利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留dna的方法
【专利摘要】本发明涉及一种利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留DNA的方法，其特征是：以人用乙型脑炎疫苗收获液为原料，使用中空纤维膜微过滤方法，去除人用乙型脑炎疫苗收获液中的杂蛋白及DNA，收集过滤后的液体经超滤浓缩系统制成人用乙型脑炎疫苗浓缩液，灭活后使用分子筛层析纯化系统对人用乙型脑炎疫苗灭活液进行纯化。本发明在不影响疫苗制品生物活性的前提下，通过中空纤维膜对病毒收获液进行微滤处理，有效去除残留在其中的一定比例的DNA，从而使成品疫苗DNA残留量达到合格标准。
【专利说明】利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留DNA的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种人用乙型脑炎疫苗制品中去除DNA及杂蛋白的方法，特别是涉及一种利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留DNA的方法。本发明提到的中空纤维膜为中空纤维微滤膜，其材质主要成分是PP或PVDF等。
【背景技术】
[0002]人用乙型脑炎疫苗是将乙型脑炎病毒接种于适合的动物细胞上，经繁殖后病毒释放到培养液中，此间一些残余的宿主细胞或其碎片也会随着混在培养液中，经澄清，浓缩灭活，纯化后，提取得到乙型脑炎病毒疫苗原液中，会产生游离的宿主DNA及与抗原蛋白结合的宿主DNA，原液中还含有大量的宿主蛋白，浓缩纯化工艺会将一定比例的游离的DNA除去，但仍会有残余DNA存在，特别是与病毒或抗原蛋白结合的DNA会残留在纯化原液中，如去除不彻底，这部分残留的DNA会随着成品疫苗一起被注入到人体内，可能会在人体内引起不良反应，或具有导致癌症发生的可能。
【发明内容】
[0003]本发明的目的就在于解决现有技术存在的上述不足，给出一种利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留DNA的方法。本发明在不影响疫苗制品生物活性的前提下，通过中空纤维膜对病毒收获液进行微滤处理，有效去除残留在其中的一定比例的DNA，从而使成品疫苗DNA残留量达到合格标准。
[0004]本发明给出的技术方案是:这种利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留DNA的方法，其特点是:以人用乙型脑炎疫苗收获液为原料，使用中空纤维膜微过滤方法，去除人用乙型脑炎疫苗收获液中的杂蛋白及DNA，收集过滤后的液体经超滤浓缩系统制成人用乙型脑炎疫苗浓缩液，灭活后使用分子筛层析纯化系统对人用乙型脑炎疫苗灭活液进行纯化。
[0005]这种利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留DNA的方法，其优选的方案是: [0006]选取一个批次的人用乙型脑炎疫苗病毒收获液，使用中空纤维膜对其进行微过滤处理，中空纤维膜系统为GE公司生产的型号为CFP-6-D-8A，孔径为0.65 μ m，膜面积为
4.0m2，料液进口端压力< 10PSI，料液出口端压力为≥0PSI，料液回流端压力< 3PSI，处理的人用乙型脑炎疫苗病毒收获液，总体积为230L-240L，总工作时间为1.5h_2.0h，整个微过滤处理过程中保证料液温度在18°C -26°C之间。过滤后得到的液体进入到浓缩工艺程序，通过超滤浓缩系统将其制成乙型脑炎疫苗浓缩液，灭活后批号为SA-03，再通过分子筛层析系统纯化，收集到的人用乙型脑炎疫苗纯化液批号为SA-04。
[0007]这种利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留DNA的方法，其优选的方案是:[0008]选取一个批次的人用乙型脑炎疫苗病毒收获液，使用中空纤维膜对其进行微过滤处理，中空纤维膜系统的型号为CFP-6-D-8A，孔径为0.65 μ m,膜面积为4.0m2,料液进口端压力< 10PSI，料液出口端压力为≥OPSI，料液回流端压力< 3PSI，处理的人用乙型脑炎疫苗病毒收获液，总体积为110L-120L，总工作时间为0.8h-l.0h,整个微过滤处理过程中保证料液温度在18°C -26°C之间。过滤后得到的液体进入到浓缩工艺程序，通过超滤浓缩系统将其制成乙型脑炎疫苗浓缩液，灭活后批号为SA-05，再通过分子筛层析系统纯化，收集到的人用乙型脑炎疫苗纯化液批号为SA-06。
[0009]中空纤维膜具有纤维管状的开放式流道结构，无筛网的管状流道结构避免了料液的无规则剧烈湍流，因此具有更低的剪切力，温和的操作可以有效防止病毒表面糖蛋白的脱落和蛋白的聚集，有利于保护大分子病毒的完整性，防止病毒颗粒聚集的同时有助于杂蛋白和DNA的透过和去除。
[0010]疫苗病毒收获液经过过滤处理后，进入到浓缩工艺程序，通过超滤浓缩系统将其制成疫苗病毒浓缩液，在这个过程中，所得到的超滤透过液中会含有一定数量的杂蛋白和DNA.对疫苗病毒收获液，采取不同的过滤方式，对应得到的超滤透过液中DNA的含量会有明显差异。具体检测数据见表3。
[0011]与现有技术相比，本发明的有益效果是:
[0012]1.中空纤维膜具有良好的物理化学耐受性，料液进口耐压大于4bar，可以在50摄氏度以下，耐受lmol/L NaOH溶液彻底清洗消毒，大多数中空纤维膜还可以高压灭菌，寿命长，成本低。
[0013]2.中空纤维膜在对溶液进行分离过程中，不发生质的变化，化学兼容性优越，耗能低，工艺流程简单，易于操作管理。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1SA-02纯化图谱
[0015]是人用乙型脑炎疫苗灭活液(SA-Ol)，直接经分子筛层析纯化后(SA-02)的图谱，图中纵坐标(紫外吸收值mAU)，横坐标(体积ml)。
[0016]图2SA-04纯化图谱
[0017]是人用乙型脑炎疫苗灭活液(SA-03)，先使用中空纤维膜微过滤后，再进行分子筛层析纯化后(SA-04)的图谱，图中纵坐标(紫外吸收值mAU，横坐标(体积ml)。
[0018]图3SA-06纯化图谱
[0019]是人用乙型脑炎疫苗灭活液(SA-05)，先使用中空纤维膜微过滤后，再进行分子筛层析纯化后(SA-06)的图谱，图中纵坐标(紫外吸收值mAU)，横坐标(体积ml)。
【具体实施方式】
[0020]以下实施例详细说明了本发明的技术方案，但不用于限制本发明的保护范围。
[0021]实施例1 [0022]选取一个批次的乙型脑炎疫苗病毒收获液，使用套筒滤器对其进行澄清过滤处理，套筒滤器系统的型号为TPO12TV25TCTFELB，孔径为0.65 μ m，膜面积约为4.0m2，料液进口压力< 10PSI，料液出口压力约为OPSI，处理的人用乙型脑炎疫苗收获液，总体积为230L-240L，总工作时间为1.5h_2.0h,整个澄清过滤处理过程中保证料液温度在18°C_26°C之间，过滤后得到的液体进入到浓缩工艺程序，通过超滤浓缩系统将其制成人用乙型脑炎疫苗浓缩液，灭活后批号为SA-Ol，再通过分子筛层析系统纯化，收集到的人用乙型脑炎疫苗纯化液批号为SA-02。
[0023]浓缩工艺程序中:超滤透过液批号为SC-Ol。
[0024]实施例2
[0025]选取一个批次的人用乙型脑炎疫苗病毒收获液，使用中空纤维膜对其进行微过滤处理，中空纤维膜系统的型号为CFP-6-D-8A，孔径为0.65 μ m，膜面积约为4.0m2，料液进口端压力< 10PSI，料液出口端压力约为0PSI，料液回流端压力< 3PSI，处理的人用乙型脑炎疫苗病毒收获液，总体积为230L-240L，总工作时间为1.5h_2.0h,整个微过滤处理过程中保证料液温度在18°C -26°C之间。过滤后得到的液体进入到浓缩工艺程序，通过超滤浓缩系统将其制成乙型脑炎疫苗浓缩液，灭活后批号为SA-03，再通过分子筛层析系统纯化，收集到的人用乙型脑炎疫苗纯化液批号为SA-04。
[0026]浓缩工艺程序中:超滤透过液批号为SC-02。
[0027]实施例3
[0028]选取一个批次的人用乙型脑炎疫苗病毒收获液，使用中空纤维膜对其进行微过滤处理，中空纤维膜系统的型号为CFP-6-D-8A，孔径为0.65 μ m，膜面积约为4.0m2，料液进口端压力< 10PSI，料 液出口端压力约为0PSI，料液回流端压力< 3PSI，处理的人用乙型脑炎疫苗病毒收获液，总体积为110L-120L，总工作时间为0.8h-l.0h,整个微过滤处理过程中保证料液温度在18°C -26°C之间。过滤后得到的液体进入到浓缩工艺程序，通过超滤浓缩系统将其制成乙型脑炎疫苗浓缩液，灭活后批号为SA-05，再通过分子筛层析系统纯化，收集到的人用乙型脑炎疫苗纯化液批号为SA-06。
[0029]浓缩工艺程序中:超滤透过液批号为SC-03。
[0030]将SA-01、SA-02、SA-03、SA-04、SA-05、SA-06 分别经行抗原含量、DNA 残留量检测。检测数据见表1。
[0031]将SC-01、SC-02、SC_03分别进行DNA含量检测。检测数据详见表3。
[0032]表1: SA-OI~SA-06抗原含量、DNA残留量检测结果。
[0033]
【权利要求】
1.一种利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留DNA的方法，其特征在于:以人用乙型脑炎疫苗收获液为原料，使用中空纤维膜微过滤方法，去除人用乙型脑炎疫苗收获液中的杂蛋白及DNA，收集过滤后的液体经超滤浓缩系统制成人用乙型脑炎疫苗浓缩液，灭活后使用分子筛层析纯化系统对人用乙型脑炎疫苗灭活液进行纯化。
2.按照权利要求1所述的利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留DNA的方法，其特征在于优选的方案是: 选取一个批次的人用乙型脑炎疫苗病毒收获液，使用中空纤维膜对其进行微过滤处理，中空纤维膜系统为GE公司生产的型号为CFP-6-D-8A，孔径为0.65 μ m，，膜面积为4.0m2，料液进口端压力< 10PSI，料液出口端压力为≥0PSI，料液回流端压力< 3PSI，处理的人用乙型脑炎疫苗病毒收获液，总体积为230L-240L，总工作时间为1.5h_2.0h，整个微过滤处理过程中保证料液温度在18°C _26°C之间，过滤后得到的液体进入到浓缩工艺程序，通过超滤浓缩系统将其制成乙型脑炎疫苗浓缩液(灭活后批号为SA-03)，再通过分子筛层析系统纯化，收集到的即为人用乙型脑炎疫苗纯化液(批号为SA-04)。
3.按照权利要求1所述的利用中空纤维膜去除人用乙型脑炎疫苗制品中残留DNA的方法，其特征在于优选的方案是: 选取一个批次的人用乙型脑炎疫苗病毒收获液，使用中空纤维膜对其进行微过滤处理，中空纤维膜系统的型号为CFP-6-D-8A，孔径为0.65μπι，膜面积为4.0m2，料液进口端压力< IOPSI，料液出口端压力为≥OPSI，料液回流端压力< 3PSI，处理的人用乙型脑炎疫苗病毒收获液，总体积为110L-120L，总工作时间为0.8h-l.0h,整个微过滤处理过程中保证料液温度在18°C _26°C之间，过滤后得到的液体进入到浓缩工艺程序，通过超滤浓缩系统将其制成乙型脑炎疫苗浓缩液(灭活后批号为SA-05)，再通过分子筛层析系统纯化，收集到的即为人用乙型脑炎疫苗纯化液(批号为SA-06)。
【文档编号】A61K39/12GK103768589SQ201210398655
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2012年10月18日 优先权日:2012年10月18日
【发明者】高军, 白珠穆, 李旭, 李庆岸, 秦大伟, 石雅丽 申请人:辽宁成大生物股份有限公司