专利名称：一类具酪氨酸酶抑制活性的化合物的制备方法与用途的制作方法
技术领域：
本发明属于中药领域，具体地说涉及从中药桑叶中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的化合物及其制备方法和制药用途。
背景技术：
桑叶，又名“铁扇子”，属于桑科桑属植物桑iMorus alba L.)。桑叶作为药用始载于《神农本草经》，其味苦、性寒，具有补血、疏风、散热、益肝通气、降压利尿等功效。现代大量的药理学研究证明了桑叶具有降血糖、降血压、降血脂、清除自由基、抗衰老、抗炎、抗菌、抗病毒和抗癌等诸多药理作用。桑叶化学成分有黄酮、留体、香豆素、挥发油、生物碱、氨基酸、有机酸、维生素和多糖等。 酪氨酸酶作为黑色素合成的关键酶，其异常过量表达可导致人体的色素沉着性疾病及黑色素瘤等。因此，酪氨酸酶抑制剂可作为黑色素抑制剂应用于医药等领域。本发明涉及从桑叶中提取分离具有显著酪氨酸酶抑制活性的化合物及其制剂，能够有效预防和治疗黑色素合成异常导致的人体色素沉着性疾病、黑色素瘤以及其它需要抑制酪氨酸酶活性的病症。
发明内容
本发明的目的在于提供一类具有酪氨酸酶抑制活性的化合物，是从桑叶中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的六种多酚类化合物，包括(2S)-Euchrenone a7，桑辛素M-6-β-D-批喃葡萄糖苷[Moracin M 6- ( β -D-glucopyranoside) ] , (2S)-7-轻基-8-轻乙基-4’ -甲氧基黄烧-2’ -O- β -D-卩比喃葡萄糖苷[(2S) -7-hydroxyl-8-hydroxyethyl_4’ -methoxylflavane-2' -O- β -D-glucopyranoside], (2S) ~1~ 甲氧基 _8_ 轻乙基-4’ -轻基黄烧-2’ -O- β -D-卩比喃葡萄糖苷[(2S) -7-methoxyl-8-hydroxyethyl-4’ -hydroxyIf Iavane-2’ -O- β -D-glucopyranoside]， (2S) -8-轻乙基-7, 4’ - 二甲氧基黄烧-2’ -O- β -D-批喃葡萄糖苷[(2S) -8-hydroxyethyl-7, 4，-dimethoxylf lavane-2' -O- β -D-glucopyranoside]，桑辛素D (Moracin D)，其结构如下
权利要求
1.一类具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现(I)将桑叶用70%乙醇溶液回流提取，提取物减压浓缩至浸膏；(2)将浸膏混悬于适量水中，用石油醚脱脂，乙酸乙酯萃取；(3)将乙酸乙酯萃取部分用正相硅胶分离，洗脱剂为体积比为100:(Γ 90:10的石油醚和乙酸乙酯，体积比为82:18的石油醚和乙酸乙酯，体积比为78:22飞5:35的石油醚和乙酸乙酯，体积比为60:40的石油醚和乙酸乙酯及乙酸乙酯；(4)分别收集体积比为82:18的石油醚和乙酸乙酯洗脱液、体积比为60:40的石油醚和乙酸乙酯洗脱液及乙酸乙酯洗脱液，浓缩干燥后得样品，用制备液相色谱继续分离得到的化合物；制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱，流动相为水和甲醇，梯度洗脱； 所述化合物包括(2S)-Euchrenone a7，桑辛素D，桑辛素Μ_6_β-D-吡喃葡萄糖苷，(2S)-7-羟基-8-羟乙基-4’-甲氧基黄烷-2’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，(2S)_7_甲氧基-8-羟乙基-4’ -羟基黄烷_2’ -Ο-β-D-吡喃葡萄糖苷。
2.根据权利要求I所述的一类具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制备方法，其特征在于，(2S)-Euchrenone a7化合物通过以下步骤获得步骤(4)收集体积比为60:40的石油醚和乙酸乙酯洗脱液，浓缩干燥后得样品，用制备液相色谱继续分离得到的样品，制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱Agilent Zorbax SB-C18柱250X21.2 mm, 7 μπι,流动相为水A 和甲醇 B，梯度洗脱程序如下0 min,30%B ；20 min,50%B ；27 min,50%B ；28 min,60%B ；35min，60%B ；36 min,70%B ；50 min,70%B ；60 min,80%B ;流速10ml/min，检测波长:210nm，收集48. 5 min的色谱峰，减压回收溶剂，即得。
3.根据权利要求I所述的一类具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制备方法，其特征在于，桑辛素D化合物通过以下步骤获得步骤(4)收集体积比为82:18的石油醚和乙酸乙酯洗脱液，浓缩干燥后得样品，用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱Agilent Zorbax SB-C18柱250X21.2 mm, 7 μ m,流动相为水A和甲醇B,梯度洗脱程序如下0 min,5%B ；5 min,30%B ；27 min,30%B ；40 min,35%B ；41 min,67%B ；65 min,67%B ；80 min,80%B ;流速10ml/min，检测波长210nm，收集72. 5min的色谱峰，减压回收溶齐U，即得。
4.根据权利要求I所述的一类具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制备方法，其特征在于，桑辛素M-6-i3-D-吡喃葡萄糖苷化合物通过以下步骤获得步骤(4)收集乙酸乙酯洗脱液，浓缩干燥后得样品，用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱Agilent Zorbax SB-C18柱250X2L2 mm, 7 μ m,流动相为水A和甲醇B,梯度洗脱程序如下0 min,25%B ；32 min,44%B ；47 min,44%B ；48 min,55%B ；71 min,60%B ；75 min,100%B ;流速10ml/min，检测波长210nm，收集31. 9min的色谱峰，减压回收溶剂，即得。
5.根据权利要求I所述的一类具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制备方法，其特征在于，(2S)-7-羟基-8-羟乙基-4’ -甲氧基黄烷-2，-Ο-β-D-吡喃葡萄糖苷化合物通过以下步骤获得步骤(4)收集乙酸乙酯洗脱液，浓缩干燥后得样品，用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱Agilent Zorbax SB-C18柱250X21.2 mm, 7P m,流动相为水A和甲醇B,梯度洗脱程序如下0 min, 25%B ；32 min,44%B ；47 min, 44%B ；48 min,55%B ；71 min,60%B ；75 min，100%B，流速10ml/min，检测波长210nm ;收集 58. Omin的色谱峰，减压回收溶剂，即得。
6.根据权利要求I所述的一类具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制备方法，其特征在于，(2S)-7-甲氧基-8-羟乙基-4’ -羟基黄烷_2’ -Ο-β-D-吡喃葡萄糖苷化合物通过以下步骤获得步骤(4)收集乙酸乙酯洗脱液，浓缩干燥后得样品，用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱Agilent Zorbax 513_(18柱250X21.2 mm, 7P m,流动相为水A和甲醇B,梯度洗脱程序如下0 min, 25%B ；32 min,44%B ；47 min, 44%B ；·48 min,55%B ；71 min，60%B ；75 min, 100%B ;流速10ml/min,检测波长210nm,收集 64. 7min的色谱峰，减压回收溶剂，即得。
7.根据权利要求I所述方法制备的一类具有酪氨酸酶抑制活性的化合物在制备预防和治疗黑色素合成异常导致的人体色素沉着性疾病、黑色素瘤以及其它需要抑制酪氨酸酶活性的病症药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物由(2S)-Euchrenonea7、桑辛素D、桑辛素M-6-i3-D-卩比喃葡萄糖苷、(2S)-7-羟基-8-羟乙基-4’-甲氧基黄烷-2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖苷、(2S) -7-甲氧基-8-羟乙基-4’ -羟基黄烷_2’ -O- β -D-吡喃葡萄糖苷、(2S)-8-羟乙基-7，4’- 二甲氧基黄烷-2’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷中的一种加入药剂学上可接受的辅料，按照药剂学上记载的制剂制备方法制成。
全文摘要
本发明提供一类具有酪氨酸酶抑制活性的化合物的制备方法，包括六种从桑叶中提取的具有酪氨酸酶抑制活性的多酚类化合物。通过将药材经乙醇水溶液加热提取，浓缩，硅胶柱分离，洗脱，洗脱液浓缩干燥，再用制备液相色谱继续分离，收集溶液，溶液浓缩干燥后得到样品并进行结构鉴定。本发明还提供了从桑叶中分离上述多酚类化合物的方法。本发明提供的六种多酚类化合物具有较强的酪氨酸酶抑制活性，能够有效预防和治疗黑色素合成异常导致的人体色素沉着性疾病、黑色素瘤以及其它需要抑制酪氨酸酶活性的病症，可用于制备治疗此类疾病的药物。
文档编号A61K31/352GK102924421SQ20121043301
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月4日 优先权日2012年11月4日
发明者程翼宇, 张玉峰, 范骁辉, 邵青 申请人:浙江大学