含有蛋白酶的药物组合物和治疗溶酶体贮积病的方法

含有蛋白酶的药物组合物和治疗溶酶体贮积病的方法
【专利摘要】本发明提供了一种治疗患有溶酶体贮积病例如戈谢病的受试者的方法和组合物，所述方法是通过给予患有溶酶体贮积病的受试者治疗有效量的组合物，所述组合物以足以改良、减少或改善所述疾病的至少一种症状的量包含至少一种蛋白酶或肽酶。本发明还提供了用于患有溶酶体贮积病的受试者的膳食补充剂。
【专利说明】含有蛋白酶的药物组合物和治疗溶酶体贮积病的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及溶酶体贮积病领域。本发明还涉及用于溶酶体贮积病的酶替代疗法的组合物和方法。具体地，本发明提供了用于预防和/或治疗戈谢病(Gaucher’s disease)的方法和组合物。
【背景技术】
[0002]溶酶体是一种细胞质细胞器，其功能为降解大分子例如蛋白质、多核苷酸、多糖和脂质。溶酶体围起一个酸性环境并含有催化生物大分子水解的水解酶。还发现溶酶体在经胞吞作用摄取分子中起重要作用。
[0003]当溶酶体蛋白缺乏或突变时，会发生溶酶体贮积病。在许多情况中，这种蛋白为酶，并且所述缺乏的酶的底物的异常沉着物在细胞中累积。在其他情况中，所述缺乏的蛋白涉及溶酶体酶的运输、翻译后加工或保护或激活。在其他情况中，所述缺乏的蛋白不是酶，而是存在于溶酶体内空间中或跨越溶酶体膜。这些蛋白中的某些的功能目前未知。在所述溶酶体贮积病中有广泛的临床异质性和生化异质性，所述溶酶体贮积病包括大多数脂质贮积病、黏多糖贮积症、黏脂贮积病和糖蛋白贮积病。目前大约有50种已知的溶酶体贮积病，包括尼曼一皮克(Niemann-Pick)病、法布里病(Fabry’s disease)、戈谢病等。所述病症一般是进行性的，在儿童期或青少年期经常是致命的。遗传咨询在这些疾病的治疗中是重要的，具体的治疗例如酶替代疗法是有希望但昂贵的。通常对这些患者的护理主要是针对症状的。
[0004]溶酶体贮积病( LSD)是大约50种的一组遗传代谢疾病，其起因在于细胞缺乏特定溶酶体酶、受体靶、激活蛋白、膜蛋白或转运蛋白，这导致溶酶体中物质的致病性累积，造成底物的聚集，使得细胞和组织功能衰退。LSD的标志性特征是溶酶体中代谢物的异常累积，其导致在核周体中形成大量的膨胀溶酶体。治疗LSD的主要挑战(与治疗器官特异性酶病如肝特异性酶病相反)是需要反转多个单独组织中的溶酶体贮积病状。
[0005]溶酶体贮积病发生在大约1/5000至1/10000的活产儿中，显示出大量的临床异质性和生化异质性。大多数的溶酶体贮积病作为常染色体隐性病症遗传，但是两个伴X染色体的实例为黏多糖贮积症II型(MPS II)和法布里病。溶酶体贮积病的范围和严重度取决于累积的底物的类型和量，但是几乎所有病症是进行性的。大多数病症具有中枢神经系统表现和全身表现，然而某些仅影响中枢神经系统或神经系统之外的组织。许多溶酶体贮积病患者在幼儿期或儿童期死亡，存活到成人期的患者经常寿命缩短且病态明显。溶酶体病症的实例包括粘多糖(MPS) 1-1X的代谢缺陷(黏多糖贮积症IH型、黏多糖贮积症IS型、黏多糖贮积症II型、黏多糖贮积症III型、黏多糖贮积症IV型、葡糖胺聚糖黏多糖病VI型、黏多糖累积病VII型(Sly diseases)、透明质酸酶缺乏症)、聚糖降解缺陷的天冬氨酰基葡萄糖胺尿、岩藻糖苷贮积症、甘露糖苷贮积症、葡萄糖鞘脂辛德勒(Schindler)病、黏脂病I型、糖原降解缺陷(糖原贮积症II型)、球形三脂酰基鞘鞍醇降解缺陷(法布里病)、脂质降解缺陷(法伯(Farber)病)、戈谢病(鞘脂质组分1_3型)GM-1神经节苷脂贮积症、GM2-神经节苷脂贮积症(泰-萨克斯病、GM2神经节苷脂贮积症变异型O、GM2激活病)、克拉伯病、异染性脑白质营养不良、尼曼一皮克病(A型或B型)、致密性成骨不全症、脂褐素降解或转运缺陷导致的蜡样脂褐质沉积症(具有不同胆固醇、胆固醇酯或缺陷的多种类型，一些还未知)、胆固醇酯贮积疾病以及其他复脂贮积疾病、尼曼一皮克病C型、酸性脂酶缺乏症、多种溶酶体硫酸酯酶缺乏、半乳糖唾液酸苷贮积症、黏脂贮积病I型、III型和IV型、胱氨酸忙积症、唾液酸忙积症、马里内斯科-舍格伦(Marinesco-Sjogren)综合征、海-普二氏(Hermansky-Pudlak)综合征(几种形式)、白细胞异常色素减退综合征(Chediak-Higashisyndrome)和糖原忙积病 II B 型(Danon disease)。
[0006]戈谢病是最普遍的溶酶体贮积病，其是由于所有组织中的葡糖脑苷脂酶(GC;EC3.2.1.45)缺乏。这种酶缺乏导致包括肝、脾、肺和骨髓的网状内皮系统中载脂巨噬细胞(称为戈谢细胞)中葡糖苷酯酰鞘氨醇的累积。戈谢病已被分类为三种主要的表型:1型，非神经型；2型，急性婴儿神经型；和3型，慢性神经型。I型戈谢病的疾病严重度谱宽。儿童和成人可以无症状或可以具有严重衰弱的症状，包括骨骼退化、贫血、血小板减少和肝脾大。
[0007]症状可存在于任何年龄。虽然I型戈谢病在阿什肯纳兹犹太人(AshkenaziJewish)人群中更常见，但是其发生在所有人种群中。2型戈谢病是快速进行性的。到6月龄时，大多数2型婴儿具有脑干功能障碍并在18-24个月龄时死于并发症例如呼吸停止或吸入性肺炎。3型戈谢病患者在晚于2型患者的年龄发生神经系统异常；大多数仅发生微弱的水平扫视眼动缺陷。
[0008]戈谢病是最常见的溶酶体贮积病，影响世界上大约8000-10000人。在戈谢病中，称为酸性(6-葡糖苷酶或葡糖脑苷脂酶(GlcCerase)的溶酶体酶的活性由于编码所述酶的GBA基因中大约200个突变之一而显著下降。这种病症以常染色体隐性模式遗传，这意味着在所述GBA基因的两 个拷贝上都有突变的人会发生戈谢病。降低的GlcCerase活性会导致组织(包括脾、肝、肺、骨髓，有时是脑)中葡糖脑苷脂(还称为葡糖苷酯酰鞘氨醇)的累积。这种葡糖脑苷脂的累积被认为会导致戈谢病的多种症状和征象，包括增大的肝和脾(脾大)、骨骼病症以及一些情况中的肺、肾和中枢神经系统病损。戈谢病与影响运动和平衡的帕金森氏病或帕金森样病症(帕金森症)之间也有关联。帕金森症已经在患有戈谢病的患者以及疾病基因携带者中观察到(Lesage et al.，2011)。在这些人中帕金森症的征象和症状可包括:意向性震颤、强直和运动徐缓、面无表情、讲话急促不清或单调、肌阵挛性反射、嗅觉丧失以及无血管性骨坏死(Neudorfer et al., 1996;Bultron et al.，2010)。在一些受试者中还报告了路易体痴呆。针对一种或多种这些征象和症状的有效饮食和/或药物干预会显著改善这些人的生活质量。
[0009]目前，酶替代疗法(ERT)和减少底物疗法是针对患有戈谢病的患者仅有的被批准的治疗选择(综述见Harmanci, 2008)。使用重组伊米苷酶的ERT改善了所述疾病的内脏表现和血液学表现，但是其对神经型形式的戈谢病无效。并且，ERT的费用是每患者每年大约200000美元，这对许多患者来说是负担不起的，并且没有充足的重组酶供应来满足市场的医学需要。此外，重组伊米苷酶必须经静脉给药，这是不利的。针对戈谢病的首个口服治疗剂是麦格司他(miglustat，N-丁基脱氧野艽霉素)，其是葡糖苷酯酰鞘氨醇合成酶的亚胺糖抑制剂，其用于减少底物疗法。麦格司他在患有轻度或中度疾病的选择患者中产生临床改善，但是反应比使用ERT所观察到的反应更慢且更弱。针对戈谢病的其他可能疗法仍然在开发中(Futerman, 2004)。
[0010]长期需要可为患者提供更高生活质量并达到更好临床结果的预防和/或治疗溶酶体贮积病的方法。具体地，需要可为患者提供更高生活质量并达到更好临床结果的预防和/或治疗戈谢病的方法。
[0011]因此，尚未满足对用于治疗戈谢病的改进方法和组合物的长期需要。具体地，尚未满足对可口服且经济的方法和组合物的长期需要。仍然需要治疗那些经常致命的疾病的其他疗法。本发明的系统、组合物和方法会提供这些长期未满足的需要以及现有疗法没有提供的其他优点。
[0012]本发明的目的
[0013]因此，本发明的一个目的是提供用于治疗溶酶体贮积病的新治疗方法。
[0014]本发明的另一个目的是提供用于治疗溶酶体贮积病的蛋白酶/肽酶组合物。
[0015]本发明的另一个目的是提供用于治疗戈谢病的蛋白酶/肽酶。
[0016]本发明的另一个目的是提供用于减少戈谢病的症状的方法。
[0017]本发明的 另一个目的是蛋白酶/肽酶结合物治疗戈谢病的用途。
[0018]从下文的描述和实施例将会更容易明白本发明的这些目的以及其他目的。

【发明内容】

[0019]本发明提供了新组合物以及使用所述组合物预防和/或治疗具有患上溶酶体贮积病的风险或被诊断患有所述疾病的患者中的溶酶体贮积病的方法，包括给予所述有此需要的患者有效量的本文描述的组合物。
[0020]本发明还提供了用于治疗溶酶体贮积病的方法和组合物，所述溶酶体贮积病包括但不限于，糖原贮积症II型、GMl神经节苷脂贮积症、泰-萨克斯病、GM2神经节苷脂贮积症、GM2神经节苷脂贮积症变异型O、法布里病、戈谢病、异染性脑白质营养不良、克拉伯病、尼曼一皮克病A型、尼曼一皮克病B型、尼曼一皮克病C型、尼曼一皮克病D型、法伯病、酸性脂酶缺乏症、黏多糖贮积症IH型、黏多糖贮积症IS型、胡-射二氏综合征、黏多糖贮积症II型、黏多糖贮积症III型A型、黏多糖贮积症III型B型、黏多糖贮积症III型C型、黏多糖忙积症III型D型、莫尔丘病A型、莫尔丘病B、黏多糖病VI型(Maroteaux-Lamy disease)、黏多糖累积病VII型、α -甘露糖苷贮积症、β -甘露糖苷贮积症、岩藻糖苷贮积症、天冬氨酰基葡萄糖胺尿、涎酸贮积症、黏脂贮积病II型、黏脂贮积病III型、黏脂贮积病IV型、Goldberg综合征、辛德勒病、胱氨酸贮积症、Salla病、婴儿唾液酸贮积病、Batten病、婴儿神经元腊样质脂褐质沉积症或前列腺血清酸性磷酸酶(prosaposin)。
[0021]本发明还涉及治疗溶酶体贮积病的治疗方法，所述溶酶体贮积病例如糖原贮积症II型、黏多糖累积病、黏脂贮积病II型、黏脂贮积病III型、多硫酸酯酶缺乏症、GM2激活蛋白缺陷变异型AB、糖原贮积病II b型、Salla病、泰-萨克斯病、GM2神经节苷脂贮积症变异型O、辛德勒病、Kanzaki病、α -甘露糖苷贮积症、β -甘露糖苷贮积症、岩藻糖苷贮积症、涎酸贮积症、天冬氨酰基葡萄糖胺尿、碳水化合物-缺乏糖蛋白综合征、酸性脂酶缺乏症、法伯病、尼曼一皮克病Α、B和C型、戈谢病、克拉伯病、法布里病、多种硫酸脂酶缺乏症、GMl神经节苷脂贮积症、GM2神经节苷脂贮积症、GM3神经节苷脂贮积症、半乳糖唾液酸苷贮积症、胱氨酸贮积症、唾液酸贮积病、骨发育障碍矮小症、异染性脑白质营养不良、半乳糖唾液酸苷贮积症、神经元腊样脂褐质症(1-9型)、乳糖基酰基鞘氨醇过多症、糖原贮积症II型以及钴胺素缺乏症(cobalamin definiciency)F型,所述方法是通过以足够改良、减少或改善所述溶酶体贮积病的至少一种症状或标记物的量使用至少一种蛋白酶或肽酶进行治疗。
[0022]在一个方面，本文的组合物、方法、系统目的在于提供能够在有此需要的个体中减少戈谢病的一种或多种症状的生理上可接受的组合物，以及制造和使用或给予这类组合物的方法。
[0023]在另一方面，本文的组合物、胶囊、方法包含用于在有此需要的个体中减少戈谢病的所述至少一种症状的组合物。在一个实施方案中，被本发明的组合物、方法等减少的戈谢病的所述至少一种症状是所述疾病的以下征象或症状之一:骨骼异常，包括骨变薄(骨质减少)、骨痛和骨折；增大的肝(肝大)或脾(脾大)，或两者都有；健康红细胞减少(贫血);过度疲劳；对受伤更敏感，其可指示血小板数量低(血小板减少)；眼睛中的黄斑(睑裂斑(Pingueculae));青春期延迟；-和/或鼻出血；以及认知衰退。在本发明的优选实施方案中，所述被减少的症状是脾大。
[0024]在本发明的另一方面，戈谢病的替代标记物被用于评估所述组合物治疗戈谢病的效用。适合的疾病标记物包括细胞标记物、生理标记物或生化标记物。
[0025]在另一个实施方案中 ，所述生理上可接受的组合物、制剂、方法等可被用作膳食补充剂或用作食物添加剂或用作药剂或以需要的其他方式使用来减少戈谢病的症状。口服给药是有利的，因为治疗剂的口服途径给药相对于任何其他途径是优选的。
[0026]这些生理上可接受的组合物和方法可以与戈谢病的其他疗法联合使用。例如，所述组合物可以与酶替代疗法(ERT)或减少底物疗法(SRT)联合使用。
[0027]在另一方面，本发明提供了用于治疗溶酶体贮积病的试剂盒。本发明试剂盒包括用于治疗溶酶体贮积病的至少一种蛋白酶或其药物组合物。所述试剂盒还可包括用于治疗本文所述的基础溶酶体贮积病或其症状的其他试剂。所述试剂盒一般包括多个剂量的一种或多种蛋白酶和任选的第二治疗剂。所述试剂盒可以包括足够剂量的用于治疗受试者的每种试剂，持续一周、两周、三周、一个月、两个月、三个月、六个月或更长时间。所述试剂盒还可以包括用于给予所述试剂的装置例如匙、注射器等。所述试剂盒一般还包括所述试剂盒中所包括试剂的处方信息。
[0028]本文的方法包括目的在于标记、销售以及另外将所述组合物提供给健康护理专业人员和/或给消费者用于减少戈谢病的症状的方法、试剂盒、标签和系统。
[0029]在本发明的另一方面，一种或多种所述生理上可接受的蛋白水解酶可存在于适于人消费的食物或饮料中。在一方面，所述生理上可接受的一种或多种蛋白酶/ 一种或多种肽酶存在于发酵食物中。
[0030]在本发明的另一方面，所述生理上可接受的蛋白酶或肽酶可以存在于食品级的微生物、酵母、藻类或海草、植物、脊椎动物、无脊椎动物、环节动物、昆虫或节肢动物中。
[0031]在另一个实施方案中，所述生理上可接受的酶是具有脯氨酰寡肽酶活性、二肽基肽酶活性或三肽基肽酶活性的肽酶或蛋白酶-肽酶复合物。
[0032]根据本发明的另一个实施方案，所述生理上可接受的酶具有DPP-1V氨基肽酶活性。[0033]根据本发明的另一个实施方案，所述酶为具有DPP-1V氨基肽酶活性的曲霉菌蛋白酶。
[0034]在本发明的优选方面,所述组合物包含SerenAid?，具有蛋白酶和DPP-1V活性的膳食补充剂以及其他成分。
[0035]在本发明的另一方面，将蛋白酶或肽酶与以下的一种或多种结合给予:维生素、矿物质、抗氧化剂、生物类黄酮、其他酶、草药、草药提取物、植物和动物浓缩物、益生菌或其他成分。
[0036]在本发明的另一方面，所述方法、组合物等在协同组合物中包含两种或多种蛋白酶或肽酶。
[0037]在一个实施方案中，所述产品可以是试剂盒或系统，其中本文的组合物、胶囊包含在可药用容器中，以及解释所述产品可以减少戈谢病的一种或多种症状的书面说明书、小册子、信息页、目录或标签。另外，所述产品可以与所述解释所述产品可以减少戈谢病的一种或多种症状的书面说明书、小册子、信息页、目录或标签一起销售。
[0038]这些以及其他方面、特征和实施方案在本申请，包括如下的详细描述中阐明。除非特别地另有说明，所有实施方案、方面、特征等可以以任何需要的方式被混合和匹配、结合以及改变次序。`
【具体实施方式】
[0039]在其最宽泛方面，本发明教导了有效量或更多量的口服给药生理上可接受的蛋白水解酶减少、改善或治疗哺乳动物中溶酶体贮积病的一种或多种症状的用途。
[0040]本发明教导了有效量的口服给药生理上可接受的蛋白水解酶减少、改善或治疗哺乳动物中戈谢病的一种或多种症状的用途。
[0041]本发明还教导了口服给药生理上可接受的蛋白水解酶可被用于减少、改善或治疗人中戈谢病的一种或多种症状。
[0042]本发明涉及治疗溶酶体贮积病的治疗方法，所述溶酶体贮积病例如糖原贮积症II型、黏多糖累积病、黏脂贮积病II型、黏脂贮积病III型、多硫酸酯酶缺乏症、GM2激活蛋白缺陷变异型AB、糖原贮积病II b型、Salla病、泰-萨克斯病、GM2神经节苷脂贮积症变异型
O、辛德勒病、Kanzaki病、a -甘露糖苷贮积症、3 -甘露糖苷贮积症、岩藻糖苷贮积症、涎酸贮积症、天冬氨酰基葡萄糖胺尿、碳水化合物-缺乏糖蛋白综合征、酸性脂酶缺乏症、法伯病、尼曼一皮克病A、B和C型、戈谢病、克拉伯病、法布里病、多种硫酸脂酶缺乏症、GMl神经节苷脂贮积症、GM2神经节苷脂贮积症、GM3神经节苷脂贮积症、半乳糖唾液酸苷贮积症、胱氨酸贮积症、唾液酸贮积病、骨发育障碍矮小症、异染性脑白质营养不良、半乳糖唾液酸苷贮积症、神经元腊样脂褐质症(1-9型)、乳糖基酰基鞘氨醇过多症、糖原贮积症II型以及钴胺素缺乏症F型，所述方法是通过用法尼基转移酶抑制剂来治疗。
[0043]在一个方面，本发明提供了通过给予治疗有效量的至少一种蛋白酶、肽酶或蛋白酶/肽酶复合物用于治疗患溶酶体贮积病的受试者的方法。
[0044]在另一方面，本发明提供了用于在患戈谢病的受试者中或在是其携带者的受试者中治疗帕金森氏病的一种或多种症状或征象的方法。
[0045]对于本发明，包括至少一种蛋白酶、肽酶或蛋白酶/肽酶复合物是必要的。[0046]蛋白酶是存在于多种来源(包括植物、动物和微生物)中的普遍存在的酶。它们催化蛋白质和肽中肽键的水解断裂。在本发明中，术语“肽酶”和“蛋白酶”可互换使用。可供选择的蛋白酶可以是产生本文所述需要的效果的任何可药用蛋白酶，单独给予或与维生素、矿物质、抗氧化剂、生物类黄酮、其他酶、草药、草药提取物、植物和动物浓缩物、益生菌或其他药物活性成分结合给予。
[0047]鉴定和选择适合用于本发明的蛋白酶可以通过经验方式来完成。例如，作为本发明主题的适合生理上可接受组合物可被给予至患戈谢病的个体，并且可以在监控戈谢病的一种或多种症状或征象以在减少所述症状方面评价所述组合物的效力。
[0048]可被监控改善的戈谢病症状或征象包括以下的一种或多种:骨骼异常，包括骨密度损失(骨质减少)、骨痛和骨折；增大的肝(肝大)或脾(脾大)，或两者都有；健康红细胞减少(贫血)；过度疲劳；对受伤更敏感,其可指示血小板数量低(血小板减少)；眼睛中的黄斑(睑裂斑);青春期延迟；鼻出血；和/或认知衰退。在另一方面，在具有与帕金森氏病有关的至少一种戈谢病基因突变的个体中，可监测以下一种或多种疾病症状或征象的改善:意向性震颤、强直和运动徐缓、面无表情、讲话急促不清或单调、肌阵挛性反射、嗅觉丧失、无血管性骨坏死和痴呆。
[0049]本文的组合物、胶囊、方法等包含用于减少戈谢病的至少一种症状或征象，从而通常引起所述至少一种症状或征象改善的组合物。在本发明的优选实施方案中，所述被减少的征象是脾大。
[0050]戈谢病的细胞标记物、生理标记物和生化标记物还可用于选择用于本发明的最佳蛋白酶。潜在的疾病标记物可见于例如美国专利申请2010/0196279、美国专利申请2010/0120056 ;和 Lieberman, 1976 中。
[0051]通常认为，许多蛋白酶和肽酶对人服用是安全的，即它们是生理上可接受的。许多来源可在科学文献和专利文献中找到。例如，已经显示，补充性的消化酶制剂可改善营养吸收(US7，235，390)，可减少胃灼热和消化不良(US7，067，124);可促进手术快速恢复(US6, 900，173);可改善气道粘液分泌过多疾病(Rogers，2007);并可改善肝功能、囊性纤维化病、胆固醇吸收和胆石(US5，324，514)。菠萝蛋白酶(一种植物蛋白酶)已被用于炎性的、血液凝固相关的和恶性的疾病的口服全身治疗(Maurer, 2001)。可口服的蛋白酶和肽酶已被用于维持哺乳动物血浆中胆囊收缩素的基础水平以及用于治疗患有胰腺炎的哺乳动物的腹痛(US7，459，155)。许多这样的酶不仅在肠中保持其活性，而且通过胃肠道被完整吸收并在血流中保持活性(见例如Castell et al., 1997;Fujita et al.，1995)。对于本发明的目的，没必要知道所述蛋白酶或肽酶的确切作用机制，只要能实现所需要的效果。
[0052]生理上可接受的蛋白水解酶可见于某些细菌、真菌、酵母和霉菌(Rao etal., 1998; Sumatha et al., 2006;Peng et al.，2005)。例如，蛋白酶和妝酶可在已被用于发酵许多传统食物和饮料的真菌中发现。适合的种包括镰刀菌属(Fusarium)、根霉菌属(Rhizopus)、放射毛霉属(Actinomucor)、曲霉菌属(Aspergillus)和链孢霉属(Neurospora)的种(见例如US6，413，512; US3，932，618;美国专利申请2009/0155239;Sriranganadane., et al,2010;O'Toole, 1999;Kudryavtseva et al.,2008;Frish, 1974;Machida, 2010;Luisetti et al., 1991;Meyer et al., 2010 ；以及Kolodny, 1963)。[0053]蛋白酶和肽酶还可在已被用于产生酸乳和其他发酵的乳制品的乳酸菌中找到(Liu et al.，2010)。纳ii囷酵素、蜂蜜曲霉蛋白酶、沙雷囷妝酶、链霉蛋白酶、键刀囷蛋白酶、司非立酶是生理上可接受的蛋白水解酶的实例(例如US5, 296，223;Majima Y.，etal.,1988;Pant KK, et al., 2008;Yoshida K，1983;Sumi H，et al.，1990)。
[0054]脯氨酰寡肽酶属于不同类的丝氨酸肽酶(EC3.4.21.26)。这些酶在脯氨酸残基的羧基末端一侧切割肽键。这些肽酶已经牵涉于这些疾病和病症例如焦虑、精神疾病和抑郁性疾病、认知障碍、痛觉和神经变性疾病例如路易体痴呆、帕金森氏病和亨廷顿氏病中(Goossens et al., 1996; Sedo et al., 1991 ;Mantle et al., 1996)。降低水平的脑氛酸内肽酶活性还可在重性抑郁症的病理生理学中起作用(Maes et al.，1995)。脯氨酰寡肽酶的分布和其用于治疗性发现的潜力最近被综述(Rosenblum et al.，2003)。从肽中除去N-末端脯氨酸和轻脯氨酸残基的脯氨酰氨基肽酶已在黑曲霉(Aspergillus niger)中被鉴定(Basten et al., 2005)。
[0055]二肽基氨基肽酶从多肽的N-末端切割二肽基部分(Kreil，1990)。二肽基氨基肽酶IV型(DPP IV)属于一组特化的蛋白酶,其能够切割邻近脯氨酸的键(Cunningham and
0Connorl997;Lambeir et al.，2003)。该结构域定义了属于 EC3.4.14.5 的丝氨酸妝酶。EC3.4.14.5酶分类广泛用于饲料、食物加工和膳食补充剂工业。在人中，DPP-1V (也称为CD26)被认为涉及心理神经内分泌功能、营养和免疫防御(Hildebrandt et al.，2000)。DPP-1V蛋白酶可在多种生物例如酵母、真菌、昆虫和蛙中发现。细胞外DPP-1V已经在几种曲霉菌属种包括米曲霉(Aspergillus oryzae)、黑曲霉和蜂蜜曲霉(Aspergillusme Ileus)中被表征(Doumas et al.1998, Tachi et al, 1992; Jalving et al.，2005)。
[0056]含有脯氨酰内肽酶的口服补充剂已被提议用于治疗不利的食物反应包括乳糜泻或口炎性腹泻的肠病表现。能够分解膳食麸质的食品级蛋白酶已被建议用于缓和该问题(US7，741，094)。Ehren`等(2009)已经提出了两种食品级酶的结合物，来自黑曲霉的曲霉酸性蛋白酶(aspergiIlopepsin, ASP ；EC3.4.23.18)和来自米曲霉(Aspergillusoryzae)的二肽基肽酶IV(DPP-1V;EC3.4.21.63)。Mitea et al.(2008)建议与含麸质的膳食共服用脯氨酰内肽酶可消除麸质毒性。Byun et al.(2001)报告了 X-脯氨酰二肽基氨基肽酶和非特异性氨基肽酶在蛋白水解中的协同作用。本发明中也考虑协同组合物。
[0057]在酪蛋白和麸质的消化中释放的脯氨酰肽被认为作为阿片受体激动剂或外啡肽(exorphin)起作用，其可介导或加剧患有孤独癖谱群疾病(ASD)的个体中的神经行为症状。这些阿片样妝已经被称为酪吗啡(casomorphin)和谷吗啡(gluteomorphin)。DPP-1V还因为其针对酪吗啡的蛋白水解活性而被称为酪吗啡酶(casomorphinase)。补充性的DPP-1V已被提议用于减少 ASD 的症状(US6, 251，391;US6, 413，512;US6, 447，772;US6, 808，708;US6，821，514;US6, 899，876)。
[0058]三肽基肽酶或sedolisin广泛存在于丝状子囊菌包括曲霉菌属种中(Reichard etal.，2006;Gotou et al.，2009)。在人中，编码三肽基肽酶I的基因的突变会导致晚期婴儿
神经元蜡样质脂褐质沉积症-一种致命的神经变性疾病(Pal et al.，2009)，但是还没
有报告三肽基肽酶I在戈谢病中的活性。
[0059]虽然已表明许多蛋白水解酶用于人是生理上可接受的，如本文所述，上述参考文献都没有预料到蛋白酶或肽酶在治疗戈谢病的组合物中的用途。[0060]本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以变化，以使得对于具体的患者、组合物和给药方式可获得有效实现所需治疗反应的活性成分的量，而对所述患者无毒性。
[0061]所选择的剂量水平将取决于多种因素，包括本发明使用的具体蛋白酶或肽酶或其衍生物的活性、口服给药、给药时间、所用具体蛋白酶排泄或代谢速率、治疗的持续时间、与所用具体蛋白酶结合使用的其他药物、化合物和/或材料、被治疗患者的年龄、性别、体重、病症、一般健康状况和之前的医疗史等医学领域熟知的因素。
[0062]本领域的普通医师可以容易地确定并开出有效量的所需药物组合物。例如，医师可以以比实现所需治疗效果需要的剂量低的水平开始所述药物组合物中使用的本发明的蛋白酶或肽酶的剂量，然后逐渐增加所述剂量直到实现所需效果。
[0063]以下实施例进一步描述并证明本发明范围内的实施方案。这些实施例目的仅是解释，不应被认为是对本发明的限制，因为在不背离本发明精神或范围的前提下可以作出许
多变化。
[0064]实施例1
[0065]称为SerenAid?的产品是六种植物衍生的酶的混合物，包括具有二肽基肽酶IV (DPP-1V)活性的蛋白酶(见例如US6，251，391)。配制SerenAid?以帮助分解植物和动物蛋白质，包括酪蛋白(乳和乳产品)、麸质(小麦、黑麦、燕麦、大麦和其他谷物)和大豆蛋白。发明人已经观察到，在开始口服给予SerenAid?,后，患有戈谢病的患者脾大症状减少并且能量增加。本发明 考虑SerenAid?在有此需要的个体中改善戈谢病的一种或多种症
状、征象或标记物的用途。
[0066]实施例2
[0067]适合的蛋白酶可以分离自其天然来源，或者它们可以经重组DNA技术在培养物中通过适合的宿主细胞产生，所述宿主细胞选自细菌、酵母、真菌、植物、昆虫或哺乳动物宿主细胞中的任一种。例如，见US6，309，868和Doumas et al.，1998。重组酶包括来自天然存在的酶序列的核酸，或由其编码。另外，重组酶包括与天然存在的序列同源或基本相同的氨基酸序列，以及那些由与编码蛋白酶的天然存在核酸同源或基本相同的核酸编码的酶。或者，用于本发明的组合物和方法的酶可以通过常规的肽合成技术合成。本领域技术人员已知产生和纯化酶(包括蛋白酶和肽酶)的方法。
[0068]许多商业供应商销售可用于本发明的纯化的蛋白酶和肽酶。综述见于Sumantha等，2006。商业供应商的几个实例为:Amano Enzyme Inc ;Novozymes ;和 National EnzymeCompany。
[0069]实施例3
[0070]为了将本发明的组合物作为药物的给药，多种可能的蛋白质稳定、修饰和配制方法是本领域技术人员已知的。见于US6，613，332 ;美国专利申请20080311214 ;美国专利申请 20080317726 ；Singh et al., 2008 ；McNally and Hastedt, 2008 ；Mahato, et al., 2003 ；Rao，2008。这些方法以及其他方法可以用于本发明。
[0071]应强调，配制和给予所述组合物和协同组合物的方法不限于本文提供的实施例；本领域技术人员可以想出另外的方法和新制剂。[0072]以下专利、公开的申请(包括它们所有的外文等同物)和期刊出版物的全部内容(包括其引用的参考文献)，为了所有目的将其全文以引用的方式纳入本文，如同每个单独的专利、专利申请或出版物被单独指出一样。
[0073]
【权利要求】
1.一种用于改良、减少或改善戈谢病的至少一种症状或征象或替代标记物的方法，所述方法包括给予有此需要的个体有效量的可药用组合物，所述组合物以足以改良、减少或改善所述疾病的至少一种症状、征象或标记物的量包含至少一种蛋白酶或肽酶。
2.权利要求1的方法，其中被改良、减少或改善的症状或征象选自:骨密度损失(骨质减少)、骨痛和骨折；增大的肝(肝大)；增大的脾(脾大)；贫血；肺动脉高压；过度疲劳；血小板数量低(血小板减少)；眼睛中的黄斑(睑裂斑)；青春期延迟；共济失调；痉挛状态；发作；听觉受损；鼻出血；认知损害；意向性震颤；强直；运动徐缓；面无表情；讲话急促不清或单调；肌阵挛性反射；嗅觉丧失；无血管性骨坏死；和痴呆。
3.权利要求1的方法，其中被改良、减少或改善的疾病标记物选自:溶酶体酸性(6-葡糖苷酶活性；存在载脂巨噬细胞(“戈谢巨噬细胞”)；壳丙糖酶水平；肝酶水平；肺的趋化因子PARC/CCL18的水平；血管紧张素转换酶(ACE)、总酸性磷酸酶和骨特异性酸性磷酸酶的水平；免疫缺陷例如贫血、血小板减少、白细胞减少、高Y球蛋白血、脾中T淋巴细胞的量减少、全身性B细胞过度增殖、浆细胞增多、血浆a突触核蛋白；炎性细胞因子的水平、包含巨噬细胞、淋巴细胞和中性白细胞的组织或器官中存在炎性病灶以及受损的中性粒细胞趋化性；骨骼缺陷例如骨髓中戈谢细胞的浸润、甘油三酯水平降低；骨密度和其他异常的放射照相结果；神经症状例如神经元损失、神经退行性变、水平凝视异常、肌阵挛运动、角膜浑浊、戈谢巨噬细胞的肺浸润；在戈谢病患者的细胞中酸性(6-葡糖苷酶从ER到溶酶体的异常运输；细胞脂质通过胞内体途径的异常运输；在ER或胞质溶胶中存在增加数量的错折叠的酸性P -葡糖苷酶；存在由GCase的毒性累积产生的ER和/或应激(通过应激相关标记物的基因和/或蛋白表达确定);异常的胞内体PH水平；在单核细胞上存在增加的MHCII和/或CDld的质膜表达；异常的细胞形态；泛素/蛋白酶体途径抑制；泛素化蛋白的量增加；以及血清或尿中生化标记物的改变。
4.权利要求1的方法，其中所述蛋白酶或肽酶被口服给予。
5.权利要求1的方法，其中所述蛋白酶或肽酶衍生自发酵食物或饮料。
6.权利要求1的方法，其中所述蛋白酶或肽酶为脯氨酰肽酶、二肽基肽酶或三肽基肽酶。
7.权利要求1的方法，其中所述蛋白酶或肽酶衍生自食品级的微生物、酵母、藻类、海草、植物、脊椎动物、无脊椎动物、环节动物、昆虫或节肢动物。
8.权利要求1的方法，其中所述蛋白酶或肽酶衍生自曲霉菌属(Aspergillus)的种。
9.权利要求1的方法，其中所述蛋白酶衍生自包含具有二肽基肽酶IV活性的蛋白酶的曲霉菌属发酵产物。
10.权利要求1的方法，其中所述可药用组合物被标记为膳食补充剂。
11.权利要求10的方法，其中所述可药用组合物被配制为干粉剂、片剂、硬明胶胶囊或软明胶胶囊。
12.权利要求10的方法，其中所述可药用组合物在适于人服用的可消化载体材料中提供。
13.权利要求12的方法，其中所述载体材料选自基于谷类作物的产品、米糕、大豆糕、食物棒产品、冷成型的食物棒产品、软冻、布丁、明胶、米浆、豆浆、果浆产品、糖果、糖果棒、苹果沙司、酸乳、饮料和发酵饮料。
14.权利要求11、12或13的方法，其中所述可药用组合物还含有一种或多种选自以下的成分:维生素、矿物质、草药或草药提取物、益生菌或益生元、抗氧化剂、生物类黄酮、木瓜蛋白酶、乳糖酶、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶以及植物和动物浓缩物。
15.权利要求1的方法，其中所述可药用组合物含有一种或多种蛋白酶。
16.权利要求1的方法,其中所述可药用组合物与单独的、FDA批准的药物组合物结合或共同给予。
17.权利要求1的方法，其中所述可药用组合物还包含有治疗活性的小分子。
18.权利要求16的方法，其中所述FDA批准的药物组合物为有治疗活性的小分子。
19.权利要求2的方法，其中在患有戈谢病的个体中被改良、减少或改善的所述征象为增大的脾(脾大)。
20.一种筛选适用于治疗戈谢病的蛋白酶和肽酶的方法，所述方法包括:(a)在患有戈谢病的个体中定量戈谢病的症状或标记物；(b)以已知的量给予所述个体在可药用载体中的生理上可接受的蛋白酶或肽酶，持续已知的时间；和(C)定量前述症状或替代标记物以评估是否由于给予所述蛋白酶或肽酶组合物而导致所述症状或标记物的定量改变。
21.权利要求20的方法，其中所述症状或疾病标记物选自权利要求2或3所述的症状和疾病标记物。
22.—种治疗患有溶酶体贮积病的受试者的方法，所述方法包括给予患有溶酶体贮积病的受试者治疗有效量的组合物，所述组合物以足以改良、减少或改善所述疾病的至少一种症状的量包含至少一种蛋白酶或肽酶。
23.权利要求22的方法，其中所述患有溶酶体贮积病的受试者患有选自以下的疾病:糖原贮积症II型、黏多糖累积病、黏脂贮积病II型、黏脂贮积病III型、多硫酸酯酶缺乏症、GM2激活蛋白缺陷变异型AB、糖原贮积病II b型、Salla病、泰-萨克斯病、GM2神经节苷脂贮积症变异型O、辛德勒病、Kanzaki病、α -甘露糖苷贮积症、β -甘露糖苷贮积症、岩藻糖苷贮积症、涎酸贮积症、天冬氨酰基葡萄糖胺尿、碳水化合物-缺乏糖蛋白综合征、酸性脂酶缺乏症、法伯病、尼曼一皮克病Α、B和C型、克拉伯病、法布里病、多种硫酸脂酶缺乏症、GM1神经节苷脂贮积症、GM2神经节苷脂贮积症、GM3神经节苷脂贮积症、半乳糖唾液酸苷贮积症、胱氨酸贮积症、唾液酸贮积病、骨发育障碍矮小症、异染性脑白质营养不良、半乳糖唾液酸苷贮积症、神经元腊样脂褐质症(1-9型)、乳糖基酰基鞘氨醇过多症、糖原贮积症II型以及钴胺素缺乏症F型。
24.权利要求22的方法其中所述受试者为人。
25.一种用于将膳食补充剂提供给患有溶酶体贮积病的受试者的方法，所述方法包括给予患有溶酶体贮积病的受试者有效量的包含至少一种蛋白酶或肽酶的膳食补充剂。
26.一种用于在具有一个或多个戈谢病基因突变的个体中改良、减少或改善帕金森氏病的至少一种征象或症状或替代标记物的方法，所述方法包括给予有此需要的个体有效量的可药用组合物，所述组合物以足以改良、减少或改善帕金森氏病的至少一种征象、症状或标记物的量包含至少一种蛋白酶或肽酶。
27.权利要求26的方法，其中被改良、减少或改善的症状或征象选自:意向性震颤、强直和运动徐缓、面无表情、讲话急促不清或单调、肌阵挛性反射、嗅觉丧失、无血管性骨坏死和痴呆。
【文档编号】A61K38/48GK103796672SQ201280028579
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2012年6月8日 优先权日:2011年6月10日
【发明者】S·F·奥姆斯特德 申请人:普洛特拉有限公司