日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA，该siRNA选自下述的一对或任意两对以上的组合：SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列；SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示的核苷酸序列；SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6所示的核苷酸序列；SEQ?ID?NO.7和SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列。本发明还公开了日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA的应用。本发明日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA，可明显抑制Sj?PGMRC2基因的转录，并能获得24％的减虫率，适用于制备治疗血吸虫病的药物。
【专利说明】日本血吸虫PGMRC2基因的s i RNA及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及分子生物学和生物医药【技术领域】，尤其涉及一种日本血吸虫PGMRC2 (膜相关的孕酮受体组件2)基因的siRNA及其应用。
【背景技术】
[0002]日本血吸虫病是一种重要的人兽共患寄生虫病。虽然我国在血吸虫病的防治上已经取得了巨大成就，但是由于中间宿主钉螺难以消灭及血吸虫重复感染现象严重，全面控制血吸虫病传播的前景仍不容乐观。吡喹酮自问世以来，以其高效、低毒、使用方便、价格低廉等优点在血吸虫病临床治疗和防治工作中得到广泛应用，并成为目前治疗血吸虫病的唯一药物，20多年来，未见有新的治疗血吸虫病的药物出现。然而，近年来在曼氏血吸虫上已经有了吡喹酮抗性虫株的报道，耐药虫株的出现引起了人们的不安与高度关注。因此，有必要寻找新的治疗血吸虫病的药物。
[0003]PGMRC2 (膜相关的孕酮受体组件2)以及和其密切相关的PGMRCl属于膜相关的孕酮受体家族(MAPR)，该天然蛋白首次从猪的肝脏细胞中纯化得到，并随后证实存在于多种真核动物中，包括线虫、昆虫、酵母菌和拟南芥等，其氨基酸序列拥有一个信号横跨膜结构和潜在的细胞色素b5的结合位点。该蛋白对孕酮有高亲和力，这种亲和力是相对于睾酮或者糖皮质激素的2-10倍，而且还可以结合其他分子例如亚铁血红素、胆固醇等。对于PGMRCl功能的研究，有证据表明，其可能参与并调节了大鼠粒层细胞中孕酮介导的抗细胞凋亡的过程并且其可能是哺乳动物精子顶体反应中孕酮感应的中间物。
[0004]RNA干扰(RNAi)技术目前已经在功能基因组学、基因治疗、微生物学研究和药物研发等领域里取得了令人瞩目的进展。RNA干扰是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制，是双链RNA(dsRNA)介导的、序列特异的靶基因转录后基因沉默的过程。将与靶基因转录的产物mRNA存在同源互补序列的双链RNA导入细胞后，能特异性地降解该mRNA,从而产生相应的功能表型缺失。所谓的小分子干扰RNA (small interferingRNAs, siRNAs)，是能够以同源互补序列mRNA为靶目标并将其降解而介导RNA干扰途径的短片段双链RNA分子，通常由20多个核苷酸组成，能进行特异性的转录后基因沉默。SiRNA已经广泛应用于基因表达调控机制研究等领域。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题是提供一种日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA，该siRNA可明显抑制SjPGMRC2基因的转录，可用于制备治疗血吸虫病的药物。
[0006]此外，还需要提供一种日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA在制备治疗血吸虫病的药物中的应用。
[0007]为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现:
[0008]在本发明的一个方面，提供了一种日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA，所述siRNA选自下述的一对或任意两对以上的组合:[0009]SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示的核苷酸序列；
[0010]SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.4所示的核苷酸序列；
[0011]SEQ ID N0.5和SEQ ID N0.6所示的核苷酸序列；
[0012]SEQ ID N0.7和SEQ ID N0.8所示的核苷酸序列。
[0013]优选的，所述siRNA为SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示的核苷酸序列。
[0014]在本发明的另一方面，提供了一种治疗血吸虫病的药物，所述药物的活性成分为:通过RNA干扰抑制日本血吸虫PGMRC2基因表达的siRNA，该siRNA为SEQ ID N0.1和SEQID N0.2所示的核苷酸序列。
[0015]在本发明的另一方面，还提供了一种日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA在制备治疗血吸虫病的药物中的应用，该siRNA为SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示的核苷酸序列。
[0016]在本发明的另一方面，还提供了一种日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA在制备预防血吸虫病的药物中的应用，该siRNA为SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示的核苷酸序列。
[0017]本发明日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA，可用于干扰日本血吸虫PGMRC2基因转录、表达及血吸虫的生长发育，小鼠的体内RNA干扰实验表明，该siRNA能获得24%的减虫率，适于制备治疗血吸虫病的药物。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]下面结合附图和【具体实施方式】对本发明作进一步详细的说明。
[0019]图1是本发明实施例1实时定量PCR分析体外干扰效果图；
[0020]图2是本发明实施例2实时定量PCR分析体内干扰效果图；
[0021]图3是本发明实施例2用Western-blotting分析体内蛋白表达的干扰效果图。
【具体实施方式】
[0022]下列实施例中，未注明具体条件的实验方法，通常按常规条件，如《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克，D.W.拉塞尔著，黄培堂，汪嘉玺，朱厚础，等译.第3版，北京:科学出版社，2002)中所述的方法进行。
[0023]实施例1体外RNA干扰
[0024]1.siRNA分子的设计
[0025]根据日本血吸虫PGMRC2基因序列(GeneBank:FN317689.1)设计四对siRNA分子(见下表1)，NC-RL siRNA分子为无关对照，siRNA由上海吉玛制药技术有限公司设计并合成。
[0026]表1siRNA 序列
[0027]
【权利要求】
1.一种日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA，其特征在于，所述SiRNA选自下述的一对或任意两对以上的组合: SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示的核苷酸序列； SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.4所示的核苷酸序列； SEQ ID N0.5和SEQ ID N0.6所示的核苷酸序列； SEQ ID N0.7和SEQ ID N0.8所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA，其特征在于，所述siRNA为SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示的核苷酸序列。
3.一种治疗血吸虫病的药物，其特征在于，所述药物的活性成分为:通过RNA干扰抑制日本血吸虫PGMRC2基 因表达的siRNA，该siRNA为SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示的核苷酸序列。
4.权利要求1所述日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA在制备治疗血吸虫病的药物中的应用，所述siRNA为SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示的核苷酸序列。
5.权利要求1所述日本血吸虫PGMRC2基因的siRNA在制备预防血吸虫病的药物中的应用，所述siRNA为SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示的核苷酸序列。
【文档编号】A61K48/00GK103667286SQ201210343029
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2012年9月14日 优先权日:2012年9月14日
【发明者】傅志强, 吴秀娟, 林矫矫, 洪炀, 石耀军, 陆珂 申请人:中国农业科学院上海兽医研究所