免疫原性组合物及使用所述组合物诱导体液和细胞免疫反应的方法

免疫原性组合物及使用所述组合物诱导体液和细胞免疫反应的方法【专利摘要】本发明提供用于诱导受试者的免疫反应的改进的双重免疫策略的组合物和方法，所述免疫反应包括体液免疫反应和细胞免疫反应(均为CD4和CD8T淋巴细胞免疫反应)，从而提供了针对一种或多种抗原的完全适应性免疫反应。所述方法因而用于治疗和/或预防(即，减小发生的可能性或风险)不同疾病、障碍和病况例如癌症和感染性疾病，针对所述疾病的体液免疫反应和细胞免疫反应的诱导是非常期望的和有益的。【专利说明】免疫原性组合物及使用所述组合物诱导体液和细胞免疫反应的方法[0001]相关申请的交叉参考[0002]本申请要求2011年4月8日提交的美国临时申请N0.61/473,660的优先权，将所述美国临时申请通过引用整体并入本申请。[0003]关于序列表的声明[0004]以文本格式代替纸质拷贝提供与本申请相关的序列表，该序列表据此通过引用并入说明书中。包括序列表的文本文件的名称为46441A_SeqListing.txt。该文本文件为163，840字节，创建于2012年4月6日，并且通过EFS-Web以电子形式提交。【
技术领域：
】[0005]本公开内容总体上涉及通过用至少两种组合物免疫受试者以诱导对针免疫原的体液和细胞免疫反应来增强针对免疫原的特异性免疫反应的方法。【
背景技术：
】[0006]宿主的免疫系统提供了用于快速和特异性增强针对病原性微生物的保护反应以及还用于促成恶性肿瘤的排斥的方法。免疫反应通常已被描述为包括体液反应，其中对于抗原是特异性的抗体由分化的B淋巴细胞产生，和细胞介导的反应，其中各种类型的T淋巴细胞通过各种机制消除抗原。例如，能够识别特异性抗原的CD4(也称为CD4+)辅助T细胞可通过释放可溶性介质例如细胞因子以招募免疫系统的额外细胞参与免疫反应来作出反应。CD8(也称为CD8+)细胞毒性T细胞还能够识别特异性抗原并且可结合和破坏或损伤具有抗原的细胞或颗粒。具体地，包括细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应的细胞介导的免疫反应对于消除肿瘤细胞和被微生物例如病毒、细菌或寄生虫感染的细胞可以是特别重要的。[0007]癌症包括广泛的疾病并影响世界上约1/4的个体。CTL反应是有效癌症疫苗的主要特征；有效CD4T细胞的帮助也可能在生产性CD8T细胞活化中起着关键作用，从而提供临床益处。基于自体树突细胞(DC)的疫苗Sipuleucel-T(PR0VENGE?)最近被美国食品和药品管理局(FDA)批准用于治疗转移性、去势抗性前列腺癌，尽管与该治疗相关的存活益处是适中的4.1个月，因此存在对改良的明显需要(参见，例如，Kantoff等人，NewEngl.J.Med.363(5):411(2010))。基于痘病毒载体的疫苗PrOStVac?VF还在II期显示显著的存活益处(参见，例如，Kantoff等人，J.Clin.0ncol.28(7):1099(2010))?活性免疫疗法例如Sipuleucel-T和ProstVac?VF通常比包括目前去势抗性疾病的护理标准的化学治疗方案更好地被耐受(参见，例如，Petrylak等人，N.Engl.J.Med.351(15):1513(2004)；Sylwester等人，J.Exp.Med.202(5):673(2005))。这些临床成功表明免疫反应可被用于癌症背景以提供改善的患者结果和延长的生存期。[0008]关于微生物感染，疟疾、疟疾、结核病、HIV-AIDS和其它病毒感染例如单纯疱疹病毒(HSV)感染(全球生殖器溃疡的首要原因)继续导致全球健康问题。HSV-2流行率以令人担忧的速度在全球日益增加(参见，例如，Corey等人，J.Acquir.1mmuneDefic.Syndr.35:435(2004))。在美国，总体HSV-2血清流行率超过20%，在发展中国家HSV-2血清流行率估计为30%至50%。除了在成人中存在HSV-2感染的巨大负担外，新生儿HSV-2感染的发病率也日益增加。即使当得到治疗时，来自HSV-2感染的新生儿脑炎具有大于15%的死亡率，在HSV-2感染的婴儿当中另有30至50%的存活病例患有神经疾病。与HSV-2流行性相伴随的是HSV-2感染显著增加了HIV-1获得和传播的风险的完全实现。来自非洲的数据显示HSV-2感染可使HIV传播的风险增至多达7倍并且多至一半的新获得的HIV病例由HSV-2感染直接引起(参见，例如，Abu-Raddad等人，PLoS0NE3(5):e2230(2008))。总体上，HIV获得的相对风险使HSV-2-感染的个体增加2倍以上。[0009]尽管广泛地使用药物干预，但在成人和小儿群体中HSV-2的流行率继续日益增加。在感染早期以高剂量给予的抗病毒药疗法可减少HSV传播，但这阻止不了潜伏感染(参见，例如，Corey等人,SexTransm.Dis.12:215(1985))。在最近的研究中，尽管进行了早期干预，但利用伐昔洛韦的连续抑制施用使HSV的传播减少低于50%(参见，例如，Corey等人，N.Engl.J.Med.350:11(2004))。针对抗病毒药物的替代药物例如局部杀微生物剂在临床上未得到证实。由于这些原因，许多主要权威相信接种疫苗是减小HSV-2疾病的健康影响所必需的。[0010]存在对抗感染性疾病微生物例如人免疫缺陷病毒(HIV)和单纯疱疹病毒、疟疾、抗生素抗性细菌的疫苗(包括改进的疫苗)的需要，对于所述感染性疾病微生物，诱导强劲的体液和/或细胞介导的反应对于成功地预防和治疗感染是非常重要的。此外，存在对改善的癌症疫苗效力的相当大的潜能和需要。【
发明内容】[0011]概述[0012]本申请中提供的是免疫原性组合物、这类免疫原性组合物的制剂以及使用所述制剂和组合物诱导对于一种或多种免疫原及相关抗原是特异性的免疫反应的方法。在一个实施方案中，提供了用于诱导受试者的免疫反应的方法，所述方法包括(a)给受试者施用至少一个剂量的包含至少第一免疫原的第一免疫原性组合物，其中至少一种抗原能够诱导对于第一指定抗原是特异性的免疫反应；和(b)给受试者施用至少一个剂量的包含含有编码第一免疫原的核苷酸序列的重组表达载体的第二免疫原性组合物，从而诱导对于第一指定抗原是特异性的免疫反应。在具体实施方案中，(i)第一免疫原性组合物还包含佐剂；(ii)第二组合物还包含佐剂；或(iii)第一组合物和第二组合物的每一种还包含佐剂。在某些实施方案中，在施用第一免疫原性组合物后施用第二免疫原性组合物。在其它某些实施方案中，在施用第一免疫原性组合物之前施用第二免疫原性组合物。在其它某些实施方案中，同时施用第一免疫原性组合物和第二免疫原性组合物。在具体实施方案中，施用至少两个剂量的第一免疫原性组合物或施用至少两个剂量的第二免疫原性组合物。在其它实施方案中，施用(a)2个剂量；(b)3个剂量；(c)4个剂量或(d)5个剂量的第一免疫原性组合物。在另一个实施方案中，当施用两个或更多个剂量时，(a)在施用第二免疫原性组合物之前施用每一个剂量的第一免疫原性组合物；(b)在施用第二免疫原性组合物施用至少一个剂量的第一免疫原性组合物；(C)在施用第二免疫原性组合物的同时施用至少一个剂量的第一免疫原性组合物；(d)在施用第二免疫原性组合物之前施用至少一个剂量的第一免疫原性组合物，并且在施用第二免疫原性组合物之后施用任何剩下剂量的每一个剂量的第一免疫原性组合物；或(e)同时施用每一个剂量的第一组合物与第二组合物。关于这些方法和实施方案的每一个，由第一免疫原诱导的免疫反应包括对于第一指定抗原是特异性的CD4T细胞免疫反应，在某些实施方案中，由第一免疫原诱导的免疫反应包括对于第一指定抗原是特异性的CD8T细胞免疫反应；以及在其它某些实施方案中，由第一免疫原诱导的免疫反应包括对于第一指定抗原是特异性的CD4T细胞免疫反应和CD8T细胞免疫反应。[0013]在上文和本申请中描述的方法的某些实施方案中，第一免疫原性组合物还包含第二免疫原，重组表达载体还包含编码第二免疫原的核苷酸序列，其中第二免疫原诱导对于第二指定抗原是特异性的免疫反应。在某些具体实施方案中，第一指定抗原与第二指定抗原是相同的。在其它某些具体实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是不同的。在上文和本申请中描述的方法的某些其它实施方案中，重组表达载体还包含编码能够诱导对于第二指定抗原是特异性的免疫反应的第二免疫原的核苷酸序列。在某些具体实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是相同的。在其它某些具体实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是不同的。在关于此类方法的具体实施方案中，由第一免疫原诱导的免疫反应包括对于第一指定抗原是特异性的CD4T细胞反应。在关于此类方法的具体实施方案中，由第二免疫原诱导的免疫反应包括对于第二指定抗原是特异性的CD8T细胞反应。[0014]在上文和本申请中描述的具体实施方案并且当一种或多种免疫原性组合物包含佐剂时，佐剂是无毒性脂质A相关佐剂。在某些具体实施方案中，无毒性脂质A相关佐剂是吡喃葡萄糖基脂质A(GLA);在更具体实施方案中，在稳定的水包油乳液中配制GLA。[0015]在上文和本申请中描述的方法的其它实施方案中，第一指定抗原是(a)肿瘤相关抗原或(b)来自选自病毒、细菌、真菌和寄生虫的感染性微生物。在更具体实施方案中，第一指定抗原是选自肾细胞癌抗原、前列腺癌抗原、间皮瘤(mesothelioma)抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原的肿瘤相关抗原。在更具体实施方案中，前列腺癌抗原是前列腺酸性磷酸酶、前列腺特异性抗原、NKX3.1或前列腺特异性膜抗原。在其它具体实施方案中，第一指定抗原来自病毒。在更具体实施方案中，病毒是单纯疱疹病毒-2(HSV-2)。在某些具体实施方案中，第一指定抗原是HSV-2UL19多肽或HSV_2gD多肽。[0016]在上文和本申请中描述的方法的其它具体实施方案中，当诱导对于第一指定和第二指定抗原是特异性的免疫反应时，第一指定抗原和第二指定抗原的每一种是肿瘤相关抗原。在更具体的实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的每一种选自肾细胞癌抗原、前列腺癌抗原、间皮瘤(mesothelioma)抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原。在更具体的实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的每一种是选自前列腺酸性磷酸酶、前列腺特异性抗原、NKX3.1或前列腺特异性膜抗原的前列腺癌抗原。在其它具体实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的每一种是来自选自病毒、细菌、真菌和寄生虫的感染性微生物的抗原。在更具体实施方案中，感染性疾病生物是病毒，其在更具体的实施方案中是单纯疱疹病毒_2(HSV-2)。在某些实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的至少一种是HSV-2UL19多肽，并且第一指定抗原和第二指定抗原的其它抗原是HSV-2gD多肽。[0017]在上文和本申请中描述的方法的其它具体实施方案中，重组表达载体选自慢病毒载体基因组、痘病毒载体基因组、痘苗病毒载体基因组、腺病毒载体基因组、腺病毒相关病毒载体基因组、疱疹病毒载体基因组和a病毒载体基因组。在具体实施方案中，重组表达载体被整合进入载体颗粒，其在某些具体实施方案中将重组表达载体递送至抗原呈递细胞。在具体实施方案中，抗原呈递细胞是树突细胞。在具体实施方案中，载体颗粒是包含慢病毒载体基因组的慢病毒载体颗粒；包含痘病毒载体基因组的痘病毒载体颗粒；包含痘苗病毒载体基因组的痘苗病毒载体颗粒；包含腺病毒载体基因组的腺病毒载体颗粒；包含腺病毒相关病毒载体基因组的腺病毒相关病毒载体颗粒；包含疱疹病毒载体基因组的疱疹病毒载体颗粒；或包含a病毒载体基因组的a病毒载体颗粒。在更具体实施方案中，载体颗粒是包含慢病毒载体基因组的慢病毒载体颗粒。在更具体实施方案中，慢病毒载体颗粒还包括包含辛德比斯病毒E2糖蛋白的包膜，所述糖蛋白包含相较于SEQIDNO:1具有至少一个氨基酸变化的氨基酸序列，其中SEQIDNO:1的残基160不存在或为除谷氨酸外的氨基酸，并且其中E2糖蛋白不是包含辛德比斯病毒E3蛋白的融合蛋白的部分。在更具体的实施方案中，E2糖蛋白结合树突细胞特异性细胞内粘附分子-3-捕捉非整联蛋白(DC-SIGN)。[0018]在本申请一个实施方案中还提供了制剂，在一个实施方案中，所述制剂包含(a)含有至少一种能够诱导对于第一指定抗原是特异性的免疫反应的第一免疫原的第一免疫原性组合物；和(b)包含含有编码第一免疫原的核苷酸序列的重组表达载体的第二免疫原性组合物。在具体实施方案中，由第一免疫原诱导的特异性免疫反应包括对于第一指定抗原是特异性的CD4T细胞反应。在另一个具体实施方案中，由第一免疫原诱导的特异性免疫反应包括对于第一指定抗原是特异性的CD8T细胞反应。在其它具体实施方案中，由第一免疫原诱导的免疫反应包括对于第一指定抗原是特异性的CD4T细胞免疫反应和CD8T细胞免疫反应。在上文和本申请中描述的制剂的另一个实施方案中，这类制剂被提供来用于诱导抗具有(a)第一指定抗原的肿瘤细胞的细胞毒性T淋巴细胞反应。在其它具体实施方案中，上文和本申请中描述的制剂被提供来用于诱导抗具有第一指定抗原的感染性疾病微生物的细胞毒性T淋巴细胞反应。在其它具体实施方案中，上文和本申请中描述的制剂被提供来用于减少包含多个具有肿瘤相关抗原的肿瘤细胞的肿瘤的发生或复发的可能性。在另一个实施方案中，这类制剂被提供来用于预防或治疗由感染性微生物引起的感染。[0019]提供了制剂的另外的实施方案，其中第一免疫原性组合物还包括第二免疫原，并且其中重组表达载体还包括编码第二免疫原的核苷酸序列，其中第二免疫原诱导对于第二指定抗原是特异性的免疫反应。在一个具体实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是相同的。在另一个具体实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是不同的。在上文和本申请中描述的制剂的其它具体实施方案中，重组表达载体还包括编码能够诱导对于第二指定抗原是特异性的免疫反应的第二免疫原的核苷酸序列。在某些具体实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是相同的，在其它具体实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是不同的。在这些实施方案中，由第一免疫原诱导的免疫反应包括对于第一指定抗原是特异性的⑶4T细胞反应。同样地，关于制剂的这些实施方案，由第二免疫原诱导的免疫反应包括对于第二指定抗原是特异性的CD8T细胞反应。[0020]关于上文和本申请中提供的制剂的实施方案，(a)第一免疫原性组合物还包含佐剂，(b)第二免疫原性组合物还包含佐剂；或(C)第一免疫原性组合物和第二免疫原性组合物各自还包含佐剂。在更具体的实施方案中，佐剂是无毒性脂质A相关佐剂。在更具体的实施方案中，佐剂是无毒性脂质A相关佐剂。在更具体的实施方案中，无毒性脂质A相关佐剂是吡喃葡萄糖基脂质A(GLA)，在具体实施方案中，在稳定的水包油乳液中配制所述佐剂。[0021]关于上文和本申请中提供的制剂的实施方案，第一指定抗原是(a)肿瘤相关抗原或(b)来自选自病毒、细菌、真菌和寄生虫的感染性微生物。在具体实施方案中，第一指定抗原是选自肾细胞癌抗原、前列腺癌抗原、间皮瘤抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原的肿瘤相关抗原。在更具体实施方案中，前列腺癌抗原是前列腺酸性磷酸酶、前列腺特异性抗原、NKX3.1或前列腺特异性膜抗原。在其它具体实施方案中，第一指定抗原来自病毒。在更具体实施方案中，病毒是单纯疱疹病毒-2(HSV-2)。在另一个具体实施方案中，第一指定抗原是HSV-2UL19多肽或HSV-2gD多肽。[0022]在上文和本申请中描述的制剂的其它实施方案中，当由制剂诱导的免疫反应包括对于第一指定抗原和第二指定抗原是特异性的免疫反应，第一指定抗原和第二指定抗原的每一种是肿瘤相关抗原。在更具体实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的每一种选自肾细胞癌抗原、前列腺癌抗原、间皮瘤抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原。在又一个更具体实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的每一种是选自前列腺酸性磷酸酶、前列腺特异性抗原、NKX3.1和前列腺特异性膜抗原的前列腺癌抗原。在其它具体实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的每一种是来自选自病毒、细菌、真菌和寄生虫的感染性微生物的抗原。在一个具体实施方案中，感染性疾病生物是病毒。在具体实施方案中，病毒是单纯疱疹病毒-2(HSV-2)。在另一个具体实施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的至少一种是HSV-2UL19多肽并且第一指定抗原和第二指定抗原的另一种是HSV-2gD多肽。[0023]在上文和本申请中描述的制剂的其它实施方案中，重组表达载体选自慢病毒载体基因组、痘病毒载体基因组、痘苗病毒载体基因组、腺病毒载体基因组、腺病毒相关病毒载体基因组、疱疹病毒载体基因组和a病毒载体基因组。在一个具体实施方案中，重组表达载体被整合进入载体颗粒。在另一个具体实施方案中，载体颗粒能够将重组表达载体递送至抗原呈递细胞。在更具体的实施方案中，抗原呈递细胞是树突细胞。在其它具体实施方案中，载体颗粒是包含慢病毒载体基因组的慢病毒载体颗粒；包含痘病毒载体基因组的痘病毒载体颗粒；包含痘苗病毒载体基因组的痘苗病毒载体颗粒；包含腺病毒载体基因组的腺病毒载体颗粒；包含腺病毒相关病毒载体基因组的腺病毒相关病毒载体颗粒；包含疱疹病毒载体基因组的疱疹病毒载体颗粒；或包含a病毒载体基因组的a病毒载体颗粒。在更具体实施方案中，载体颗粒是包含慢病毒载体基因组的慢病毒载体颗粒。在更具体实施方案中，慢病毒载体颗粒还包含含有辛德比斯病毒E2糖蛋白的包膜，所述糖蛋白包含相较于SEQIDNO:1具有至少一个氨基酸变化的氨基酸序列，其中SEQIDN0:1的残基160不存在或为除谷氨酸外的氨基酸，并且其中E2糖蛋白不是包含辛德比斯病毒E3蛋白的融合蛋白的部分。在更具体的实施方案中，E2糖蛋白结合树突细胞特异性细胞内粘附分子-3-捕捉非整联蛋白(DC-SIGN)。[0024]在上文和本申请中描述的制剂的另一个实施方案中，这类制剂被提供来用于诱导抗具有(a)第一指定抗原；(b)第二指定抗原；或(C)第一指定抗原和第二指定抗原的肿瘤细胞的细胞毒性T淋巴细胞反应。在其它具体实施方案中，上文和本申请中描述的制剂被提供用于诱导抗具有(a)第一指定抗原；(b)第二指定抗原；或(C)第一指定抗原和第二指定抗原的细胞毒性T淋巴细胞反应。在其它具体实施方案中，上文和本申请中描述的制剂被提供来用于减少包含多个具有肿瘤相关抗原的肿瘤细胞的肿瘤的发生或复发的可能性。在另一个实施方案中，这类制剂被提供来用于预防或治疗由感染性微生物引起的感染。[0025]如本申请中所用，术语“分离的”意指从其原始环境(例如，如果其是天然存在的，则是天然环境)取出的材料。例如，存在于活的动物中的天然存在的核酸或多肽不是分离的，但与一些或全部存在于天然系统中的共存材料分离的相同核酸或多肽是分离的。这样的核酸可以是载体的部分。可以为载体的部分的核酸可以仍然是分离的，因为核酸不是核酸的天然环境的部分。分离的多肽或蛋白质或其片段可以是组合物的组分，并且仍然是分离的，因为组合物不是多肽的天然环境的部分。术语“基因”意指参与产生多肽链的DNA的区段；基因包括在编码区之前和之后的区域“前导序列和非转录尾区”以及单个编码区段(外显子)之间的间插序列(内含子)。氨基酸可在本申请中按照单字母和三字母代码提及，所述代码在本领域中是共有的教科书知识，从而为本领域技术人员所熟知。本申请中所用的术语“融合多肽”还可与“融合蛋白”互换使用，并且除非明确地另有所指，否则两个术语无意表示具有可区别的性质或特征的分子。[0026]如本申请中和所附权利要求中所用，除非上下文中明确地另有所指，否则单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”以及“该(the)”包括复数形式。因此，例如，提及“一个/一种抗原”包括多个/多种此类抗原，提及“一个/一种细胞”或“该细胞(thecell)”包括提及一个/一种或多个/多种细胞及对于本领域技术人员来说是已知的其等同物(例如，多个/多种细胞)等等。类似地，除非明确地另有所指，否则提及“一个/和一种化合物(acompound)”和“一个/一种组合物(acomposition)”包括多个/多种此类化合物或组合物，和分别提及一个/一种或多个/多种化合物或组合物。当描述或声明方法的步骤，并且步骤被描述为以特定的顺序发生时，如果改写以声明:第二步骤在第一步骤“之后”进行(或执行)，则在第二步骤“之前”(即，在……前)进行(或执行)第一步骤的描述具有相同的含义。当提及数字或数值域时，术语“约”意指提及的数字或数值域是实验变异性内(或统计实验误差内)的·近似值，从而数字或数值域可在1%与15%的所述数字或数值域之间变化。术语“包含”(和相关术语例如“含有”或“拥有”或“具有”或“包括”)无意排除在其它某些实施方案中，例如，本申请中描述的物质、组合物、方法或过程等的任意组合成的实施方案可由所述特征“组成”或“基本由所述特征组成”。【专利附图】【附图说明】[0027]图1描述了对于HSV-2UL19蛋白是特异性的⑶4免疫反应。通过初免/加强免疫方案(d0初免/d21加强)免疫利用与5μg于稳定的水包油乳液中配制的吡喃葡萄糖基脂质A(GLA)(GLA-SE)、稳定的水包油乳液(SE)或PBS(无)组合的5ug重组HSV-2UL19免疫成组的5只小鼠。在利用含有UL19T细胞表位的肽离体再刺激后测量脾CD4T细胞反应。IFN-Y、TNF-α和IL-2的水平通过细胞内细胞因子染色(ICS)，随后进行荧光激活细胞分选(FACS)来进行测定。描述了每一组的细胞因子阳性CD4T细胞的百分比。[0028]图2举例说明针对HSV-2UL19蛋白的免疫反应。GLA-SE-佐剂化的rUL19蛋白(重组蛋白(rProtein)+GLA/SE)或利用编码HSV-2多肽UL19(Lentivector)的慢病毒载体(DC-NILV)(ImmuneDesignCorporation,Seattle,WA)免疫成组的5只小鼠。测试抗体滴度(右)，通过ICS分析脾UL19-特异性⑶4和⑶8T细胞的IFN-Y和TNF-α的产量(左)。加框的区域中的数字表示为IFN-Y+和TNF-α+的⑶4或⑶8细胞的百分比。[0029]图3描述了在利用编码卵白蛋白(LV)的DC-NILV初次免疫，随后利用PBS、单独的GLA/SE、与SE组合的重组卵白蛋白(rP+SE)或GLA-SE-佐剂化的卵白蛋白(rP+GLA/SE)加强的小鼠中诱导的免疫反应。在加强免疫后4天从动物分离脾细胞。通过ICS分析脾卵白蛋白特异性⑶8T细胞的IFN-Y和TNF-α的产量。每一个象限中的数字代表为IFN-Y+和TNF-α+的⑶8细胞的百分比。[0030]图4Α和4Β举例说明利用用GLA-SE配制的重组HSV-2UL19蛋白免疫的和利用编码UL19的DC-NILV免疫的动物的免疫反应。利用GLA-SE-佐剂化的rUL19蛋白(rP+GLA/SE)或PBS免疫成组的5只C57BL/6小鼠，利用GLA-SE-佐剂化的rUL19蛋白或含有编码UL19(LV)的多核苷酸的DC-NILV进行加强。在加强免疫后10天从动物分离脾细胞。在利用单次含CD4或CD8UL19表位的15聚体肽进行离体刺激后，通过ICS分析脾UL19-特异性⑶4和⑶8T细胞的IFN-Y,TNF-α和IL-2的产量。图4Α(左)描述了每组一只代表性小鼠的细胞因子产量。图4Α的右侧举例说明通过两种不同的CD8UL19表位的每一种刺激的细胞因子阳性⑶8Τ细胞的百分比。图4Β显示在来自每一个免疫的组的动物中测量的总IgG。GLA-SE佐剂化的rUL19蛋白在图4B中以“rP”表示。BLD:低于检测的水平。[0031]图5A和5B描述了用利用佐剂GLA/SE配制的重组蛋白免疫的，随后利用佐剂化的重组蛋白和编码所述蛋白质的慢病毒载体加强的动物的免疫反应。利用GLA-SE-佐剂化的rUL19蛋白(rP+GLA/SE)或PBS免疫成组的5只C57BL/6小鼠，利用GLA-SE-佐剂化的rUL19蛋白(rP+GLA/SE)和含有编码UL19(LV)的多核苷酸的DC-NILV进行加强。在加强免疫后10天从动物分离脾细胞。在利用单次含有CD4或CD8UL19表位的15聚体肽离体刺激后，通过ICS分析脾UL19特异性⑶4和⑶8T细胞的IFN-y,TNF-α和IL-2的产量。图5Α(左)描述了每组一只代表性小鼠的细胞因子产量。图5Α的右侧举例说明了利用两种不同的CD4UL19表位的每一种刺激的细胞因子阳性CD4T细胞的百分比和利用两种不同的⑶8UL19表位的每一种刺激的细胞因子阳性⑶8Τ细胞的百分比。[0032]在加强后5天和加强后10天从动物获得血清，检测特异性IgG抗体。图5Β显示了在来自每一个免疫的组的动物中测量的总IgG。GLA-SE佐剂化的rUL19蛋白在图5B中由“rP”表示。从左至右，4个数据集代表接受(I)PBS(初免组合物，1°)，随后利用GLA-SE佐剂化的rUL19蛋白和编码UL19(rP+LV)的DC-NILV(加强组合物，2°)(在加强后5天获得的血清)免疫的；(2)PBS(初免组合物，1°)，随后利用rP+LV(加强组合物，2°)(在加强后10天获得的血清)免疫的；(3)GLA-SE佐剂化的rUL19蛋白(rP)(初免组合物，1°)，随后利用rP+LV(加强组合物，2°)(加强后5天获得的血清)免疫的；(4)rP(初免组合物，1°)，随后用rP+LV(加强组合物，2°)(加强后10天获得的血清)免疫的动物的IgG滴度。[0033]图6举例说明可使用本申请中描述的用于诱导特异性CD4T细胞反应、特异性CD8T细胞反应和特异性抗体反应的免疫原性组合物进行应用的几个示例性免疫方案。免疫原:目标重组或分离多肽；编码免疫原的载体；含有编码目标多肽的多核苷酸的重组表达载体。[0034]图7显示DC-NILV产生强劲的Gag-特异性CD8T细胞反应。[0035]图8显示GLA是在利用SIV-Gag重组蛋白免疫后产生强劲的Thl⑶4T细胞所需的。[0036]图9显示利用SIV-Gag重组蛋白+GLA-SE和表达SIV-Gag的DC-NILV的异源性初免、加强、加强接种产生CD8和CD4抗原特异性T细胞反应。[0037]图10显示由异源性接种产生的CD8和TH1CD4T细胞反应可利用rSIV-Gag+GLA-SE来进行加强。[0038]图11举例说明由DC-NILV产生⑶8T细胞反应可利用合成的长肽+GLA-SE来进行加强。显示了SIV-Gag的氨基酸289-333(GPKEPFQSYVDRFYKSLRAEQTDAAVKNWMTQTLLIQNANPDCKL；SEQIDNO:42)。【具体实施方式】[0039]针对疾病和病况例如感染性疾病的接种包括其中利用一种组合物(初免组合物)免疫受试者，随后利用不同的组合物(加强组合物)加强受试者的免疫的策略。然而，迄今为止双重接种策略不足以同时诱导CD4和CD8T细胞反应以及提供充足的抗许多疾病和病况的保护作用的体液免疫。[0040]本申请中提供的是用于诱导受试者的免疫反应的改进的双重免疫策略的组合物和方法，所述免疫反应包括体液免疫反应和细胞免疫反应(均为CD4和CD8T淋巴细胞免疫反应)，从而提供针对一种或多种抗原的完全适应性免疫反应。因此，本申请中描述的组合物可被开发和配制为疫苗。描述的方法因而用于治疗和预防(即，以生物学、临床和/或统计上显著的方式减少发生或复发的可能性或风险)不同的疾病、障碍和病况例如癌症和感染性疾病，针对所述疾病的体液免疫反应和细胞免疫反应的诱导改善临床结果或是最佳益处所必需的。[0041]本申请中提供了同时或以任一顺序相继地给有此需要的受试者施用的两种不同的免疫原性组合物。免疫原性组合物的至少一种诱导针对免疫原的特异性体液(即，抗体反应)和/或特异性CD4T细胞反应(其可包括记忆CD4T细胞反应)，并且免疫原性组合物的至少一种诱导特异性CD8T细胞反应，其可包括对于免疫原是特异性的细胞毒性T细胞(CTL)反应。在某些实施方案中，两种免疫原性组合物之一对于诱导特异性体液和/或特异性CD4T细胞反应是更有效，并且两种免疫原性组合物的另一种对于诱导特异性CD8T细胞反应可以是更有效的。[0042]一种免疫原性组合物包含至少一种能够诱导对于指定的目标抗原是特异性的免疫反应的免疫原。该免疫原性组合物还可包括佐剂，所述佐剂增强对于免疫原和指定抗原是特异性的免疫反应，或可以是诱导所述免疫反应所需的。第二免疫原性组合物包含含有编码免疫原的核苷酸序列的重组表达载体。重组表达载体还包含至少一个有效地连接至编码免疫原的核苷酸的调控序列，从而重组表达载体能够指导免疫原的表达。在某些具体实施方案中，将重组表达载体整合进入载体颗粒(例如，病毒载体颗粒)。如本申请中进一步描述的，免疫原可以是指定抗原的免疫原性片段或可以是全长指定抗原(或其免疫原性变体)，或包含一个或多个免疫原性片段或包含全长指定抗原(或其免疫原性变体)的融合蛋白。[0043]因此，术语“免疫原”在本申请中的任何用途是指整个组的多肽，所述多肽是:(a)全长抗原，(2)抗原的免疫原性片段，(3)全长抗原的免疫原性变体或免疫原性片段，(4)包含不同多肽的部分的其嵌合融合物以及(5)其缀合物。因此，“免疫原”表示包含⑴第一指定抗原，(ii)其免疫原性片段或(iii)能够诱导对于第一指定抗原是特异性的免疫反应的其变体的任一种的多肽。[0044]例如，此类免疫原性变体在抗原的至少10个连续氨基酸上保持至少90%的氨基酸同一性，或在抗原(例如，包膜蛋白或肿瘤相关抗原)的至少15个连续氨基酸上保持至少85%的氨基酸同一性。作为另一个实例，此类免疫原性片段包含抗原的至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、48或50个连续氨基酸。其它实例包括在抗原的至少50个连续氨基酸上，或在抗原的至少100个连续氨基酸上至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性。[0045]应当理解，在本申请中的方法中，当提及包含免疫原的第一免疫原性组合物和包含编码“免疫原”的核苷酸序列的第二免疫原性组合物时，第二免疫原性组合物的编码的免疫原多肽不必具有与第一免疫原性组合物的多肽免疫原相同的氨基酸序列。因此，本申请中描述的方法和组合物涉及第一免疫原性组合物包含抗原(包膜蛋白或肿瘤相关抗原)的至少一个、二个、三个或更多个小片段，以及第二免疫原性组合物包含编码全长抗原或其更大的片段的核苷酸序列，或反之亦然。例如，第一多肽是在长度上具有约50个或更少的氨基酸的抗原的小免疫原性片段，并且第二多肽是全长抗原或在长度上具有约50个或更多的氨基酸的其更大的片段，所述片段任选地与全长抗原具有至少80%、85%、90%或95%的同一性。[0046]在本申请中提供的其它具体实施方案中，将第二免疫原包含在任一免疫原性组合物中。第二免疫原能够诱导针对指定抗原的免疫反应，所述指定抗原可与第一免疫原诱导针对其的特异性免疫反应的指定抗原相同或不同。在另一个具体实施方案中，第一免疫原诱导特异性CD4T细胞免疫反应并且还可诱导特异性抗体反应，第二免疫原诱导至少CD8T细胞免疫反应。某些具体实施方案中，待免疫的受试者期望仅通过用重组表达载体表达第二免疫原来利用第二免疫原进行免疫。因此，包含第一免疫原(以及还可包含佐剂)的免疫原性组合物不存在第二免疫原，重组表达载体包含编码第一免疫原和编码第二免疫原的核苷酸序列。[0047]本申请中描述的免疫原性组合物和方法可用于预防或治疗感染性疾病，特别地对于其未获得满意的疫苗或感染后治疗的感染性疾病(例如，病毒感染例如HIV和HSV-2，以及寄生虫感染例如疟疾)。在其它实施方案中，本申请中描述的免疫原性组合物和方法可用于治疗和/或减少癌症和恶性肿瘤发生的可能性。[0048]在下文中详细地描述了免疫原性组合物、包含免疫原性组合物的制剂以及使用制剂和组合物的方法的各种实施方案。[0049]免疫原性组合物[0050]当用于协调免疫策略时，本申请中描述的不同免疫原性组合物用于诱导特异性的适应性免疫反应。一种免疫原性组合物包含至少一种免疫原，并且还可包含生理上适当的(即，药学上可接受的或适当的)佐剂。该第一免疫原性组合物中包含的免疫原通常是分离的免疫原，所述免疫原可从其天然环境分离或可重组地产生。为了容易参考，存在于第一免疫原性组合物中的免疫原在本申请中称为分离的/重组的免疫原。第二不同的组合物包含含有编码免疫原的核苷酸序列的重组表达载体。第二免疫原性组合物还可进一步包含佐剂。如果第一组合物和第二组合物包含佐剂，则每一种组合物中包含的佐剂可以相同或不同。[0051]给受试者施用两种不同的组合物可诱导针对至少一种免疫原和针对各自目标抗原(在本申请中也称为指定抗原)的特异性免疫反应。特异性免疫反应包括特异性体液免疫反应(即，特异性抗体反应)和特异性细胞免疫反应(包括CD4T细胞反应和CD8T细胞反应)，每一种对于免疫原是特异性的并因而对于指定的目标抗原是特异性的反应。本申请中提及的免疫原性制剂包括这两种免疫原性组合物，所述组合物在本申请中为方便起见可称为第一免疫原性组合物和第二免疫原性组合物。因此，在一个实施方案中，免疫原性制剂包含(a)至少一种包含至少一种能够引发对于指定抗原是特异性的免疫反应的免疫原性组合物；和(b)至少一种包含含有编码至少一种免疫原的核苷酸序列的重组表达载体的第二免疫原性组合物。可将制剂的免疫原性组合物同时或以任一顺序相继地施用至受试者以诱导对于免疫原和对于各自的指定抗原是特异性的免疫反应。用于组合物的免疫原性组合物的每一种更详细地描述于本申请中。[0052]每一种免疫原性组合物还可包含至少一种生理上(或药学上)可接受的或适当的赋形剂。本领域技术人员已知的用于药物组合物的任何生理上或药学上适当的赋形剂或载体(g卩，不干扰活性成分的活性的无毒性材料)可用于本申请中描述的免疫原性组合物。示例性赋形剂包括维持蛋白质的稳定性和完整性的稀释剂和载体。用于治疗剂的赋形剂是公知的，并且描述于例如Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(Gennaro,第21版，MackPub.C0.，Easton,PA(2005))，和更详细地描述于本申请中。[0053]免疫原可与指定抗原相同，即，免疫原包含指定抗原的示例性全长氨基酸序列，或可包括与示例性全长指定抗原共有高度百分比同一性并且保持指定抗原的功能特征，例如诱导特定免疫反应的能力的其变体。或者，免疫原可以是指定抗原的免疫原性片段。作为指定抗原的变体或片段的免疫原显示以统计上、临床上和/或生物学上显著的方式诱导受试者的免疫反应(例如，体液反`应(即，B细胞反应)或细胞介导的反应(即，T细胞反应(包括细胞毒性T淋巴细胞反应))或体液和细胞介导的反应的能力。指定的目标抗原以及其指定抗原的免疫原性片段和免疫原性变体更详细地描述于本申请中。[0054]关于包含至少一种分离的/重组的免疫原的免疫原性组合物，免疫原可以是已按照分子生物学和蛋白质分离领域中常规实施的方法在宿主细胞中重组地产生，随后从宿主细胞分离或从宿主细胞培养物分离(即，从其原始宿主细胞环境取出)的多肽或肽。当按照本申请中和本领域中描述的并且本领域技术人员熟悉的方法重组产生免疫原时，免疫原可称为重组免疫原。或者，免疫原可从天然来源例如病毒、细菌、寄生虫、真菌或肿瘤细胞分离或取出。用于从天然来源分离一种或多种免疫原和抗原的方法描述于本领域中，并且还可由本领域技术人员使用本领域中常规实施的方法和技术来容易地凭经验进行测定。[0055]如本申请中所述，包含在第二免疫原性组合物的重组表达载体包含编码至少一种免疫原的核苷酸序列(在本申请中也称为多肽序列)。重组表达载体还包含至少一个有效地连接至编码核苷酸序列的调控序列，以便载体能够指导免疫原的表达。通过重组表达载体编码和表达的免疫原可与指定抗原相同，即，免疫原包含指定抗原的示例性全长氨基酸序列，或可包括与示例性全长指定抗原共有高百分比的同一性并且保持指定抗原的功能性特征，例如诱导特定免疫反应的能力的其变体。或者，编码的免疫原可以是指定抗原的免疫原性片段。为指定抗原的变体或片段的免疫原显示以统计学上、临床上和/或生物学上显著的方式诱导受试者的免疫反应(例如，体液反应(即，B细胞反应)或细胞介导的反应(即，T细胞反应(包括细胞毒性T淋巴细胞反应))或体液和细胞介导的反应的能力。指定的目标抗原以及指定抗原的免疫原性片段和免疫原性变体更详细地描述于本申请中。[0056]在某些实施方案中，将重组表达载体整合进入载体颗粒(例如，病毒载体颗粒或细胞颗粒)。以使得颗粒能够被引入(即，递送至)靶细胞的方式构建包含载体的重组表达载体或载体颗粒。在某些实施方案中，靶细胞是抗原呈递细胞。在更具体的实施方案中，靶细胞是专职抗原呈递细胞例如树突细胞。随后在靶细胞中表达免疫原，免疫原或其片段呈现于抗原呈递细胞的表面上，并且诱导对于免疫原是特异性(从而对于各自指定抗原是特异性)的免疫反应。[0057]在其它实施方案中，包含至少一种分离的/重组的免疫原(并且其还可包含佐剂)的免疫原性组合物还可包含至少一种另外的免疫原(即，至少2、3、4、5或更多种免疫原，其可被重述为2、3、4、5或更多种免疫原))。在某些实施方案中，免疫原性组合物可包含两种或更多种分离的/重组的免疫原(即，至少两种免疫原)，从而形成多价免疫原性组合物。在当将两种或更多种免疫原与佐剂组合的情况下，免疫原性组合物可包含单独地用佐剂配制的每一种免疫原，随后将佐剂化的免疫原组合以形成免疫原性组合物。或者，将两种或更多种免疫原与佐剂一起配制。在某些具体实施方案中，另外的免疫原(例如，第二、第三等免疫原)的每一种可诱导针对与第一免疫原相同的指定抗原的免疫反应。在其它具体实施方案中，另外的免疫原(例如，第二、第三等免疫原)的每一种可分别诱导对于不同的(例如，第二、第三等)指定抗原是特异性的免疫反应。[0058]在某些替代性实施方案中，多价免疫原性组合物可包含细胞裂解物、细胞器或包括至少两种免疫原的细胞上清液。例如，从它们的原始环境取出的免疫原，例如从微生物获得的免疫原可与微生物部分地分离，以便两种或更多种免疫原存在于免疫原性组合物中。类似地，从肿瘤细胞获得的免疫原可与肿瘤细胞部分地分离，以便两种或更多种肿瘤相关抗原存在于免疫原性组合物中。[0059]关于包含重组表达载体的免疫原性组合物，核苷酸序列可编码超过一种免疫原，例如至少2、3、4、5或更多种免疫原(即，2、3、4、5或更多种免疫原)。在某些具体实施方案中，额外免疫原(例如，第二、第三等免疫原)的每一种可诱导针对与第一免疫原相同的指定抗原的免疫反应。在其它具体实施方案中，另外的免疫原(例如，第二、第三等免疫原)的每一种可分别诱导对于不同的(例如，第二、第三等)指定抗原是特异性的免疫反应。[0060]在具体实施方案中，包含至少一种分离的/重组的免疫原的一种免疫原性组合物(也称为第一免疫原性组合物)(并且所述组合物还可包含佐剂)能够诱导对于免疫原是特异性，从而对于指定抗原是特异性的CD4T细胞反应，以及还可诱导针对免疫原和指定抗原的体液反应(即，特异性抗体反应或抗原-特异性抗体反应)。包含含有编码免疫原的核苷酸序列的重组表达载体的其它免疫原性组合物(或第二免疫原性组合物)能够诱导对于免疫原是特异性的CD8T细胞反应，从而能够诱导对于指定抗原是特异性的CD8T细胞反应。如在本申请中更详细地描述的，免疫原具有一个或多个包含能够诱导对于免疫原是特异性的CD4T细胞反应和CD8T细胞反应的表位的免疫原性区域。[0061]在其它具体实施方案中，提供了免疫原性制剂，其中包含至少一种分离的/重组的免疫原(为方便起见称为第一免疫原)的第一免疫原性组合物还可包含至少一种另外的分离的/重组的免疫原。在其它实施方案中，包含在第二不同的免疫原性组合物中的重组表达载体可编码第一免疫原和编码至少一种另外的免疫原。在其它可替代性实施方案中，第一免疫原性组合物包含至少两种分离的/重组的免疫原并且第二免疫原性组合物包含含有编码第一免疫原的核苷酸序列的表达载体和至少一种另外的免疫原。[0062]在某些实施方案中，当期望引物对于两种或更多种免疫原是特异性的免疫反应时，至少一种免疫原能够诱导包括至少一种特定体液和/或⑶4T细胞反应的免疫反应并且至少一种另外的免疫原能够诱导包括至少一种特异性⑶8T细胞免疫反应的免疫反应。因此，在本申请的一个实施方案中提供了免疫原性制剂，其包含(a)含有第一分离的/重组的免疫原的免疫原性组合物(其可被称为第一免疫原性组合物)(所述组合物还可包含佐剂)和(b)包含编码和指导第一免疫原和第二免疫原的表达的重组表达载体的第二免疫原性组合物，其中至少第二免疫原能够诱导特异性⑶8T细胞反应。在某些实施方案中，至少两种免疫原的每一种具有诱导针对相同指定抗原的免疫反应。或者，至少两种免疫原的每一种具有诱导对于不同抗原(为方便起见，也分别称为第一和第二指定抗原)是特异性的免疫反应的能力。_3]免疫原和指定抗原[0064]用于本申请中描述的方法和用途的免疫原(其可以是包含在一种免疫原性组合物中的分离的和/或重组的免疫原和/或由包含在第二免疫原性组合物中的重组表达载体编码的)包括期望针对其诱导特定的免疫反应的任何免疫原。在某些实施方案中，免疫原包含指定的目标抗原的示例性全长氨基酸序列，或免疫原可以是各自的指定抗原的免疫原性片段。在其它某些实施方案中，免疫原可包括指定抗原的变体，所述变体与示例性全长指定抗原共有高百分比同一性并且显示与包含示例性氨基序列的指定抗原大体上相同水平的免疫原性(即，变体保持相较于示例性或野生型抗原的免疫原性达到统计学上、临床上和/或生物学上显著的程度的免疫原性的水平)。具体地，作为指定抗原的免疫原性片段或变体的免疫原以统计学上、临床上或生物学上显著的方式保持诱导受试者的体液免疫反应(即，B细胞反应导致特定抗体的表达)或细胞介导的反应(即，CD4T细胞反应和/或CD8T细胞反应，包括细胞毒性T淋巴细胞反应))或体液和细胞介导的反应的能力。指定的目标抗原及其免疫原性片段和免疫原性变体更详细地描述于本申请中。[0065]如本申请中更详细描述的，免疫原包含至少一个能够诱导受试者的对于指定抗原是特异性的免疫反应的免疫原性区域或免疫原性表位。在一个具体实施方案中，免疫原包含一个或多个免疫原性区域以便免疫原能够诱导抗体反应、CD4T细胞反应和CD8T细胞反应的任一种或多种，其中每一个反应对于免疫原是特异性的，从而对于各自指定抗原是特异性的。因此，免疫原性区域包含至少一个诱导抗体反应、⑶4T细胞反应和⑶8T细胞反应的一种或多种的表位(即，一个或多个表位)。[0066]细胞介导的免疫反应包括细胞毒性T淋巴细胞反应，所述反应可破坏或损害产生或表达免疫原或各自指定抗原的细胞(例如，肿瘤细胞、细菌细胞、病毒、寄生虫或真菌细胞)或感染性颗粒(例如，病毒颗粒)。与疾病或障碍相关的任何抗原(针对所述抗原的体液反应或细胞介导的免疫反应或两者对于免疫的受试者是有益的)可用作免疫原。[0067]与许多疾病和障碍相关的抗原在本领域是公知的。目标抗原(即，指定抗原)先前可能已知与疾病或障碍相关，或可被本领域中已知和实施的任何方法鉴定为与疾病或障碍相关的抗原。例如，与患者所遭受的癌症类型相关的抗原可以是已知的，例如肿瘤相关抗原，或可通过本领域中实施的多种方法的任一种从肿瘤本身鉴定。在某些实施方案中，指定抗原是来源于癌细胞(例如，肿瘤细胞)的肿瘤相关抗原(在本申请中也称为肿瘤抗原)，一种或多种此类肿瘤抗原可用于癌症的免疫治疗性治疗。以非限定性实例为例，肿瘤相关抗原可来源于前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌、肺癌、前列腺癌、肾癌、间皮癌、卵巢癌或黑色素瘤癌。此类和另外的肿瘤相关抗原是如本申请中和本领域中所描述的。[0068]在某些实施方案中，免疫原包括作为指定抗原和来源于肿瘤或恶性肿瘤的全长蛋白质。在其它某些实施方案中，免疫原包含一种或多种包含一个或多个来自此类蛋白质的表位的免疫原性片段。在其它实施方案中，免疫原包括包含全长指定抗原或包含来源于肿瘤细胞的指定抗原的1、2、3或更多个免疫原性片段的融合多肽。在其它实施方案中，当免疫原性组合物被制备用于诱导抗两种或更多种指定抗原的免疫反应时，融合多肽可包括两种或更多种指定抗原的每一种的全长抗原或其一个或多个免疫原性片段的任意组合。例如，融合多肽可包含获自一种肿瘤相关抗原的一个或多个免疫原性片段并且还可包含获得第二不同的肿瘤相关抗原的一个或多个免疫原性片段。除了免疫原性多肽或肽以外，融合蛋白还可包含至少一种多肽或肽，所述多肽或肽在免疫学领域有时称为载体蛋白，其增强对目标免疫原的免疫反应。[0069]示例性肿瘤相关抗原或肿瘤细胞来源的抗原包括MAGE1，3和MAGE4(或其它MAGE抗原例如国际专利申请公布N0.W099/40188中公开的那些抗原)；PRAME；BAGE；RAGE,Lage(也称为NYES01)；SAGE；和HAGE(参见，例如，国际专利申请公布N0.W099/53061)或GAGE(Robbins等人，Curr.0pin.1mmunol.8:628-36(1996)；VandenEynde等人，Int.J.Clin.Lab.Res.27:81-86(1997)；VandenEynde等人，Curr.0pin.1mmunol.9:648-93(1997);Correale等人，J.Natl.CancerInst.89:293(1997))。肿瘤抗原的这类非限定性实例在许多肿瘤类型例如黑色素瘤、肺癌、肉瘤和膀胱癌中表达。参见，例如，美国专利N0.6，544，518。前列腺癌肿瘤相关抗原包括例如前列腺特异性膜抗原(PSMA)、前列腺特异性抗原(PSA)、前列腺酸性磷酸盐、NKX3.1和前列腺的6跨膜上皮细胞抗原(STEAP)(Hubert等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA9614523-28,1999);也参见，例如，Reiter等人，Proc.Nat.Acad.Sc1.USA95:1735-40，1998;Nelson等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA96:3114-19(1999)；W098/12302;美国专利N0.5，955，306;5，840，871和5，786，148;国际专利申请公布N0.W098/20117；W000/04149;W098/137418)。[0070]其它肿瘤相关抗原包括Plu-1(J.Biol.Chem.274:15633-45，1999)、HASH-1、HasH-2、Cripto(Salomon等人，Bioessaysl99,21:61-70;美国专利5，654，140)和Criptin(美国专利N0.5，981，215)。此外，肿瘤抗原可以是用于治疗许多癌症的自身肽激素例如全长促性腺激素释放激素(GnRH，国际专利申请公布N0.W095/20600)、短的10个氨基酸长的妝。[0071]肿瘤抗原包括来源于特征在于肿瘤相关抗原表达例如HER-2/neu表达的癌症的肿瘤抗原。目标肿瘤相关抗原包括谱系特异性肿瘤抗原例如黑色素细胞-黑素瘤谱系抗原MART-l/Melan-A、gplOO、gp75、mda_7、酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白。说明性肿瘤相关抗原包括但不限于来源于如下抗原的任一种或多种或包含如下抗原的任一种或多种的肿瘤抗原:p53、Ras,c-Myc、细胞质丝氨酸/苏氨酸激酶(例如，A-Raf、B-Raf和C-Raf、细胞周期蛋白质依赖激酶)、MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A6、MAGE-AIO、MAGE-A12、MART-1、BAGE、DAM-6、-10、GAGE-1、-2、-8、GAGE-3、-4、-5、-6、-7B、NA88-A、MART-1、MC1R、Gpl00、PSA、PSM、酪氨酸酶、TRP-l、TRP-2、ART-4、CAMEL、CEA、Cyp-B、hTERT、hTRT、iCE、MUCl、MUC2、磷酸肌醇酯3-激酶(P13K)、TRK受体、PRAME、P15、RU1、RU2、SART-1、SART-3、WiIms’肿瘤抗原(WTl)、AFP、-连环蛋白/m、半胱天冬酶-8/m、CEA、CDK-4/m、ELF2M、GnT-V,G250、HSP70-2M、HST-2、KIAA0205、MUM-1、MUM-2、MUM-3、肌球蛋白/m、RAGE、SART-2、TRP-2/INT2、707-AP、膜联蛋白I1、CDC27/m、TPI/mbcr-abl、BCR-ABL、干扰素调节因子4(IRF4)、ETV6/AML、LDLR/FUT、Pml/RAR、肿瘤相关钙信号转导蛋白I(TACSTD1)TACSTD2、受体酪氨酸激酶(例如，表皮生长因子受体(EGFR)(特别地，EGFRvIII)、血小板衍生生长因子受体(TOGFR)、血管内皮生长因子受体(VEGFR))、细胞质酪氨酸激酶(例如，src-家族、syk-ZAP70家族)、整联蛋白连接的激酶(ILK)、信号转导蛋白和转录激活子STAT3、STAT5和STAT6、缺氧诱导因子(例如，HIF-1.和HIF-2)、细胞核因子-KB(NF-B)、Notch受体(例如，Notchl-4)、c-Met、雷帕霉素的哺乳动物祀(mammaliantargetsofrapamycin)(mTOR)、WNT、细胞外信号调节激酶(ERK)及其调节亚基、PMSA,PR-3、MDM2、间皮素、肾细胞癌-5T4、SM22-α、碳酸酐酶I(CAI)和IX(CAIX)(也称为G250)、STEAD、TEL/AML1、GD2、蛋白酶3、hTERT、肉瘤易位断裂点、EphA2、ML-1AP,EpCAM,ERG(TMPRSS2ETS融合基因)、NA17、PAX3、ALK、雄激素受体、细胞周期蛋白81、多唾液酸、1^^、1^0(:、0)3、岩藻糖基611、间皮素(mesothelian)、PSCA、sLe、PLACl、GM3、BORIS、Τη、GLoboH、NY-BR-1、RGs5、SART3、STn、PAX5、0Y-TES1、精子蛋白17、LCK,miWMAA、AKAP-4、SSX2、XAGEl、B7H3、legumain、TIE2、Page4、MAD-CT-UFAP,MAD-CT-2、fos相关抗原I和独特型(idiotype)。[0072]免疫原还包括包含表位区或表位肽的肿瘤抗原，所述表位区或表位肽来源于肿瘤细胞中突变的基因或来源于肿瘤细胞中相较于正常细胞以不同水平转录的基因例如端粒酶、存活素、间皮素、突变的·ras、bcr/abl重排、Her2/neu、突变型或野生型p53、细胞色素P4501B1和异常表达的内含子序列例如N-乙酰葡糖氨基转移酶-V;在黑色素瘤和B细胞淋巴瘤中产生独特的独特型的免疫球蛋白的克隆性重排；包含来源于肿瘤病毒过程的表位区或表位肽的肿瘤抗原，例如人乳头状瘤病毒蛋白E6和E7;爱泼斯坦巴尔病毒蛋白LMP2;具有肿瘤选择性表达的非突变型癌胚胎蛋白质例如癌胚抗原和甲胎蛋白。也参见Boon等人，Ann.Rev.Tmmunol.12:337-65(1994);Renkvist等人,CancerTmmunol.1mmunother.50:3-15(2001)。[0073]在其它实施方案中，免疫原分离自或来源于病原微生物或来自条件致病性微生物(在本申请中也称为感染性疾病微生物)，例如病毒、真菌、寄生虫和细菌。在某些实施方案中，来源于这样的微生物的免疫原包括为选择的指定抗原的全长蛋白质。在其它某些实施方案中，免疫原包括一种或多种包含一个或多个来自这样的蛋白质的表位的免疫原性片段。在其它实施方案中，免疫原包含含有来源于微生物的蛋白质的1、2或更多个免疫原性片段的融合多肽。在其它实施方案中，免疫原包括含有全长指定抗原或含有来源于微生物的指定抗原的1、2、3或更多个免疫原性片段的融合多肽。在其它实施方案中，当免疫原性组合物被制备用于诱导抗感染性疾病微生物的2或更多个指定抗原的免疫反应时，融合多肽可包含两种或更多种指定抗原的每一种的全长抗原或其一个或多个免疫原性片段的任意组合。例如，融合多肽可包含一个或多个获自一种微生物抗原(即，病毒、细菌、寄生虫或真菌抗原)的一个或多个免疫原性片段，并且还可包含获自第二不同的微生物抗原(即，第二不同的病毒、细菌、寄生虫或真菌抗原)的一个或多个免疫原性片段。除了免疫原性多肽或肽以外，融合蛋白还可包含至少一个有时在免疫学领域中称为载体蛋白的增强针对目标免疫原的免疫反应的多肽或肽。[0074]其抗原预期为用于本申请中描述的免疫原性组合物的指定抗原和免疫原并且由本申请中描述的载体和载体颗粒编码的举例说明性病原微生物包括人免疫缺陷病毒(HIV)、单纯疱疹病毒(HSV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、巨细胞病毒(CMV)、爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)、A、B和C型流感病毒、水疱性口炎病毒(VSV)、水疱性口炎病毒(VSV)、包括抗甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcusaureus)(MRSA)的葡萄球菌属(Staphylococcus)物种和包括肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)的链球菌属(Streptococcus)物种。如本领域技术人员可理解的,来源于这类和其它病原微生物的用作本申请中描述的免疫原的蛋白质在本领域是已知的并且此类蛋白质(及其种类)的氨基酸序列和编码所述蛋白质的核苷酸序列可在出版物和公共数据库例如GENBANK、Swiss-Prot和TrEMBL中得以鉴定。[0075]可以为免疫原并且如本申请中所述使用的来源于人免疫缺陷病毒(HIV)的抗原包括HIV病毒体结构蛋白(例如，gpl20、gp41、pl7、p24)、蛋白酶、逆转录酶或由tat、rev、nef、vif、vpr和vpu编码的HIV蛋白的任一种。HIV蛋白及其免疫原性片段对于本领域技术人员来说是公知的，并且可见于许多公共数据库的任何数据库(参见，例如，Vider-Shalit等人，AIDS23(11):1311-18(2009)；ffatkins,Mem.1nst.0swaldoCruz.103(2):119-29(2008);Gao等人，ExpertRev.Vaccines(4Suppl):S161-68(2004))。(也参见，例如，Klimstra等人，2003.J.Virol.77:12022-32;Bernard等人，Virology276:93-103(2000)；Byrnes等人，J.Virol.72:7349-56(1998)；Lieberman等人，AIDSResHum.Retroviruses13(5):383-92(1997);Menendez_Arias等人，ViralImmunol.11(4):167-181(1998)。[0076]预期用作本申请中描述的组合物的免疫原并且由本申请中描述的载体和载体颗粒编码的来源于单纯疱疹病毒的抗原(例如，HSVl和HSV2)包括但不限于从HSV晚期基因表达的蛋白质。后一组基因主要编码形成病毒体颗粒的蛋白质。此类蛋白质包括从其形成病毒衣壳的5种蛋白质(UL):UL6、UL18、UL35、UL38和大衣壳蛋白UL19、UL45和UL27,其各自可用作本申请中描述的免疫原(参见，例如，McGeoch等人，VirusRes.117:90-104(2006);Mettenleiter等人，Curr.0pin.Microbiol.9:423-29(2006))?其它预期在本申请中用作免疫原的举例说明性HSV蛋白包括ICP27(H1，H2)、糖蛋白B(gB)和糖蛋白D(gD)。HSV基因组包括至少74个基因，每一个基因编码可潜在地用作诱导T细胞反应(包括CTL反应)、B细胞反应或CTL反应和B细胞反应的免疫原的蛋白质。[0077]人(参见，例如，Corey等人，“GenitalHerpes,”SexuallyTransmittedDiseases,Holmes等人,编(McGraw-Hill,NewYork,1999)285-312)和动物模型(参见，例如，Parr等人，J.Virol.72:2677(1998))中抗HSV-2的保护性免疫反应表明适当的HSV-2疫苗制剂是期望的和可获得的目标。在过去40年中，在美国和欧洲已进行了一系列使用失活的完整HSV制剂和利用佐剂配制的亚单位HSV蛋白的HSV疫苗人试验。虽然对于这类疫苗在一些短期研究中观察到适度的治疗效果，但来自具有更长的随访窗口的适当地受控试验的结果一直以来令人十分失望(参见，例如，Rajcani等人，FoliaMicrobiol.(Praha)51:67(2006))ο[0078]在欧洲，在1960年代和1970年代，利用甲醛灭活的HSV(EliLilly试验)或热灭活的HSV(LupidonH试验)进行了大型临床试验。虽然报导了HSV复发的严重度和频率的改善，但仅有小亚组的这些试验采用安慰剂对照和双盲试验。此外，这类疫苗不赋予长期治疗效果。1980年代的母-胎HSV-2传播研究显示HSV-2血清阳性妇女的婴儿相对于近期获得HSV-2的妇女的婴儿具有更低的传播风险，这表明抗HSV-2糖蛋白gD和gB的中和抗体(nAb)可赋予保护作用(参见，例如，Koelle等人,Clin.Microbiol.Rev.16:96(2003))。在1990年代由美国的Glaxo-SmithKline和Chiron设计来产生抗此类HSV-2糖蛋白的nAb的试验测试了具有单独的gD或具有利用3种不同佐剂:明矾、MF-59(水包油)和单磷酰脂质A(MPL)配制的gB的重组亚单位疫苗。这类疫苗引发或加强血清阴性个体的HSV-2特异性nAb和HSV-1血清阳性个体的交叉反应性nAb(参见，例如，Burke,Rev.1nfect.Dis.13Supplll:S906-S911(1991))。然而，尽管达到目标水平的体液免疫原性，但此类疫苗在男人中未显示治疗效果并且在女人中仅显示短暂的疗效，这表明抗-HSVnAb是不足的并且成功的HSV疫苗将可能需要产生有效力的T细胞免疫(参见，例如，Corey等人，JAMA282:331(1999)；Stanberry等人，N.Engl.J.Med.347:1652(2002))。[0079]先前进行的HSV疫苗试验表明nAb可能不足以保护人免受HSV-2感染，数据表明HSV-2特异性T细胞在减少病毒的获取、传播和再激活中起着至关重要的作用(参见，例如，Corey等人，JAMA(1999)，同上)。例如，在T细胞功能上具有缺陷的个体具有延长的更严重的HSV-2感染的发作，并且在HSV-2损伤的纵向活组织检查研究中，病毒清除与CD8T细胞的渗入相关(参见，例如，Koelle等人，J.Clin.1nvest.101:1500(1998))。另外的HSV研究已显示:1型辅助T细胞(Thl)反应在动物模型中具有保护性(参见,例如,Koelle等人，J.1mmunol.166:4049(2001);Zhu等人，J.Exp.Med.204:595(2007))。HSV-2再活化的严重度和频率与HSV特异性T细胞的频度反相关，并且HSV-2特异性CTL至生殖器损伤的渗入与病毒清除相关(参见，例如，Koelle等人,J.1nfect.Dis.169:956(1994);Koelle等人,J.Clin.1nvest.110:537(2002)；Koelle等人，J.Clin.1nvest.(1998)，同上)。这些发现与来自牵涉粘膜HSV-2清除中CD8和ThlCD4T细胞反应的亚单位疫苗研究的数据一致(参见，例如，Posavad等人，Nat.Med.4:381(1998))。此外，在生殖器疱疹消退后在真皮表皮接合部长期检测到HSV-2-特异性CD8T细胞(参见，例如，Cattamanchi等人，Clin.VaccineImmunol.15:1638(2008))。[0080]预期用于本申请中描述的现有免疫原性组合物和方法的某些实施方案中的来源于巨细胞病毒(CMV)的抗原包括CMV结构蛋白、在病毒复制的立即早期和早期中表达的病毒抗原、糖蛋白I和II1、衣壳蛋白、外壳蛋白、低基质蛋白PP65(PPUL83)、p52(ppUL44)、El和IE2(UL123和UL122)、来自来自UL128-UL150的基因簇的蛋白质产物(Rykman等人，J.Virol.2006Jan；80(2):710-22)、包膜糖蛋白B(gB)、gH、gN和ppl50。如由本领域技术人员理解的，用作本申请中描述的免疫原的CMV蛋白可在公共数据库例如GenBank、Swiss-Prot和TrEMBL中被鉴定(参见例如，Bennekov等人，Mt.SinaiJ.Med.71(2):86-93(2004)；Loewendorf等人，J.1ntern.Med.267(5):483-501(2010)；Marschall等人，FutureMicrobiol.4:731-42(2009))。[0081]预期用于某些实施方案的来源于爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)的抗原包括EBV裂解蛋白gp350和gpllO、在潜伏周期感染过程中产生的EBV蛋白(包括爱泼斯坦巴尔核抗原(EBNA)-l、EBNA-2、EBNA-3A、EBNA-3B、EBNA-3C、EBNA-前导蛋白(EBNA-LP)和潜伏膜蛋白(LMP)-ULMP-2A和LMP-2B)(参见，例如，Lockey等人，Front.Biosc1.13:5916-27(2008))。[0082]预期用作本申请中描述的免疫原的来源于呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原包括由RSV基因组编码的11种蛋白质的任一种或其免疫原性片段:NS1、NS2、N(核壳体蛋白)、M(基质蛋白)SH、G和F(病毒衣壳蛋白)、M2(第二基质蛋白)、M2-1(延伸因子)、M2-2(转录调节)、RNA聚合酶和磷蛋白P。[0083]预期用作免疫原的来源于水疱性口炎病毒(VSV)的抗原包括由VSV基因组编码的5种主要蛋白质的任一种及其免疫原性片段:大蛋白质(L)、糖蛋白(G)、核蛋白(N)、磷蛋白(P)和基质蛋白(M)(参见，例如，Rieder等人，J.1nterferonCytokineRes.(2009)(9):499-509!Roberts等人，Adv.VirusRes.(1999)53:301-19)。[0084]预期用于某些实施方案的来源于流感病毒的抗原包括血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)、基质蛋白Ml和M2、NSUNS2(NEP)、PA、PBUPB1-F2以及PB2。参见例如，Nature437(7062):1162-66。[0085]作为病毒抗原的免疫原的实例还包括但不限于腺病毒多肽、甲病毒多肽、杯状病毒多肽(例如，杯状病毒衣壳抗原)、冠状病毒多肽、温热病病毒多肽、埃博拉病毒多肽、肠病毒多肽、黄病毒多肽、肝炎病毒(AE)多肽(乙型肝炎病毒核心或表面抗原、丙型肝炎病毒El或E2糖蛋白、核心或非结构蛋白质)、疱疹病毒多肽(如本申请中论述的，包括单纯疱疫病毒或水痘带状疱疫病毒糖蛋白)、感染性腹膜炎病毒多肽、白血病病毒多肽、马尔堡病毒多肽、正粘病毒多肽、乳头状瘤病毒多肽、副流感病毒多肽(例如，血凝素和经氨酸酶多肽)、副粘病毒多肽、细小病毒多肽、痕病毒多肽、微小RNA病毒多肽(例如，脊髓灰质炎病毒衣壳多肽)、痘病毒多肽(例如，痘苗病毒多肽)、狂犬病病毒多肽(例如，狂犬病病毒糖蛋白G)、里奥病毒多肽、逆转录病毒多肽和轮状病毒多肽。[0086]在某些实施方案中，细胞抗原可被选择作为指定抗原，并且细菌抗原或其免疫原性片段或变体可用作免疫原。在某些实施方案中，目标细菌抗原可以是分泌的多肽。在其它某些实施方案中，可用作诱导免疫反应的免疫原的细菌抗原包括具有在细菌的外细胞表面上表达的多肽的一部分或多部分的抗原。在细胞表面上表达的多肽免疫苗原的部分对于宿主中的免疫细胞和/或抗体是可及的，因而可以是由重组表达载体编码的有用的免疫原，并且包含在含有本申请中描述的免疫原的免疫原性组合物(其还可包含佐剂)中。[0087]预期用作免疫原的来源于葡萄球菌属物种(包括抗甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA))的抗原包括毒性介质例如Agr系统、Sar和Sae、Arl系统、Sar同源物(Rot、MgrA、SarS、SarR、SarT、SarU、SarV、SarX、SarZ和TcaR)、Srr系统和TRAP。可用作免疫原的其它葡萄球菌属蛋白质包括Clp蛋白、HtrA、MsrR、顺乌头酸酶、CcpA、SvrA、Msa、CfvA和CfvB(参见，例如，葡萄球菌属:MolecularGenetics,2008CaisterAcademicPress,Ed.JodiLindsay)。金黄色葡萄球菌的两个物种(N315和Mu50)的基因组已进行了测序，并且是可以例如在PATRIC(PATRIC:TheVBIPathoSystemsResourceIntegrationCenter,Snyder等人，NucleicAcidsRes.(2007)35=401-406)中公共获得的。如本领域技术人员可理解的，用作免疫原的葡萄球菌属蛋白质还可在其它公共数据库例如GenBank、Swiss-Prot和TrEMBL中被鉴定。[0088]预期在本申请中描述的某些实施方案中用作免疫原的来源于肺炎链球菌的抗原包括肺炎球菌溶血素(pneumolysin)、PspA、胆碱结合蛋白A(CbpA)、NanA>NanB>SpnHL>PavA、LytA、Pht和菌毛蛋白(RrgA；RrgB；RrgC)。肺炎链球菌的免疫原性蛋白在本领域也是已知的并且预期用作免疫原(参见，例如，Zysk等人，Infect.1mmun.200068(6):3740-43)。肺炎链球菌的强毒株的完整基因组序列已被测序(参见，例如，TettelinH等人，Science(2001)293(5529):498-506)并且，如本领域技术人员所理解的，用于本申请中描述的组合物的肺炎链球菌(S.pneumoniae)蛋白还可在其它公共数据库例如GenBank、Swiss-Prot和TrEMBL中被鉴定。用于根据本公开内容的免疫原的特定目标蛋白质包括预测在肺炎双球菌的表面上表达的毒力因子(virulencefactor)和蛋白质(参见,例如，Tettelin等人，同上；Frolet等人，BMCMicrobiol.(2010)Jull2;10:190；Rigden等人，Crit.Rev.Biochem.Mo1.Biol.(2003)38(2):143-68；Jedrzejas,Microbiol.Mo1.Biol.Rev.(2001)65(2):187-207)。[0089]可用作免疫原的细菌抗原的实例包括但不限于放线菌属(Actinomyces)多肽、芽孢杆菌属(Bacillus)多肽、拟杆菌属(Bacteroides)多肽、博德特菌属(Bordetella)多肽、巴尔通体属(Bartonella)多肽、疏螺旋体属(Borrelia)多肽(例如，博氏疏螺旋体(B.burgdorferi)OspA)、布鲁氏菌属(Brucella)多妝、弯曲杆菌属(Campylobacter)多肽、二氧化嗜纤维菌属(Capnocytophaga)多肽、衣原体属(Chlamydia)多肽、棒杆菌属(Corynebacterium)多肽、考克斯体属(Coxiella)多肽、嗜皮菌属(Dermatophilus)多肽、肠球菌属(Enterococcus)多肽、埃立克体属(Ehrlichia)多肽、埃希氏菌属(Escherichia)多肽、弗朗西斯氏菌属(Fra·ncisella)多肽、梭杆菌属(Fusobacterium)多肽、支原体属(Haemobartonella)多肽、嗜血菌属(Haemophilus)多肽(例如，乙型流感嗜血杆菌(H.1nfluenzaetypeb)外膜蛋白)、螺杆菌属(Helicobacter)多肽、克雷伯氏菌属(Klebsiella)多肽、L型细菌(L-formbacteria)多肽、钩端螺旋体属(Leptospira)多肽、利斯特菌属(Listeria)多肽、分枝杆菌属(Mycobacteria)多肽、支原体属(Mycoplasma)多肽、奈瑟球菌属(Neisseria)多肽、新立克次体属(Neorickettsia)多肽、诺卡尔菌属(Nocardia)多肽、巴斯德氏菌属(Pasteurella)多肽、消化球菌属(Peptococcus)多肽、蛋白胨链球菌属(Peptostreptococcus)多肽、肺炎球菌多肽(即，肺炎链球菌(S.pneumonia)多肽)(参见本申请所述的)、变形杆菌属(Proteus)多肽、假单胞细菌属(Pseudomonas)多肽、立克次体属(Rickettsia)多肽、罗沙利马体属(Rochalimaea)多肽、沙门菌属(Salmonella)多肽、志贺菌属(Shigella)多肽、葡萄球菌属(Staphylococcus)多肽、A组链球菌属(groupAstreptococcus)多肽(例如，化脓性链球菌(S.pyogenes)M蛋白)、B组链球菌(groupBstreptococcus)(无乳链球菌(S.agalactiae))多肽、密螺旋体属(Treponema)多肽、和耶尔森氏菌属(Yersinia)多肽(例如，鼠疫耶尔森氏菌Fl(Y.pestisFl)和V抗原(Vantigens))。[0090]可以为免疫原的真菌抗原的实例包括但不限于犁头霉属(Absidia)多肽、支顶孢属(Acremonium)多肽、链格孢属(Alternaria)多肽、曲霉菌属(Aspergillus)多肽、娃粪霉菌属(Basidiobolus)多肽、双极霉属(Bipolaris)多肽、芽生菌属(Blastomyces)多肽、假丝酵母属(Candida)多肽、球孢子菌属(Coccidioides)多肽、耳霉属(Conidiobolus)多肽、隐球菌属(Cryptococcus)多肽、弯孢菌属(Curvalaria)多肽、表皮癖菌属(Epidermophyton)多肽、外小杯菌(Exophiala)多肽、地丝菌属(Geotrichum)多肽、组织胞衆菌属(Histoplasma)多肽、马杜拉分枝菌属(Madurella)多肽、马拉色霉菌属(Malassezia)多肽、小孢子菌属(Microsporum)多肽、小丛梗孢属(Moniliella)多肽、被孢霉菌(Mortierella)多肽、毛霉菌属(Mucor)多肽、拟青霉属(Paecilomyces)多肽、青霉属(Penicillium)多肽、单胞瓶霉属(Phialemonium)多肽、瓶霉菌属(Phialophora)多肽、原壁菌属(Prototheca)多肽、假霉样真菌属(Pseudallescheria)多肽、假小托菌属(Pseudomicrodochium)多妝、腐霉菌属(Pythium)多妝、鼻抱子菌属(Rhinosporidium)多肽、根霉菌属(Rhizopus)多肽、线状担子菌属(Scolecobasidium)多肽、孢子丝菌属(Sporothrix)多肽、匍柄霉属(Stemphylium)多肽、发癖菌属(Trichophyton)多肽、毛孢子菌属(Trichosporon)多肽和木丝霉属(Xylohypha)多肽。[0091]原生动物寄生虫抗原的实例包括但不限于巴贝虫属(Babesia)多肽、肠袋虫属(Balantidium)多肽、贝诺孢子虫属(Besnoitia)多肽、隐孢子虫属(Cryptosporidium)多肽、艾美虫属(Eimeria)多肽、脑胞内原虫属(Encephalitozoon)多肽、内阿米巴属(Entamoeba)多肽、贾第虫属(Giardia)多肽、哈蒙德虫属(Hammondia)多肽、肝簇虫属(Hepatozoon)多肽、等孢子球虫属(Isospora)多肽、利什曼原虫属(Leishmania)多肽、微孢子虫(Microsporidia)多肽、新孢子虫属(Neospora)多肽、微粒子虫属(Nosema)多肽、五鞭毛滴虫属(Pentatrichomonas)多肽、痕原虫属(Plasmodium)多肽。螺虫寄生虫抗原的实例包括但不限于棘唇线虫属(Acanthocheilonema)多肽、猫圆线虫属(Aelurostrongylus)多妝、钩虫属(Ancylostoma)多妝、管圆线虫属(Angiostrongylus)多肽、蛔虫属(Ascaris)多肽、布鲁丝虫属(Brugia)多肽、仰口线虫(Bunostomum)多肽、毛细线虫属(Capillaria)多肽、夏柏特线虫(Chabertia)多肽、古柏线虫属(Cooperia)多肽、环体线虫属(Crenosoma)多肽、网尾线虫属(Dictyocaulus)多肽、膨结线虫属(Dioctophyme)多肽、棘唇属(Dipetalonema)多肽、裂头属(Diphyllobothrium)多肽、犬复孔绦虫(Diplydium)多肽、恶丝虫属(Dirofilaria)多肽、龙线虫属(Dracunculus)多肽、蛲虫属(Enterobius)多肽、丝状虫属(Filaroides)多肽、血矛线虫属(Haemonchus)多肽、兔唇蛔线虫属(Lagochilascaris)多肽、罗阿丝虫属(Loa)多肽、曼森线虫属(Mansonella)多肽、缪勒线虫属(Muellerius)多肽、侏形吸虫属(Nanophyetus)多肽、板口线虫属(Necator)多肽、细颈线虫属(Nematodirus)多肽、结节线虫属(Oesophagostomum)多肽、盘尾丝虫属(Onchocerca)多肽、后睾属(Opisthorchis)多肽、胃线虫属(Ostertagia)多肽、畐1J丝虫属(Parafilaria)多肽、并殖吸虫属(Paragonimus)多肽、副蛔属(Parascaris)多肽、泡翼属线虫(Physaloptera)多肽、原圆线虫属(Protostrongylus)多肽、腹腔丝虫属(Setaria)多肽、旋毛线虫属(Spirocerca)多肽、迭宫绦虫属(Spirometra)多肽、冠丝虫属(Stephanofilaria)多肽、类圆线虫属(Strongyloides)多肽、圆线虫属(Strongylus)多肽、吸晚线虫属(Thelazia)多肽、弓蛔线虫属(Toxascaris)多肽、弓蛔虫属(Toxocara)多肽、毛线虫属(Trichinella)多肽、毛圆线虫属(Trichostrongylus)多肽、鞭虫属(Trichuris)多肽、钩虫属(Uncinaria)多肽和吴策线虫属(Wuchereria)多肽(例如，恶性痕原虫环子孢子(P.falciparumcircumsporozoite)(PfCSP))、子孢子表面蛋白2(PfSSP2)、肝状态抗原I的羧基末端(PfLSAlc-term)以及输出蛋白I(PfExp-1)、肺囊虫(Pneumocystis)多肽、肉孢子虫属(Sarcocystis)多肽、血吸虫属(Schistosoma)多肽、泰勒虫属(Theileria)多肽、弓形虫属(Toxoplasma)多肽和锥虫属(Trypanosoma)多肽。[0092]外寄生虫抗原的实例包括但不限于来自如下外寄生虫的多肽(包括保护性抗原以及变应原):蚤；蝶(ticks),包括硬蝶科(hardticks)和软蝶科(softticks);苍蚬，例如蚊(midges)、蚊子(mosquitoes)、白蛉子(sandflies)、黑蚬(blackflies)、马妮(horseflies)、角妮(hornflies)、斑!lit(deerflies)、米米妮(tsetseflies)、螫妮(stableflies)、引起妮咀病的苍妮(myiasis-causingflies)和朦(bitinggnats);蚁(ants);蜘蛛(spiders)、風(lice);螨(mites);和椿象例如床風(bedbugs)和猎蝽。[0093]免疫反应包括体液反应(即,B细胞反应)或细胞介导的反应(包括细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应)或两者的诱导还可促成另外的生物例如铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、结核分枝杆菌属(Mycobacteriumtuberculosis)、麻疯分枝杆菌(M.leprae)和无害利斯特菌(Listeriainnocula)的吞曬或杀死。CTL免疫反应促成铜绿假单胞菌、结核分枝杆菌、麻疯分枝杆菌和无害利斯特菌的杀死(参见，例如，Oykhman等人，J.Biomed.Biotechnol.(2010=249482);于2010年6月23日在线出版的)。因此，用于本申请中描述的免疫原性组合物并且由重组表达载体和包含所述载体的载体颗粒编码的免疫原还可来源于这类细菌。许多由细菌物种的任一种的细菌基因组编码的和由细菌表达的多肽的氨基酸序列可在本领域中和公共可获得的蛋白质序列数据库中被容易地鉴定。(也参见，例如，Stover等人，Nature406:959(2000))。[0094]本申请中描述的免疫原可获自或来源于真菌或寄生虫。诱导免疫反应包括CTL免疫反应的示例性寄生虫包括曼森氏血吸虫(Schistosomamansoni)、溶组织阿米巴变形虫(Entameobahistolytica)、刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)和恶性痕原虫(Plasmodiumfalciparum)(参见例如,Oykhman,同上)。因此,来源于或获自这类寄生虫的蛋白质抗原可用作诱导抗各自寄生虫的免疫反应的免疫原。免疫原还可获自或来源于真菌的物种，包括但不限于新型隐球菌(Cryptococcusneoformans)和白色念珠菌(Candidaalbicans)(参见例如，Oykhman,同上)。[0095]包含免疫原性多肽(例如，本申请中和/或本领域中描述的肿瘤相关抗原或微生物抗原的任一种)的至少一个免疫原性片段的多肽可用作免疫原并且由本申请中描述的重组表达载体编码。免疫原性片段包含至少一个T细胞表位或至少一个B细胞表位。免疫原性片段可由免疫原性多肽的至少6、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100或更多个连续氨基酸组成。免疫原性片段可包含上述连续氨基酸数目之间的任何数目的连续氨基酸，以便例如免疫原性片段为免疫原性多肽的约6-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100或更多个连续氨基酸。免疫原性片段可包含形成线性表位的充足数量的连续氨基酸和/或可包含允许片段以与片段所源自的全长多肽相同(或充分相似)的三维构象折叠(以提供非线性表位(在本领域也称为构象表位))的充足数量的连续氨基酸。用于评估免疫原性片段是否折叠成可与全长多肽相比较的构象的测定包括例如蛋白质与对于天然的或展开的表位是特异性的单克隆或多克隆抗体反应的能力、其它配体结合功能的保留以及多肽片段对利用蛋白酶的消化的敏感性或抗性(参见，例如，Sambrook等人,MolecularCloning:ALaboratoryManual,第3版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,NY(2001))。因此,例如，当特异性结合全长多肽的抗体对于片段的结合能力和结合水平与对于全长多肽的大体上相同(即，结合的水平保持与示例性或野生型全长抗原的免疫原性相比较达到在统计学上、临床上和/或生物学上充分的程度)时，多肽片段的三维构象与全长多肽充分相似。[0096]目标多肽或其免疫原性片段的三维结构的测定可通过确定免疫原性片段是否保持如在全长多肽中发现的氨基酸的空间定位的常规方法来进行。参见，例如，Bradley等人，Science309:1868-71(2005);Schueler-Furman等人，Science310:638(2005)；Dietz等A,Proc.Nat.Acad.Sc1.USA103:1244(2006)；Dodson等人，Nature450:176(2007)；Qian等人，Nature450:259(2007)。还可在本领域中获得的是软件工具，例如PSORT或PSORTII和Spscan(WisconsinSequenceAnalysisPackage,GeneticsComputerGroup),所述软件工具用于预测已知或据信横跨细胞膜的多肽的跨膜区段和膜拓扑学(参见，例如，Nakai等人，TrendsBiochem.Sc1.24:34-36(1999))。[0097]单独地，或与上述技术组合地，以及在给定指定的目标抗原的示例性氨基酸序列的情况下，本领域技术人员可鉴定多肽抗原的潜在表位(参见，例如，Jameson和Wolf,Comput.Appl.Biosc1.4:181-86(1988))。以另一个实例为例，Hopp和Woods描述了亲水性方法，所述方法基于多肽区域的亲水性与它们的抗原性之间的密切关系的经验实证(参见，例如，Hopp,Pept.Res.6:183-90(1993)；Hofmann等人，Biomed.Biochim.Acta46:855-66(1987))。计算机程序也可用于鉴定B细胞或T细胞表位。称为EPIPL0T的BASIC程序根据它们的一级结构，通过使用13个不同等级(scale)计算和标绘柔性、亲水性和抗原性特征谱来预测蛋白质中的B细胞抗原性位点(参见,例如,Menendez等人,Comput.Appl.Biosc1.6:101-105(1990)),也参见,例如,VanRegenmortel,Methods:acompaniontoMethodsinEnzymology,9:465-472(1996);Pellequer等人，“Epitopepredictionsfromtheprimarystructureofproteins,”InPeptideantigens:apracticalapproach(编者G.B.Wisdom),第7_25页；0xfordUniversityPress,Oxford(1994)；VanRegenmortel,“Moleculardissectionofproteinantigens”InStructureofantigens(编者Μ.Η.V.VanRegenmortel),第I卷，第1-27页.CRCPress,BocaRaton(1992)。[0098]可用作免疫原的指定抗原的T细胞表位还可使用基于由Rammensee等人(Immunogenetics50:213-219(1999))；由Parker等人(同上)开发的算法的肽基序搜索程序，或通过使用方法例如由Doytchinova和Flower在Immunol.CellBiol.80(3):270-9(2002)；Blythe等人，Bioinformaticsl8:434-439(2002)；Guan等人，AppliedBioinformatics2:63-66(2003)；Flower等人，AppliedBioinformaticsl:167-176(2002)；Mallios,Bioinformaticsl7:942-48(2001)；Schirle等人，J.1mmunol.Meth.257:1-16(2001)中描述的那些方法来鉴定。[0099]可在本申请中描述的组合物和方法中用作免疫原的指定微生物抗原或指定肿瘤抗原的表位区域也在本领域中进行了描述。参见例如，Lamb等人，Rev.1nfect.Dis.Mar-Apr:Suppl2:s443-447(1989)；Lamb等人，EMBOJ.6:1245-49(1987)；Lamb等人，Lepr.Rev.Suppl2:131-37(1986)；Mehra等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA83:7013-27(1986)；Horsfall等人，Immunol.Todayl2:211-13(1991)；Rothbard等人，Curr.Top.Microbiol.Tmmunol.155:143-52(1990)；Singh等人，Bioinformaticsl7:1236-37(2001)；DeGroot等人，Vaccinel9:4385-95(2001)；DeLalla等人，J.1mmunol.163:1725-29(1999);Cochlovius等人，J.1mmunol.165:4731-41(2000)；Consogno等人，BloodlO1:1039-44(2003)；Roberts等人，AIDSRes.Hum.Retrovir.12:593-610(1996);Kwok等人,TrendsImmunol.22:583-88(2001);Novak等人,J.Tmmunol.166:6665-70(2001)。[0100]用于鉴定表位区域的另外的方法包括Hoffmeister等人，Methods29:270-281(2003);Maecker等人，J.1mmunol.Methods255:27-40(2001)中描述的方法。用于鉴定表位的测定描述于本申请中并且对于本领域技术人员来说是已知的，包括例如Immunology,Coligan等人(编)，Johnffiley&Sons,NewYork,NY(1991)中的现有方案(CurrentProtocol)中描述的那些测定。[0101]鉴定指定的目标抗原的免疫原性区域和/或表位还可由本领域技术人员凭经验和/或通过计算机分析和计算机建模，使用由本领域技术人员常规实施的方法和技术来容易地确定。经验方法包括例如合成包含特定长度的蛋白质的连续氨基酸的多肽片段，或通过使用一种或多种蛋白酶产生片段，随后使用本领域中常规实施的许多结合测定或免疫测定法的任一种来测定片段的免疫原性。用于测定抗体(多克隆抗体、单克隆抗体或其抗原结合片段)特异性结合片段的能力的示例性方法包括但不限于ELISA、放射免疫测定、免疫印迹、竞争性结合测定、荧光激活细胞分选仪分析(FACS)和表面等离子体共振。[0102]T细胞和B细胞表位的序列可获自公共可获得的数据库。例如，包括T细胞确定的肿瘤抗原的肽数据库可在互联网上见于定期更新的由癌症免疫(CancerImmunity)(参见cancerimmunity(dot)org/peptidedatabase/Tcellepitopes.htm)资助的妝数据中。另一个可获得的由国家过敏及传染病研究所(NationalInstituteofAllergyandInfectiousDisease)支持的数据库，其提供用于搜索B细胞和T细胞表位的工具和提供表位分析工具(参见immunoepitope(dot)org上的免疫表位数据库和分析源(ImmuneEpitopeDatabaseandAnalysisResource))。[0103]在某些情况下，当抗原特异性T细胞或克隆是可获得的时，例如肿瘤-浸润淋巴细胞(TIL)、病毒特异性或细菌特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，可使用利用特定抗原制备的靶细胞将此类细胞用于筛选相关表位的存在。此类靶可使用随机肽文库或选择的合成肽文库来制备，所述靶可用于使靶细胞易于被CTL裂解。当T细胞系或克隆是可获得的时，鉴定相关表位的另一个方法将使用重组DNA法。首先制备来自对CTL易感的靶的基因或cDNA文库，随后将其转染进入非易感靶细胞。这允许鉴定和克隆编码包含CTL表位的肽的蛋白质前体的基因。本方法的第二步骤是从相关的克隆化基因制备截短的基因，以使缩小编码至少一个CTL表位的区域。如果基因不太大，该步骤是任选的。第三步骤是制备例如长度约10-20个氨基酸、重叠5-10个残基的合成肽，所述肽用于使靶对CTL敏感。当肽经显示包含相关表位时，需要时，可制备更小的肽来建立包含表位的具有最小尺寸的肽。这些表位通常(但不一定)包含在9-10个残基(对于CTL表位而言)和达到20或30个残基(对于辅助T淋巴细胞(HTL)表位而言)内。[0104]或者，表位可通过肽的直接洗脱来确定，所述肽被特定主要组织相容性复合物(MHC)分子非特异性结合，随后对洗脱的肽进行氨基酸测序(参见，例如，Engelhard等人，CancerJ.2000May；6Suppl3:S272-80)。简而言之，使用纯化法例如HPLC分离洗脱的肽，测试单个级分的使靶易于被CTL裂解或诱导细胞因子在HTL中的分泌的增加的能力。当级分已被鉴定为包含肽时，将其经历进一步纯化和接受序列分析。肽序列还可使用串联质谱法来测定。随后利用CTL或HTL制备和测试合成肽以确证正确的序列和肽已被鉴定。[0105]表位还可使用计算机分析例如Tsites程序(参见,例如,Rothbard和Taylor,EMBOJ.7:93-100，1988；Deavin等人，Mol.1mmunol.33:145-155，1996)来鉴定，所述计算机分析搜索具有引发Th反应的潜能的肽基序。具有适用于结合鼠和人I类或II类MHC的基序的CTL肽可按照BIMAS(Parker等人，J.1mmunol.152:163,1994)和其它HLA肽结合预测分析来鉴定。简而言之，检查例如来自微生物组分或抗原或肿瘤细胞组分或肿瘤抗原的蛋白质序列的MHC结合基序的存在。对于每一个MHC等位基因存在的这类结合基序是通常在通常为9-10个残基长的MHCI类结合肽的位置2(或3)和9(或10)上的保守氨基酸残基。随后制备包含具有MHC结合基序的这类序列的合成肽，随后测试此类肽的结合MHC分子的能力。MHC结合测定可使用表达高数目的空(未被占据的)MHC分子的细胞(细胞结合测定)或使用纯化的MHC分子来进行。最后，随后在体外使用人淋巴细胞或在体内使用HLA转基因动物测试MHC结合肽诱导首次用于实验的个体的CTL反应的能力。使用肽致敏的靶细胞和天然加工抗原的靶例如病毒感染的细胞或肿瘤细胞测试这类CTL。为了进一步确认免疫原性，可使用HLAA2转基因小鼠模型和/或多种体外刺激测定的任一种来测试肽。[0106]在某些实施方案中，免疫原包括指定抗原的肽物种，所述肽物种在本领域中为已知的并且可获得的各自免疫原的氨基酸序列中具有一个或多个氨基酸置换、插入或缺失。氨基酸的保守置换是公知的并且通常可天然地存在于多肽中，或当重组产生多肽时可被引入。氨基酸置换、缺失和添加·可使用公知的和常规实施的诱变方法(参见，例如，Sambrook等人MolecularCloning:ALaboratoryManual,第3版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,NY2001))来引入多肽。寡核苷酸指导的定点(或区段专一性)诱变法可被用于提供具有按照期望的置换、缺失或插入改变的特定密码子的改变的多核苷酸。可用作免疫原的指定抗原的缺失或截断变体还可通过使用与期望的缺失相邻的方便的限制性内切核酸酶位点来构建。在限制性位点之后，可填充悬突，再连接DNA。或者，可使用随机诱变技术例如丙氨酸扫描诱变、易错聚合酶链式反应诱变和寡核苷酸指导的诱变来制备免疫原多肽变体(参见，例如，Samtoook等人，同上)。特定指定抗原的物种(或变体)(或其多肽片段)包括与本领域已知的示例性氨基酸序列的任一个具有至少85%、90%、95%或99%的氨基酸序列同一'I"生的多肽免疫原。[0107]这类多肽免疫原变体保持各自指定抗原的一个或多个生物活性或功能。具体地，作为指定抗原的变体的免疫原以统计上、临床上或生物学上显著的方式保持诱导受试者的免疫反应(例如，例如体液反应(即，B细胞反应)、细胞介导的反应(即，T细胞反应(包括细胞毒性T淋巴细胞反应))或体液和细胞介导的反应的能力。给定在本领域中常规实施的用于在多肽中引入突变、制备多肽片段、分离片段和变体以及分析所述片段和变体的许多分子生物学、蛋白质表达和蛋白质分离技术及方法，具有期望的生物活性的免疫原多肽变体和片段可被容易地制备而无需过多实验。[0108]本领域技术人员已知的多种标准指明在肽或多肽的特定位点上被置换的氨基酸是否是保守的(或相似的)。例如，相似氨基酸或保守氨基酸置换是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基置换的置换。相似氨基酸可包括在下列分类中:具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)；具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)；具有不带电的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、组氨酸)；具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)；具有β分枝侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)以及具有芳香侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)。被认为更难分类的脯氨酸与具有脂肪族侧链的氨基酸(例如，亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和丙氨酸)共有许多性质。在某些情况下，用谷氨酰胺替代谷氨酸或用天冬酰胺替代天冬氨酸的置换可被认为是相似置换，因为谷氨酰胺和天冬酰胺分别是谷氨酸和天冬氨酸的酰胺衍生物。如本领域中所理解的，两个多肽之间的“相似性”可通过将多肽的氨基酸序列和对于其的保守氨基酸置换与第二多肽的序列相比较(例如，使用GENEWORKS、Align、BLAST算法或本申请中描述的和本领域实施的其它算法)来进行测定。[0109]如本申请中对于免疫原性片段所描述的，用于评估各个变体是否折叠成可与非变体多肽或片段相比较的构象的测定包括例如蛋白质与对于天然或展开的表位是特异性的单克隆或多克隆抗体反应的能力、配体结合功能的保留以及突变蛋白质对利用蛋白酶的消化的敏感性或抗性(参见Sambrook等人，同上)。此类变体可按照本申请中描述的方法或本领域内已知的其它方法来鉴定、表征和/或制备，所述方法由本领域技术人员常规地实施。[0110]包含在本申请中描述的免疫原性组合物中的分离的/重组的免疫原可按照分子生物学和/或多肽纯化领域中常规实施的各种方法和技术来产生和制备。用于重组产生目标免疫原的表达载体的构建可使用本领域内已知的许多适当的分子生物学工程技术的任一种来实现，包括但不限于限制性内切核酸酶降解、连接、转化、脂质体纯化和DNA测序的标准技术，例如如Sambrook等人(1989和2001版；MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,NY)和Ausubel等人(CurrentProtocolsinMolecularBiology(2003))中描述的。为了获得高效的转录和翻译,每一个重组表达构建体中的多核苷酸序列包括至少一个适当的表达控制序列(也称为调控序列)，例如有效地连接至编码免疫原的核苷酸序列的前导序列和特别地启动子序列。[0111]通过重组技术，利用重组表达载体对宿主细胞进行遗传工程来产生免疫原、其片段或变体。可将本申请中描述的多肽和融合多肽的每一种在适当的启动子控制下于哺乳动物细胞、酵母、细菌、昆虫或其它细胞中表达。无细胞翻译系统还可被用于使用来源于DNA构建体的RNA来产生此类蛋白质。用于与原核和真核宿主一起使用的适当的克隆和表达载体例如由Sambrook等人，MolecularCloning:ALaboratoryManual,第3版，ColdSpringHarbor,NewYork,(2001)进行描述。[0112]—般而言，用于产生目标免疫原的重组表达载体包括复制起始点、允许转化宿主细胞的可选择标记(例如大肠杆菌(E.coli)的氨苄青霉素抗性基因和酿酒酵母(S.cerevisiae)TRPl基因)和来源于高度表达的基因的启动子来指导下游结构序列的转录。启动子可来源于编码糖酵解酶例如3-磷酸甘油酸酯激酶(PGK)、α-因子、酸性磷酸酶或热激蛋白及其它的操纵子。将异源结构序列以适当的相位与翻译起始和终止序列装配在一起。[0113]任选地，可将异源序列与编码免疫原的核苷酸序列框内插入，以提供赋予期望的特征(例如简化表达的重组产物)的纯化的肽或多肽。这样鉴定的肽包括多组氨酸标记(his标记)或FLAG?表位标记(DYKDDDDK，SEQIDNO:35)、β-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶、GST或XPRESS?表位标记(DLYDDDDK,SEQIDNO:41；InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)等(参见，例如，美国专利N0.5，011，912;Hopp等人(Bio/Technology6:1204(1988))。亲和序列可由载体提供，例如在pBAD/His(Invitrogen)中提供的六组氨酸标记。或者，亲和序列可通过合成添加进入或工程化进入用于重组产生核酸编码序列的引物(例如，使用聚合酶链式反应)。[0114]包含描述的重组表达构建体的宿主细胞可利用表达构建体(例如，克隆载体、穿梭载体或表达构建体)来遗传工程化(转导、转化或转染)。载体或构建体可以质粒、病毒颗粒、噬菌体等形式存在。可将工程化宿主细胞培养在经改良适合于激活启动子、选择转化体或扩增编码核苷酸序列的常规营养培养基中。用于特定宿主细胞的培养条件例如温度、PH等的选择和维持对于本领域技术人员来说是显而易见的。优选地，可按照已建立的用于产生多肽的方法改造宿主细胞以使之适合于在培养中持续增殖来产生细胞系。在某些实施方案中，细胞系是永生化细胞系，其是指可在对数期生长后于培养中反复(至少10次，同时保持活力)传代的细胞系。[0115]有用的细菌表达构建体可通过将表达载体以可操作的阅读相与适当的翻译起始和终止信号以及与功能性启动子一起插入编码期望的免疫原的结构DNA序列来构建。构建体可包括一个或多个表型可选择标记和复制起始点来确保载体构建体的维持以及，必要时，在宿主内提供扩增。用于转化的适当的原核宿主包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、鼠伤寒沙门菌(Salmonellatyphimurium)和假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)和葡萄球菌属(Staphylococcus)内的不同种，尽管其它细菌也可用作选择的主题。可使用任何其它质粒或载体，只要它们是在宿主中是可复制的和有活力的。因此，例如，可将编码目标免疫原或指定抗原的核苷酸序列包含在多种用于表达多肽的重组表达构建体的任一种中。此类载体和构建体包括染色体、非染色体和合成DNA序列，例如细菌质粒；噬菌体DNA;杆状病毒；酵母质粒；来源于质粒与噬菌体DNA的组合的载体；病毒DNA，例如牛痘病毒、腺病毒、鸡痘病毒和假性狂犬病毒病毒。然而，任何其它载体可用于制备重组表达构建体，只要其在宿主中是可复制的和有活力的。[0116]可利用多种方法将适当的DNA序列插入载体。一般而言，利用本领域已知的方法将DNA序列插入适当的限制性内切核酸酶位点。用于克隆、DNA分离、扩增和纯化、用于牵涉DNA连接酶、DNA聚合酶、限制性内切核酸酶等的酶促反应的标准技术以及各种分离技术是本领域技术人员已知和通常使用的那些技术。许多标准技术描述于例如Ausubel等人(CurrentProtocolsinMolecularBiology(GreenePubl.Assoc.1nc.&Johnffiley&Sons,Inc.,2003));Sambrook等人(MolecularCloning:ALaboratoryManual,第3版，(ColdSpringHarborLaboratory2001));Maniatis等人(MolecularCloning,(ColdSpringHarborLaboratoryl982))中，以及其它地方。[0117]表达载体中编码多肽免疫原的DNA序列有效地连接至至少一个适当的表达控制序列(例如，启动子或调节启动子)以指导mRNA合成。此类表达控制序列的代表性实例包括LTR或SV40启动子、大肠杆菌Iac或trp、噬菌体λPL启动子以及其它已知在原核或真核细胞或它们的病毒中控制基因的表达的启动子。启动子区域可选自任何期望的使用CAT(氯霉素转移酶)载体或具有可选择标记的其它载体的基因。具体的细菌启动子包括lad,lacZ、T3、T5、T7、gpt、λPR、PL和trp。真核生物启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、来自逆转录病毒的LTR启动子和小鼠金属硫蛋白-1启动子。适当的载体和启动子的选择以及某些包含至少一个有效地连接至编码至少一个免疫原的核苷酸序列的启动子或调节启动子的重组表达构建体的制备完全在本领域技术人员的能力水平之内。[0118]诱导型调节启动子和/或受密切调控的启动子的设计和检测在本领域是已知的并且将取决于具体的宿主细胞和表达系统(参见，例如，Guzman等人，J.Bacteriologyl77:4121-30(1995)；Smith等人，J.Biol.Chem.253:6931-33(1978)；Hirsh等人，Cellll:545-50(1977)中描述的大肠杆菌阿拉伯糖操纵子(Pbad或Para);可从Stratagene(LaJolla,CA)获得的PET表达系统(参见美国专利N0.4.952，496);受tet调控的表达系统(Gossen等人,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA89:5547-51(1992)；Gossen等人，Science268:1766-69(1995));pLP_TRE2受体载体(BDBiosciencesClontech,PaloAlto,CA)被设计来与CLONTECH’sCreator?克隆试剂盒一起使用)；也参见，例如，Sauer,Methodsl4:381-92(1998)；Furth,J.Mamm.GlandBiol.Neoplas.2:373(1997));参见，例如，Cascio,Artif.0rgans25:529(2001))。[0119]编码免疫原的核酸序列可被克隆进入杆状病毒穿梭载体，随后将其与杆状病毒重组以产生用于感染例如Sf9宿主细胞的重组杆状病毒表达构建体(参见，例如，BaculovirusExpressionProtocols,MethodsinMolecularBiology第39卷，Richardson,Ed.(HumanPressl995)；Piwnica-fforms,“ExpressionofProteinsinInsectCellsUsingBacu·loviralVectors,，，ShortProtocolsinMolecularBiology,第2版，Ausubel等人编，(JohnWiley&Sonsl992)中的第II部分，第16章)。[0120]可用于分离和纯化重组免疫原的方法例如可包括从将重组免疫原分泌进入培养基的适当的宿主/载体系统获得上清液，随后使用商购可得的过滤器浓缩培养基。在浓缩后，可将浓缩物应用于单个适当的纯化基质或一系列适当的基质，例如亲和基质或离子交换树脂。可将一个或多个反相HPLC步骤用于进一步纯化重组多肽。当从其天然环境分离免疫原或指定抗原时，还可使用这类纯化法。[0121]用于大规模产生本申请中描述的分离的/重组的免疫原的一种或多种的方法包括分批细胞培养，所述培养被监控和控制以维持适当的培养条件。免疫原的纯化可按照本申请中描述的和本领域内已知的并且与国内和外国管理机构的法律和指导方针相符的方法来进行。[0122]佐剂和佐剂组合物[0123]如本申请中所述，免疫原性组合物还可包含至少一种意欲增强(或改善、增进)对免疫原和其各自指定抗原的免疫反应(即，相较于在不施用佐剂下的特异性免疫反应的水平以在统计学上、生物学上或临床上显著的方式增加针对免疫原和指定抗原的特异性免疫反应的水平)的佐剂。在某些实施方案中，免疫原性组合物包含至少一种可以是分离的和/或重组的免疫原和至少一种佐剂。[0124]在其它某些实施方案中，包含编码至少一种免疫原并且能够指导免疫原的表达的重组表达载体的免疫原性组合物还包含佐剂。在其它某些实施方案中，包含至少一种免疫原的免疫原性组合物和包含重组表达载体的免疫原性组合物均还包含佐剂。在其它实施方案中，不是将佐剂与包含重组表达载体的免疫原性组合物组合或将佐剂与该免疫原性组合物同时施用，而是在更晚的时间施用佐剂，以及通过与包含载体的免疫原性组合物不同的途径和/或不同的位置施用佐剂。当在施用包含重组表达载体的免疫原性组合物后施用佐剂时，在施用免疫原性组合物后第18小时、24小时、36小时、72小时或I天、2天、3天、4天、5天、6天或7天(I周)施用佐剂。用于测定免疫反应的水平的方法和技术在本申请中进行了更详细地论述并且在本领域中被常规地实施。[0125]可包含在免疫原性组合物和用于本申请中描述的方法中的示例性佐剂包括但不一定限于下列佐剂。可用于此类方法的佐剂包括用于增强对于免疫原和各自指定抗原是特异性的体液反应、细胞反应或体液反应和细胞反应的佐剂。细胞免疫反应包括对于免疫原和其各自指定抗原是特异性的⑶4T细胞反应(其可包括记忆⑶4T细胞反应)和CD8T细胞反应。细胞反应还可包括针对免疫原(或针对具有或表达免疫原的细胞或颗粒)的细胞毒性T细胞反应(CTL反应)。期望的佐剂增强对免疫原的反应而不引起可能不利地影响反应的定性形式的免疫原的构象变化。适当的佐剂包括铝盐例如明矾(硫酸铝钾)或其它含铝佐剂；无毒性脂质A相关佐剂例如，以非限定性实例为例，无毒性单磷酸脂质A(参见，例如，Tomai等人,J.Biol.ResponseMod.6:99—107(1987);Persing等人，TrendsMicrobiol.10:s32-s37(2002));本申请中描述的GLA;3脱-0-酰化单磷酰脂质A(MPL)(参见，例如，英国专利申请N0.GB2220211);佐剂例如QS21和QuilA,其包含从在南美洲发现的阜皮树(QuillajasaponariaMolinatree)的树皮中分离的三職糖苷(triterpeneglycoside)或阜苷(saponin)(参见，例如，Kensil等人，于VaccineDesign:TheSubunitandAdjuvantApproach(编PowellandNewman,PlenumPress,NY,1995)；美国专利N0.5，057，540中)。其它适当的佐剂包括任选地与免疫刺激物例如单磷酰脂质A组合的水包油乳液(例如角S烯或花生油)(参见，例如，Stoute等人，N.Engl.J.Med.336，86-91(1997))。另一种适当的佐剂是CpG(参见，例如，Klinman,Int.Rev.1mmunol.25(3-4):135-54(2006);美国专利N0.7，402，572;欧洲专利N0.772619)。[0126]如本申请中所述，适当的佐剂是铝盐例如氢氧化铝、磷酸铝或硫酸铝。此类佐剂可与或可以不与其它特定免疫刺激剂例如MPL或3-DMP、QS21、多聚氨基酸或单体氨基酸例如多聚谷氨酸或多聚赖氨酸一起使用。另一种类的适当佐剂是水包油乳液制剂(在本申请中也称为稳定的水包油乳液)。可任选地将此类佐剂与其它特定免疫刺激例如胞壁酰肽(例如，N-乙酰基胞壁酰基-L-苏氨酰-D-异谷氨酰胺(thr-MDP)、N-乙酰基-正胞壁酰-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺(正-MDP)、N-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺酰-L-丙氨酸_2-(1’-2，二棕榈酰-Sn-甘油-3-羟基磷酰氧基)_乙胺(MTP-PE)、N-乙酰基葡糖胺基-N-乙酰基胞壁酰基-L-Al-D-异谷氨酰-L-Ala-二棕榈酰丙酰胺(DTP-DPP)theramide?)或其它细菌细胞壁组分一起使用。水包油乳液包括(I)使用微射流机(microfIuidizer)例如ModelllOY微射流机(Microfluidics,NewtonMass.)配制成亚微米颗粒的含有5%角鲨烯、0.5%Tween80和0.5%Span85(任选地包含不同量的MTP-PE)的MF59(W090/14837)；⑵包含10%角鲨烷、0.4%Tween80、5%普流尼克嵌段聚合物L121和thr-MDP的SAF被微流化成亚微米乳剂或经涡旋以产生更大的颗粒尺寸乳剂，和(3)Ribi佐剂系统(RAS)(RibiImmunochem,Hamilton,MT)，包含2%角S烯、0.2%Tween80和一种或多种来自由单磷酰脂质A(MPL)、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)和细胞壁骨架(CWS)组成的组的细菌细胞壁组分，优选MPL+CWS(Detox?)。同样地如上文中所描述的，适当的佐剂还包括皂苷佐剂例如Stimulon?(QS21，Aquila,Worcester,Mass.)或从其产生的颗粒例如ISC0M(免疫刺激复合物)和ISCOMATRIX。其它佐剂包括完全弗式佐剂(CFA)(其适用于非人用途但不适合于人用途)和不完弗氏佐剂(IFA)。其它佐剂包括细胞因子例如白细胞介素(IL-1、IL-2和IL-12)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和肿瘤坏死因子(TNF)。[0127]如本申请中所述，佐剂可以是无毒性脂质A-相关(或脂质A衍生物)佐剂。在具体实施方案中，基于其用作Toll-样受体(TLR)激动剂的能力选择佐剂。例如，用作TLR4激动剂并且可用于本申请中描述的组合物的无毒性脂质A相关佐剂被鉴定为DSLP。DSLP化合物共有这样的特征:它们包含通过将两个选自葡萄糖和氨基取代的葡萄糖的单糖基团连接在一起形成的二糖(DS)基团，其中二糖被化学地结合至磷酸(P)基团和多种脂质(L)基团。更具体地，二糖可被视为是从两个单糖单位(每一个具有6个碳)形成的。在二糖中，单糖之一将形成还原端，另一个单糖将形成非还原端。为方便起见，按照常规碳水化合物编号命名法，形成还原端的单糖的碳被指定为位于位置1、2、3、4、5和6，然而形成非还原端的单糖的对应的碳被指定为位于位置1’、2’、3’、4’、5’和6’。在DSLP中，非还原端的位置I上的碳通过醚基(-0-)或氨基(-NH-)连接至还原端的6’位置上的碳。磷酸基团优选通过非还原端的4’碳连接至二糖。脂质基团的每一个通过酰胺(-NH-C(O)-)或酯(-O-C(O)-)键连接至二糖，其中羰基连接至脂质基团。二糖具有7个可被连接至酰胺或酯基团的位置，即，非还原端的位置2’、3’和6’以及还原端的位置1、2、3和4。[0128]脂质基团具有至少6个碳，优选至少8个碳，更优选至少10个碳，其中在每一种情况下，脂质基团具有不超过24个碳，不超过22个碳，或不超过20个碳。在一个实施方案中，脂质基团一起提供60-100个碳，优选70至90个碳。脂质基团可仅由碳和氢原子组成，即，其可以是烃基脂质基团，或其可包含一个羟基，即，其可以是羟基取代的脂质基团，或其可包含酯基团，所述酯基团反过来通过酯基团的羰基(-c(o)-)连接至烃基脂质或羟基取代的脂质基团，即酯取代的脂质。烃基脂质基团可以是饱和的或不饱和的，其中不饱和烃基脂质基团可在相邻的碳原子之间具有一个双键。[0129]DSLP包含3或4或5或6或7个脂质基团。在一个方面，DSLP包含3至7个脂质基团，然而在另一个方面DSLP包含4-6个脂质。在一个方面，脂质基团独立地选自烃基脂质、羟基取代的脂质和酯取代的脂质。在一个方面，1、4’和6’位置被羟基取代。在一个方面，单糖单位各自是葡糖胺。DSLP可以游离酸形式或以盐形式例如铵盐形式存在。[0130]在某些实施方案中，DSLP上的脂质通过下列方面进行描述:3’位置被-O-(CO)-CH2-CH(Ra)(-O-C(O)-Rb)取代；2’位置被-NH-(CO)-CH2-CH(Ra)(-O-C(O)-Rb)取代；3位置被-O-(CO)-CH2-CH(OH)(Ra)取代；2位置被-NH-(CO)-CH2-CH(OH)(Ra)取代；其中Ra和Rb的每一个选自癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基，其中这些术语的每一个是指饱和的烃基。在一个实施方案中，Ra是十一烷基并且Rb是十三烷基，其中该佐剂在例如美国专利申请公布2008/0131466被描述为“GLA”。其中Ra是十一烷基并且Rb是十三烷基的化合物可以以立体化学上定义的形式(如可从例如AvantiPolarLipid以PHAD?佐剂获得)使用。[0131]在一个方面，DSLP是称为3D-MPL的天然来源的化合物。3D-MPL佐剂可由GlaxoSmithKlineCompany将其作为它们的MPL?佐剂以医药级形式商业地生产。3D-MPL已在科学和专利文献中进行了详尽描述，参见例如VaccineDesign:thesubunitandadjuvantapproach,PowellM.F.和Newman,M.J.编，第21章MonophosphorylLipidAasanadjuvant:pastexperiencesandnewdirectionsbyUlrich,J.T.和Myers,K.R.，PlenumPress,NewYork(1995)和美国专利公布N0.4，912，094。[0132]在另一个方面，DSLP佐剂可被描述为包含(i)二葡糖胺骨架，所述骨架具有通过非还原端葡糖胺的己糖胺位置I与还原端葡糖胺的己糖胺位置6之间的醚键连接至非还原端葡糖胺的还原端葡糖胺；(ii)连接至非还原端葡糖胺的己糖胺位置4的O-磷酰基；和(iii)达到6个脂肪酰基链；其中脂肪酰基链之一通过酯键连接至还原端葡糖胺的3-羟基，其中脂肪酰基链之一通过酰胺键连接至非还原端葡糖胺的2-氨基并且包含通过酯键连接至具有超过12个碳原子的烷酰基链的十四酰基链，并且其中脂肪酰基链之一通过酯键连接至非还原端葡糖胺的3-羟基并且包含通过酯键连接至具有超过12个碳原子的烷酰基链的十四酰基链。参见，例如，美国专利申请公布N0.2008/0131466。[0133]在另一个方面，佐剂可以是具有6个脂质基团的合成二糖，如美国专利申请公布2010/0310602中所描述的。[0134]在另一个方面，DSLP佐剂通过化学式⑴进行描述，称为吡喃葡萄糖基脂质A(GLA):[0135]【权利要求】1.一种用于诱导受试者的免疫反应的方法，所述方法包括(a)给所述受试者施用至少一个剂量的包含至少第一免疫原的第一免疫原性组合物，其中所述至少一种免疫原能够诱导对于第一指定抗原是特异性的免疫反应；和(b)给所述受试者施用至少一个剂量的包含含有编码所述第一免疫原的核苷酸序列的重组表达载体的第二免疫原性组合物，从而诱导对于所述第一指定抗原是特异性的免疫反应。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一免疫原是第一多肽，并且所述核苷酸序列编码与所述第一多肽不同的第二多肽。3.根据权利要求1所述的方法，其中(i)所述第一免疫原性组合物还包含佐剂；(ii)所述第二组合物还包含佐剂；或(iii)所述第一组合物和所述第二组合物的每一种还包含佐剂。4.根据权利要求1或权利要求3所述的方法，其中在施用所述第一免疫原性组合物之后施用所述第二免疫原性组合物。5.根据权利要求1或权利要求3所述的方法，其中在施用所述第一免疫原性组合物之前施用所述第二免疫原性组合物。6.根据权利要求1或权利要求3所述的方法，其中共同施用所述第一免疫原性组合物和所述第二免疫原性组合物。7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中施用至少两个剂量的所述第一免疫原性组合物或其中施用至少两个剂量的所述第二免疫原性组合物。8.根据权利要求1或权利要求3所述的方法，其中施用(a)两个剂量；(b)三个剂量；(C)四个剂量；或(d)五个剂量的第一免疫原性组合物。9.根据权利要求8所述的方法，其中(a)在施用所述第二免疫原性组合物之前施用每一个剂量的所述第一免疫原性组合物；(b)在施用所述第二免疫原性组合物之后施用至少一个剂量的第一免疫原性组合物；(C)将至少一个剂量的所述第一免疫原性组合物与所述第二免疫原性组合物的施用同时施用；(d)在施用所述第二免疫原性组合物之前施用至少一个剂量的所述第一免疫原性组合物并且在施用所述第二免疫原性组合物之后施用任何剩余剂量的每一个剂量的所述第一免疫原性组合物；或(e)将每一个剂量的所述第一组合物与所述第二组合物同时施用。10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中由所述第一免疫原诱导的免疫反应包括对于所述第一指定抗原是特异性的CD4T细胞免疫反应。11.根据权利要求ι-?ο中任一项所述的方法，其中由所述第一免疫原诱导的免疫反应包括对于所述第一指定抗原是特异性的CD8T细胞免疫反应。12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述第一免疫原性组合物还包含第二免疫原，并且其中所述重组表达载体还包含编码第二免疫原的核苷酸序列，其中所述第二免疫原诱导对于第二指定抗原是特异性的免疫反应。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述第一指定抗原与所述第二指定抗原相同。14.根据权利要求12所述的方法，其中所述第一指定抗原与所述第二指定抗原不同。15.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述重组表达载体还包含编码能够诱导对于第二指定抗原是特异性的免疫反应的第二免疫原的核苷酸序列。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原相同。17.根据权利要求15所述的方法，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原不同。18.根据权利要求12-17中任一项所述的方法，其中通过所述第一免疫原诱导的免疫反应包括对于所述第一指定抗原是特异性的CD4T细胞反应。19.根据权利要求12-17中任一项所述的方法，其中由所述第二免疫原诱导的免疫反应包括对于所述第二指定抗原是特异性的CD8T细胞免疫反应。20.根据权利要求中3-19中任一项所述的方法，其中所述佐剂是无毒性脂质A相关佐剂。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述无毒性脂质A相关佐剂是吡喃葡萄糖基脂质A(GLA)。22.根据权利要求21所述的方法，其中在稳定的水包油乳液中配制GLA。23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述第一指定抗原是(a)肿瘤相关抗原或(b)来自选自病毒、细菌、真菌和寄生虫的感染性微生物。24.根据权利要求23所述的方法，其中所述第一指定抗原是选自肾细胞癌抗原、前列腺癌抗原、间皮瘤抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原的肿瘤相关抗原。25.根据权利要求24所述的方法，其中所述前列腺癌抗原是前列腺酸性磷酸酶、前列腺特异性抗原、NKX3.1或前列腺特异性膜抗原。26.根据权利要求23所述的方法，其中所述第一指定抗原来自病毒。27.根据权利要求26所述的方法，其中所述病毒是单纯疱疹病毒-2(HSV-2)。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述第一指定抗原是HSV-2UL19多肽或HSV-2gD多肽。29.根据权利要求12-22中任一项所述的方法，其中第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一种是肿瘤相关抗原。30.根据权利要求29所述的方法，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一种选自肾细胞癌抗原、前列腺癌抗原、间皮瘤抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原。31.根据权利要求30所述的方法，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一种是选自前列腺酸性磷酸酶、前列腺特异性抗原、NKX3.1或前列腺特异性膜抗原的前列腺癌抗原。32.根据权利要求12-22中任一项所述的方法，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一种是来自选自病毒、细菌、真菌和寄生虫的感染性微生物的抗原。33.根据权利要求32所述的方法，其中所述感染性疾病生物是病毒。34.根据权利要求33所述的方法，其中所述病毒是单纯疱疹病毒-2(HSV-2)。35.根据权利要求34所述的方法，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的至少一种是HSV-2UL19多肽并且所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的另一种是HSV-2gD多肽。36.根据权利要求1-35中任一项所述的方法,其中所述重组表达载体选自慢病毒载体基因组、痘病毒载体基因组、痘苗病毒载体基因组、腺病毒载体基因组、腺病毒相关病毒载体基因组、疱疹病毒载体基因组和a病毒载体基因组。37.根据权利要求36所述的方法，其中将所述重组表达载体整合进入载体颗粒。38.根据权利要求37所述的方法，其中所述载体颗粒优先将所述重组表达载体递送至抗原呈递细胞。39.根据权利要求38所述的方法，其中所述抗原呈递细胞是树突细胞，优选表达DC-SIGN的树突细胞。40.根据权利要求37-39中任一项所述的方法，其中所述载体颗粒是包含慢病毒载体基因组的慢病毒载体颗粒；包含痘病毒载体基因组的痘病毒载体颗粒；包含痘苗病毒载体基因组的痘苗病毒载体颗粒；包含腺病毒载体基因组的腺病毒载体颗粒；包含腺病毒相关病毒载体基因组的腺病毒相关病毒载体颗粒；包含疱疹病毒载体基因组的疱疹病毒载体颗粒；或包含α病毒载体基因组的α病毒载体颗粒。41.根据权利要求40所述的方法，其中所述载体颗粒是包含慢病毒载体基因组的慢病毒载体颗粒，和优先将所述慢病毒载体颗粒递送至表达DC-SIGN的树突细胞的包膜，任选地为虫媒病毒包膜或甲病毒包膜的变体的包膜。42.根据权利要求41所述的方法，其中所述载体颗粒是包含优先将甲病毒载体颗粒递送至表达DC-SIGN的树突细胞的甲病毒载体颗粒。43.根据权利要求42所述的方法，其中所述慢病毒载体颗粒还包含含有辛德比斯病毒Ε2糖蛋白的包膜，所述糖蛋白包含相较于SEQIDNO:1具有至少一个氨基酸变化的氨基酸序列，其中SEQIDNO:1的残基160不存在或为除谷氨酸外的氨基酸，并且其中所述Ε2糖蛋白不是包含辛德比斯病毒Ε3蛋白的融合蛋白的部分。44.根据权利要求43所述的方法，其中所述Ε2糖蛋白结合树突细胞特异性细胞间粘附分子-3-捕捉非整联蛋白(DC-SIGN)。45.一种制剂，其包含(a)第一`免疫原性组合物，其包含至少一种能够诱导对于第一指定抗原是特异性的免疫反应的第一免疫原；和(b)第二免疫原性组合物，其包含含有编码所述第一免疫原的核酸序列的重组表达载体。46.根据权利要求45所述的制剂，其中由所述第一免疫原诱导的特定免疫反应包括对于所述第一指定抗原是特异性的CD4T细胞反应。47.根据权利要求45所述的制剂，其中由所述第一免疫原诱导的特定免疫反应包括对于所述第一指定抗原是特异性的CD8T细胞反应。48.根据权利要求45-47中任一项所述的制剂，其中所述第一免疫原性组合物还包含第二免疫原，并且其中所述重组表达载体还包含编码所述第二免疫原的核苷酸序列，其中所述第二免疫原诱导对于第二指定抗原是特异性的免疫反应。49.根据权利要求48所述的制剂，其中所述第一指定抗原与所述第二指定抗原相同。50.根据权利要求48所述的制剂，其中所述第一指定抗原与所述第二指定抗原不同。51.根据权利要求45所述的制剂，其中所述重组表达载体还包含编码能够诱导对于第二指定抗原是特异性的免疫反应的第二免疫原的核苷酸序列。52.根据权利要求51所述的制剂，其中所述第一指定抗原与所述第二指定抗原相同。53.根据权利要求51所述的制剂，其中所述第一指定抗原与所述第二指定抗原不同。54.根据权利要求51-53中任一项所述的制剂，其中由所述第一免疫原诱导的免疫反应包括对于所述第一指定抗原是特异性的CD4T细胞反应。55.根据权利要求51-53中任一项所述的制剂，其中由所述第二免疫原诱导的免疫反应包括对于所述第二指定抗原是特异性的CD8T细胞反应。56.根据权利要求45-55中任一项所述的制剂，其中(a)所述第一免疫原性组合物还包含佐剂；(b)所述第二免疫原性组合物还包含佐剂；或(c)所述第一免疫原性组合物和所述第二免疫原性组合物各自还包含佐剂。57.根据权利要求56所述的制剂，其中所述佐剂是无毒性脂质A相关佐剂。58.根据权利要求57所述的制剂，其中所述无毒性脂质A相关佐剂是吡喃葡萄糖基脂质A(GLA)。59.根据权利要求58所述的制剂，其中在稳定的水包油乳液中配制GLA。60.根据权利要求45-59中任一项所述的制剂，其中所述第一指定抗原是(a)肿瘤相关抗原或(b)来自选自病毒、细菌、真菌和寄生虫的感染性微生物。61.根据权利要求60所述的制剂，其中所述第一指定抗原是选自肾细胞癌抗原、前列腺癌抗原、间皮瘤抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原的肿瘤相关抗原。62.根据权利要求61所述的制剂，其中所述前列腺癌抗原是前列腺酸性磷酸酶、前列腺特异性抗原、NKX3.1或前列腺特异性膜抗原。63.根据权利要求60所述的制剂,其中所述第一指定抗原来自病毒。64.根据权利要求63所述的制剂，其中所述病毒是单纯疱疹病毒-2(HSV-2)。·65.根据权利要求64所述的制剂，其中所述第一指定抗原是HSV-2UL19多肽或HSV-2gD多肽。66.根据权利要求49-59中任一项所述的制剂，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一种是肿瘤相关抗原。67.根据权利要求66所述的制剂，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一种选自肾细胞癌抗原、前列腺癌抗原、间皮瘤抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原。68.根据权利要求67所述的制剂，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一种是选自前列腺酸性磷酸酶、前列腺特异性抗原、NKX3.1或前列腺特异性膜抗原的前列腺癌抗原。69.根据权利要求48-59中任一项所述的制剂，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一种是来自选自病毒、细菌、真菌和寄生虫的感染性微生物的抗原。70.根据权利要求69所述的制剂，其中所述感染性疾病生物是病毒。71.根据权利要求70所述的制剂，其中所述病毒是单纯疱疹病毒-2(HSV-2)。72.根据权利要求71所述的制剂，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的至少一种是HSV-2UL19多肽并且所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的另一种是HSV-2gD多肽。73.根据权利要求45-72中任一项所述的制剂，其中所述重组表达载体选自慢病毒载体基因组、痘病毒载体基因组、痘苗病毒载体基因组、腺病毒载体基因组、腺病毒相关病毒载体基因组、疱疹病毒载体基因组和a病毒载体基因组。74.根据权利要求73所述的制剂，其中将所述重组表达载体整合进入载体颗粒。75.根据权利要求74所述的制剂，其中所述载体颗粒能够将所述重组表达载体递送至抗原呈递细胞。76.根据权利要求75所述的制剂，其中所述抗原呈递细胞是树突细胞。77.根据权利要求74-76中任一项所述的制剂，其中所述载体颗粒是包含慢病毒载体基因组的慢病毒载体颗粒；包含痘病毒载体基因组的痘病毒载体颗粒；包含痘苗病毒载体基因组的痘苗病毒载体颗粒；包含腺病毒载体基因组的腺病毒载体颗粒；包含腺病毒相关病毒载体基因组的腺病毒相关病毒载体颗粒；包含疱疹病毒载体基因组的疱疹病毒载体颗粒；或包含a病毒载体基因组的a病毒载体颗粒。78.根据权利要求77所述的制剂，其中所述载体颗粒是包含慢病毒载体基因组的慢病毒载体颗粒。79.根据权利要求78所述的制剂，其中所述慢病毒载体颗粒还包含含有辛德比斯病毒E2糖蛋白的包膜，所述糖蛋白包含相较于SEQIDNO:1具有至少一个氨基酸变化的氨基酸序列，其中SEQIDNO:1的残基160不存在或为除谷氨酸外的氨基酸，并且其中所述E2糖蛋白不是包含辛德比斯病毒E3蛋白的融合蛋白的部分。80.根据权利要求79所述的制剂，其中所述E2糖蛋白结合树突细胞特异性细胞间粘附分子-3-捕捉非整联蛋白(DC-SIGN)。81.根据权利要求60-62和66-68中任一项所述的制剂，其用于诱导针对具有(a)所述第一指定抗原；(b)所述第二指定抗原；或(C)所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的肿瘤细胞的细胞毒性T淋巴细胞反应。82.根据权利要求60、63-65和69-72中任一项所述的制剂，其用于诱导针对具有(a)所述第一指定抗原；(b)所述第二指定抗原；或(C)所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的感染性疾病微生物的细胞毒性T淋巴细胞反应。83.根据权利要求60-62和66-68中任一项所述的制剂，其用于减小包含多个具有肿瘤相关抗原的肿瘤细胞的肿瘤的发生或复发的可能性。84.根据权利要求60、63-65和69-72中任一项所述的制剂，其用于预防或治疗由所述感染性微生物引起的感染。【文档编号】A61K39/00GK103596586SQ201280027969【公开日】2014年2月19日申请日期:2012年4月6日优先权日:2011年4月8日【发明者】汤玛士·W·杜本斯基,史考特·H·罗宾斯申请人:免疫设计公司