专利名称：穿破石总黄酮在制备保护肝脏药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及穿破石提取物的医药用途，具体涉及一种以穿破石根为原料提取纯化出穿破石总黄酮及其在保护肝脏药物中的应用。
背景技术：
穿破石为桑科柘属植物构棘[MacIuracochinchinensis ( Lour. ) Corner ]或柘树[tri-cusp idata Carr .]的根,又名柘根、川破石、地棉根、拉牛入石、柘藤根等。其味淡、微苦，性凉；具有祛风通络，清热除湿，解毒消肿等功效；主治风湿痹痛、跌打损伤、黄疸、腮腺炎、肺结核、胃和十二指肠溃疡、淋浊、蛊胀、闭经、劳伤咳血、疗疮痈肿。穿破石资源丰富，主要分布在湖南、安徽、浙江、福建、广东、广西等地，为西南地区民间常用药材。穿破石含黄酮苷、酚类、氨基酸、有机酸、糖类、挥发油等成分，其活性成分以黄酮类为主。已从穿破石中分离出的成分有根含柘树异黄酮(cudraisoflavone) A, 3' -O-甲基香豌豆式兀(3，-0-methylorobol),去氢木香内酯(dehydrocostuslactone),亚油酸甲酯(methyllinoIeate), β -谷留醇(β -sitoste-rol)等。在近代临床方面的报道中，穿破石常用于急慢性肝炎的治疗，并有良效。民间用其治疗肝脏疾病的历史悠久，长期经验与用药表明，其药用价值高。近年来对穿破石的研究与开发不足，仅有少数的化学、药理与临床方面的报道，尚未见穿破石总黄酮在急性肝损伤、保肝药物应用方面的研究报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种穿破石总黄酮在制备保护肝脏药物中的应用。本发明提供穿破石总黄酮的一种新用途，用于制备保护肝脏的药物。通过提取其总黄酮部位，制成片剂、胶囊、缓释片、滴丸、冲剂、微粒剂和针剂等。穿破石总黄酮临床推荐 剂量(成人计)0. l-ο. 3g/天，口服，一日三次。并通过动物实验证明其有显著的抗急性肝损伤的作用，可应用于制备保护肝脏的药物。实现本发明目的的技术方案是
穿破石总黄酮在制备保护肝脏药物中的应用，穿破石总黄酮通过如下方法制得
(1)取穿破石干药材，粉碎成粗粉；
(2)取穿破石粗粉，加50%-95%乙醇回流1-3次，过滤，滤液回收乙醇得总浸膏；
(3)浸膏加蒸馏水充分溶解，过滤；
(4)取滤液，调pH4 5，选用DlOl大孔吸附树脂纯化，收集50%_95%醇洗脱液，洗脱液经测定总黄酮纯度达到60. 84%-79. 85%，回收乙醇，减压浓缩，干燥后即得穿破石总黄酮。在穿破石总黄酮提取物中加入相应辅料，可制成片剂、胶囊、缓释片、滴丸、冲剂、微粒剂等，并可进一步纯化制成针剂。本发明的优点是发掘了穿破石总黄酮的药用前景，开拓了新的药用领域。穿破石总黄酮含有多种药用成分，对急性肝损伤具有预防和治疗的作用，疗效确切。
图I为空白组(A)小鼠的病理切片图(X200)；
图2为阳性组(B)小鼠的病理切片图(X200)；
图3为模型组(C)小鼠的病理切片图(X200)；
图4为高剂量组(D)小鼠的病理切片图(X200)；
图5为中剂量组(E)小鼠的病理切片图(X200)；
图6为低剂量组(F)小鼠的病理切片图(X200)。
具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明内容作进一步的说明，但不是对本发明的限定。实施例
提取穿破石总黄酮，取干燥穿破石10kg，粉碎成粗粉，加75%乙醇100 L回流2次，每次
I.5h，合并提取液，过滤，滤液回收乙醇，减压浓缩得总浸膏。浸膏加蒸馏水充分溶解，过滤。取滤液，调PH5，选用DlOl型大孔吸附树脂纯化，上样流速4mL/min，上样后静止12h，先用3倍树脂体积的30%乙醇洗脱，再用4倍树脂体积的70%乙醇洗脱，流速3mL/min，收集70%乙醇洗脱液。70%乙醇洗脱液经硝酸铝络合分光光度法测定总黄酮纯度达到78. 54% ;浓缩洗脱液减压浓缩，干燥后得穿破石总黄酮。在穿破石总黄酮提取物中加入相应辅料，制成片剂、胶囊、缓释片、滴丸、冲剂、微粒剂等，还可进一步纯化制成针剂。穿破石总黄酮临床推荐剂量(成人计)0. 1-0. 3g/天，口服，一日三次。为了验证穿破石总黄酮的药理实验及结果，发明人进行了一系列的动物实验，说明穿破石在防治急性肝损伤中的作用。I.实验材料与试剂
穿破石总黄酮；0. 12% CCl4 ;联苯双酯；AST、ALT、MDA和SOD试剂盒(均来自南京建成生物工程研究所)；昆明种小鼠，普通级，体重(20±2)g，早 兼用，广西医科大学实验动物中心提供。2.实验方法
将60只健康小鼠随机分成6组，每组10只，分别为正常对照组，模型组，联苯双酯阳性组和受试药品高、中、低剂量组。正常对照组和模型组每天灌胃给予注射用水，联苯双酯阳性对照组和受试药的小鼠每天按剂量灌胃给药。在给药的第7天，除正常对照组外，其余各组小鼠均腹腔注射O. 12% CCl4,0. 8ml/100g，禁食不禁水，18h后从眼球取血，离心，分离血清。参照试剂盒的说明测定ALT、AST、MDA和SOD生化指标；取肝组织做病理检查。3.实验结果
模型组与正常对照组比较，ALT、AST、MDA和SOD差异有极显著性(P < O. 01)，说明本实验造模成功。与模型组比较，小鼠口服阳性对照药能非常明显的抑制ALT、AST和MDA活性，显著升高SOD活性{P <0.01, ^ < 0.05)。小鼠口服穿破石总黄酮各剂量组能显著降低小鼠血清中ALT、AST和MDA活性，显著升高SOD活性(P <0.01, ^ < O. 05)，且成量效关系。因此初步判断穿破石总黄酮为保肝护肝的药效活性成分。
表I穿破石总黄酮对CCl4致急性肝损伤小鼠ALT、AST、MDA, SOD的影响广X 土 S，/7 = 10)
组别 I剂量/g.kg-1 lALT/U · L-1lAST/U · Γ1 |MDA/nm · mL-1|S0D/U · mL-1
空白32. 17±13· 99**64.75±20· 12** 一12·30±2·41**_ 79.24± 15.41**
模型287·21±23·42279·65±22·15 一25·23±11·22_27·64±14·52
阳性 _ O. 2089. 23±45· 15**97. 55±20· 32** 一16·23±13·23*_ 83. 45± 19. 33**
高剂 f 0.5117·00±21·31*112.35±28· 30** 一16·36±1·33*_ 83.45±36· 55**
中剂f 0.3181.25±42.21林213.55±35· 44* 一17·58±5·61*_ 58.25±33· 14* 低剂量 |θ·2丨221· 19±30·23*丨217· 42±34· 61* | 7·60±3·58*|51·54±32·54*
与模型组比较ι*Ρ<Λ· 05，林/XO. 01。肝组织病理变化光镜下观察，模型组肝组织损伤严重，镜下见肝小叶结构破坏，小叶内肝细胞出现水肿，部分区域出现明显点灶状坏死和淤血；病变以环中央静脉分布为主。而穿破石总黄酮用药组的肝细胞坏死程度较模型组都有明显改善，肝小叶结构基本正常，细胞索状排列较整齐，肝内淤血及细胞肿胀明显减轻，可见少量点灶状坏死。4.实验总结
通过实验结果表明小鼠口服穿破石总黄酮的各剂量组能显著降低小鼠血清中ALT和AST ( Ρ〈0.01，Ρ〈0.05)。因此表明穿破石总黄酮有保肝降酶的作用；能显著降低MDA含量、提高SOD活性(Ρ〈0.01，Ρ〈0. 05)，说明总黄酮保肝作用机理是通过调节机体的免疫而实现。穿破石总黄酮可成为具有保肝降酶的中药制剂。
权利要求
1.穿破石总黄酮在制备保护肝脏药物中的应用，其特征在于所述穿破石总黄酮是通过如下方法制得 (1)取穿破石干药材，粉碎成粗粉； (2)取穿破石粗粉，加50%-95%乙醇回流1-3次，过滤，滤液回收乙醇得总浸膏； (3)浸膏加蒸馏水充分溶解，过滤； (4)取滤液，调pH4 5，选用DlOl大孔吸附树脂纯化，收集50%_95%醇洗脱液，洗脱液经测定总黄酮纯度达到60. 84%-79. 85%，回收乙醇，减压浓缩，干燥后即得穿破石总黄酮。
2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于制得的药物为片剂、胶囊、缓释片、滴丸、冲剂、微粒剂和针剂。
全文摘要
本发明公开了一种穿破石总黄酮在制备保护肝脏药物中的应用，穿破石总黄酮通过如下方法制得取穿破石干药材，粉碎成粗粉；取粗粉，加50%-95%乙醇回流1-3次，过滤，滤液回收乙醇得总浸膏；浸膏加蒸馏水充分溶解，过滤；取滤液，调pH4~5，选用D101大孔吸附树脂纯化，收集50%-95%醇洗脱液，洗脱液经测定总黄酮纯度达到60.84%-79.85%，回收乙醇，减压浓缩，干燥后即得穿破石总黄酮，制成片剂、胶囊、缓释片、滴丸、冲剂、微粒剂和针剂等。本发明的优点是发掘了穿破石总黄酮的药用前景，开拓了新的药用领域。穿破石总黄酮含有多种药用成分，对急性肝损伤具有预防和治疗的作用，疗效确切。
文档编号A61P1/16GK102920784SQ201210477940
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月22日 优先权日2012年11月22日
发明者段小群, 张可锋, 陈毅飞, 李明 申请人:桂林医学院