粘度降低的制剂的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种降低包含柠檬酸盐和治疗性蛋白的制剂的粘度的方法以及使用请求保护的方法制得的制剂。本发明还涉及通过本发明任一方法制备的稳定制剂。本发明还涉及包含容器的制品，该容器包含本发明的制剂。
【专利说明】粘度降低的制剂
发明领域
[0001]本发明涉及治疗性蛋白的制剂领域。更具体地，本发明涉及粘度降低的制剂以及制备其的方法。
[0002]发明背景
[0003]许多包含蛋白的药品需要高治疗剂量以实现有效的患者响应。由于治疗性蛋白(包括单克隆抗体)体积大以及易于蛋白分解，为了达到血流中的治疗浓度，需要将其经静脉内或皮下注射给药。在这两种给药途径中，皮下注射对患者更为便利，因为可在家给予靶向皮下给药途径的药品。存在多种在预填充注射器中的已经重新或作为产品线延伸而开发的单克隆抗体药品，用于皮下给药途径。通常，由于皮下空间对给药剂量的体积限制，通过预填充注射器单次推注给药(bolus administration)的方式可给药不超过ImL药品溶液。然而，给药总体积和持续时间由给药溶液中单克隆抗体的浓度控制。为在更小体积内实现输注或推注给药更高剂量，需要溶液中高浓度的单克隆抗体。
[0004]多种浓度范围超过100mg/mL的单克隆抗体以及大多数浓度为更高的200mg/mL的单克隆抗体具有相对高粘度，导致处置单克隆抗体药品溶液的问题。诸如用于浓缩抗体至高水平的切向流动过滤以及无菌过滤的制备エ艺是困难的并导致高粘度溶液的产量损失。当必须达到超过约20牛的カ以使用预填充注射器递送药品的皮下剂量时，还可出现患者或医疗专业人员药品处理和注射能力的问题。显然需要降低粘度的制剂方法，且在制剂开发期间使用降低粘度的赋形剂是一可行的方法。
【发明内容】
[0005]本发明涉及一种降低包含柠檬酸盐和治疗性蛋白的制剂的粘度的方法。
[0006]在一项实施方案中，该方法包括:(a)提供包含柠檬酸盐的制剂；以及(b)将氯化钠添加至该制剂中至约20mM至约150mM的浓度，其中具有氯化钠的制剂的粘度比不具有氯化钠的相同制剂的粘度小。
[0007]在另ー项实施方案中，该方法包括:(a)提供包含柠檬酸盐的制剂；以及(b)将甘氨酸和/或精氨酸添加至该制剂中至浓度约0.4%w/v至约1.l%w/v，其中具有甘氨酸和/或精氨酸的制剂的粘度比不具有甘氨酸和/或精氨酸的相同制剂的粘度小。
[0008]在另ー项实施方案中，该方法包括:(a)提供包含柠檬酸盐的制剂；以及(b)将苯丙氨酸添加至该制剂中至浓度约0.4%w/v至约1.l%w/v,其中具有苯丙氨酸的制剂的粘度比不具有苯丙氨酸的相同制剂的粘度小。
[0009]在另ー项实施方案中，该方法包括:(a)提供包含柠檬酸盐的制剂；以及(b)将酪氨酸添加至该制剂中至浓度约0.001%w/v至约0.005%w/v,其中具有酪氨酸的制剂的粘度比不具有酪氨酸的相同制剂 的粘度小。
[0010]在另ー项实施方案中，该方法包括:(a)提供包含柠檬酸盐的制剂；以及(b)将脯氨酸添加至该制剂中至浓度约4.0%w/v，其中具有脯氨酸的制剂的粘度比不具有脯氨酸的相同制剂的粘度小。[0011 ] 本发明还涉及通过本发明任一方法制备的稳定制剂。
[0012]本发明还涉及包含容器的制品，该容器包含本发明制剂。
[0013]附图简述
[0014]图1.氯化钠:在所有测试浓度下，氯化钠降低了柠檬酸盐缓冲液中的抗IL5mAb的粘度。
[0015]图2.柠檬酸盐缓冲液:除了 0.04%甲硫氨酸以外，所有浓度的直链氨基酸降低了样品的粘度。
[0016]图3.柠檬酸盐:苯丙氨酸、酪氨酸和脯氨酸降低了抗IL5mAb制剂的粘度，而色氨酸未改变抗IL5mAb制剂的粘度。
[0017]发明详述
[0018]应当理解，本发明不限于具体的方法、试剂、化合物、组合物或生物系统，其当然可以变化。还应当理解，本文所用的术语仅为描述具体的实施方案，而不是为了限制。如本说明书及所附权利要求书中使用的，除非内容明确另有所指，単数形式“ー个”、“ー种”和“该”包括所指事物的复数形式。因此，例如，提及“多肽”包括两种或多种多肽的组合等。
[0019]当涉及可测量值如量、持续时间等时，本文所用的“约”是指涵盖从特定数值的±20%或±10%的变体(包括±5%、±1%和±0.1%),这样的变体适于施行所公开的方法。
[0020]除非另有所指，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常所理解的相同的含义。尽管任何与本文所述的方法和材料相似或相当的方法和材料可用于本发明测试的实践中，但优选的材料和方法如本文所述。在描述和请求本发明中，将用到以下术语。·
[0021]本发明涉及一种降低包含柠檬酸盐和治疗性蛋白的制剂的粘度的方法。
[0022]在本发明的示例性实施方案中，所生产的液体多肽组合物表现出理想的特性，如理想的粘度和表面张カ特性。
[0023]术语“表面张力”是指表面下的分子对表面/空气界面的分子施加的吸引力，是由于液体的高分子浓度相对气体的低分子浓度而引起。具有低表面张カ值的液体，如非极性液体，比水更容易流动。通常，表面张カ值以牛/米或达因/厘米表示。
[0024]本文涉及的“动态表面张力”是指表面/空气界面和对表面/表面界面的动态界面张力。有多种可选的方法测量动态表面张力，例如，捕泡表面张カ计(captivebubble surface tensionometry)或搏胡气泡表面张カ计(pulsating bubble surfacetensionometry)。
[0025]术语“粘度”指的是流体在规定温度表现的对流动的内部阻力；是切应力与剪切速率之比。如果I达因/平方厘米的カ导致两个面积为I平方厘米且相距I厘米的平行液体表面以lcm/s的速度相对运动，则液体具有I泊的粘度。I泊=100厘泊。
[0026]当涉及表观粘度，应当理解粘度值取决于进行测量的条件，如所采用的温度、剪切速率和切应力。表观粘度定义为切应カ与应用的剪切速率之比。有多种可选的方法測量表观粘度。例如，粘度可通过合适的锥和板、平行板或其它类型的粘度计或流变仪测试。
[0027]在一些实施方案中，粘度降低的制剂具有小于约50cP、小于约45cP、小于约40cP、小于约35cP、小于约30cP、小于约25cP、小于约20cP或小于约15cP的粘度。
[0028]本文替换使用的“多肽”、“肽”和“蛋白”是指氨基酸残基的聚合物。多肽可以是天然(组织衍生的)起源的、重组的或由原核或真核细胞制品天然表达的，或者是经由合成方法化学生产的。该术语适用于氨基酸聚合物(其中一个或多个氨基酸残基为相应的天然存在的氨基酸的人工化学模拟物)，也适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。氨基酸模拟物是指具有与氨基酸的一般的化学结构不同的结构，但作用的方式与天然存在的氨基酸类似的化学化合物。科学和专利文献充分地描述了非天然残基。ー些示例性的用作天然氨基酸残基模拟物的非天然组合物和指导如下所述。芳香族氨基酸的模拟物可通过由以下替代而生成:例如D-或L-萘基丙氨酸(naphylalanine) ;D_或L-苯基甘氨酸；D_或L-2噻吩基丙氨酸(thieneylalanine) ;D_或L_l, _2，3_，或4-花基丙氨酸(pyreneylalanine) ;D_ 或 L-3 噻吩基丙氨酸(thieneylalanine) ;D_ 或 L-(2_ 吡唳基)-丙氨酸；D-或L- (3-吡啶基)-丙氨酸；D-或L- (2-吡嗪基)-丙氨酸；D-或L- (4-异丙基)-苯基甘氨酸；D- ( 二氟甲基)-苯基甘氨酸；D_ ( 二氟甲基)-苯丙氨酸；D_对-氟-苯丙氨酸；D-或L-对-联苯基苯丙氨酸；K-或L-对-甲氧基-联苯基苯丙氨酸；D-或L-2-吲哚(烷基)丙氨酸；和D-或L-烷基丙氨酸，其中烷基可以为取代或未取代的甲基、乙基、丙基、己基、丁基、戍基、异丙基、异丁基、sec-1sotyl、异戍基,或非酸性氨基酸。非天然氨基酸的芳香族环包括，例如噻唑基、噻吩基(thiophenyl)、吡唑基、苯并咪唑基、萘基、呋喃基、吡咯基，和吡啶基芳香族环。
[0029]本文所用的“肽”包括作为本文具体举例说明的那些肽的保守变体的肽。本文所用的“保守变体”表示使用另ー生物学上相似的残基替代氨基酸残基。保守变体的实例包括但不限于，ー个疏水性残基如异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸、正亮氨酸或甲硫氨酸取代另ー个疏水残基，或一个极性残基取代另ー个极性残基，如精氨酸取代赖氨酸、谷氨酸取代天冬氨酸或谷氨酰胺取代天冬酰胺等。可互相取代的中性亲水性氨基酸包括天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸和苏氨酸。“保守变体”还包括使用取代的氨基酸代替未取代的母体氨基酸，条件是取代的多肽的抗体也与未取代的多肽起免疫反应。这样的保守取代在本发明的肽的种类的定义之内。本文所用的“阳离子的”是指在PH7.4时具有净正电荷的任何肽。肽的生物活性可通过本领域技术人员已知的和本文所述的标准方法测定。
[0030]当关于蛋白使用“重 组”时，表示该蛋白已通过引入异源核酸或蛋白或者改变天然核酸或蛋白进行修饰。
[0031]本文所用的“治疗性蛋白”指的是(例如)研究者或临床医生所寻找的、可向哺乳动物给药以引出组织、系统、动物或人类的生物学或医学应答的任何蛋白和/或多肽。治疗性蛋白可引出多于ー种生物学或医学应答。而术语“治疗有效量”是指与未接受该量的相应的受试者相比，导致(但不限干)疾病、病症或副作用痊愈、预防或减轻，或者疾病或病症进展速率降低的任何量。该术语在其范围内还包括有效增强正常生理功能的量以及在患者中有效地引起增强或有助于第二种药物的治疗作用的生理功能的量。
[0032]本文所鉴定的所有“氨基酸”残基为天然的L-构型。与标准多肽命名一致，氨基酸残基的縮写如下表所示。
[0033]表1.氨基酸缩写
[0034]
【权利要求】
1.一种降低包含柠檬酸盐和治疗性蛋白的制剂的粘度的方法，该方法包括:(a)提供包含柠檬酸盐的制剂；以及(b)将氯化钠添加至该制剂中至约20mM至约150mM的浓度，其中具有氯化钠的制剂的粘度比不具有氯化钠的相同制剂的粘度小。
2.权利要求1的方法，其中氯化钠添加至选自约25mM、约50mM和约IOOmM的浓度。
3.前述权利要求任ー项的方法，其中具有氯化钠的制剂的粘度比不具有氯化钠的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%或至少约 40% o
4.前述权利要求任ー项的方法，其中具有氯化钠的制剂的粘度小于约50cP、小于约45cP、小于约40cP或小于约35cP。
5.一种 降低包含柠檬酸盐和治疗性蛋白的制剂的粘度的方法，该方法包括:(a)提供包含柠檬酸盐的制剂；以及(b)将甘氨酸和/或精氨酸添加至该制剂中至约0.4%w/v至约1.l%w/v的浓度，其中具有甘氨酸和/或精氨酸的制剂的粘度比不具有甘氨酸和/或精氨酸的相同制剂的粘度小。
6.权利要求5的方法，其中甘氨酸和/或精氨酸添加至选自约0.5%w/v和约l%w/v的浓度。
7.权利要求5或6的方法，其中具有甘氨酸和/或精氨酸的制剂的粘度比不具有甘氨酸和/或精氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约40%或至少约50%。
8.权利要求5、6或7的方法，其中具有甘氨酸和/或精氨酸的制剂的粘度小于约50cP、小于约45cP、小于约40cP、小于约35cP、小于约30cP或小于约25cP。
9.一种降低包含柠檬酸盐和治疗性蛋白的制剂的粘度的方法，该方法包括:(a)提供包含柠檬酸盐的制剂；以及(b)将苯丙氨酸添加至该制剂中至约0.4%w/v至约1.l%w/v的浓度，其中具有苯丙氨酸的制剂的粘度比不具有苯丙氨酸的相同制剂的粘度小。
10.权利要求9的方法，其中苯丙氨酸添加至为约0.8%w/v的浓度。
11.权利要求9或10的方法，其中具有苯丙氨酸的制剂的粘度比不具有苯丙氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约40%或至少约50%。
12.权利要求9、10或11的方法，其中具有苯丙氨酸的制剂的粘度小于约50cP、小于约45cP、小于约40cP、小于约35cP、小于约30cP或小于约25cP。
13.一种降低包含柠檬酸盐和治疗性蛋白的制剂的粘度的方法，该方法包括:(a)提供包含柠檬酸盐的制剂；以及(b)将酪氨酸添加至该制剂中至约0.001%w/v至约0.005%w/v的浓度，其中具有酪氨酸的制剂的粘度比不具有酪氨酸的相同制剂的粘度小。
14.权利要求13的方法，其中酪氨酸添加至为约0.004%w/v的浓度。
15.权利要求13或14的方法，其中具有酪氨酸的制剂的粘度比不具有酪氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约40%或至少约50%。
16.权利要求13、14或15的方法，其中具有酪氨酸的制剂的粘度小于约50cP、小于约45cP、小于约40cP、小于约35cP、小于约30cP或小于约25cP。
17.一种降低包含柠檬酸盐和治疗性蛋白的制剂的粘度的方法，该方法包括:(a)提供包含柠檬酸盐的制剂；以及(b)将脯氨酸添加至该制剂中至约4.0%w/v的浓度，其中具有脯氨酸的制剂的粘度比不具有脯氨酸的相同制剂的粘度小。
18.权利要求17的方法，其中具有脯氨酸的制剂的粘度比不具有脯氨酸的制剂的粘度降低至少约5%、至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%或至少约75%。
19.权利要求17或18的方法，其中具有酪氨酸的制剂的粘度小于约50cP、小于约45cP、小于约40cP、小于约35cP、小于约30cP、小于约25cP、小于约20cP或小于约15cP。
20.前述权利要求任ー项的方法，其中该方法进ー步包括測定蛋白制剂的稳定性。
21.前述权利要求任ー项的方法，其中该制剂进ー步包含蔗糖。
22.权利要求21的方法，其中该制剂进ー步包含浓度为约234mM的蔗糖。
23.前述权利要求任ー项的方法，其中该制剂配制为pH约6.0。
24.前述权利要求任ー项的方法，其中该制剂进ー步包含聚山梨酷-80。
25.前述权利要求任ー项的方法，其中该治疗性蛋白是抗原结合多肽。
26.前述权利要求任ー项的方法，其中该抗原结合多肽是抗体。
27.前述权利要求任ー项的方法，其中该抗原结合多肽是免疫球蛋白单一可变域。
28.权利要求25的方法，其中该抗原结合多肽结合至白细胞介素5(IL5)。
29.权利要求28的方法，其·中该抗原结合多肽是抗IL5抗体。
30.权利要求29的方法，其中该抗IL5抗体包括包含SEQID NO:1的重链以及包含SEQID NO:2的轻链。
31.前述权利要求任ー项的方法，其中该治疗性蛋白的存在浓度为至少约150mg/ml、至少约175mg/ml、至少约200mg/ml、至少约225mg/ml、至少约250mg/ml、至少约275mg/ml或至少约300mg/ml。
32.前述权利要求任ー项的方法，其中该治疗性蛋白的存在浓度为至少约150mg/ml至约 300mg/ml。
33.前述权利要求任ー项的方法，其中该制剂是重构制剂。
34.前述权利要求任ー项的方法，其中该制剂是液体药物制剂。
35.前述权利要求任ー项的方法，其中该制剂适于肠胃外给药。
36.前述权利要求任ー项的方法，其中该制剂包含约IOmM至约50mM柠檬酸盐。
37.权利要求36的方法，其中该制剂包含约20mM柠檬酸盐。
38.通过前述权利要求任ー项方法制备的稳定制剂。
39.包含容器的制品，该容器包含权利要求38的制剂。
40.权利要求39的制品，其进ー步包含用于给药该制剂的说明书。
【文档编号】A61K39/00GK103596585SQ201280026486
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2012年4月6日 优先权日:2011年4月7日
【发明者】M.A.蒙克, M.Y.王, K.张 申请人:葛兰素史密斯克莱有限责任公司