专利名称：制备富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷提取物的方法
技术领域：
本发明涉及中草药提取领域，更确切地说涉及一种以山楂叶提取物为原料制备高含量牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷提取物的方法。
背景技术：
山楂叶富含黄酮类有效成分，对心脑血管疾病具有广泛而确切的治疗作用。山楂叶提取物中牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷含量较高，两者结构和极性相似，是山楂叶提取物的专属性药理活性成分。中国药典2010年版一部中规定，将牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷作为山楂叶提取物的指纹图谱特征指标成分，规定山楂叶总黄酮提取物中的牡荆素鼠李糖苷需达到8. 8%以上。
朱晓新等报道，牡荆素鼠李糖苷可通过稳定心肌细胞膜，减轻其损伤，调节PGs 的表达，降低心肌细胞搏动频率等机制保护心肌细胞缺氧再给氧性损伤{中国天然药物， 2005，I (I)，45 49};目前，山楂叶总黄酮制剂已作为治疗心血管药物上市，国内外对山楂叶黄酮类的药理活性及制剂研究还在不断深入，希望从中再开发新药或保健食品，如牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷等为主要原料水解获得的牡荆素作为中药一类新药正在进行开发，开发剂型为注射剂，处于申请临床试验阶段。牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖作为主要有效成分，其水溶性很好，较之其水解产物牡荆素的难溶性，开发注射剂具有明显优势。要进行上述深入开发与研究，需大量的、含高浓度牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的山楂叶提取物及牡荆素鼠李糖苷、牡荆素葡萄糖苷单体化合物。
然而，山楂叶提取物中组分复杂，包含多种黄酮类、有机酸类成分及未知杂质，与牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷极性相近的成分很多，且牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷属极性较大的成分，无论是对这两个成分的分离或富集均存在很大困难，目前市售山楂叶提取物中的牡荆素鼠李糖苷均低于20%，牡荆素葡萄糖苷低于10%。
专利号为ZL03102024. O、名称为“一种用于治疗心血管疾病的山楂叶注射剂”的发明专利，公开了牡荆素鼠李糖苷的含量为30 50%的山楂叶提取物，其制备方法为山楂叶用乙醇提取，经大孔吸附树脂处理，再用醋酸乙酯萃取，余液经正丁醇萃取，正丁醇液回收溶剂后干燥而成。该方法存在制备方法复杂，需要同时使用大量的醋酸乙酯和正丁醇，成本较闻。发明内容
为了解决现有技术中山楂叶提取物牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷含量较低， 制备方法复杂，有机溶剂使用量大的问题，本发明提供一种制备富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷提取物的方法。
本发明另一目的是提供富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的山楂叶提取物在制备药物组合物、牡荆素鼠李糖苷单体、牡荆素葡萄糖苷单体或牡荆素中的应用。
本发明的目的采用如下技术方案实现。
制备富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷提取物的方法，其中牡荆素鼠李糖苷的质量百分数为30% 55%，牡荆素葡萄糖苷的质量百分数为10% 35%，该制备方法包括以下步骤a.将山楂叶粗提取物的水溶液，过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱，首先用水洗脱杂质，然后用溶剂A洗脱杂质，最后用含有碳酸氢钠或碳酸氢钾的溶剂A洗脱目标成分并收集洗脱液；所述溶剂A为质量百分比浓度为3% 30%的亲水性有机溶剂的水溶液；b.将步骤a收集的洗脱液用酸调节pH至6 7.5，除去亲水性有机溶剂，获得无有机溶剂的洗脱液；C、将步骤b所述无有机溶剂的洗脱液用正丁醇或异丁醇萃取目标成分，分取正丁醇或异丁醇层，回收溶剂，干燥后即得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物；或者将步骤b所述无有机溶剂的洗脱液过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱，用水洗脱盐，然后用溶剂B 洗脱目标成分并收集洗脱液，回收洗脱液，干燥后即得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物；所述溶剂B中亲水性有机溶剂质量百分数为30 100%，水的质量百分数为 O 70%。
所述山楂叶粗提取物为山楂叶水提取溶液、水提取湿浸膏、水提取干浸膏、醇提取湿浸膏或醇提取干浸膏；或它们进一步经大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱纯化后的总黄酮湿浸膏或总黄酮干浸膏。
所述亲水性有机溶剂为乙醇、甲醇、正丙醇、异丙醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃中的一种或两种以上的混合溶剂。
步骤a中所述含有碳酸氢钠的溶剂A中碳酸氢钠的浓度为2 80g/L，所述含有碳酸氢钾的溶剂A中碳酸氢钾的浓度为2 250 g/L。
所述大孔吸附树脂为非极性或弱极性的树脂。
所述大孔吸附树脂的型号为D101、AB-8、HPD-100、HPD-400和X-5。
上述方法所得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物在制备药物组合物、牡荆素鼠李糖苷单体、牡荆素葡萄糖苷单体或牡荆素中的应用。
本发明的有益效果I、因牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷同时含有7，4'两个羟基，属于酸性相对较强的黄酮，可与碳酸氢钠或碳酸氢钾成盐，成盐后极性增加。若采用大孔吸附树脂或聚酰胺处理，先用水洗除杂质、再用低浓度，3 30%的乙醇洗脱除杂质,最后可用低浓度,3 30%的乙醇，加入碳酸氢钠或碳酸氢钾，制成碱性溶液洗脱，牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷即可与碳酸氢钠或碳酸氢钾成盐，极性变大，可被洗脱，而极性相近、无法成盐的杂质仍保留于大孔吸附树脂或聚酰胺柱，故使目标成分与杂质达到了很好的分离，从而实现牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷高浓度的富集。实验还发现，用碳酸氢钠或碳酸氢钾的水溶液无法直接将牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷从大孔吸附树脂或聚酰胺柱洗脱，必须加入一定量的亲水性有机溶剂，当亲水性有机溶剂质量百分比大于3%时即可，但超过30%时，可同时将杂质洗脱。该方法除杂效果好，产品纯度高，所得提取物，牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷含量高，杂质明显简化，主要为少量酸性较强的黄酮类杂质；如将其进一步采用色谱分离等方法制备牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷单体化合物，由于杂质量少，易于结晶， 分离过程明显简化。相对比，若从山楂叶粗提物或总黄酮作为起始原料制备该两单体化合物，则提取分离步骤相当复杂，杂质干扰严重，难于分离。本发明的提取物也可作为酸水解制备牡荆素的原料应用。酸水解后杂质量少，易于处理。如，将所得提取物水液，酸水解后， 析出黄色固体，滤出固体用乙醇结晶与重结晶，即可获得纯度大于99%的牡荆素。
2、本发明采用的大孔吸附树脂或聚酰胺为常用材料，可反复使用，所用有机溶剂可反复回收利用，制备成本较低；3、本发明工艺路线简化，易操作，比较容易实现从实验室小量制备到工业化批量生产的转换。
4.本发明制备的富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的山楂叶提取物，其牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的含量很高，经高效液相色谱仪检测，牡荆素鼠李糖苷含量达309Γ55%，牡荆素葡萄糖苷含量达109Γ35%，可用于制备药物组合物、牡荆素鼠李糖苷单体、牡荆素葡萄糖苷单体或牡荆素。
具体实施方式
以下是提供最佳实施例对本发明作进一步的说明，但并非限制本发明。
本发明制备的富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物，采用高效液相色谱仪检测牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的含量。具体条件为紫外检测器，检测波长 330nm;C18-0DS柱；流动相为四氢呋喃-甲醇-乙腈-乙酸-水(38 3 3 4 152);流速I.Oml/min ;样品进样浓度约O. lmg/ml，进样量为10 μ，采用外标法进行定量分析。
下述各实施例中如果没有特别说明，浓度均指质量百分比浓度。
下述实施例中使用的DlOl大孔吸附树脂、Χ-5大孔吸附树脂和ΑΒ-8大孔吸附树脂生产商为南开大学化工厂；HPD-100大孔吸附树脂、和HPD-400大孔吸附树脂生产商为沧州宝恩吸附材料科技有限公司；聚酰胺(30 60目)生产商为台州市路桥四甲生化塑料厂。
实施例I取山楂叶1kg，加水煎煮2次，第I次加10倍量水，第2次6倍量水，每次I小时,所得提取液过滤后，得到山楂叶粗提取物的水溶液，上聚酰胺柱吸附，先用10倍柱体积的水洗除杂质。再用浓度为5%、10%和20%的乙醇水溶液依次洗脱杂质，每次用量均为5倍柱体积。 继以含有10g/L碳酸氢钠的10%乙醇水溶液洗脱目标成分，洗脱剂用量为10倍柱体积，收集洗脱液。
将洗脱液用盐酸调节pH至7，回收乙醇至无醇味，获得500ml无有机溶剂的洗脱液。
将无有机溶剂的洗脱液，用正丁醇萃取3次，每次萃取过程中正丁醇的用量为 500ml，分取正丁醇层，回收正丁醇，干燥，得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物9. 2g。经高效液相检测，其中牡荆素鼠李糖苷质量分数为44. 1%，牡荆素葡萄糖苷质量分数为21. 4%。
实施例2取山楂叶1kg，加60%乙醇水溶液回流提取2次，第I次加8倍量，第2次6倍量，每次 I小时，所得提取液过滤，回收乙醇至无醇味，用水稀释得到山楂叶粗提取物的水溶液，上 DlOl大孔吸附树脂柱吸附，先用10倍柱体积的水洗除杂质。再用5%、15%、30%的乙醇水溶液依次洗脱杂质，每次乙醇水溶液用量为5倍柱体积。继以含5g/L碳酸氢钾的15%乙醇水溶液洗脱目标成分，洗脱剂用量为8倍量柱体积，收集洗脱液。
将洗脱液用硫酸调节pH为6. 5，回收乙醇至无醇味，得到无有机溶剂的洗脱液。
将无有机溶剂的洗脱液用水稀释为澄清水溶液，上DlOl大孔吸附树脂柱吸附，水洗至无硫酸钾流出，然后用95%乙醇水溶液解吸附完全，收集洗脱液，除去乙醇并浓缩成稠膏，干燥，得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物9. Sg。经高效液相检测，其中牡荆素鼠李糖苷质量分数为48. 6%,牡荆素葡萄糖苷质量分数为23. 5%。
实施例3取市售山楂叶水提取物(经高效液相检测，其中牡荆素鼠李糖苷含量I. 6%，牡荆素葡萄糖苷含量O. 7%) 200g，溶于2000ml水，过滤，制成澄清的山楂叶粗提取物的水溶液，上AB-8 大孔吸附树脂柱吸附，先用10倍量柱体积的水洗除杂质。配制混合溶剂，将正丙醇和乙醇按照体积比I :1混合。用5%混合溶剂的水溶液10倍柱体积、30%混合溶剂的水溶液5倍量柱体积依次洗脱杂质。继以含5g/L碳酸氢钠的20%混合溶剂的水溶液洗脱目标成分,洗脱剂用量为8倍量柱体积，收集碱性洗脱液。
用盐酸调节洗脱液的pH为7，回收正丙醇和乙醇，得到体积为2000ml无有机溶剂的洗脱液。
将无有机溶剂的洗脱液上AB-8大孔吸附树脂柱吸附，用水洗至无氯化钠流出，再用无水乙醇解吸完全，收集洗脱液，回收乙醇至稠浸膏，干燥，得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物6. 9g。经高效液相检测,其中牡荆素鼠李糖苷质量分数为42. 9%,牡荆素葡萄糖苷的质量分数为含量18. 6%。
实施例4取市售山楂叶醇提取物(经高效液相检测，其中牡荆素鼠李糖苷含量3. 7%，牡荆素葡萄糖苷含量I. 5%) 200g，溶于3000ml水，过滤，制成澄清的山楂叶粗提取物的水溶液，上聚酰胺柱吸附，先用10倍量柱体积的水洗除杂质，再用10倍柱体积10%甲醇水溶液、5倍量柱体积20%甲醇水溶液洗脱杂质。继以含50g/L碳酸氢钾的10%甲醇水溶液洗脱目标成分，洗脱剂用量为10倍量柱体积，收集洗脱液。
将收集的洗脱液，用盐酸调节pH为7. 5，回收甲醇，得到2000ml无有机溶剂的洗脱液。
将无有机溶剂的洗脱液，上聚酰胺柱吸附，用水洗至无氯化钾流出，再用80%的甲醇水溶液解吸，收集洗脱液，回收甲醇并浓缩至稠浸膏，干燥，得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物12. Sg。经高效液相检测，提取物中牡荆素鼠李糖苷质量分数为 52. 2%，牡荆素葡萄糖苷质量分数为20. 8%。
实施例5取市售山楂叶水提取物(经高效液相检测,其中牡荆素鼠李糖苷含量1. 6 %,牡荆素葡萄糖苷含量O. 7%) 200g，溶于2000ml水，过滤，制成澄清的山楂叶粗提取物的水溶液，上 HPD-100大孔吸附树脂柱吸附，先用10倍量柱体积的水洗除杂质，再用10%、20%、30%的丙酮水溶液各5倍量柱体积依次洗脱杂质，继以含150g/L碳酸氢钾的5%丙酮水溶液洗脱目标组分，洗脱剂用量为12倍量柱体积，收集碱性洗脱液。
将收集的洗脱液用醋酸调节pH=6，合并调节pH值后的洗脱液，回收丙酮，浓缩得到2000ml无有机溶剂的洗脱液。
将无有机溶剂的洗脱液上HPD-100大孔吸附树脂柱吸附，用水洗至无钾盐流出， 再用60%的丙酮水溶液解吸至流出液无色，收集洗脱液，回收丙酮至稠浸膏，干燥，得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物5. 5g。经高效液相检测,提取物中牡荆素鼠李糖苷质量分数为47. 7%，牡荆素葡萄糖苷质量分数为20. 5%。
实施例6取市售山楂叶醇提取物(经高效液相检测，其中牡荆素鼠李糖苷含量3. 7%，牡荆素葡萄糖苷含量I. 5%) 200g，溶于3000ml水，过滤，制成澄清的山楂叶粗提取物的水溶液，上X_5 大孔吸附树脂柱吸附，先用10倍量柱体积的水洗除杂质，再用5%异丙醇水溶液10倍柱体积、20%异丙醇水溶液5倍量柱体积洗脱杂质。继以含40g/L碳酸氢钠的8%异丙醇水溶液洗脱目标组分，洗脱剂用量为12倍量柱体积，收集碱性洗脱液。
将收集的碱性洗脱液用磷酸调节洗脱液pH=7. 5，回收异丙醇，浓缩得2000ml无有机溶剂的洗脱液。
将无有机溶剂的洗脱液，上聚酰胺柱吸附，用水洗脱至无钠盐流出，再用60%异丙醇水溶液解吸完全，收集洗脱液，回收异丙醇至稠浸膏，干燥，得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物14. 9g。经高效液相检测，提取物中牡荆素鼠李糖苷质量分数 43. 9%，牡荆素葡萄糖苷质量分数17. 4%。
实施例7取市售山楂叶总黄酮提取物(经高效液相检测，其中牡荆素鼠李糖苷含量9. 2%，牡荆素葡萄糖苷含量5. 4%) 200g，溶于5000ml水，过滤，制成澄清的山楂叶粗提取物的水溶液，上聚酰胺柱吸附，先用10倍量柱体积的水洗除杂质,再用10%乙腈水溶液10倍柱体积、20%乙腈水溶液5倍量柱体积洗脱杂质，继以含20g/L碳酸氢钠的10%乙腈水溶液洗脱目标组分， 洗脱剂用量为10倍量柱体积，收集碱性洗脱液。
将收集的洗脱液用盐酸调节pH=7，回收乙腈并浓缩至1000ml，得到无有机溶剂的洗脱液。
将无有机溶剂的洗脱液用异丁醇萃取2次，每次萃取过程中异丁醇的用量为 1500ml，合并异丁醇层并回收溶剂至稠浸膏，干燥，得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物31. 6g。经高效液相检测，提取物中牡荆素鼠李糖苷质量分数51. 3%，牡荆素葡萄糖苷质量分数29. 4%。
实施例8取市售山楂叶水提取物(经高效液相检测,其中牡荆素鼠李糖苷含量1. 6 %,牡荆素葡萄糖苷含量O. 7%) 200g，溶于2000ml水，过滤，制成澄清的山楂叶粗提取物的水溶液，上 HPD-400大孔吸附树脂柱吸附，先用10倍量柱体积的水洗除杂质。将甲醇、乙醇和异丙醇按照体积比I ;1 :1混合配制混合溶剂。用水洗脱后，再用5%混合溶剂水溶液10倍柱体积、 25%混合溶剂水溶液5倍量柱体积洗脱杂质，继以含30g/L碳酸氢钾的10%混合溶剂水溶液洗脱目标组分，洗脱剂用量为10倍量柱体积，收集碱性洗脱液。
将收集的碱性洗脱液用盐酸调节pH=7，除去溶剂并浓缩至2000ml，获得无有机溶剂的洗脱液。
将无有机溶剂的洗脱液，上聚酰胺柱吸附，用水洗至无氯化钾流出，再用80%混合溶剂水溶液解吸完全，收集洗脱液，回收混合溶剂并浓缩成稠浸膏，干燥，得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物7. 6g。经高效液相检测，提取物中牡荆素鼠李糖苷质量分数38. 8%，牡荆素葡萄糖苷质量分数16. 1%。
实施例9取市售山楂叶总黄酮提取物(经高效液相检测，其中牡荆素鼠李糖苷含量9. 2%，牡荆素葡萄糖苷含量5. 4%) 200g，溶于5000ml水，过滤，制成澄清的山楂叶粗提取物的水溶液，上 AB-8大孔吸附树脂柱吸附，先用10倍量柱体积的水洗除杂质，再用5%四氢呋喃水溶液10 倍柱体积、20%四氢呋喃水溶液5倍量柱体积洗脱杂质。继以含10g/L碳酸氢钠的3%、5%、 10%四氢呋喃水溶液依次洗脱目标组分,洗脱剂用量各为5倍量柱体积，收集碱性洗脱液。
将收集的洗脱液用盐酸调节pH=7，回收四氢呋喃并浓缩至1000ml，获得无有机溶剂的洗脱液。
将无有机溶剂的洗脱液用正丁醇萃取2次，每次正丁醇的用量为2000ml，回收正丁醇层、除去正丁醇至稠浸膏，干燥，得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物 32. 0g。经高效液相检测，提取物中牡荆素鼠李糖苷质量分数49. 6%，牡荆素葡萄糖苷质量分数 28. 8%ο实施例10取市售山楂叶总黄酮提取物(经高效液相检测，其中牡荆素鼠李糖苷含量11. 2%，牡荆素葡萄糖苷含量5. 8 %) 100g，溶于3000ml水，过滤，制成澄清的山楂叶粗提取物的水溶液， 上DlOl大孔吸附树脂柱吸附，先用10倍量柱体积的水洗除杂质，再用5%乙醇水溶液10倍柱体积、25%乙醇水溶液5倍量柱体积洗脱杂质。继以含20g/L碳酸氢钾的15%乙醇水溶液洗脱目标组分，洗脱剂用量为10倍量柱体积，收集碱性的洗脱液。
将收集的洗脱液用盐酸调节pH=7，回收乙醇并浓缩至1000ml，获得无有机溶剂的洗脱液。
将无有机溶剂的洗脱液，用正丁醇萃取3次，每次萃取过程中正丁醇的用量为 1000ml，合并正丁醇层，除去有机溶剂得到稠浸膏，干燥，得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物18. 6g。经高效液相检测，提取物中牡荆素鼠李糖苷质量分数52. 3%，牡荆素葡萄糖苷质量分数26. 9%。
实施例11取实施例7制备的富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷提取物20g，其中牡荆素鼠李糖苷含量51.3%，牡荆素葡萄糖苷含量29.4%。用lkg20(T300目的硅胶分离，洗脱剂是体积比为100 : (I 20) : (O. 3 10)的醋酸乙酯、甲水醇和水混合溶剂，梯度洗脱。GF254硅胶薄层色谱检测，展开剂醋酸乙酯-甲醇-水(25 5 :3)，紫外光灯254nm下检视。相同流份合并，浓缩，析晶，乙醇重结晶，得牡荆素鼠李糖苷3. 5g，纯度95. 6%。牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷交叉混合组分再用600g20(T300目的硅胶按上述条件再分离，又获得牡荆素鼠李糖苷I. 6g，纯度96. 9%，牡荆素葡萄糖苷I. 9g，纯度95. 3%。
相对比，取市售山楂叶总黄酮提取物(经高效液相检测，其中牡荆素鼠李糖苷含量11.2%，牡荆素葡萄糖苷含量5.8%) 20g，用lkg20(T300目硅胶，同上述色谱条件分离，第一次未分离出牡荆素鼠李糖苷或牡荆素葡萄糖苷纯品，仅可达到初步分离除杂，获得牡荆素鼠李糖苷或牡荆素葡萄糖苷混合物，且仍含有较多杂质，将所得的牡荆素鼠李糖苷或牡荆素葡萄糖苷混合物再用lkg20(T300目硅胶，同上述色谱条件再分离一次，仅获得220mg牡荆素鼠李糖苷，纯度94. 4%，未分离获得牡荆素葡萄糖苷纯品。
实施例12取实施例10制备的富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的山楂叶提取物10g，其中牡荆素鼠李糖苷质量分数为52. 3%，牡荆素葡萄糖苷质量分数26. 9%，加入200ml浓度为5% 的盐酸溶解，80°C水解2小时，析出黄色沉淀，滤出沉淀，水洗至洗出液呈中性，用乙醇加热溶解后结晶并重结晶,得牡荆素3. 2g,纯度为99. 2%。
权利要求
1.制备富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷提取物的方法，其中牡荆素鼠李糖苷的质量百分数为30% 55%，牡荆素葡萄糖苷的质量百分数为10% 35%，该制备方法包括以下步骤 a.将山楂叶粗提取物的水溶液，过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱，首先用水洗脱杂质，然后用溶剂A洗脱杂质，最后用含有碳酸氢钠或碳酸氢钾的溶剂A洗脱目标成分并收集洗脱液；所述溶剂A为质量百分比浓度为3% 30%的亲水性有机溶剂的水溶液； b.将步骤a收集的洗脱液用酸调节pH至6 7.5，除去亲水性有机溶剂，获得无有机溶剂的洗脱液； C、将步骤b所述无有机溶剂的洗脱液用正丁醇或异丁醇萃取目标成分，分取正丁醇或异丁醇层，回收溶剂，干燥后即得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物；或者将步骤b所述无有机溶剂的洗脱液过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱，用水洗脱盐，然后用溶剂B洗脱目标成分并收集洗脱液，回收洗脱液，干燥后即得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物；所述溶剂B中亲水性有机溶剂质量百分数为30 100%，水的质量百分数为O 70%。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于所述山楂叶粗提取物为山楂叶水提取溶液、水提取湿浸膏、水提取干浸膏、醇提取湿浸膏或醇提取干浸膏；或它们进一步经大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱纯化后的总黄酮湿浸膏或总黄酮干浸膏。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述亲水性有机溶剂为乙醇、甲醇、正丙醇、异丙醇、丙酮、乙腈、四氢呋喃中的一种或两种以上的混合溶剂。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤a中所述含有碳酸氢钠的溶剂A中碳酸氢钠的浓度为2 80g/L，所述含有碳酸氢钾的溶剂A中碳酸氢钾的浓度为2 250 g/L0
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述大孔吸附树脂为非极性或弱极性的树脂。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述大孔吸附树脂的型号为D101、AB-8、HPD-100、HPD-400 和 X-5。
7.权利要求1、2、3、4、5或6所得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物在制备药物组合物、牡荆素鼠李糖苷单体、牡荆素葡萄糖苷单体或牡荆素中的应用。
全文摘要
本发明提供制备富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷提取物的方法，涉及中草药提取领域。该方法包括如下步骤将山楂叶粗提取物的水溶液，过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱，用水洗、溶剂洗、含碳酸氢钠或碳酸氢钾的溶剂A洗脱目标成分并收集洗脱液；将洗脱液调节pH至6～7.5，除去有机溶剂，获得无有机溶剂的洗脱液，用正丁醇或异丁醇萃取目标成分，回收溶剂，干燥；或者过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱，用水洗脱盐，然后用溶剂B洗脱目标成分并收集洗脱液，回收洗脱液，干燥后即得富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷的提取物。采用上述方法得到的提取物中牡荆素鼠李糖苷为30%～55%，牡荆素葡萄糖苷为10%～35%。
文档编号A61K31/7048GK102920727SQ20121044613
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月9日 优先权日2012年11月9日
发明者石荣火, 陈文星, 严燕青, 叶华 申请人:苏州衷中医药科技有限公司