含有猪圆环病毒2型抗原与猪流感抗原的疫苗组合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种同时抵抗猪圆环病毒2型（PCV2）和猪流感病毒（SIV）感染的疫苗组合物。疫苗组合物包含至少一种有效剂量的猪圆环病毒2型抗原和至少一种有效剂量的猪流感病毒抗原及佐剂。所述疫苗组合物可用于预防和治疗猪圆环病毒2型相关疾病和猪流感病毒病。
【专利说明】含有猪圆环病毒2型抗原与猪流感抗原的疫苗组合物
【技术领域】[0001]本发明涉及一种猪用疫苗，具体涉及一种同时抵抗猪圆环病毒2型(Porcinecircovirus type 2，PCV2)和猪流感病毒(Swine influenza virus, SIV)感染的疫苗。
【背景技术】
[0002]猪圆环病毒(Porcine circovirus, PCV)是迄今发现的一种最小的动物病毒。现已知PCV有两个血清型，即PCVl和PCV2。PCVl为非致病性的病毒。PCV2为致病性的病毒，它是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原。PMWS的临床特征有消瘦、皮肤苍白、呼吸困难、腹泻、黄疽等。病理变化可见全身淋巴结肿大，特别是腹股沟淋巴结肿大可达5~10倍；肺主要呈弥散性、间质性肺炎变化，质地硬如橡皮，表面一般呈灰褐色的斑驳状外观；肾的变化较多，可见皮质和髓质散布大小不一的白色坏死灶，由于水肿而导致其呈现蜡样外观；脾轻度肿大；大多数病猪的肝有不同程度的萎缩、纤维化。除PMWS外，猪皮炎与肾病综合征(PDNS)、增生性坏死性肺炎(PNP)、猪呼吸道疾病综合征(PRDC)、繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等疾病亦与PCV2感染有重要关联。PCV2相关的猪病，死亡率达10%~30%不等，较严重的猪场在暴发时死淘率高达40%，给养猪业造成严重的经济损失。
[0003]猪流感(Swine influenza, SI)是当前危害养猪业的一种重要的呼吸系统疾病,主要表现为高热、咳嗽和呼吸困难等症状，是规模化养猪场普遍存在且难以根除的群发性疫病之一。自20世纪90年代中期以来，由猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪肺炎支原体等原发性病原体引起的猪呼吸道疫病综合征(Porcine respiratory disease complex,PRDC)给世界各国养猪业造成了严重的损失。据国内外的文献报道，猪体内的A型流感病毒血清亚型有HlNl、H1N2、H1N7、H3N2、H3N6、H4N6、H5N1和H9N2，国内的猪流感病毒血清亚型主要以H1N1、H1N2、H3N2、H5N1和H9N2为主，而其中又以HlNl和H3N2亚型为主。由于猪流感病毒对呼吸道上皮有高度特异的亲嗜性，易使呼吸道上皮管壁受损，导致胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌、链球菌、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒的继发感染或混合感染，增加疫情的复杂性，给养猪业造成极大的经济损失。此外，对猪流感的控制还具有重要的公共卫生意义。2009年起始于美国和墨西哥的HlNl亚型流感疫情再次证实了 SIV在人流感研究和控制中具有重要地位。SIV的变异速度较快，传统疫苗的研制明显滞后，交叉保护能力有限，且诱导细胞免疫能力差，抗体产生较慢(崔克、江甜，猪流感疫苗研究进展，兽医导刊，2012 (02):53-54.)。
[0004]猪流感跟圆环病毒引起的发病症状基本相同，而猪流感是条件致病的病毒，当两者的混合感染时，导致本领域技术人员很容易把两者的混合感染当做猪圆环治疗和预防，造成了猪流感病毒病没有防治而造成猪的生长性能降低，猪流感和圆环病毒的混合感染也造成猪免疫功能受到影响，极易感染猪瘟、猪蓝耳病等烈性传染病。
[0005]因此，本领域需要能产生保护性免疫应答以同时抵抗PCV2和SIV感染的疫苗，减少所述感染的发生率和/或减轻所述感染的严重性，或预防与所述感染有关的临床表现。
【发明内容】
[0006]为解决现有技术的不足，本发明提供了一种疫苗，以解决现有技术的缺陷。
[0007]本发明的SIV HlNl毒株和SIV H3N2毒株的分离鉴定:
[0008]利用鸡胚分别从河南洛阳地区两猪场发病猪的鼻拭子分离到SIV HlNl亚型病毒(命名为ZJS株)和SIV H3N2亚型病毒(命名为WX株)，通过RT-PCR鉴定、血凝试验和接种动物试验进行了鉴定。
[0009]SIV RT-PCR 鉴定引物
【权利要求】
1.一种猪流感病毒血清型HlNl亚型ZJS株，学名为(Swine influenza virus, HlNlsubtype strain ZJS, Orthomyxoviridae, Influenza virus A),保藏单位:中国典型培养物保藏中心，保藏日期:2012年8月13号，保藏号为CCTCC N0.V201233o
2.一种猪流感病毒HA基因，它编码实质上含有序列号5所示的氨基酸序列的多肽。
3.根据权利要求2所述的HA基因，它具有序列号3所示的碱基序列。
4.一种猪流感病毒HA基因编码的多肽， 它实质上含有序列号5所示的氨基酸序列。
5.一种猪流感病毒血清型H3N2亚型WX株，学名为(Swine influenza virus, H3N2subtype strain WX, Orthomyxoviridae, Influenza virus A),保藏单位:中国典型培养物保藏中心，保藏日期:2012年8月13号，保藏号为CCTCC N0.V201234。
6.一种猪流感病毒HA基因，它编码实质上含有序列号6所示的氨基酸序列的多肽。
7.根据权利要求6所述的HA基因，它具有序列号4所示的碱基序列。
8.一种猪流感病毒HA基因编码的多肽，它实质上含有序列号6所示的氨基酸序列。
9.一种预防或治疗猪流感病毒感染的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包括HlNl亚型ZJS株全病毒抗原IO4-1O8EID5tl/头份和H3N2亚型WX株全病毒抗原IO4-1O8EID5tl/头份。
10.一种预防或治疗猪流感病毒感染的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包括HlNl亚型ZJS株血凝价为7-12Log2的HA抗原和H3N2亚型WX株血凝价为7_12Log2的HA抗原。
11.一种预防或治疗猪圆环病毒2型(PCV2)和猪流感病毒感染的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包含至少一种有效剂量的猪圆环病毒2型抗原和至少一种有效剂量的猪流感病毒抗原，所述猪圆环病毒2型抗原为猪圆环病毒2型灭活全病毒抗原、减毒活病毒抗原，所述猪流感病毒抗原为猪流感病毒血清型HlNl亚型抗原、减毒活病毒抗原和/或猪流感病毒血清型H3N2亚型灭活全病毒抗原、减毒活病毒抗原。
12.根据权利要求11所述的疫苗组合物，其特征在于，所述的猪圆环病毒2型抗原为IO3-1O7TCID5ci/头份的灭活全病毒PCV2SH株，保藏号为CGMCC N0.23890 ;所述的猪流感病毒ZJS株灭活全菌抗原为IO4-1O8EID5tl/头份，所述的猪流感病毒WX株灭活全菌抗原为IO4-1O8EID50/ 头份。
13.一种预防或治疗猪圆环病毒2型(PCV2)和猪流感病毒感染的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包含至少一种有效剂量的猪圆环病毒2型抗原和至少一种有效剂量的猪流感病毒抗原，所述的猪圆环病毒2型抗原为亚单位抗原、重组活载体和DNA载体的抗原，所述猪流感病毒抗原为猪流感病毒血清型HlNl亚型亚单位抗原、重组活载体和DNA载体的抗原和/或猪流感病毒血清型H3N2亚型亚单位抗原、重组活载体和DNA载体的抗原。
14.根据权利要求13所述的疫苗组合物，其特征在于，所述的猪圆环病毒2型抗原为0.5~50μ g/头份的PCV20RF2蛋白；所述猪流感病毒抗原为血凝价7_12Log2的ZJS株HA抗原和/或血凝价7-12Log2的WX株HA抗原。
15.根据权利要求14所述的疫苗组合物，其特征在于，所述PCV20RF2蛋白为含有实质上SEQ N01.核苷酸序列编码的蛋白或编码实质上序列表SEQ N02.氨基酸序列的蛋白。
16.根据权利要求11~15任一项所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗中还包含其它的猪病原体的附加抗原，所述附加抗原选自:猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抗原、猪肺炎支原体抗原、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)抗原、猪伪狂犬病毒(PRV)抗原、猪波氏杆菌抗原、猪多杀性巴氏杆菌抗原、副猪嗜血杆菌抗原及它们的组合。
17.根据权利要求11~15任一项所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物还包含兽医学上可接受的佐剂；优选所述佐剂优选自:氢氧化铝、磷酸铝、皂苷如Quil A和QS-21、油包水乳剂、水包油乳剂、水包油包水乳剂、卡波姆、Montanide Gel ;所述佐剂更优选自5%~20%的Montanide? Gel,所述佐剂最优选为卡波姆的水溶液。
18.一种制备预防或治疗猪圆环病毒2型(PCV2)和猪流感病毒感染的疫苗组合物的方法，所述方法包括将所述PCV2病毒株大量增殖，将所述猪流感病毒ZJS株和WX株大量增殖，分别灭活，加入免疫佐剂，乳化或搅拌均匀制备。
19.根据权利要求CIO任意一项所述的疫苗组合物在预防和治疗猪流感病毒相关疾病中的应用。
20.根据权利要求11-15任意一项所述的疫苗组合物在预防和治疗猪圆环病毒相关疾病和猪流感病毒相关疾病中的应用。
【文档编号】A61P31/20GK103667196SQ201210358160
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2012年9月25日 优先权日:2012年9月25日
【发明者】张许科, 孙进忠, 白朝勇 申请人:普莱柯生物工程股份有限公司