专利名称：一种石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法
技术领域：
本发明涉及中药领域，特别是一种石胆草中苯こ醇苷和黄酮碳苷的提取方法。
背景技术：
石胆草做为传统中药之一，在《云南中草药》和《昆明民间常用草药》中均有记载“苦，辛，寒。活血解毒，消肿止痛。治疗月经不调，赤白带下，心悸，跌打损伤，刀伤疮痈，顽癣。” “清热解毒，除湿。治湿热痹症，腮腺炎，咽喉肿痛。”在现代，石胆草在河南西部伏牛山一带民间常用于初期上呼吸道感染及治疗妇女月经不调，赤白带下等症。石胆草药材来源于苦苣苔科(Gesneriaceae)旋蒴苣苔 属(Boea Comm, ex Lam)植物猫耳朵(Boeahygrometrica (Bunge) R. Br)的干燥全草。该植物又名牛耳草、还魂草、镇心草等，多生于溪边或山坡的阴湿岩壁上，主要分布在广西、云南、河南等地，夏、秋采集全草入药，石胆草在我国分布广泛，资源丰富，具有很好的开发利用价值。在结构鉴定研究中，发现其含有大量的苯こ醇苷和黄酮碳苷成分。此两类成分极性大，溶解性相似，均具有很强的生物活性有抗菌、抗炎、抗病毒、抗甲状腺、抗氧化、保肝、免疫调节、强心、增强记忆等多种药理作用而备受:关注。事实证明，对石胆草药材的深入研究具有很高的医学意义和经济价值，石胆草主要成分苯こ醇苷和黄酮碳苷提取エ艺研究可以为同类中药的研究提供借鉴和參考，具有很高的技术价值；能够为石胆草药材及同类中药的开发利用及エ业化大生产提供指导和依据，具有广阔的应用前景。而至今还未见有关石胆草中苯こ醇苷和黄酮碳苷提取方法的报道。目前，中药生产中常用的提取方法有煎煮法、回流法、浸溃法、渗漉法等，虽然存在损失较大、周期长、エ序多、提取率不高等缺点，但操作简单、设备便易，目前エ业生产仍被普遍采用，近年来也出现了ー些新提取エ艺技术(超临界流体萃取技术、膜提取分离技木、高速逆流色谱提取技术、空气爆破法、半仿生提取法等)。尽管新エ艺技术能够提高有效成分的收率和纯度，但是其适用范围及操作应用均有很大的局限性，因此，如何从石胆草中提取出苯こ醇苷和黄酮碳苷是迫切要解决的问题。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明之目的就是提供一种石胆草中苯こ醇苷和黄酮碳苷的提取方法，可有效解决从石胆草中提取出苯こ醇苷和黄酮碳苷的问题。本发明解决的技术方案是，取石胆草药材，加入质量浓度为10-95%的こ醇，石胆草药材和こ醇的重量体积比为1:8-16，在50°C -90°C回流提取1-4次，每次提取时间1. 5-3. 5h，过滤，滤液减压回收溶剤，真空干燥得提取物，备用，取大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，大孔吸附树脂用0. 5BV的质量浓度为95%的こ醇浸泡24h(BV为I个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的こ醇以2BV 的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4_5h，用质量浓度为95%的こ醇2BV IT1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以4-6BV 的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以4-6BV h—1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的树脂柱；苯こ醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为0. 06-0.1g mL-1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为1:4-8的预处理后的树脂柱进行动态吸附，浓度为0. 06-0.1g ml/1的提取物的上样量为50-85ml，流速为2-4BV h—1，待吸附完全后，用2-8倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为2-4BV h'除杂后用4-6倍柱体积的质量浓度为10-50%的こ醇以1-3BV h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯こ醇苷和黄酮碳苷；所述的大孔吸附树脂为HPD-100、AB-8、X-5中的ー种；所述的重量体积比是指固体(石胆草药材)以g计，液体(こ醇)以ml计。本发明方法简单、易操作，提取エ艺成本低、效率高。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明的具体实施方式
作详细说明。实施例1取石胆草药材，加入质量浓度为50%的こ醇，石胆草药材和こ醇的重量体积比为1:12，在80°C回流提取2次，每次提取时间2. 5h，过滤，滤液减压回收溶剤，真空干燥得提取物，备用，取HPD-100大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，HPD-100大孔吸附树脂用0. 5BV的质量浓度为95%的こ醇浸泡24h (BV为I个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的こ醇以2BV 的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的こ醇2BV IT1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以5BV 的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以5BV IT1的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的HPD-100树脂柱；苯こ醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为0. OSg mL-1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为I 6的预处理后的HPD-100树脂柱进行动态吸附，浓度为0. 08g mr1的提取物的上样量为65ml，流速为3BV 待吸附完全后，用5倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为3BV h'除杂后用6倍柱体积的质量浓度为30%的こ醇以2BV 的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯こ醇苷和黄酮碳苷。实施例2取石胆草药材，加入质量浓度为10%的こ醇，石胆草药材和こ醇的重量体积比为1:8，在50でで回流提取1次，每次提取时间1. 5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取HPD-100大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，HPD-100大孔吸附树脂用0. 5BV的质量浓度为95%的こ醇浸泡24h (BV为I个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的こ醇以2BV 的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的こ醇2BV IT1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以4BV h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以4BV IT1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的HPD-100树脂柱；苯こ醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为0. 06g mじ1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为I 4的预处理后的HPD-100树脂柱进行动态吸附，浓度为0. 06g mr1的提取物的上样量为85ml，流速为2BV 待吸附完全后，用2倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为2BV h'除杂后用4倍柱体积的质量浓度为10%的こ醇以IBV 的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯こ醇苷和黄酮碳苷。实施例3取石胆草药材，加入质量浓度为95%的こ醇，石胆草药材和こ醇的重量体积比为1:16，在90°C回流提取4次，每次提取时间3. 5h，过滤，滤液减压回收溶剤，真空干燥得提取物，备用，取HPD-100大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，HPD-100大孔吸附树脂用
0.5BV的质量浓度为95%的こ醇浸泡24h (BV为I个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的こ醇以2BV 的流速通过树脂柱，并浸泡树脂5h，用质量浓度为95%的こ醇2BV IT1 的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以6BV 的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以6BV IT1的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的HPD-100树脂柱；苯こ醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为0.1g mL-1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为I 8的预处理后的HPD-100树脂柱进行动态吸附，浓度为0.1g ml/1的提取物的上样量为50ml，流速为4BV h'待吸附完全后，用8倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为4BV h'除杂后用6倍柱体积的质量浓度为50%的こ醇以3BV 的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯こ醇苷和黄酮碳苷。实施例4取石胆草药材，加入质量浓度为30%的こ醇，石胆草药材和こ醇的重量体积比为1:10，在60°C回流提取2次，每次提取时间2h，过滤，滤液减压回收溶剤，真空干燥得提取物，备用，取AB-8大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，AB-8大孔吸附树脂用0. 5BV的质量浓度为95%的こ醇浸泡24h(BV为I个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的こ醇以2BV h—1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的こ醇2BV h—1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以5BV h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以5BV IT1的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的AB-8树脂柱；苯こ醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为0. 07g mじ1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为1:5的预处理后的AB-8树脂柱进行动态吸附，浓度为0. 07g mじ1的提取物的上样量为75ml，流速为3BV h'待吸附完全后，用4倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为3BV r1,除杂后用5倍柱体积的质量浓度为20%的こ醇以2BV .h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯こ醇苷和黄酮碳苷。实施例5取石胆草药材，加入质量浓度为70%的こ醇，石胆草药材和こ醇的重量体积比为1:12，在50°C °C回流提取I次，每次提取时间3h，过滤，滤液减压回收溶剤，真空干燥得提取物，备用，取AB-8大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，AB-8大孔吸附树脂用0. 5BV的质量浓度为95%的こ醇浸泡24h(BV为I个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的こ醇以2BV 的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的こ醇2BV IT1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以4BV h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以4BV IT1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2_4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的AB-8树脂柱；苯こ醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为0. 09g mじ1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为1:7的预处理后的AB-8树脂柱进行动态吸附，浓度为0. 09g !!!じ1的提取物的上样量为60ml，流速为2BV h'待吸附完全后，用6倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为2BV r1,除杂后用4倍柱体积的质量浓度为30%的こ醇以IBV .h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯こ醇苷和黄酮碳苷。实施例6
取石胆草药材，加入质量浓度为80%的こ醇，石胆草药材和こ醇的重量体积比为1:14，在70で回流提取3次，每次提取时间3. 5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取AB-8大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，AB-8大孔吸附树脂用0. 5BV的质量浓度为95%的こ醇浸泡24h(BV为I个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的こ醇以2BV 的流速通过树脂柱，并浸泡树脂5h，用质量浓度为95%的こ醇2BV IT1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以6BV 的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以6BV IT1的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的AB-8树脂柱；苯こ醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为0.1g mL-1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为1:8的预处理后的AB-8树脂柱进行动态吸附，浓度为0.1g ml/1的提取物的上样量为50ml，流速为4BV h'待吸附完全后，用8倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为4BV h'除杂后用6倍柱体积的质量浓度为50%的こ醇以3BV .h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯こ醇苷和黄酮碳苷。本发明采用平行试验结合L9(34)正交试验确立的提取エ艺方法，苯こ醇苷和黄酮碳苷的提取率分别为4. 48±0. 97%,8. 06±1. 03%,该提取方法除去了叶绿素、糖类、蛋白质、植物纤维等大量杂质，为下一步的纯化工艺提供前提，建立了石胆草药材中苯こ醇苷和黄酮碳苷的纯化工艺，经纯化工艺去除杂质后的纯化物中苯こ醇苷和黄酮碳苷的总含量为50-53%，转移率为58-63%。符合中药五类新药有效部位的有效成分含量达到50%以上，转移率也要达到50%以上的要求。通过对3批3份样品的制备，对石胆草中苯こ醇苷和黄酮碳苷成分的提取纯化工艺进行验证，測定结果苯こ醇苷和黄酮碳苷的总含量均达到50%以上，转移率也达到50%以上。本发明エ艺条件稳定、可行。具体实验资料如下石胆草中苯こ醇苷和黄酮碳苷成分的提取エ艺实验I提取方法选取中药生产中常用的提取方法有煎煮法、回流法、浸溃法、渗漉法等，虽然存在损伤较大、周期长、エ序多、提取率不高等缺点，但操作简单、设备便易，目前エ业生产仍被普遍采用。近年来也出现了ー些新提取エ艺技术(超临界流体萃取技术、膜提取分离技术、高速逆流色谱提取技术、空气爆破法、半仿生提取法等)。尽管新エ艺技术能够提高有效成分的收率和纯度，但是其适用范围及操作应用均有很大的局限性，因此，在エ业生产中尚未普及。综合以上因素并结合本实验室的条件，仍将选取常用的提取方法作为石胆草药材的提取方法。通过比较几种常用的提取方法的优缺点及使用范围，并考虑石胆草药材自身的特点，最终选取回流法。2影响回流提取因素考察影响回流提取法的因素包括溶剂浓度(%)、溶剂用量、提取温度(°C )、提取时间(h)、提取次数等，首先以苯こ醇苷和黄酮碳苷成分的得率为考察指标，采用平行实验考察各因素对回流提取的影响。2.1溶剂浓度考察精密称取5份石胆草药材(每份20. Og)，分别加入240mL体积分数分别为10%、30%、50%、70%、95%的こ醇溶液，于60°C恒温水浴加热回流2次，每次2h。提取液浓缩干燥后用紫外分光光度法测定苯こ醇苷和黄酮碳苷含量。表I不同溶剂浓度回流提取苯こ醇苷和黄酮碳苷含量和得率
权利要求
1.一种石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法,其特征在于，取石胆草药材，加入质量浓度为10-95%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:8-16，在501 _90°C回流提取1-4次，每次提取时间1. 5-3. 5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，大孔吸附树脂用O. 5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV · IT1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂 4_5h，用质量浓度为95%的乙醇2BV · IT1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止， 再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以4-6 BV · IT1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以4-6 BV · h—1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为O. 06-0.1g · mL-1的提取物，通过径高比为1:4-8的预处理后的树脂柱进行动态吸附，浓度为O. 06-0.1g · ml/1的提取物的上样量为50-85ml，流速为2-4 BV · h—1，待吸附完全后，用2_8倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为2 -4 BV -^1,除杂后用4-6倍柱体积的质量浓度为10-50%的乙醇以1-3 BV 的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷；所述的大孔吸附树脂为HPD-100、AB-8、X-5中的一种。
2.根据权利要求1所述的石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，其特征在于，取石胆草药材，加入质量浓度为50%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:12，在80°C 回流提取2次，每次提取时间2. 5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取 HPD-100大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，HPD-100大孔吸附树脂用O. 5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV · IT1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的乙醇2BV · 的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以5 BV 的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5% 氢氧化钠溶液以5 BV * h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的HPD-100树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为O. 08g -mr1的提取物，通过径高比为1:6的预处理后的HPD-100树脂柱进行动态吸附，浓度为O. 08g -πιΓ1 的提取物的上样量为65ml，流速为3 BV 士―1，待吸附完全后，用5倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为3BV · 1Γ1，除杂后用6倍柱体积的质量浓度为30%的乙醇以2BV · 的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
3.根据权利要求1所述的石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，其特征在于， 取石胆草药材，加入质量浓度为10%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:8，在 50°C°C回流提取I次，每次提取时间1. 5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取HPD-100大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，HPD-100大孔吸附树脂用O. 5BV 的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV · IT1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的乙醇2BV · 的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以4 BV · h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以4 BV · h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的HPD-100树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为O.06g · ml/1的提取物，通过径高比为1:4的预处理后的HPD-100树脂柱进行动态吸附，浓度为O. 06g · πιΓ1的提取物的上样量为85ml，流速为2 BV · h—1，待吸附完全后，用2倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为2 BV -^1,除杂后用4倍柱体积的质量浓度为10% 的乙醇以I BV · 的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
4.根据权利要求1所述的石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，其特征在于， 取石胆草药材，加入质量浓度为95%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1: 16，在 90°C回流提取4次，每次提取时间3. 5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取HPD-100大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，HPD-100大孔吸附树脂用O. 5BV 的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV · IT1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂5h，用质量浓度为95%的乙醇2BV · 的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以 6 BV · 的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以6 BV · h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的HPD-100树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为O.1g -mr1的提取物，通过径高比为1:8的预处理后的HPD-100树脂柱进行动态吸附，浓度为O.1g -mr1的提取物的上样量为50ml，流速为4 BV ΙΓ1，待吸附完全后，用8倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为4 BV · h—1，除杂后用6倍柱体积的质量浓度为50%的乙醇以3 BV · 的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
5.根据权利要求1所述的石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，其特征在于，取石胆草药材，加入质量浓度为30%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:10，在60°C 回流提取2次，每次提取时间2h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取 AB-8大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，AB-8大孔吸附树脂用O. 5BV的质量浓度为 95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV -h^1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的乙醇2BV 的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以5 BV 的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以5 BV · h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速冼脱至中性， 得预处理后的AB-8树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为O. 07g · mL-1的提取物， 通过径高比为1:5的预处理后的AB-8树脂柱进行动态吸附，浓度为O. 07g · mL-1的提取物的上样量为75ml，流速为3 BV 士―1，待吸附完全后，用4倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为3BV · 1Γ1，除杂后用5倍柱体积的质量浓度为20%的乙醇以2BV · IT1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
6.根据权利要求1所述的石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，其特征在于， 取石胆草药材，加入质量浓度为70%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:12，在 50°C°C回流提取I次，每次提取时间3h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取AB-8大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，AB-8大孔吸附树脂用O. 5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV · IT1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的乙醇2BV · 的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以4 BV的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5% 氢氧化钠溶液以4 BV · h—1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的AB-8树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为O. 09g · mL-1的提取物，通过径高比为1-J的预处理后的AB-8树脂柱进行动态吸附，浓度为O. 09g -mL-1的提取物的上样量为60ml，流速为2 BV 士―1，待吸附完全后，用6倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为2 BV · 1Γ1，除杂后用4倍柱体积的质量浓度为30%的乙醇以I BV · 的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
7.根据权利要求1所述的石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，其特征在于， 取石胆草药材，加入质量浓度为80%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1: 14，在 700C回流提取3次，每次提取时间3. 5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取AB-8大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，AB-8大孔吸附树脂用O. 5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV · IT1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂5h，用质量浓度为95%的乙醇2BV · 的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以6 BV 的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5% 氢氧化钠溶液以6 BV * h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的AB-8树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化取浓度为O.1g · mL-1的提取物，通过径高比为1:8的预处理后的AB-8树脂柱进行动态吸附，浓度为O.1g · ml/1的提取物的上样量为50ml，流速为4 BV 士―1，待吸附完全后，用8倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为4 BV · 1Γ1，除杂后用6倍柱体积的质量浓度为50%的乙醇以3 BV · IT1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
全文摘要
本发明涉及石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，有效解决从石胆草中提取出苯乙醇苷和黄酮碳苷的问题，取石胆草药材，加入乙醇回流提取，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取大孔吸附树脂进行预处理，提取物通过预处理后的树脂柱进行动态吸附，待吸附完全后，用蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，除杂后用乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷；本发明方法简单、易操作，提取工艺成本低、效率高。
文档编号A61P1/16GK103006721SQ20121055050
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月14日 优先权日2012年12月14日
发明者王彦志, 冯卫生, 郑晓珂, 刘媛媛, 王小兰 申请人:河南中医学院