专利名称：丹酚酸a组合物用于制备改善脑缺血后的神经功能症状药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种丹酚酸A组合物用于制备改善脑缺血后的神经功能症状药物的用途。
背景技术：
脑血管病又称脑卒中，是由各种病因使供应脑部血液的血管发生病变所致的一种神经系统疾病。其主要病因为脑动脉系统病损(如脑动脉硬化)等原因导致的脑动脉管腔狭窄、血管痉挛、闭塞或破裂、血流减少或完全阻塞，脑部血液循环和功能障碍，脑组织受损而发生的一系列症状。主要包括缺血性和出血性脑血管病。其中(ICVD，又称缺血性卒中)占80 左右。缺血性脑血管病是指局部脑组织包括神经细胞、胶质细胞及联系纤维由于供血障碍发生的变性、坏死或一过性的功能丧失。血管内血栓形成、栓塞、血管狭窄导致的脑动脉阻塞是缺血性脑卒中的主要原因。缺血引起脑神经细胞损伤和死亡的作用机制多样、复杂，缺血性脑卒中(即脑缺血)后，由于脑部缺乏血液和氧气的供应，导致大脑能量代谢失衡，产生一系列病理性损伤，如氧化应激、兴奋性氨基酸毒性、钙超载、炎症反应等，从而导致神经元的大量死亡。它是临床上的常见病、多发病，死亡率及致残率很高，现已经成为世界公认的三大致死疾病之一。临床上治疗主要是溶栓、挽救缺血区域(半暗带)的濒临死亡的神经元和促进损伤后神经功能的恢复。防治缺血性脑血管疾病是目前人类迫切需要解决的医学难题。目前美国FDA仅批准了组织纤溶酶原活化因子(tPA)用于中风后的溶栓治疗，但其治疗时间窗很窄，只有在中风4.5小时内使用才有效；而且还存在出血以及缺血再灌加重脑损伤的危险性。而目前针对 缺血性中风治疗的神经保护药包括钙通道阻断剂如尼莫地平、谷氨酸受体拮抗剂如地佐环平(dizocilPine)、抗氧化剂或自由基清除剂如依达拉奉、NO信号传导通路调节剂芦贝鲁哩(Lubeluzole)以及炎症抑制剂恩莫单抗(enlimomab)等。但它们中有的治疗作用不确切或特异性不强，有的毒副作用较大、耐受性小，有的还处于临床前或临床研究阶段，很难在防治缺血性脑卒中发挥积极影响。因而，研发出快速有效、安全稳定的防治脑缺血药物迫在眉睫。在此领域中医药发挥了不可忽视的积极作用。丹参制剂是我国心脑血管疾病的基本治疗药物，因疗效确切，丹参已成为我国用量最大、销售额最高、制剂生产厂最多，临床剂型最全的中药之一。丹参有效化学成分主要有两大类:脂溶性丹参酮类化合物和水溶性酚酸类化合物。研究表明:丹酚酸类在抗肝脏损伤、抗动脉粥样硬化及细胞凋亡以及改善记忆功能障碍等方面有着显著的活性。其中又以丹酚酸A(Salvianolic acid A)抗氧化活性最强，丹酚
酸A结构如下:
权利要求
1.酚酸A组合物用于制备改善脑缺血后的神经功能症状药物的用途，其中所述的组合物中丹酚酸A94% 97%，紫草酸0.1% 1.5%，迷迭香酸0.1% 1.5%，丹酚酸B0.1% 1.5%，丹酚酸C0.1% 2.0%，所述丹酚酸A组合物采用下制备方法获得: 取丹参药材，切成饮片或粉碎成直径约Imm 5mm颗粒，每次加3 15倍量、45 95°C水温浸提取，同时以10 50转/分速度搅拌，或加3 15倍量水煎煮提取，共提取I 3次，每次提取I 4小时；提取液减压浓缩至相对密度1.0 1.25 (600C )，加入乙醇使含醇量在50% 85%，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至无醇味，得丹参提取液；或者 取丹参药材，切成饮片或粉碎成直径约Imm 5mm颗粒，每次加3 15倍量30% 60%乙醇回流提取，每次提取I 4小时，共提取I 3次；减压回收乙醇并浓缩至无醇味，得丹参提取液； 上述丹参提取液加水稀释至每Iml含丹酚酸BI 30mg，水溶液用碱调pH至3.5 6.5，加入与丹酚酸B摩尔百分比0.1 3%氯化锌作为催化剂，在100 140°C温度加热转化I 6小时； 转化液调PH值至2.5 4.5，静置、离心，上清液减压浓缩至每Iml含丹酚酸Al 10mg，经HPD-100大孔树脂柱层析分离，丹酚酸A上样量与大孔吸附树脂比为1: 35 I: 70，树脂柱径高比为1: 4 1: 30，分别用I 8倍柱体积水、I 10倍柱体积10% 40%乙醇洗脱，除去杂质，再用2 10倍柱体积20% 60%乙醇洗脱，HPLC检测，收集含有丹酚酸A的20% 60%乙醇洗脱部分，减压回收乙醇并浓缩至无醇味； 水溶液浓缩至每Iml含1-1Omg丹酚酸A的溶液，通过聚酰胺层析柱分离，丹酚酸A上样量与聚酰胺比为1: 5 1: 25，树脂柱径高比为1: 4 1: 25，分别用I 10倍柱体积水、5 20倍柱体积20% 60%乙醇溶液洗脱除杂，再用4 15倍柱体积40% 90%乙醇溶液洗脱，收集含有丹酚酸A的40% 90%乙醇溶液部分，减压回收乙醇并浓缩至无醇味水溶液； 水溶液浓缩，调酸pH至2.0 4.0，用水溶液1-8倍量的叔丁基甲基醚，分2 6次萃取，分离有机层，减压回收叔丁基甲基醚，制成每Iml含丹酹酸Alg IOg的萃取液,加入I 3倍量硅胶，搅拌，挥干； 把搅拌样硅胶加到已装好的5 20倍量干硅胶柱上，硅胶柱径高比为1: 4 1: 25，以正戊烷-叔丁基甲基醚为洗脱剂，梯度洗脱，分别用正戊烷-叔丁基甲基醚(4: 6)洗脱6 30倍柱体积，正戊烷-叔丁基甲基醚出:4)洗脱6 30倍柱体积，减压回收洗脱剂，回收有机溶剂后的丹酚酸A加5 20倍量水溶解，微波真空干燥，得所述丹酚酸A组合物。
2.据权利要求1所述的用途，其中所述组合物是由下列重量配比制成:丹酚酸A95% 96%，紫草酸0.1% 1.2%，迷迭香酸0.1% 1.2%，丹酚酸B0.1% 1.2%，丹酚酸 C0.1% 1.5%。
3.据权利要求1或2所述的用途，其中微波真空干燥温度:20-100°C，回差温度1_5°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率1-100KW，干燥10-200分钟。
4.据权利要求3所述的用途，其中微波真空干燥温度:50-85°C，回差温度2-4°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率10-80KW，干燥100-150分钟。
5.据权利要求4所述的用途， 其中微波真空干燥温度:55-80°C，回差温度2-3°C，真空度-0.07Mpa以上，微波功率25-60KW，干燥120-140分钟。
6.据权利要求1 5任一项所述的用途，其特征在于采用高效液相色谱法测定丹酚酸A，紫草酸，迷迭香酸，丹酚酸B，丹酚酸C含量，测定条件如下: 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 检测波长286nm ;流速1.0ml/min ;柱温30°C ； 理论塔板数按丹酚酸A计应不低于10000 ； 对照品溶液的制备精密称取丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C对照品适量至容量瓶中，加甲醇制成混合对照品溶液； 供试品溶液的制备:精密称取样品IOmg到IOOml容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度，即得； 洗脱以甲醇为流动相A，以0.1 0.5%磷酸为流动相B，按下述条件进行梯度洗脱，运行60分钟； O 10分钟时，甲醇的比例由30%升至40%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由70%降至60% ； 10 30分钟时，甲醇的比例由40%升至55%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由50%降至45% ； 30 60分钟时，甲醇的比例由55%升至80%，0.1 0.5%磷酸水溶液的比例由45%降至20%。
测定法:分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10 yl，注入液相色谱仪，测定，计算丹酚酸A 、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C的含量。
全文摘要
本发明涉及一种丹酚酸A组合物用于制备改善脑缺血后的神经功能症状药物的用途，该组合物由丹酚酸A、紫草酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸C组成，其中所述的组合物是由下列重量配比制成丹酚酸A90％～99％，紫草酸0.1％～3％，迷迭香酸0.1％～3％，丹酚酸B0.1％～3％，丹酚酸C0.1％～5％。
文档编号A61K31/216GK103083303SQ201210490339
公开日2013年5月8日 申请日期2012年11月20日 优先权日2012年11月20日
发明者刘地发, 曾发林, 钟阳桂, 蒋春红, 杨小玲, 李志勇 申请人:蒋春红