瘤细胞表面受体上，激活该受体，从而导致细胞凋亡(以线粒体为代表)。抗体也可以通过受体拮抗活性介导肿瘤细胞杀伤，比如，某些抗体可结合到细胞表面受体上，并阻断二聚化、激酶激活和下游信号，从而抑制增殖，促进凋亡。抗体结合到酶上可以导致中和作用、信号阻断和细胞死亡。2)通过免疫介导的细胞杀伤机制包括补体依赖的细胞毒作用(complement-dependentcytotoxicity, CDC),抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cellularcytotoxicity, ADCC)，T细胞功能调控等。免疫介导的肿瘤细胞杀伤可通过以下途径来完成:诱导吞噬作用；补体激活；抗体依赖细胞介导的细胞毒作用；遗传修饰的T细胞通过单链可变片段靶向肿瘤；通过抗体介导抗原交叉递呈给树突状细胞激活T细胞；抑制T细胞抑制性受体，如细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)。其中抗体Fe部分的功能对于通过⑶C和ADCC介导的肿瘤细胞杀伤作用尤其重要。3)抗体对肿瘤血管和基质的特异性效应。通过对血管受体拮抗或配体捕获诱导血管和基质细胞消融，包括:基质细胞的抑制作用；向基质细胞传递毒素；向脉管系统传递毒素。(Scott AM, Wolchok JD, Old L1.Antibodytherapy of cancer.Nat Rev Cancer.2012Mar 22 ； 12 (4):278-87.)
[0004]单纯治疗性单抗药物的推动了抗癌药物的研究发展，但仍有些问题需要进一步研究解决。例如抗体的免疫原性，长`期使用的肿瘤靶点耐受，单纯阻断单一信号传导通路的长期效果等等，总而言之，绝大部分的单纯抗体都较难做到长期的，高效率的抑制和杀伤肿瘤细胞。
[0005]1964年《自然》杂志提出了抗体-药物偶联(ADC)技术的新思路，这方面的技术在近年来有了突破性的进展。ADC是一种通过化学连接子(Iinkeri将强毒性药物(Toxini与抗体共价连接起来。抗体识别癌细胞表面的抗原分子，由于细胞内吞ADC药物的作用将其内吞至胞质内，在胞内特殊环境下，Linker水解后释放的毒素来杀伤细胞。
[0006]Seattle Genetics 公司开发的这类药物 Brentuximab Vedotin (商品名Adcetris)已通过了 FDA的上市批准。它是由monomethyl auristatin E (MMAE)这种人工合成的毒性抗癌药和特异性靶向淋巴瘤细胞特异性的CD30分子的抗体偶联而成，提高了杀灭肿瘤细胞的作用。
[0007]现在，有数十款这类ADC药物正在开展临床试验,其中Genentech生物技术公司和ImmunoGen公司联合开发的曲妥珠单抗与美登素偶联成的，用于治疗乳腺癌的药物T-DMl已经进入了最后上市前准备。美登素是一种小分子毒素，可与微管蛋白结合，通过非还原的双-马来酰亚胺-丙二醇联合体防止微管形成。而曲妥珠单抗可靶向作用于乳腺癌和胃癌人表皮生长因子受体2 (HER2)，是被批准用于HER2阳性的癌症的新药，但曲妥珠单抗并非能够促使所有的J1ER2阳性细胞凋亡。T-DMl结合了选择性地靶向HER2受体的曲妥珠单抗与强效的细胞毒性剂maytansine而杀死肿瘤细胞。即T-DMl抗体与HER2受体结合，引起从偶联物释放的美登素细胞内化，进而杀死肿瘤细胞。T-DMl具有较好的整体疗效和药代动力学特性，并且毒性较低。
[0008]传统的小分子化疗药物具有毒性强和药代动力学的优势，但在治疗肿瘤过程中可能结合和影响其他生理靶点产生严重的副作用；抗体-药物偶联就是把具有优异临床疗效的靶向特异性抗体和小分子药物的药代动力学结合起来。抗体药物偶联物结构是具有靶向作用的单克隆抗体与具有特定药理学特性的化合物结合。这种技术的要求是治疗性抗体必须具有靶点结合特异性；必须与一个具有治疗或其他功能作用的分子如细胞毒素偶联，诸多因素影响这类抗体的作用如偶联抗体的细胞内吞功能、偶联稳定性、细胞毒素的释放及杀伤性等。
[0009]目前常用的毒素分子主要包括微管蛋白抑制剂Auristatin类似物monomethylauristatin E, monomethyl auristatin F 和美登素。monomethyl auristatin E 是人工合成的微管聚合物抑制剂，能够抑制微管聚集，干扰肿瘤细胞有丝分裂和凋亡诱导作用(Naumovski L and Junutula JR.Glembatumumab vedotin, a conjugate ofan ant1-glycoprotein non-metastatic melanoma protein B mAb and monomethylauristatin E for the treatment of melanoma and breast cancer.Curr OpinMol Ther 2003 ； 12 (2):248-57.Francisco JA, Cerveny CG et al.cAClO-vcMMAE,an ant1-CD30-monomethyl auristatin E conjugate with potent and selectiveanti tumor activity.Blood 102(4): 1458-65) monomethyl auristatin F是一种抗有丝分裂的Auristatin衍生物，C末端具有带电荷的苯基丙氨酸残基，与未带电荷的MMAE相t匕，它最小化细胞信号通·路的损伤，最小化细胞毒性。在大量CD30细胞株试验中发现，mAb-maleimidocaproyl-缴氨酸-瓜氨酸-p-aminobenzyloxycarbony1-MMAF (mAb-Ll-MMAF)的毒性比单独 MMAF 强 2200 倍以上(Doronina SO et al., Enhanced activity ofmonomethylauristatin F through monoclonal antibody delivery:effects of linkertechnology on efficacy and toxicity.Bioconjug Chem, 2006 ； 17 (I):pll4_24)。美登素也是一种能与微管蛋白结合小分子毒素，通过非还原的双-马来酰亚胺-丙二醇联合体防止微管形成。
[0010]抗体-药物偶联具有直接和间接杀伤癌细胞的作用，这种抗体使配体/受体信号的阻断或激动活性、诱导凋亡同时还可以将负载药物直接或间接(例如药物、毒素、小分子干扰RNA或放射性同位素)呈递或传递给肿瘤细胞。治疗性偶联抗体药物就是利用抗体和偶联药物的双重特性，一是结合功能，与靶分子特异性结合；二是抗体本身肿瘤细胞杀伤的效应功能，三是偶联药物的特定功效。目前的抗体-药物偶联药物是局限在如何直接杀伤肿瘤细胞。但基于这种技术在抗体，链接分子，毒素分子，链接技术等方面的高要求，以及能够带到肿瘤微环境内的毒素分子有限，在实际临床研究方面还存在着一定困难。[0011]本文引用的参考文献不应视为承认是请求保护的本发明的现有技术。
[0012]发明概述[0013]本发明涉及一个用于治疗肿瘤的具有靶向细胞功效以及细胞免疫调节功能的免疫治疗分子，此免疫治疗分子是具有靶向集团-链接分子-调节剂结构的偶联复合物。此免疫治疗分子在体内能达到杀伤肿瘤细胞同时更有效的激活肿瘤免疫和的作用。
[0014]本发明提供一种靶向免疫治疗分子，其具有如下结构:靶向集团，连接集团，和免疫调节剂，其中靶向集团和免疫调节剂经连接集团连接在一起。
[0015]在一个实施方案中,所述靶向集团可特异性地结合肿瘤。
[0016]在一个实施方案中，所述靶向集团可特异性地结合肿瘤抗原。所述肿瘤抗原可选自⑶19，⑶20，⑶22，⑶33，⑶37，⑶40，⑶52，CD70，或CD79。所述肿瘤抗原也可选自 Syndecan-1, Lewis, MUCl，MUC16, PSMA, Cripto, EphA2, EphA3, EphB2, Av integrin,Mesothelin, TAG-72, CAIX，5T4， Folate Receptor 1， BT-062, SLC44A4, Nectin-4, GD2,ED-B, FAP, GPNMB, gpA33, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP，或 Tenascin。
[0017]在一个实施方案中，所述靶向集团是抗体。所述抗体可以是单克隆抗体。所述单克隆抗体可以是人源化，或人源性单克隆抗体。在再一个实施方案中，所述靶向集团选自 Rituxan (rituximab,利妥昔单抗)，Herceptin (trastuzumab,曲妥珠单抗)，或Erbitux (cetuximab,西妥昔单抗)。
[0018]在一个实施方案中，所述革巴向集团选自a Fab, Fab’，F(ab' )2, single domainantibody, T and Abs dimer, Fv, scFv, dsFv, ds-scFv, Fd,单域抗体(linear antibody),小分子抗体(minibody),双特异抗体(diabody),双特异抗体片断(bispecific antibodyfragment), bibody, tribody, sc-diabody, kappa (Iamda) body, BiTE, DVD-1g, SIP, SMIP,DART,或含有一个或多个 CDR 的抗体类似物(a small antibody mimetic comprising oneor more CDRs)。
[0019]在一个实施方案中，所述靶向集团选自VEGFR的ATWLPPR多肽片段，Thrombospondin-lmimetics，CDCRGDCFCG (cyclic)多肽，SCH 221153 片段，NCNGRC (cyclic)多肽，CTTHWGFTLC 多肽，CGNKRTRGC 多肽(LyP-1)，Octreotide, Vapreotide, Lanreotide,C-3940 多月太，Decapeptyl, Lupron, Zoladex,或 Cetrorelix0
[0020]在一个实施方案中，权利要求1的免疫治疗分子，其中所述靶向集团是叶酸或其衍生物。
[0021 ] 在一个实施方案中，所述免疫调节剂是免疫激活剂。
[0022]在一个实施方案中，所述免疫调节剂是TLR配体。在一个实施方案中，所述免疫调节剂是下列 TLR 中至少一个的配体:TLR1，TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8，或TLR9。在再一个实施方案中，权利要求1的免疫治疗分子，其中所述免疫调节剂是TLR7和TLR8的配体。
[0023]在一个实施方案中，所述免疫调节剂选自Imiquimod, Resiquimod (R848),IM02134, IM0205, MGN-1703, MGN-1704, Agatolimod, SD-101, QAX-935, DIMS0150, PollinexQuattro, 0M-174, Eritoran, TAK-242, N1-0101,聚肌胞苷酸(Poly 1: C), CpG 寡聚脱氧核苷酸，或干扰素_b。
[0024]在Iv实施方案中，所述连接集团选自fe链，多妝链，二硫键链或硫酿键链。[0025]在一个实施方案中，所述连接集团是可被酶切的或非酶切位点的。
[0026]本发明还提供一种药物组合物，其包含所述的免疫治疗分子或其药物学可接受的盐以及一种或多种药物学可接受的载体。
[0027]在一个实施方案中，所述的药物组合物，还含有第二化学治疗剂。所述的第二化学治疗剂可选自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、来曲唑、imatanib、紫杉醇、环磷酰胺、洛伐他汀、minosine、吉西他滨、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤、多西他奇、戈舍瑞林、长春新碱、长春碱、诺考达唑、替尼泊苷、依托泊苷、吉西他滨、epo th i I one、诺维本、喜树碱、柔红霉素、放线菌素D、米托蒽醌、安吖啶、多柔比星、表柔比星或伊达比星。
[0028]本发明还提供一种一种治疗细胞增生性疾病的方法，所述方法包括将治疗有效量的如所述的免疫治疗分子、或其药物学可接受的盐，与药物学可接受的载体一起给药于有此需要的对象，其中所述的细胞增生性疾病得到治疗。
[0029]在一个实施方案中，所述的细胞增生性疾病为癌前期病变，或癌症。其中所述的癌症为肺癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、慢性髓细胞性白血病、黑素瘤或卵巢癌。
[0030]在一个实施方案中，所述的细胞增生性疾病为乳腺细胞增生性疾病。
[0031]在一个实施方案中，所述的乳腺细胞增生性疾病为乳腺癌前期病变。在再一个实施方案中，所述的乳腺癌前期病变选自乳腺非典型增生、原位管癌、和原位小叶癌。
[0032]在一个实施方案中，所述的乳腺细胞增生性疾病为乳腺癌。在再一个实施方案中，所述的乳腺癌为雌激素受体阴性乳腺癌。
[0033]在一个实施方案中，所述的治疗分子、或其药物学可接受的盐与第二化学治疗剂联合给药。在再一个实施方案中，所述的第二化学治疗药剂选自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、来曲唑、imatanib、紫杉醇、环磷酰胺、洛伐他汀、minos ine、吉西他滨、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤、多西他奇、戈舍瑞林、长春新碱、长春碱、诺考达唑、替尼泊苷、依托泊苷、吉西他滨、epothi1ne、诺维本、喜树碱、柔红霉素、放线菌素D、米托蒽醌、安口丫啶、多柔比星、表柔比星或伊达比星。
[0034]在一个实施方案中，所述的癌症治疗包括肿瘤尺寸的减小。
[0035]在一个实施方案中，所述的癌症为转移癌。在再一个实施方案中，所述的癌症治疗包括抑制转移癌细胞的侵袭。
[0036]从本文提供的其它描述，包括不同实施例，本发明的其他特征和优点将是显而易见的。所提供的实施例举例说明在实践本发明中有用的不同组分和方法。实施例不限制请求保护的本发明。基于本公开内容，本领域技术人员可以鉴定和采用对于实践本发明有用的其他组分和方法。
[0037]附图简述
[0038]图1.Balb/c裸鼠注射4xl06肿瘤细胞建立癌症模型，每3天鼠尾静脉注射给药一次，对照组(n = 10)抗体 IgG 5mg/kg, Trastuzumab 抗体组(n = 10) 5mg/kg, R848 组(n =10) 30ug, Tra。stuzumab偶联R848抗体组(n = 10) 5mg/kg,实验为50天测定肿瘤体积为其中观察项目之一。
[0039]发明详述
[0040]树突细胞是一类在免疫应答与免疫耐受中发挥重要作用的免疫细胞，其最突出的功能特点是在病毒刺激下产生大量的I型干扰素，因此又被称为是天然I型干扰素生产细胞。
[0041]树突状细胞是迄今所知的功能最强的抗原提呈细胞。根据其表面分子标记，树突状细胞可以被分成二个亚型，浆细胞样树突细胞(plasmacytoid DC, pDC)和骨髓样树突细胞(myeloid DC，mDC)。通过大量产生I型干扰素、细胞因子、趋化因子以及与其它细胞之间的相互作用等途径，浆细胞样树突细胞广泛地参与到机体的固有免疫和适应性免疫应答过程中，它可以调控NK、T、B等细胞参与免疫反应的强度、持续时间以及应答方式，从而在肿瘤、感染和自身免疫性疾病过程中均发挥十分重要的功能(Liu Y.T.1PC professionaltype I interferon-producing cells and plasmacytoid dendritic cell precursors.Annu Rev Immunol.2005 ;23:275-306.Gilliet M，Cao W,Liu Y.T.Plasmacytoid dendriticcells !sensing nucleic acids in viral infection and autoimmune diseases.Nat RevImmuno12008Aug ；8 (8):594-606)。
[0042]研究发现许多实体肿瘤如乳腺癌和头，颈肿瘤，卵巢癌中有pDC的侵润(Treilleux I，Blay JY，Bendriss-Vermare N et al.Dendritic cell infiltration andprognosis of early stage breast cancer.Clin Cancer Res 2004;10:7466-7474，Hartmann E，Wollenberg B，Rothenfusser S et al.1dentification and functionalanalysis of tumor—infiltrating plasmacytoid dendritic cells in head and neckcancer.Cancer Res 2003 ；63:6478-6487.Zou WP, Machelon V，Cou1mb-L^ Hermin A，etal.Stromal-derived factor-1 in human tumors recruits and alters the functionof plasmacytoid precursor dendritic cells.Nat Med 2001 ；7:1339-1346)而肿瘤细胞分泌的因子抑制的DC细胞的成熟(Gabrilovich DI，Corak J，Ciernik IF etal.Decreased antigen presentation by dendritic cells in patients with breastcancer.Clin Cancer Res 1997 ;3:483-490.Bell D，Chomarat P, Broyles D et al.1nbreast carcinoma tissue， immature dendritic cells reside within the tumor，whereas mature dendritic cel ls are located in peritumoral areas.J Exp Med1999 ；190:1417-1425.Menetrier-Caux C，Montmain G，Dieu MC et al.1nhibition ofthe differentiation of dendritic cells from CD34(+)progenitors by tumor cells:role of interleukin-6 and macrophage colony-stimulating factor.Bloodl998 ；92:4778-4791)。这些未成熟的DC细胞没能起到调节免疫功能的作用。有证据表明Toll样受体7激动剂Imiquimod，和Toll样受体9激动剂CpG类药物能够剌激肿瘤周边的pDC产生I型 IFN进而抑制肿瘤的发展。(Dummer R, Urosevic M, Kempf W et al.1miquimod in basalcell carcinoma:how does it work ? Br J Dermatol 2003 ；149:57-58.Miller RL,Gerster JF, Owens ML et al Imiquimod applied topically:a novel immune responsemodifier and new class of drug.1nt J ImmunopharmacoI 1999 ；21:1-14.HofmannMA, Kors C， Audring H et al Phase I evaluation of intralesionally injectedTLR9_agonist PF—3512676 in patients with basal cell carcinoma or metastaticmelanoma.J Immunother2008 ；31:520-527).[0043]本发明涉及一个用于治疗肿瘤的具有靶向细胞功效以及细胞免疫调节功能的免疫治疗分子，此免疫治疗分子是具有靶向集团-链接分子-调节剂结构的偶联复合物。此免疫治疗分子在体内能达到激活肿瘤免疫和杀伤肿瘤细胞的作用。[0044]本发明提供一种靶向免疫治疗分子，其具有如下结构:靶向集团，连接集团，和免疫调节剂，其中靶向集团和免疫调节剂经连接集团连接在一起。
[0045]1.革巴向集团
[0046]1.1.肿瘤靶点
[0047]肿瘤靶点是肿瘤细胞表面相对特异的受体或特定的基因表达蛋白以及相关的配体，可溶性蛋白等。针对该靶标的抗体或其他药物特异性干预调节肿瘤细胞生物学行为的信号通路直接或阻断信号通路来抑制肿瘤细胞生长或促进其凋亡，迄今为止，已有几十余种分子靶点药物被批准用于实体肿瘤或血液系统肿瘤的临床研究及治疗，另有数种分子靶向药物用于血液系统肿瘤。目前非实体肿瘤如血液病肿瘤较常见的靶点为CD19，CD20，CD22, CD30, CD33, CD37, CD40, CD52, CD70, CD79 ;而在实体肿瘤中 Syndecan-1, Lewis,MUCl，EpCAM, Her I, Her2, Her3, MUC16, PSMA, Cripto, EphB2, EphA2, EphA3, Av integrin,Mesothelin, TAG-72, CAIX，5T4， folate receptor 1， BT-062, SLC44A4, Nectin-4, GD2,ED-B, FAP, GPNMB, gpA33, VEGF, VEGFR, MET, IGF1R, TNFR, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP,Tenascin。(Scott AM, Wolchok JD, Old L1.Antibody therapy of cancer.Nat RevCancer.2012 Mar22 ；12(4):278-87.)
[0048]1.2.治疗性抗体
[0049]临床上成功的案 例如:Rituxan (Rituximab,利妥昔单抗)，是人鼠嵌合抗体,用来治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤。它作用在表达于B细胞表面的⑶20抗原，90%以上的B细胞非霍奇金淋巴瘤均有表达。Rituxan与⑶20结合通过⑶C和ADCC引发B细胞溶解，同时也可使药物抵抗性的人体淋巴细胞对一些化疗药的细胞毒性敏感。
[0050]Herceptin(Trastuzumab,曲妥珠单抗)是人源化的单抗,作用在人表皮生长因子受体HER2的胞外区域，25%-30%的乳腺癌有表达。Herc印tin抗肿瘤作用认为是I)使HER2受体的表达下调，抑制HER2的胞内信号转道通路，诱导细胞凋亡。2)与免疫机制有关，通过依赖抗体的ADCC和⑶C杀伤肿瘤细胞。
[0051]Erbitux(Cetuximab,西妥昔单抗)是人鼠嵌合抗体，作用在表皮生长因子受体(EGFR)。Erbitux与EGFR结合可抑制其信号转道通路，影响细胞增殖、侵袭转移以及血管生成。抑制EGFR信号转道通路可增强化疗药物和放射治疗的疗效。
[0052]Avastin(Bevacizumab,贝伐单抗)是人源化的单抗,其作用祀点是血管皮生长因子(VEGF)。它与VEGF结合抑制VEGFR的信号转导，结果导致抑制肿瘤的新血管生成。
[0053]1.3.其它抗体
[0054]目前在研发的针对肿瘤靶点的治疗性抗体药物有血液系统疾病肿瘤方面的抗⑶19，⑶20，⑶22，⑶33，⑶37，⑶40，⑶52，⑶70，⑶79单克隆抗体；有用于治疗实体肿瘤的抗 Syndecan-1, Lewis, MUCl, MUC16, PSMA, Cripto, EphA2, EphA3, EphB2, Av integrin,Mesothelin, TAG-72, CAIX，5T4， Folate Receptor 1， BT-062, SLC44A4, Nectin-4, GD2,ED-B, FAP, GPNMB, gpA33, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, Tenascin 抗体等。(Scott AM, Wolchok JD, Old L1.Antibody therapy of cancer.Nat Rev Cancer.2012Mar22 ；12(4):278-87)
[0055]下表列举了以肿瘤抗原分类的各种正在研发的治疗性抗体:
[0056]1.4.抗体片段或变体[0057]下表列举了可用于肿瘤抗原抗体结合的各种抗体形式以及正在研究的肿瘤靶
点
[0058]
抗体结构靶点列举
scFvCC49, ERBB2, Ley
DiabodyLey and TAG-72
AffibodyERBB2
MinibodyCEA, ERBB2
Protein-FcAngiopoietin I, angiopoietin 2， VEGFRI, VEGFR2
Intact IgGCD20, CD33, EGFR, ERBB2, VEGF
IgE and IgMGM2
Drug conjugatesCD30, CD33 and ERBB2
Loaded nanoparticles A33, EGFR and transferrin
BispecificsCD19 - CD3, EPCAM - CD3，gplOO - CD3
[0059]可结合抗原的抗体片断或衍生物:a Fab, Fab’，F(ab ' )2, single domainantibody, T and Abs dimer, Fv, scFv, dsFv, ds-scFv, Fd,单域抗体(linear antibody),小分子抗体(minibody),双特异抗体(diabody),双特异抗体片断(bispecific antibodyfragment), bibody, tribody, sc-diabody, kappa (Iamda) body, BiTE, DVD-1g, SIP, SMIP,DART,或含有一个或多个 CDR 的抗体类似物(a small antibodymi metic comprising oneor more CDRs)。
[0060]1.5?其它可特异性结合肿瘤的分子
[0061]研究发现许多多肽类分子较特异性的作用在肿瘤血管方面和细胞表面激素受体上。如肿瘤血管方面的有VEGFR的ATWLPPR多肽片段，作用在CD36的Thrombospondin-1mimetics,在 Integrins avb 3and avb 5 的 ACDCRGDCFCG(cyclic)多妝和 SCH 221153片段，作用在 Aminop^tidase 上的 NCNGRC(cyclic)多肽；作用在 MMP_2and MMP-9 的CTTHWGFTLC和Lymphatic vessels的CGNKRTRGC多肽(LyP-1);在细胞表面激素受体上有 omatostatin receptors 的 Octreotide, Vapreotide 和 Lanreotide；Bombesin/GRPreceptor 的 C-3940 多妝，HRH 受体的 Decapeptyl, Lupron, Zoladex, Cetrorelix。
[0062]近年来，Folic acid的研究进展引人注目，叶酸是一种小分子维生素，是细胞分裂所必须的。肿瘤细胞分裂异常，其表面存在着高表达的叶酸受体(FR，Folatereceptor)以便捕捉足够的叶酸来支持细胞分裂。
[0063]数据表明FR在肿瘤细胞的表达比正常细胞高出20-200倍以上，各种恶性肿瘤FR表达率分别是卵巢癌82 %，非小细胞肺癌66 %，肾癌64 %，结肠痛34 %，乳腺癌29 %，(Xia ff, Low PS.Late-targeted therapies for cancer.1 Med Chem.2010 ；14 ；53(19):6811-24)且与上皮肿瘤组织的恶性程度及转移侵袭程度呈正相关。FA可以通过细胞表面的FR介导内吞作用将FA吞入胞内，而FA通过其羧基与药物形成FA复合物进入细胞内仍然保持高度亲和力，并在酸性条件下(PH值为5) FR与FA脱离，FA并将药物释放在细胞质内。
[0064]临床上可以利用这个传递药物系统来达到选择性攻击肿瘤细胞。叶酸分子量小，无免疫原性，稳定性强，合成价格低廉，重要的是与药物或载体之间的化学键偶联简单易行，以FA为靶向分子构建药物传递系统成为治疗肿瘤的研究热点之一。目前在临床试验阶段的EC145 (FA化疗药物偶联复合物)能有效的攻击癌细胞(Pribble P and EdelmanMJ.EC145:a novel targeted agent for adenocarcinoma of the lung.Expert Opin.1nvestig.Drugs(2012) 21:755-761)。
[0065]2.免疫调节剂
[0066]2.1.TLR 配体
[0067]Toll like receptor (Toll样受体，TLR)是树突细胞重要的模式识别受体并在其分化和功能成熟中发挥重要作用，TLR通过识别细菌、虫体、真菌和病毒等保守的病原相关分子模式(PAMP)而捕获病原体，刺激树突细胞分化和功能成熟。
[0068]到现在为止，一共有10个人类和13个鼠类TLR家族相继被发现。它们在细胞内均有一定的分布。TLR1、2、4、5、6表达于细胞表面，TLR3、7、8、9存在于细胞的胞内体(endosome) 0它们均属I型跨膜蛋白，由胞外区(550-980个氨基酸)、跨膜段和胞内区(约130个氨基酸)3部分组成。胞外区富含亮氨酸重复序列(LRR)，能识别病原体成分；胞内区有一个Toll/IL-lR(TIR)区域，是高度保守的蛋白质相互作用区，通过与转接分子的相互作用转导信号，是信号转导的核心元件。
[0069]近年来以TLR为靶向药物的研究也有突破性的进展，如通过TLR7MYD88信号途径诱导IFNa、IL6和TNFa的生成来调`节免疫抗病毒、抗肿瘤药物的TLR7/8靶向激动剂Imiquimod 和已通过临床二期试验的 Resiquimod(R848) (Hemmi H, Kaisho T, Takeuchi0, et al.Small antiviral compounds activate immune cells via the TLR7 Myd88dependent signaling pathway.Nat Immunol, 2002 ;3:196—200 ;Panter G, Kuznik A,Jerala R.Therapeutic applications of nucleic acids as ligands for Toll likereceptors.Curr Opin Mol Ther,2009 ；11:133-145.Kronenberger B, Zeuzem S.Currentand future treatment option for HCV, Ann Hepatol, 2009 ；8:103-112).针对 TLR9 革巴点的 M02134，IM0205, MGN-1703, MGN-1704, CpG-ODN 药物 Agatolimod，SD-101, QAX-935,DIMS0150等；TLR4也是人们关注的靶点之一现在临床研究药物有单磷酰酯质A成分的Pollinex Quattro, 0M-174, Eritoran, TAK-242, N1-0101 等等
[0070]表中列举了已报道的临床前或临床研究的能通过各种途径激活TLR的分子以及其作用的TLR和临床适应症
【权利要求】
1.一种靶向免疫治疗分子，其具有如下结构:靶向集团，连接集团，和免疫调节剂，其中靶向集团和免疫调节剂经连接集团连接在一起。
2.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述靶向集团可特异性或优先地结合肿瘤。
3.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述靶向集团可特异性或优先地结合肿瘤抗原。
4.权利要求3的免疫治疗分子，其中所述肿瘤抗原选自⑶19，⑶20，⑶22，⑶33，⑶37，CD40, CD52, CD70，或 CD79。
5.权利要求3的免疫治疗分子,其中所述肿瘤抗原选自Syndecan-1,Lewis, MUCl,MUC16, PSMA, Cripto, EphA2, EphA3, EphB2, Av integrin, Mesothelin, TAG-72, CAIX，5T4，Folate Receptor 1，BT-062，SLC44A4, Nectin-4，GD2，ED-B，FAP，GPNMB,gpA33，MET，IGF1R,TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP，或 Tenascin。
6.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述靶向集团是抗体。
7.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述靶向集团是单克隆抗体。
8.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述靶向集团是人源化，或人源性单克隆抗体。
9.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述祀向集团选自RituxanCrituximab,利妥昔单抗),Herceptin (trastuzumab,曲妥珠单抗)，或 Erbitux (cetuximab,西妥昔单抗)。
10.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述靶向集团选自aFab, Fab’，F(ab/ )2,single domain antibody, T and Abs dimer,Fv, scFv, dsFv, ds-scFv, Fd,单域抗体(linearantibody),小分子抗体(minibody),双特异抗体(diabody),双特异抗体片断(bispecificantibody fragment), bibody, tribody, sc-diabody, kappa (Iamda) body, BiTE, DVD-1g,SIP, SMIP，DART，或含有一个或多个⑶R的抗体类似物。
11.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述靶向集团选自VEGFR的ATWLPPR多肽片段，Thrombospondin-1 mimetics, CDCRGDCFCG(cyclic)多肽，SCH 221153 片段，NCNGRC(eyelie)多肽，CTTHWGFTLC 多肽，CGNKRTRGC 多肽(LyP-1)，Octreotide,Vapreotide, Lanreotide, C-3940 多月太，Decapeptyl, Lupron, Zoladex,或 Cetrorelix0
12.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述靶向集团是叶酸或其衍生物。
13.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述免疫调节剂是免疫激活剂。
14.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述免疫调节剂是TLR配体，NodLile Receptor配体，RIG-1-Like Receptor 配体。。
15.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述免疫调节剂是下列TLR中至少一个的配体:TLRl，TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8，或 TLR9。
16.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述免疫调节剂是TLR7和TLR8的双配体。
17.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述免疫调节剂选自Imiquimod，Resiquimod (R848)，IM02134,頂0205，MGN-1703，MGN-1704, Agatolimod, SD-101，QAX-935,DIMS0150, Pollinex Quattro, OM-174, Eritoran, TAK-242，N1-0101，聚肌胞苷酸(Poly1: C)，CpG寡聚脱氧核苷酸，和I型干扰素，IL-12，IL-23，IL~1, IL-15。
18.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述连接集团选自腙链，多肽链，二硫键链或硫醚键链。
19.权利要求1的免疫治疗分子，其中所述连接集团是可被酶切的或非酶切位点的。
20.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的治疗分子或其药物学可接受的盐以及一种或多种药物学可接受的载体。
21. 权利要求20所述的药物组合物，其还含有第二化学治疗剂。
22.权利要求21所述的药物组合物，其中所述的第二化学治疗剂选自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、来曲唑、imatanib、紫杉醇、环磷酰胺、洛伐他汀、minosine、吉西他滨、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤、多西他奇、戈舍瑞林、长春新碱、长春碱、诺考达唑、替尼泊苷、依托泊苷、吉西他滨、印othilone、诺维本、喜树碱、柔红霉素、放线菌素D、米托蒽醌、安吖啶、多柔比星、表柔比星或伊达比星。
23.一种治疗细胞异常增殖的方法，所述方法包括将治疗有效量的如权利要求1中所定义的治疗分子、或其药物学可接受的盐，与药物学可接受的载体一起给药于有此需要的对象，其中所述的细胞异常增殖得到有效调节。
24.权利要求23所述的方法，其中所述的细胞异常增殖为癌前期病变。
25.权利要求23所述的方法，其中所述的细胞异常增殖为癌症。
26.权利要求25所述的方法，其中所述的癌症为肺癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、慢性髓细胞性白血病、黑素瘤或卵巢癌，黑素瘤或卵巢癌，皮肤、鼻窦、喉的乳头状瘤，子宫、皮肤、肺、鼻咽、阴茎、喉的乳头状癌。甲状腺、乳腺、胃肠、肺、支气管腺瘤，甲状腺癌、胃癌，肾盂和膀胱的移行上皮癌，皮肤基底细胞癌，皮肤、舌、唇的血管肉瘤，骨肉瘤，颅内的星形细胞瘤和多形胶质母细胞瘤，恶性神经鞘瘤，成神经节细胞瘤，脑膜肉瘤，何杰金氏病，非何杰金氏病，白血病、绒毛上皮癌，恶性葡萄胎，多发骨髓瘤，以及恶性黑色素瘤等。
27.权利要求23所述的方法，其中所述的细胞异常增殖为乳腺细胞增生性疾病。
28.权利要求27所述的方法，其中所述的乳腺细胞异常增殖为乳腺癌前期病变。
29.权利要求28所述的方法，其中所述的乳腺癌前期病变选自乳腺非典型增生、原位管癌、和原位小叶癌。
30.权利要求27所述的方法，其中所述的乳腺细胞增生性疾病为乳腺癌。
31.权利要求30所述的方法，其中所述的乳腺癌为雌激素受体阴性乳腺癌。
32.权利要求23所述的方法，其中所述的治疗分子、或其药物学可接受的盐与第二化学治疗剂联合给药。
33.权利要求32所述的方法，其中所述的第二化学治疗药剂选自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、来曲唑、imatanib、紫杉醇、环磷酰胺、洛伐他汀、minosine、吉西他滨、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤、多西他奇、戈舍瑞林、长春新碱、长春碱、诺考达唑、替尼泊苷、依托泊苷、吉西他滨、epothi 1ne、诺维本、喜树碱、柔红霉素、放线菌素D、米托蒽醌、安吖啶、多柔比星、表柔比星或伊达比星。
34.权利要求23所述的方法，其中所述的癌症治疗包括肿瘤尺寸的减小。
35.权利要求25所述的方法，其中所述的癌症为转移癌。
36.权利要求25所述的方法，其中所述的癌症治疗包括抑制转移癌细胞的侵袭。
【文档编号】A61K39/00GK103566377SQ201210248481
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2012年7月18日 优先权日:2012年7月18日
【发明者】李立新 申请人:上海博笛生物科技有限公司