专利名称：微生物环保剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生物环保剂，具体地说涉及一种用于垃圾场的除臭灭蝇净化剂，属于微生物脱臭领域。
背景技术：
随着经济的快速发展，城市化进程加快，人口迅速增加，生活垃圾的恶臭污染问题越来越成为政府和民众关注的重要环境问题。
恶臭污染属于大气污染的范畴。由于恶臭大部分是复杂的多组合、低浓度、低沸点各种气体物质的混合物，恶臭物质具有阀值低、感觉强度与污染浓度对数相关的特点，因而控制技术选择方面将不同于常规大气污染。目前受控的恶臭物质有氨、硫化氢、甲硫醇、甲硫醚、三甲胺，而产生这些恶臭的污染源缺乏有效的治理方法，对恶臭物质目前还没有相应有效的防治技术。目前主要防治方法有生物法、吸附法、吸收法、光催化法等。从单一的单元处理操作发展到如今的多种技术组合式应用。(针对我国城乡垃圾中转及填埋的分散无序状态，使用系统设备、封闭式的降解除臭，不是解决垃圾场空气污染的主要方法。)目前市场已有的除臭剂主要有化学除臭剂、物理除臭剂、微生物除臭剂。化学除臭剂是通过一系列的化学反应将恶臭物质或中和或置换或氧化为无臭物质，其成本高，还会造成二次污染；物理除臭剂是吸附除臭，不改变臭气组合，只改变臭气的相对浓度。微生物除臭灭蝇可为目前行之有效的方法。有关生物除臭的专利和文献很多，很大部分类似以制作新型有机肥为目的，因此菌群庞杂，即包括产生各种酶的菌株，也需要高温放线菌，还需要固氮菌、解磷解钾的芽孢菌。虽然也有除臭效果，但是工艺复杂，生产成本高，周期长，灭蝇效果不佳。如中国专利申请号200510069596. 8，名称为“一种生物除臭净化剂及其用途”的专利，再如中国专利申请号200510063042. 0，名称“生物工程处理城市生活湿垃圾的方法”。另一类微生物除臭灭蝇制剂专利，在微生物发酵完成后，为降低制剂PH加入多量的醋酸乳酸，氢离子浓度过大的培养液，会导致微生物酶失活，不能正常生长，影响使用效果，如中国专利申请号为201010124151. X，名称为“垃圾填埋场除臭酵母及其垃圾除臭使用技术”，如中国专利申请号201110284724. X，名称” 一种微生物厕所除臭剂及其制备方法”。
发明内容
本发明的目的是提供一种有效安全的，用于垃圾填埋场和畜禽圈舍的灭蝇蛆除恶臭的微生物环保剂，以弥补现有技术的不足。本发明为实现目的采用的技术方案是
微生物环保剂，其特征是包括沼泽红假单孢菌、枯草芽孢菌、德氏乳酸杆菌形成的混合菌和中药提取液；按重量比，沼泽红假单孢菌枯草芽孢菌德氏乳酸杆菌=3:4:7 ;按体积比，中药提取液在混合菌中的比例为1%_2%。所述的沼泽红假单孢菌，由下列步骤制备而成a.制作摇瓶种子液将经过驯化的沼泽红假单孢菌的单个菌落，接种到液体培养基中，于30°C培养48小时，得到摇瓶种子液；
所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液醋酸钠O. 2克，氯化钠O. I克，硫酸镁
0.I克，磷酸二氢钾O. 05克，硫酸氨O. I克，氯化钙O. 01克，IOOml水，PH为6. 6 ;121°C灭菌30分钟，冷却备用；
b.生产一级种子液将步骤a得到的沼泽红假单孢菌摇瓶种子液以10%体积比的接种量，接种到沼泽红假单孢菌一级种子液体培养基在厌氧环境30°C培养72小时，光照强度为ΙΟΟΟΙχ，菌数达30亿/ml，得到沼泽红假单孢菌一级种子液；
所述沼泽红假单孢菌一级种子液培养基为按下述比例配制的混合液磷酸二氢钾I. O克，氯化钙O. I克，碳酸氢钙3克，醋酸钠I克，氯化钠I. O克，氯化镁O. 5克，氯化胺I. O克，微量元素贮液1ml，生长辅助因子贮液1ml，水1000ml ;PH=6. 6，121°C灭菌30分钟，冷却备用；
所述的微量元素贮液为氯化亚铁1800毫克，氯化钴250毫克，氯化镍10毫克，氯化铜10毫克，氯化锰70毫克，氯化锌100毫克，硼酸500毫克，锰酸钾30毫克，硒酸钠10毫克，水 IOOOml ；
所述生长因子贮液为生物素10毫克，尼克酸35毫克，硫氨素30毫克，对氨基苯甲酸20毫克，盐酸比多醛10毫克，泛酸钙10毫克，维生素B12毫克，水IOOml ；
c.生产发酵(二级发酵):将步骤b得到的沼泽红假单孢菌一级种子液以10%体积比接种到发酵培养液中，所述的发酵培养液同于步骤b的一级种子液培养基，培养条件同于步骤b，发酵96小时，检测活菌数已达到30亿/ml时停止发酵。最后对沼泽红假单孢菌发酵液的活菌含量进行常规平板计数检测。所述的枯草芽孢菌，由下列步骤制备而成
d.制作摇瓶种子液将经过驯化的枯草芽孢菌的单个菌落，接种到液体培养基中，于30°C培养48小时，得到摇瓶种子液；
所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液蛋白胨I. O克，葡萄糖I. O克，牛肉膏
1.O克，硫酸二氢钾O. 5克，硫酸锰O. I克，水1000ml ；PH=7. 5 ；
e.生产一级种子液将步骤d得到的枯草芽孢菌摇瓶种子液以3%体积比的接种量，接种到枯草芽孢菌一级种子液体培养基在厌氧环境30°C培养20小时，菌数达30亿/ml，得到枯草芽孢菌一级种子液；枯草芽孢菌一级种子液培养基与步骤d相同；
f.生产发酵(二级发酵)将步骤e得到的枯草芽孢菌一级种子液以5%体积比接种到发酵培养液中，所述的发酵培养液同于步骤e的一级种子液培养基，培养条件同于步骤e ；
所述的德氏乳酸菌，由下列步骤制备而成
g.制作摇瓶种子将经过驯化的德式乳酸菌单个菌落接种到德氏乳杆菌液体培养基中，37°C培养36小时，得到摇瓶种子液；
所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液酵母膏5克，蛋白胨5克，葡萄糖9克，吐温80 O. 5克，磷酸二氢钾2克，番茄汁100ml，水1000ml ；PH=5. 6，121°C灭菌15分钟。h.生产一级种子液将步骤g得到的德氏乳酸杆菌种子液以5%体积比的接种量，接种于一级种子液体培养基中，于45°C培养40小时，至活菌数达到10亿/ml，得到一级种子液。
所述的一级种子液体培养基配方为按下述比例配制的混合液蔗糖10克，糖蜜25克，蛋白胨5克，酵母膏5克，硫酸镁O. 5克，氯化钠O. I克，磷酸二氢钾O. 5克，水IOOOml ；
i.生产发酵将步骤h得到的种子液以15%体积比的接种量，接种于发酵液培养基中，于40°C培养48小时，以残糖降到I克L时，发酵结束；
所述发酵液培养基配方为按下述比例配制的混合液，糖蜜40克，蔗糖20克，麦根18克，蛋白胨5克，酵母膏5克，硫酸镁O. 5克，氯化钠O. I克，磷酸二氢钾O. 5克，水IOOOml ；所述的中草药提取液，由下列步骤制备而成把中药辣寥、狼毒、威灵仙、北鲜皮、苍耳按照重量比5:3:1:1:1混合，加入10倍体积的4°的酒精浸泡24-72小时，再将浸泡后的药物在沸水条件下煎20-30分钟，浙出药液待用。所述的混合菌，由下列步骤制备而成
按重量比，沼泽红假单孢菌枯草芽孢菌德氏乳酸杆菌=3:4:7混合后加入到混合菌液培养基中发酵15天，活菌数达到10亿/ml，PH<4时混合液制备完成；
所述的混合菌培养基为为按下述比例配制的混合液糖蜜30%，硫酸镁1%，硫酸亚铁
O.4%，磷酸二氢钾1%，煮沸放至室温；
本发明的积极效果在于本发明利用多种微生物与它的代谢产物，对城市中产生恶臭的生活污染源，即垃圾转运站及处理场中氨、硫化氢、吲哚、甲硫醇、醛类，进行吸收降解转换，以达到除臭的目的。其中枯草芽孢菌细胞群，抗药性强，并产生蛋白酶和几丁质酶，有效的分解害虫卵壳和真菌细胞壁。枯草芽孢菌是一种亚硝酸盐转化菌，可以将垃圾的氨态氮转化为亚硝基氮，亚硝基氮转化为硝基氮，硝基氮可被植物吸收。光合菌利用硝基氮形成菌体蛋白，从而减少氨态氮的生成，降低了氨气的含量。光合菌为红假单孢菌属，经过驯化利用硫化物的能力增加，硫化氢可作为供氧体，可以利用氨态氮形成菌体成分。德氏乳杆菌产乳酸能力很强，可以使廨液PH〈4的酸性液体。可吸收臭味物质及抑制腐败菌的代谢和繁殖。通过微生物及其代谢产物的综合作用，对臭气原有较强降解转换能力，达到明显的除臭效果。另外，中药提取液的维生素促进混合菌液生长，混合菌液内的酶如皂戒酶等可以使植物的次生代谢产物如生物碱由活性较低变为活性较高的物质，从而提高药效。综述本发明通过复合菌液与中草药提取液混合发酵，促使中药成分进一步激活，与菌体孢外酶共同作用抑制虫卵的孵化，减少了成蝇的生成。由于中草药与菌液发酵培养基有特殊气味，对成蝇有着诱杀作用，也可有效阻隔臭源的臭气散发。本发明的微生物环保剂对人体无害，成本低，制备工艺简单，操作简便，除臭灭蝇效果显著，较好的解决了垃圾填埋场、垃圾中转站及厕所、化粪池的蚊蝇和恶臭问题，达到了良好的除臭灭蝇效果。
图I本发明实施例的实施效果表。
具体实施例方式实施例I :
沼泽红假单孢菌(pseudmonas palustris)菌的制备
a.制作摇瓶种子液将经过驯化的沼泽红假单孢菌的单个菌落，接种到液体培养基中，于30°C培养48小时，得到摇瓶种子液；所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液醋酸钠O. 2克，氯化钠O. I克，硫酸镁
0.I克，磷酸二氢钾O. 05克，硫酸氨O. I克，氯化钙O. 01克，IOOml水，PH为6. 6 ; 121。。灭菌30分钟，冷却备用；
b.生产一级种子液将步骤a得到的沼泽红假单孢菌摇瓶种子液以10%体积比的接种量，接种到沼泽红假单孢菌一级种子液体培养基在厌氧环境30°C培养72小时，光照强度为ΙΟΟΟΙχ，菌数达30亿/ml，得到沼泽红假单孢菌一级种子液；
所述沼泽红假单孢菌一级种子液培养基为按下述比例配制的混合液磷酸二氢钾I. O克，氯化钙O. I克，碳酸氢钙3克，醋酸钠I克，氯化钠I. O克，氯化镁O. 5克，氯化胺I. O克，微量元素贮液1ml，生长辅助因子贮液1ml，水1000ml ;PH=6. 6，121°C灭菌30分钟，冷却备用；
所述的微量元素贮液为氯化亚铁1800毫克，氯化钴250毫克，氯化镍10毫克，氯化铜10毫克，氯化锰70毫克，氯化锌100毫克，硼酸500毫克，锰酸钾30毫克，硒酸钠10毫克， 水 IOOOml ；
所述生长因子贮液为生物素10毫克，尼克酸35毫克，硫氨素30毫克，对氨基苯甲酸20毫克，盐酸比多醛10毫克，泛酸钙10毫克，维生素B12毫克，水IOOml ；
c.生产发酵(二级发酵):将步骤b得到的沼泽红假单孢菌一级种子液以10%体积比接种到发酵培养液中，所述的发酵培养液同于步骤b的一级种子液培养基，培养条件同于步骤b，发酵96小时，检测活菌数已达到30亿/ml时停止发酵。最后对沼泽红假单孢菌发酵液的活菌含量进行常规平板计数检测。枯草芽抱菌(Rhodopseudmonas palustris)的制备
d.制作摇瓶种子液将经过驯化的枯草芽孢菌的单个菌落，接种到液体培养基中，于30°C培养48小时，得到摇瓶种子液；
所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液蛋白胨I. O克，葡萄糖I. O克，牛肉膏
1.O克，硫酸二氢钾O. 5克，硫酸锰O. I克，水1000ml ；PH=7. 5 ；
e.生产一级种子液将步骤d得到的枯草芽孢菌摇瓶种子液以3%体积比的接种量，接种到枯草芽孢菌一级种子液体培养基在厌氧环境30°C培养20小时，菌数达30亿/ml，得到枯草芽孢菌一级种子液；枯草芽孢菌一级种子液培养基与步骤d相同；
f.生产发酵(二级发酵)将步骤e得到的枯草芽孢菌一级种子液以5%体积比接种到发酵培养液中，所述的发酵培养液同于步骤e的一级种子液培养基，培养条件同于步骤e ；
德氏乳酸菌(LactobaciIIus delbrueckill)的制备
g.制作摇瓶种子将经过驯化的德式乳酸菌单个菌落接种到德氏乳杆菌体培养基中，37°C培养36小时，得到摇瓶种子液；
所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液酵母膏5克，蛋白胨5克，葡萄糖9克，吐温80 O. 5克，磷酸二氢钾2克，番茄汁100ml，水1000ml ；PH=5. 6，121°C灭菌15分钟。h.生产一级种子液将步骤g得到的德氏乳酸杆菌种子液以5%体积比的接种量，接种于一级种子液体培养基中，于45°C培养40小时，至活菌数达到10亿/ml，得到一级种子液。所述的一级种子液体培养基配方为按下述比例配制的混合液蔗糖10克，糖蜜25克，蛋白胨5克，酵母膏5克，硫酸镁O. 5克，氯化钠O. I克，磷酸二氢钾O. 5克，水IOOOml ；i.生产发酵将步骤h得到的种子液以15%体积比的接种量，接种于发酵液培养基中，于40°C培养48小时，以残糖降到I克/ml时，发酵结束；
中药提取液的制备
所述的中草药提取液，由下列步骤制备而成把中药辣寥、狼毒、威灵仙、北鲜皮、苍耳按照重量比5:3:1:1:1混合，加入10倍体积的4°的酒精浸泡24-72小时，再将浸泡后的药物在沸水条件下煎20-30分钟，浙出药液待用。环保剂的配制(混合发酵)
按重量比，沼泽红假单孢菌枯草芽孢菌德氏乳酸杆菌=3:4:7混合后加入到混合菌液培养基中发酵15天，活菌数达到10亿/ml，PH<4时；再加入I. 5%体积比的中药提取液，即可完成。 本发明中所述的微生物均由中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)购得，其中，沼泽红假单抱菌(Rhodo pseudmonas palustris):枯草芽抱杆菌(Rhodo pseudmonaspalustris):编号为 I. 2352,德氏乳酸菌(Lactobacillus delbrueckill):编号 I. 1482。
将此环保剂用于四川省宜宾市垃圾处理厂，经宜宾市环境监测站监测硫化氢减少50%，氨气减少81%。(见图I)苍蝇显著减少。垃圾场使用环保剂，三天就见到效果，解决了苍蝇和臭气两大难题，苍蝇和臭气明显减少，给垃圾场员工创造了一个良好的工作环境，周边农民表示满意。
权利要求
1.微生物环保剂，其特征是包括沼泽红假单孢菌、枯草芽孢菌、德氏乳酸杆菌形成的混合菌和中药提取液；按重量比，沼泽红假单孢菌枯草芽孢菌德氏乳酸杆菌=3:4:7 ;按体积比，中药提取液在混合菌中的比例为1%_2%。
2.如权利要求I所述的微生物环保剂，其特征是沼泽红假单孢菌，由下列步骤制备而成a.制作摇瓶种子液将经过驯化的沼泽红假单孢菌的单个菌落，接种到液体培养基中，于30°C培养48小时，得到摇瓶种子液； 所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液醋酸钠O. 2克，氯化钠O. 1克，硫酸镁0.1克，磷酸ニ氢钾O. 05克，硫酸氨O. I克，氯化钙O. 01克，IOOml水，PH为6. 6 ;121°C灭菌30分钟，冷却备用； b.生产ー级种子液将步骤a得到的沼泽红假单孢菌摇瓶种子液以10%体积比的接种量，接种到沼泽红假单孢菌一级种子液体培养基在厌氧环境30°C培养72小时，光照强度为ΙΟΟΟΙχ，菌数达30亿/ml，得到沼泽红假单孢菌一级种子液； 所述沼泽红假单孢菌ー级种子液培养基为按下述比例配制的混合液磷酸ニ氢钾I. O克，氯化钙O. 1克，碳酸氢钙3克，醋酸钠1克，氯化钠1. O克，氯化镁O. 5克，氯化胺I. O克，微量元素贮液1ml，生长辅助因子贮液1ml，水1000ml ；PH=6. 6，121°C灭菌30分钟，冷却备用； 所述的微量元素贮液为氯化亚铁1800毫克，氯化钴250毫克，氯化镍10毫克，氯化铜10毫克，氯化锰70毫克，氯化锌100毫克，硼酸500毫克，锰酸钾30毫克，硒酸钠10毫克，水 IOOOml ； 所述生长因子贮液为生物素10毫克，尼克酸35毫克，硫氨素30毫克，对氨基苯甲酸20毫克，盐酸比多醛10毫克，泛酸钙10毫克，维生素B12毫克，水IOOml ； c.生产发酵(ニ级发酵):将步骤b得到的沼泽红假单孢菌ー级种子液以10%体积比接种到发酵培养液中，所述的发酵培养液同于步骤b的一级种子液培养基，培养条件同于步骤b，发酵96小时，检测活菌数已达到30亿/ml时停止发酵； 最后对沼泽红假单孢菌发酵液的活菌含量进行常规平板计数检測。
3.如权利要求I所述的微生物环保剂，其特征是所述的枯草芽孢菌，由下列步骤制备而成 d.制作摇瓶种子液将经过驯化的枯草芽孢菌的单个菌落，接种到液体培养基中，于30°C培养48小时，得到摇瓶种子液； 所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液蛋白胨1. O克，葡萄糖1. O克，牛肉膏1.O克，硫酸ニ氢钾O. 5克，硫酸锰O.1克，水1000ml ；PH=7. 5 ； e.生产ー级种子液将步骤d得到的枯草芽孢菌摇瓶种子液以3%体积比的接种量，接种到枯草芽孢菌ー级种子液体培养基在厌氧环境30°C培养20小时，光照强度为ΙΟΟΟΙχ，菌数达30亿/ml，得到枯草芽孢菌ー级种子液；枯草芽孢菌ー级种子液培养基与步骤d相同； f.生产发酵(ニ级发酵)将步骤e得到的枯草芽孢菌ー级种子液以5%体积比接种到发酵培养液中，所述的发酵培养液同于步骤e的一级种子液培养基，培养条件同于步骤e。
4.如权利要求I所述的微生物环保剂，其特征是所述的德氏乳酸菌，由下列步骤制备而成g.制作摇瓶种子将经过驯化的德式乳酸菌单个菌落接种到德氏乳杆菌液体培养基中，37°C培养36小时，得到摇瓶种子液；所述的液体培养基为按下述比例配制的混合液酵母膏5克，蛋白胨5克，葡萄糖9克，吐温80 O. 5克，磷酸ニ氢钾2克，番茄汁100ml，水1000ml ；PH=5. 6，121°C灭菌15分钟；h.生产ー级种子液将步骤g得到的德氏乳酸杆菌种子液以5%体积比的接种量，接种于ー级种子液体培养基中，于45°C培养40小时，至活菌数达到10亿/ml，得到一级种子液； 所述的ー级种子液体培养基配方为按下述比例配制的混合液蔗糖10克，糖蜜25克，蛋白胨5克，酵母膏5克，硫酸镁O. 5克，氯化钠O. I克，磷酸ニ氢钾O. 5克，水IOOOml ； i.生产发酵将步骤h得到的种子液以15%体积比的接种量，接种于发酵液培养基中，于40°C培养48小吋，以残糖降到I克/L吋，发酵结束； 所述发酵液培养基配方为按下述比例配制的混合液，糖蜜40克，蔗糖20克，麦根18克，蛋白胨5克，酵母膏5克，硫酸镁O. 5克，氯化钠O. I克，磷酸ニ氢钾O. 5克，水1000ml。
5.如权利要求I所述的微生物环保剂，其特征是所述的中草药提取液，由下列步骤制备而成把中药辣寥、狼毒、威灵仙、北鮮皮、苍耳按照重量比5:3:1:1:1混合，加入10倍体积的4°的酒精浸泡24-72小吋，再将浸泡后的药物在沸水条件下煎20-30分钟，浙出药液待用。
6.如权利要求I所述的微生物环保剂，其特征是所述的混合菌，由下列步骤制备而成 按重量比，沼泽红假单孢菌枯草芽孢菌德氏乳酸杆菌=3:4:7混合后加入到混合菌液培养基中发酵15天，活菌数达到10亿/ml，PH<4时混合液制备完成； 所述的混合菌培养基为为按下述比例配制的混合液糖蜜30%，硫酸镁1%，硫酸亚铁O.4%，磷酸ニ氢钾1%，煮沸放至室温。
全文摘要
本发明公开了一种微生物环保剂，其特征是包括沼泽红假单孢菌、枯草芽孢菌、德氏乳酸杆菌混合后和中药提取液；按重量比，沼泽红假单孢菌枯草芽孢菌德氏乳酸杆菌=3:4:7；按体积比，中药提取液在混合菌中的比例为1%-2%。本发明的积极效果在于本发明通过复合菌液与中草药提取液混合发酵，促使中药成分进一步激活，与菌体孢外酶共同作用抑制虫卵的孵化，减少了成蝇的生成。由于中草药与菌液发酵培养基有特殊气味，对成蝇有着诱杀作用，也可有效阻隔臭源的臭气散发。本发明的微生物环保剂对人体无害，成本低，制备工艺简单，操作简便，除臭灭蝇效果显著，较好的解决了垃圾填埋场、垃圾中转站及化粪池的蚊蝇和恶臭问题，达到了良好的效果。
文档编号A61L101/52GK102813949SQ20121030700
公开日2012年12月12日 申请日期2012年8月27日 优先权日2012年8月27日
发明者姜德油 申请人:宜宾市万华生物环保有限公司