壳多糖和活性成分复合物的制备方法及由此获得的复合物的制作方法

壳多糖和活性成分复合物的制备方法及由此获得的复合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及与至少一种带负电荷的聚合物和一种或一种以上活性成分结合的壳多糖纳米原纤维复合物；包含这样的复合物的药学或美容组合物、试剂盒，所述组合物、试剂盒用于包含所述组合物以适用于局部给药形式和以适用于口服给药形式伴随或连续给药，以及其用途。
【专利说明】壳多糖和活性成分复合物的制备方法及由此获得的复合物
【背景技术】
[0001]皮肤疾病常常对健康和社会两者产生严重影响。皮肤是将机体器官和内部组织与外部环境分隔开的屏障。它也是最大程度暴露于其它个体视野中的机体部分。因此，病理或甚至仅仅是皮肤衰老状况对表现这样的状况的个体如何产生问题，是显而易见的。
[0002]病理状况可表现为非常严重的状况(例如肿瘤)和状况例如皮炎(dermatitides)、湿疫、大疱病、鳞状疾病、红斑(erhytemas)、感染及其它，反过来,它们可以是偶发性的或慢性的。另一方面，皮肤衰老是与皮肤累进改变相关的进行中的过程，所述皮肤累进改变以细纹、皱纹、组织下垂和不规则的色素沉着(皮肤褐色斑点或色素脱失)的形式出现。衰老，部分与遗传上受控的(内在的)过程有关，部分与暴露(外在的)于环境和化学试剂(阳光、寒冷、污染物)中有关，此外，也与生活方式(例如抽烟、体重指数低)及绝经的出现有关。这些事件或多或少猛烈地出现，并且个体之间出现的次数不同，它们可引起过早的皮肤衰老。
[0003]己知大量的药学配方和美容配方以皮肤组织为目标，旨在治疗影响该器官的疾病、功能障碍和/或损伤，甚至是机械损伤，或甚至旨在保护它免受与衰老相关的后果或，特别是，旨在尽可能地保护它免受过早衰老的后果。
[0004]同一 申请人:的国际专利申请W02007/099172，描述了包含褪黑激素和至少一种免疫刺激和/或抗氧化剂物质的物质混合物，其中该混合物的至少一种组成物质结合到壳多糖纳米原纤维(chitin nanofibrils)上。
[0005]国际专利申请W02006 /048829另外描述了包含壳多糖纳米原纤维作为活性成分的医学外科组合物，作为可通过注射应用的皮肤填充物或用于防止感染。
[0006]同样，带有透明质酸的壳多糖纳米原纤维复合物也在相同的申请WO' 829和其它文献中被描述，但是这样的复合物从未被描述为其它活性成分的媒介或载体。
[0007]相同的专利申请W02006/048829提供了用于制备壳多糖纳米原纤维的方法。
[0008]文献中描述了壳多糖纳米原纤维与活性成分的一些组合。例如,Morganti等人于2011年描述了褪黑激素、维生素E和3葡聚糖组合对治疗皮肤衰老极为有效。
[0009]皮肤疾病、皮肤损伤和皮肤衰老的治疗和预防是连续不断的研究的主题，研究旨在持续不断地改进技术和获得的结果，抗老化的组合物无论如何应该同样满足非变应原性、可耐受性和非毒性的要求，可局部、口服、胃肠外、皮内给药等等。因此，存在连续不断的研究，旨在开发新的抗老化组合物和新的给药方法，在满足可耐受性、非变应原性和使用安全性要求的同时，在内在的和外在的皮肤疾病、皮肤损伤和皮肤衰老的治疗中，以及在与其相关的症状的治疗中提供甚至更有效的结果。

【发明内容】

[0010]本发明的作者令人惊讶地找到一种制备壳多糖纳米原纤维(或其衍生物)(其为具有主要是正电性的电荷的聚合物)和具有主要是负电荷的聚合物的联合复合物的方法，所述主要是负电荷的聚合物能够俘获自然和合成起源的活性成分。在治疗皮肤疾病、在修复皮肤遭受的损伤中和/或用于治疗皮肤衰老时，这些浓缩的复合物作为活性成分的媒介或载体被证明特别有效。特别是，与不使用具有主要是负电荷的物质的混合物或制备物相比较，这些复合物在掺入目标活性成分和在到达目标组织和发挥它们的治疗和/或美容效果方面被证明更有效。具有“普遍负电荷”的物质或具有“负电荷”的物质是指净电荷(普遍存在于该物质中)是负电荷(例如，高于它们的等电点，蛋白质具有负的净电荷)的物质。此外，相对于在制备方法期间不使用带负电荷物质的同等的制备物，本文描述的复合物随时间表现出较高的稳定性。与只包含纳米壳多糖和/或一种或以上在药学和美容领域中通常使用的或用于制造生物活性编织和非编织(或无纺)织物的目标活性成分的化合物比较，在包含壳多糖纳米原纤维(本文也称为CN)和活性成分的化合物的制备期间存在适当的带负电荷的聚合物，能够形成复合物，在该复合物中，活性成分受到更好的保护，防止氧化还原降解，同时也证明在体内更有效。
[0011]此外，作者令人惊讶地发现，包含上面提到的复合物的配制物的局部给药附随(concomitantly)相同配制物的口服给药显示,对于相同总剂量的单独的局部给药或口服给药，协同效应与特定的给药方式相关。
[0012]因此，本发明的目标是与至少一种带负电荷的聚合物和一种或以上活性成分结合的壳多糖纳米原纤维复合物；包含这样的复合物的药学或美容组合物，以适合于局部给药(其中此局部给药也可以通过生物功能性织物进行)的形式以及以适合于口服给药的形式，用于伴随或连续给药的包含所述组合物的试剂盒，所述复合物或所述组合物在治疗皮肤疾病、皮肤损伤、皮肤衰老的方法中的用途及与其相关的效果，一种制备所述复合物的方法以及一种制备所述组合物的方法。
【专利附图】

【附图说明】
[0013]图1显示了用本发明壳多糖纳米原纤维复合物(CN-MEB)或用不与带正电荷的壳多糖纳米原纤维复合的 单独的活性成分(MEB)局部地、口服地或以联合的口服+局部途径给药，相对于表现出皮肤光老化的健康主体的基线值，皮肤水化随时间(4、8、12周)的百分比增加。特别是，附图中报告了获得的数据，MEB由褪黑激素+维生素E+P葡聚糖混合物表示，而CN-MEB由本发明带有壳多糖纳米原纤维的复合物表示，其中带负电荷的分子是透明质酸，活性成分为激素褪黑激素，免疫刺激剂为3葡聚糖，抗氧化剂为维生素E。
[0014]用CN-MEB或MEB给药，一天两次，一直给药120天，不同组之间(CN-MEB和MEB )以及不同剂量形式之间的每天总剂量相等。因此，如果对于口服给药和局部给药，活性成分每天总的给药量等于X，那么，在组合的情况下，相对于相同形式的单独给药剂量，每种单独给药形式的剂量是一半，因此，为每天口服给药的X的1/2+局部给药的X的1/2，整体来说，每天总的活性成分的量等于X。
[0015]在图中，通过比较每个实施例的两组，可观察到CN-MEB相对于MEB具有更大的功效，以及CN-MEB的口服+局部给药如何相对于所有其它给药形式更为有效，即使所有测试均给予相同整体日总量的活性成分。
[0016]图2显示了用本发明壳多糖纳米原纤维复合物(CN-MEB)或用不与带正电荷的壳多糖纳米原纤维复合的单独的活性成分(MEB)局部地、口服地或以联合的口服+局部方式治疗，相对于表现出皮肤光老化的健康主体的基线值，表面皮肤脂质随时间(4、8、12周)的百分比增加。特别是，图中报告了获得的数据，MEB由褪黑激素+维生素E+P葡聚糖的混合物表示，而CN-MEB由本发明与壳多糖纳米原纤维复合的复合物表示，其中，带负电荷的分子是透明质酸，活性成分是激素褪黑激素，免疫刺激剂是β_葡聚糖以及抗氧化剂是维生素Ε。
[0017]用CN-MEB或MEB给药，一天两次，一直给药120天，不同组之间(CN-MEB和MEB )以及不同剂量形式之间的每天总剂量相等。因此，如果对于口服给药和局部给药，活性成分每天总的给药量等于X，那么，在组合的情况下，相对于相同形式的单独给药剂量，每种单独给药形式的剂量是一半，因此，为每天口服给药的X的1/2+局部给药的X的1/2，整体来说，每天总的活性成分的量等于X。
[0018]在图中，通过比较每个实施例中的两组，可观察到CN-MEB相对于MEB具有更大的功效，以及CN-MEB的口服+局部给药如何相对于所有其它给药形式更为有效，即使所有测试均给予相同的每天总量的活性成分。
[0019]图3显示了用本发明壳多糖纳米原纤维复合物(CN-MEB)或用不与壳多糖纳米原纤维复合的单独的活性成分(MEB)局部地、口服地或以组合的口服+局部方式治疗，相对于表现出皮肤光老化的健康主体 的基线值，皮肤弹力随时间(4、8、12周)的百分比增加。特别是，图中报告了获得的数据，MEB由褪黑激素+维生素E+β-葡聚糖的混合物表示，而CN-MEB由本发明与壳多糖纳米原纤维复合的复合物表示。其中，带负电荷的分子是透明质酸，活性成分是激素褪黑激素，免疫刺激剂是β -葡聚糖以及抗氧化剂是维生素Ε。
[0020]用CN-MEB或MEB给药，一天两次，一直给药120天，不同组之间(CN-MEB和MEB )以及不同剂量形式之间的每天总剂量相等。因此，如果对于口服给药和局部给药，活性成分每天总的给药量等于X，那么，在组合的情况下，相对于相同形式的单独给药剂量，每种单独给药形式的剂量是一半，因此，为每天口服给药的X的1/2+局部给药的X的1/2，整体来说，每天总的活性成分的量等于X。
[0021 ] 在图中，通过比较每个实施例中的两组，可观察到CN-MEB相对于MEB具有更大的功效，以及CN-MEB的口服+局部给药如何相对于所有其它给药形式更为有效，即使所有测试均给予相同的每天总量的活性成分。
[0022]图4显示了用本发明壳多糖纳米原纤维复合物(CN-MEB)或用不与壳多糖纳米原纤维复合的单独的活性成分(MEB)局部地、口服地或以联合的口服+局部方式治疗，相对于表现出皮肤光老化现象的健康主体上建立的基线值，表皮脂质的氧化随时间(4、8、12周)降低，其通过定量检测MDA(丙二醛)测量。特别是，图中报告了获得的数据，MEB由褪黑激素+维生素E+ β -葡聚糖的混合物表示，而CN-MEB由本发明与壳多糖纳米原纤维复合的复合物表示。其中，带负电荷的分子是透明质酸，活性成分是激素褪黑激素，免疫刺激剂是β_葡聚糖以及抗氧化剂是维生素Ε。
[0023]用CN-MEB或MEB给药，一天两次，一直给药120天，不同组之间(CN-MEB和MEB )以及不同剂量形式之间的每天总剂量相等。因此，如果对于口服给药和局部给药，活性成分每天总的给药量等于X，那么，在组合的情况下，相对于相同形式的单独给药剂量，每种单独给药形式的剂量是一半，因此，为每天口服给药的X的1/2+局部给药的X的1/2，整体来说，每天总的活性成分的量等于X。
[0024]在图中，通过比较每个实施例中的两组，可观察到CN-MEB相对于MEB具有更大的功效，以及CN-MEB的口服+局部给药如何相对于所有其它给药形式更为有效，即使所有测试均给予相同的每天总量的活性成分。
[0025]图5显示了用本发明壳多糖纳米原纤维复合物(CN-MEB)或用不与壳多糖纳米原纤维复合的单独的活性成分(MEB)局部地、口服地或以联合的口服+局部方式治疗，相对于表现出皮肤光老化的健康主体的基线值，皮肤光老化随时间(4、8、12周)的百分比降低。特别是，附图中报告了获得的数据，MEB(褪黑激素+维生素E+ β -葡聚糖的混合物)，而CN-MEB则由本发明带有壳多糖纳米原纤维的复合物表示，其中带负电荷的分子是透明质酸，活性成分为激素褪黑激素，免疫刺激剂为β -葡聚糖，以及抗氧化剂为维生素Ε。
[0026]用CN-MEB或MEB给药，一天两次，一直给药120天，不同组之间(CN-MEB和MEB )以及不同剂量形式之间的每天总剂量相等。因此，如果对于口服给药和局部给药，活性成分每天总的给药量等于X，那么，在组合的情况下，相对于相同形式的单独给药剂量，每种单独给药形式的剂量是一半，因此，每天口服给药1/2Χ+局部给药1/2Χ，整体来说，每天总的活性成分的量等于X。
[0027]在图中，通过比较每个实施例中的两组，可观察到CN-MEB相对于MEB具有更大的功效，以及CN-MEB的口服+局部给药如何相对于所有其它给药形式更为有效，即使所有测试均给予相同的每天总量的活性成分。
[0028]图6:图6中的表格报告了各种壳多糖衍生物和形式(壳聚糖(chitosan)、无定形壳多糖，壳多糖纳米原纤维)与透明质酸之间的复合物形成得率；还报告了叶黄素加入百分t匕(叶黄素为活性成分)、其俘获百分比和复合物的尺寸。
[0029]图7:图7的块图报告了结晶壳多糖纳米粒子、无定形壳多糖和壳聚糖与透明质酸之间叶黄素掺入复合 物的尺寸。
[0030]图8:图8中的表格报告了壳多糖和透明质酸之间的各种复合物的生物降解性数据。生物降解性按照各种复合物用水解酶在25°C下处理48天后的质量的重量损失来测定。
[0031]图9:图9报告的图示出了来自结晶壳多糖纳米粒子、无定形壳多糖和壳聚糖与透明质酸的复合物的叶黄素体外百分比释放曲线。深灰色条棒表示释放。
[0032]图10:图10的块图示出了来自结晶壳多糖纳米粒子、无定形壳多糖和壳聚糖与透明质酸的复合物在用这些复合物处理I个月之后体内百分比叶黄素释放。该测试用剥离方法进行，移除皮肤连续的层并检测其叶黄素含量。这意味着，通过从“第一剥离(Strip)”到接续的剥离，分析的皮层越来越深。深灰色柱表示来自带正电荷的复合物的叶黄素吸收(回收)，所述复合物通过将壳多糖悬液倾入透明质酸的溶液/悬液中获得。浅灰色柱表示来自带负电荷的复合物的叶黄素吸收，所述复合物通过将透明质酸悬液/溶液倾入壳多糖悬液中获得。可见，带正电荷的复合物在皮肤的最深层中也均匀扩散，而带负电荷的复合物积聚在皮肤的最浅表层，不往深处渗透。
[0033]图11:图11的块图示出了来自结晶壳多糖纳米粒子、无定形壳多糖和壳聚糖与透明质酸的化合物的体外叶黄素释放百分比。测试用“强迫缩放(Forced Scaling)”方法通过移除皮肤层进行。结果证实了已经在图10中报告的那些结果。
【具体实施方式】
[0034]本发明的作者已实施与至少一种带负电荷的分子和一种或一种以上活性成分结合的壳多糖纳米原纤维复合物的制备方法，所述活性成分非常有效地掺入所述复合物中。如下文中更具体地描述的，用本发明方法制成的复合物相对于现有技术在CN/活性成分结合方面具有较大的功效，结合于其中的活性成分具有较大的稳定性并且在医学或治疗应用中具有特定的效力。
[0035]相比于现有技术的状态，其中(W02007/099172，p.19)报道了活性成分与壳多糖纳米原纤维的结合，其中结合到纳米原纤维的活性成分的量的范围为从20%至最大30%，本文描述的方法能使活性成分的掺入(结合到壳多糖纳米原纤维)甚至高于在该文献中报道的两倍。[0036]该文献描述了通过形成化学键而实现的活性成分和纳米原纤维的结合，而本发明方法导致嵌段共聚物复合物的产生，最有可能通过范德瓦耳斯力组装，在复合物内，活性成分被掺入或“封进内部”。
[0037]通过静电相互作用形成复合物相对于通过化学键形成是优选的，因为其避免了由于化学处理常需要使用的有机溶剂而具有的任何有毒的副作用。
[0038]因此，封装能使CN与较大量的活性成分结合，其具有三个优点:
[0039]—增加可用活性成分的量，
[0040]-由于所述纳米原纤维的存在，增加了活性成分的渗透性，以及
[0041 ]—增加封进内部的活性成分随时间的稳定性,使后者的半衰期有必需的增加(相对于不封进内部的相同活性成分)，以及使复合的活性成分的保存期限相对于不复合的相同活性成分有必需的增加。
[0042]本发明的方法
[0043]发明人观察到，壳多糖纳米原纤维普遍带正电荷，通过将含水的CN(壳多糖纳米原纤维)悬液与带负电荷的聚合物混合，可以获得形式为微球体和/或微纤维的不同类型的复合结合物。
[0044]在本发明的一个实施例中，该方法包括如下步骤:
[0045]a)在壳多糖纳米原纤维的含水介质中搅拌混合物5min_2h，制备复合物的第一组分；
[0046]b)将至少一种带负电荷的聚合物悬于含水介质中，制备第二组分；
[0047]c)将第一和第二组分混合，从而获得沉淀物和上清液。可将两种组分的混合物静置例如大约I小时或更短，以使复合物稳定。
[0048]在组分(a)或组分(b)或在两者中引入活性成分(一种或多种)或多种活性成分。
[0049]第一组分中壳多糖的量为0.1%-10% (重量/体积)，例如0.5%、1%、2%、5%或8%。
[0050]第一组分可包含一种或多种活性成分，例如浓度以重量计为0.1-10%。
[0051]第二组分中的物质或带负电荷聚合物的量为0.1%_10%，或更好地为0.15%_2%，例如0.5%或1%。可选地，第二组分包含一种或多种活性成分。
[0052]当活性成分表现出疏水特性(因此为脂溶性)时，包含它的组分(a)或(b)将包含合适的表面活性剂，促进溶液或乳状液或悬液的形成。
[0053]混合步骤通常在持续搅拌下进行，优选地在高速搅拌下进行。这一步骤可按照两种方式进行:通过将带负电的聚合物溶液或悬液倾倒到壳多糖纳米原纤维(CN)悬液中，以及通过将CN悬液倾倒入带负电的聚合物制备物中。研究观察到，这两种过程得到的复合物可不同。例如，当带负电荷的聚合物是透明质酸时，第一过程得到具有负的表面电荷的复合物，而第二过程得到具有正的表面电荷的复合物。
[0054]步骤(c)获得的沉淀物可通过过滤或离心与上清液分离，并可选地经纯化和/或随后的精制以使复合物的尺寸减少至微米或纳米结构。
[0055]例如，根据本领域技术人员己知的适当技术，通过转入涡轮机，或在压力下通过合适的圆筒，或合适的均质机，或通过高能超声处理重复步骤(2、3或更多次)，可将c)获得的分离的沉淀物或c)获得的悬液进一步精制。这样的精制步骤能够将复合物的尺寸减少至微米和/或纳米级别,优选地小于200nm。
[0056]为此，可使用合适的研磨机，例如胶体研磨机，其可包含以非常高的速度在内部相对于定子旋转的截头圆锥形转子。可调整转子和定子之间的间距以获得期望的乳状液一致性。研磨机还包括由同轴的喷丝头和喷嘴构成的均质器。粗乳状液通过横跨喷嘴被层压和均质化，通过作用于连接至喷丝头的螺旋千分尺，可改变喷嘴的部分。将乳状液揉捏若干次并将其再次倒入混合物中，直到获得期望的均匀化。例如，可使用MK2000胶体研磨机(Ikausa)，其特别设计用于生产胶状混合物、极细的乳状液和悬液。可替代地，市面上有很多其它类似的或相似的合适装置可供使用，例如ART-moderne Labortechnik e.K.；IKA ?-Werke GmbH & C0.KG ；Probst&Class GmbH&C0.KG ；Zoz GmbH ；Brogtec MischtechnikGmbH0
[0057]随后可使由此获得的复合物通过喷雾干燥经历干燥，或经历低温-喷雾-干燥(cryo-spray-drying),并通过x射线衍射进行控制。
[0058]负的聚合物
[0059]在本文描述的方法中，带负电荷的聚合物或分子可选自:透明质酸、胶原蛋白、磷脂和/或选自聚糖苷、聚多酚类肽的合成肽、硅胶聚合物或寡聚物，例如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、环糊精、麦芽糖基(maltoyl)和葡萄糖基环糊精、纤维素及衍生物、明胶、葡萄糖、蔗糖、环聚二甲基硅氧烷、硅烷醇的衍生物、烷基二甲聚硅氧烷共聚物(alkyldimethiconcopolyols)、线性和环状的_.甲基硅氧烷等等。
[0060]优选的带负电荷的聚合物是透明质酸。因此，通过混合壳多糖纳米原纤维和透明质酸(HA)获得的复合物代表本发明的一个特定的和优选的实施例。
[0061]适合实施本文描述的方法的壳多糖纳米原纤维是针状晶体，也称作晶须，平均长度大约200nm，平均直径小于10nm。制备这样的纳米原纤维，例如，如在W02006/048829中所描述的。壳多糖纳米原纤维在化学上不同于壳聚糖并且在物理上不同于无定形壳多糖和通过电纺丝法获得的壳多糖，通过电纺丝法获得的壳多糖不以结晶粒子的形式产生，而是以长度等于许多微米或甚至毫米的细丝的形式产生。
[0062]根据本发明，可将包括脂溶性的和/或敏感的活性成分的各种活性成分封装入壳多糖纳米原纤维和负的聚合物的嵌段共聚物中。除了保护封进内部的活性成分，由此形成的复合物的形成也促进其通过皮肤扩散。
[0063]可将与壳多糖纳米原纤维和选定的带负电荷的物质相容的任何活性成分掺入本发明的复合物中。有利地，假如本文描述的复合物对皮肤有特定的效力，那么就可以使用适合治疗各种皮肤状况的活性成分。
[0064]特别是，因此，可选定适合于治疗皮肤疾病和/或美容治疗的一种或一种以上活性成分。例如，活性成分可选自文献中已知的治疗皮肤真菌、细菌、病毒感染、皮炎、湿疹、红斑、牛皮癣、皮肤肿瘤的那些活性成分，也可选自已知的用于治疗皮肤衰老和与其相关的影响的那些活性成分。
[0065]活性成分可在治疗皮肤损伤例如发炎、损害、伤口、疤痕、烧伤，或用于治疗皮肤衰老和与其相关的影响的那些活性成分之间选择，以及可选自激素、免疫刺激剂、抗氧化剂、消炎药、杀菌剂、抗真菌剂、愈合剂、维生素、寡聚矿物(oligominerals)。例如,激素可选自:褪黑激素和植物雌激素等等；免疫刺激剂可选自:四氢嘧啶、葡聚糖、羧甲基葡聚糖、葡萄糖酸锌、乳酸锌和吡啶甲酸锌、多元不饱和脂肪酸(PUFA);抗氧化剂可选自:类胡萝卜素、多酚、硫辛酸、维他命Α、C、Ε、生育三烯酚类、辅酶QlO和肌酸；消炎剂可选自烟碱、甘草次酸、植物鞘氨醇(phytosphyngosine)、PUFA、皮质激素类等；所述抗真菌药选自吡唳硫酮锌锌和吡啶硫酮乙醇胺、酮康唑等等；所述杀菌剂选自植物鞘氨醇、葡萄糖酸氯己定(chlorhexidrine gluconate)、甘氨酸、过氧化苯甲酰、银等等。
[0066]类胡萝卜素，例如，可选自:β_胡萝卜素、叶黄素、玉米黄质、番茄红素、原花色甙、黄酮类。
[0067]在本发明的一个特定的实施例中，复合物中的活性成分可选自:褪黑激素、维生素Ε、胡萝卜素、硫辛酸、四氢嘧啶、葡聚糖和叶黄素。在本发明的其它具体实施例中，活性成分是褪黑激素、维生素E和β -葡聚糖混合物，或褪黑激素、叶黄素、β -葡聚糖混合物；或者褪黑激素、β -胡萝卜素、β -葡聚糖混合物；或者单独的叶黄素。
[0068]在本发明的又一个实施例中，带负电荷的分子是透明质酸。因此，壳多糖纳米原纤维和透明质酸的复合物(包含以上描述的活性成分的每一种或活性成分的组合)，代表本发明的一个优选实施例。
[0069]当一种或一种以上活性成分是脂溶性的时，按照所描述的方法，使用表面活性剂稳定剂以促进复合物的制备是有利的。
[0070]因此，活性成分可各个地或混合地溶解、乳化或分散于包含一种或一种以上药学上和/或美容上可接受的表面活性剂的组合物中。可使用适用于药学用途的任何商业性的表面活性剂，例如脂肪酸酯。也可使用增塑剂和润湿剂，例如，甘油、油酸、卵磷脂、低聚乳酸、丁烯二醇、乙二醇、山梨醇等等。
[0071]本发明的方法能制备复合物，其中CN-结合的活性成分的量基本上大于现有技术状态中所描述的。
[0072]事实上，研究观察到，被浅表吸收的和“被俘获”或封装到复合物内的活性成分的百分比无疑高于文献中报道的。特别是，封装百分比高于用于制备复合物的活性成分的40%、甚至高达50%、60%以及实际上甚至高达大约70%，与现有技术报道的20、30%形成对t匕。本发明人比较了通过无定形壳多糖-透明质酸(HA)、壳聚糖-HA和结晶壳多糖纳米粒子-HA形成的复合物的叶黄素封装能力。由此获得的掺入百分比和粒子尺寸在图6和7中不出。粒子平均尺寸、分布和ζ电势通过Zetasizer (Nano ZS model Zen3600, MalvernInstruments, Worchestershire, UK)石角定。
[0073]本文描述的复合物中包含活性成分能延长保存期限及其体内半衰期。事实上，本发明报告的实验数据表明了包含本发明复合物的组合物如何随着时间持续不断地增加它们的临床效力(图5)。
[0074]体外实施的活性成分(例如叶黄素)释放测试证明，来自包含壳多糖纳米原纤维的复合物的释放曲线随着时间恒定，并在40-48小时之后达到最大释放(100%)，不像壳聚糖或无定形壳多糖复合物，其在20-25小时之后表现出最大释放。参见图9。
[0075]同样地，体内皮肤渗透研究证明了本发明复合物的功效，还揭示了其附加特性。精确地说，皮肤渗透受复合物的外部电荷影响。如图10中突出显示的，具有外部负电荷的复合物倾向于积聚在角质层外部，因此积聚在皮肤的最表层，而带正电荷的复合物将更快速地渗透到皮肤中，扩散进入最深层。在CN和透明质酸复合物的情况下，表面的总电荷至少部分地取决于用于制备复合物的过程。如上面早已指出的，通过将HA (_)悬液倾倒入CN(+ )悬液中获得的复合物产生带负电荷的复合物，而通过将CN ( + )悬液倾倒入透明质酸中，将获得带正电荷的复合物。
[0076]组合物
[0077]为了给药，本文描述的复合物配制成包含它们和至少一种药学上可接受的赋形剂以及可选的一种或一种以上药学上可接受的佐剂和/或添加剂的药学组合物。
[0078]可替代地，本文描述的复合物可配制成包含它们和至少一种美容上可接受的赋形剂和可选的一种或多种美容上可接受的佐剂和/或添加剂的美容组合物。
[0079]药学或美容组合物可配制例如用于局部、口服、直肠、阴道、肠胃外、皮下和皮内给药。
[0080]假如待处理的状况涉及阴道、直肠或低肠道粘膜，术语“局部给药”也可指阴道、直肠、鼻或眼部给药。可替代地，给药可以是混合的，例如口服-局部或口服-直肠给药，甚至在组合的、附随的或连续的给药试剂盒方式下。
[0081 ] 此外，本发明的发明人令人惊讶地发现，当同时口服(通过口服途径)和局部(通过局部途径)给药时，本发明复合物被证明特别有效，尤其是在皮肤区域中。从已知情同意治疗的健康个体体内获得的数据证明，虽然在皮肤水平，局部途径相对于口服途径似乎更有效，但是，对于相同总剂量的给予的活性成分，同时的局部和口服给药之间剂量的划分相对于单独的口服或局部给药产生了协同效应(图1-5)。此结果不仅证明了本发明复合物即使在口服给药时保持了活性成分的活性，而且证明了组合给药进一步增加了治疗效力。
[0082]包含本发明复合物的各种组合物制成适用于口服、局部或肠胃外给药的液体、半流体/半固体、固体或喷雾形式，并可包含现有技术常用的稀释剂和/或赋形剂。
[0083]液体配制物。用于口服给药的液体形式除了本发明的复合物外可包含合适的含水的或非含水的媒介和缓冲剂、悬浮剂和分散剂、乳化剂、溶剂、染料、芳香物质等等。
[0084]例如，它们可包含水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、麦芽油、橄榄油和芝麻油)、甘油醇、四氢呋喃二醇、聚乙二醇和山梨糖醇酐脂肪酸酯及它们的混合物。除了惰性的稀释剂，口服组合物还可包含佐剂，例如润湿剂、乳化和悬浮剂、粘合和甜味剂、芳化和芳香剂。
[0085]用于直肠或阴道给药的组合物可以是例如栓剂，所述栓剂可通过将本发明复合物与合适的无刺激性的赋形剂或载体例如可可油、聚乙二醇或在室温下为固体但在体温下为液体的栓剂蜡混合而制备。
[0086]用于口服给药的固体剂量形式包括硬胶囊或软胶囊、冻干物、片剂、锭剂、药丸、粉末及颗粒。在这些固体形式中，本发明的复合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体例如柠檬酸钠或磷酸钙和/或填料或填充剂(例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸)、粘合剂(例如，羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖)；分割剂(例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠);阻滞剂(例如，石蜡);吸收促进剂(例如季铵化合物);润湿剂(例如，鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯);吸附剂(如高岭土和膨润土);润滑剂(如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠)及它们的混合物混合。
[0087] 在胶囊、剂和药丸的情况下，剂量形式也可包含缓冲剂。
[0088]使用赋形剂如乳糖或奶糖(milk sugar)以及高度分子量聚乙二醇等等来填充硬或软明胶胶囊，上面指出的固体组合物也可用来填充硬或软明胶胶囊。固体剂量形式的片剂、糖衣药丸、胶囊、药丸和颗粒可制成带有包覆层例如肠溶衣和药学配方技术中己知的其它包覆剂。本文描述的配制物可选地可制成仅在或优选在肠道的某些部分，可选地以延时的方式释放本发明的复合物。
[0089]此外，本发明的组合物可配制成软膏、浆糊(pastes)、洗液、凝胶、粉末、溶液、喷雾、吸入剂、眼耳或鼻滴剂、织物或无纺组织及自然或合成的织物、薄膜或贴片的形式用于局部给药。在织物及无纺织物的情况下，包含本发明复合物的组合物可以合适的剂量通过电纺丝与通常用以制造纤维的其它物质混合，即壳聚糖、明胶、PVA、纤维素、银等等的混合物。在薄膜的情况下，组合物可在合适的溶剂中与壳聚糖溶液混合，所述溶剂通过蒸发使弹性的和抗牵引的薄膜形成。根据需要，活性组分优选在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何合适的防腐剂或缓冲剂混合。
[0090]经皮吸收贴片可用以提供受控的释放。也可使用吸收促进剂来增加流过皮肤的化合物。释放比率可通过提供受控比率薄膜或使化合物分散进入聚合物母体或凝胶来控制。
[0091]在组合给药具有特有的功效的基础上，为了联合使用，本发明还涉及包含用于如本文描述的口服给药的一份或多等份的组合物，以及用于如本文描述的局部给药的一份或多等份的组合物的部分的试剂盒。
[0092]所述等份可再分以使每天的给药剂量分成一种或多种单一的剂量。该试剂盒也可包含合适的用于测量局部和/或口服用途的配制物的装置，例如标有刻度的注射器、量杯等，并可以单剂量包提供口服和局部配制物两者。
[0093]适合于单次组合口服和局部给药的量可以包装于一(口服+局部)水包(blister)中，以帮助本文描述的配制物的正确给药和剂量。
[0094]本发明还提供一种药学或美容组合物或包含本发明复合物的药学或美容试剂盒的制备方法，包括一步骤，其中将以上描述的方法中的c)中形成的复合物的沉淀物引入合适的赋形剂(例如以上描述的那些赋形剂之一)中，以及可选地精制由此获得的混合物。
[0095]必要时，也可进一步清洗和/或精制复合物，以例如通过细菌截留过滤器进行过滤或通过与杀菌剂结合，使它们的尺寸从微米减少至纳米和/或使其无菌。
[0096]本发明还涉及如本文描述的复合物、组合物及试剂盒，用于医学用途。
[0097]在一个实施例中，这种医学用途可用于治疗病理状况和/或皮肤和/或皮肤附属物(指甲和头发)的改变。这些改变可以是例如皮肤慢性老化、皮肤光老化、临时或明确的皮肤改变，例如油性或干性皮肤、皮肤角化症、红斑痤疮、对光敏感、皮肤斑点、色素脱失、发炎；过敏或自身免疫反应，例如皮肤病和光照性皮肤病；不规则的瘢痕形成，例如皮肤营养障碍和瘢痕瘤形成、皮肤萎缩；皮肤弹性损失、皱纹、细纹、萎缩纹或蜂窝织炎。
[0098]本发明的复合物、组合物或试剂盒还可适当地用于治疗黏膜或头皮的皮肤病状，例如非正常的角化、痤疮、湿疹、发炎和皮肤或黏膜萎缩、感染、真菌病、细菌病、红斑狼疮、特应性皮炎、牛皮癣、湿疹、过敏性皮炎、超敏性反应、烧伤、眼睛干燥、白内障、黄斑变性、阴道干燥和粘膜癌、皮肤癌、皮肤黑素瘤、结直肠肿瘤、阴道肿瘤；在头皮治疗中，本发明的组合物或试剂盒可用于有需要的病人的雄激素源性脱发或用于不同形式的男性和女性脱发，或用于各种的形式的多毛症。其中所述复合物以治疗有效量对所述病人给药。
[0099]活性成分可以以治疗有效药量和剂量给予，例如目前用于期望的治疗的其它制备物中的那些剂量，或给予较低剂量，甚至低至文献描述的那些剂量的50%或以下。
[0100]“治疗有效剂量”是指被治疗的病人能够获得期望的治疗效果的剂量。在特定的情况下，治疗有效剂量是引起被治疗病人目标问题部分或全部减少的剂量(以一种或多种单一的剂量随时间给予)。
[0101]治疗有效剂量可以是，如上面指出的，通过口服和/或局部途径(如上面指出的，口服或局部可以被阴道或直肠途径取代)以一种或多种单一的剂量给药，以及通过附随或按顺序的口服和局部途径，给药可以是联合的。
[0102]术语“单一的剂量形式” “单一剂量”或者“单一的剂量”是指适用于人或动物主体单一的剂量的独立物理单位，每一单一的剂量包含经计算用于结合合适的药学赋形剂产生期望的治疗效果的预定量的活性物质。
[0103]当使用己知活性成分时，本领域技术人员可以参考这些活性成分的实际单一剂量，并可容易地将其调节到本发明的配方中。
[0104]在特定的实施例中，配制物经局部和口服附随地给予，整体的单一剂量大约等于用于单独的局部给药或单独的`口服给药的剂量，以及配制物因此被合适地制备以使通过局部途径的大约一单一剂量手段给药和通过口服途径的一单一剂量手段给药。
[0105]通过口服途径(口服地)和通过局部途径(局部地)给药之间的比率可以在两种给药的10:90至90:10之间变化。例如，可分别地口服给予单一剂量的10、20、30、40、50、60、70、80或90%，局部地给予单一剂量的大约90、80、70、60、50、40、30、20或10%，以无论如何给予所述单一剂量的大约100%。
[0106]举个例子，口服途径的每一单一剂量可包括大约l_2mg的每种活性成分，例如每种活性成分大约 I ；1.1 ；1.2 ；1.3 ；1.4 ；1.5 ；1.6 ；1.7 ；1.8 ；1.9 ;2mg，各与大约 1.2-1.6mg，例如1.2 ;1.3 ;1.4 ;1.5 ;1.6mg的壳多糖纳米原纤维/负的聚合物复合。
[0107]局部组合物的期望成分可具有终浓度，例如，其可包含大约0.5微克-500微克/ml，取决于其是否为用于浓缩的集中应用，或用于更多延伸的应用，例如用于面部、机体或局部的机体部分。
[0108]在本说明书中，术语“包含(comprising)”, “包含(comprises)”和“包含(comprise)”可分别可选地使用术语“由…组成(consisting in)”、“由…组成(consists in)”、“由...组成(consist in)”来限制。
[0109]如下实例和实验的目的在于说明本发明及其在可能的实施例之一中的作用，并且无论如何不应解释为对其的限制。
[0110]实验部分[0111]实例1:包含叶黄素的CN-HA复合物的制备和鉴定。
[0112]复合物的制备
[0113]在高速和恒定搅拌下进行操作，通过将粗结晶CN的酸性悬液滴入HA的稳定化的悬液中，反之亦然，使用带有30规格针头的注射器，获得基于嵌段聚合物的纳米粒子。HA水悬液包含稳定剂亲水的表面活性剂，而结晶CN悬液包含亲脂性的稳定剂和叶黄素作为活性成分。通过这种方式，获得满意的稳定的乳化系统。在此条件下，CN经历离子凝聚并以俘获活性成分(即，叶黄素)的薄层微粒形式沉淀。将微粒混合物通过离心纯化，重悬于脱矿质水中，并用高压均质器或高功率超声波处理，雾化成热空气流，形成非聚合粒子。
[0114]鉴定
[0115]分别使用无定形壳多糖/HA、壳聚糖/HA和结晶壳多糖纳米粒子/HA复合物来封装叶黄素。然后，测定:叶黄素从获得的纳米粒子中释放的量、粒子平均尺寸、(电势、封装效率和化合物的储存稳定性。图6和7中报告了纳米化合物的主要特征。所有聚合的复合物的叶黄素加入含量在10%_35%之间变化，而被封装的叶黄素含量非常高。CN-HA-叶黄素复合物具有最高的封装效率，即大约66%，而无定形CN-HA-叶黄素具有大约40%的封装效率，壳聚糖-HA-叶黄素具有大约32%的封装效率。考虑到叶黄素作为油溶性成分，要封入这些亲水的聚合物内部相当困难，所有使用的化合物的叶黄素加入含量和俘获效率值相当令人满意。如图6和7所示，CN-HA复合物更好的叶黄素俘获效率可能是由于CN结晶。通过Zetasizer (Nano ZS model Zen3600,Malvern Instruments, Worchestershire,UK)石角定粒子平均尺寸、幅度分布和(电势。每个样本通过Biichi Mini B-190喷雾干燥器(Flawil,Switzerland)干燥,悬于蒸懼水中,超声5分钟并相对于入射光束成173°角读取。对制备用于粒度分析 的相同样本进行;电势测定。;界限的范围为120-120mV。每一报告值是3次测量的平均值。使用扫描电子显微镜(SEM/EDY，Philips XL30)来研究纳米粒子的形态，以及还在物理上测量它们的相对尺寸。获得的所有聚合的复合物的平均纳米粒子直径从与HA复合的纳米结晶壳多糖(CN)的最小的185nm变化至壳聚糖-HA复合物的485nm (图6和7)。
[0116]体外释放研究
[0117]按照Karavelidis 等人的方法(Karavelidis V, Karavas E, Giliopoulos D,Papadimitriou S, Bikiaris D (2011), Evaluating the effects of crystallinity innew biocompatible polyester nanocarriers on drugs release behaviour (〈〈i平价新的生物相容性多元酯纳米载体的结晶度对药物释放行为的影响》)，Intern.J.Nanomedicine(《纳米医学杂志》)第6卷第3021-3032页)，在装备有使用桨法(USP II)自动取样器的溶解设备(Distek2100B)中测定纳米复合物的叶黄素释放比率。每一溶解容器装入与1.5ng叶黄素对应的一定量的纳米粒子。测试在37°C+/-1°C下以IOOrpm的转速进行。溶解介质为包含稳定剂的500ml磷酸盐缓冲液(pH7.4)。在预定的时间间隔，从溶解介质中吸取5ml样本。样本通过45 y M超高分子量聚乙烯过滤器进行过滤，并使用带有UV读数器的HPLC在490nm处进行分析测定。图9报告了所有测量，这些测量都进行了三次。如图9所示，来自壳聚糖和无定形壳多糖的纳米粒子(纳米复合物)的叶黄素释放曲线在早期(一直到20小时)达到它们最大值(从80%到98%)，而纳米结晶壳多糖的复合物引起叶黄素的连续和相当恒定的释放，在长达大约45-48小时之后达到最大值。[0118] 体内皮肤渗透测试
[0119]根据Miyajima M 等人(1999)的剥离方法(Effect of polymer/basic druginteractions on the two diffusion-controlled release from a poly (-lactic acid)matrix (《聚合物/碱性药相互作用对两者从聚(乳酸)母体中散布受控释放的影响》，J.Control Release (《控制释放杂志》)第 61 卷第 295-304 页)(D-squame Cu DermC0., Dallas, Texas),在知情同意的20个自愿主体上控制经皮渗透。在其他10个志愿者上应用擦洗技术(scrub technique),该技术之前经我们组改良和使用(Morganti P,Randazzo SD 和 Bruno C (1996), Alpha Hydroxy acids in the cosmetic treatment ofphoto-1nduced skin ageing (《光引起的皮肤衰老的美容治疗中的a羟基酸》，J.Appl.Cosmetol (《应用美容杂志》),第14卷第1-8页)。通过使用丹磺酰氯突光法(Jansen LH,Hoiyo-Tomoko MT和Kligman AM(1974), Improved fluorescent staining technique forestimating turnover of the human Stratum Corneum (《用于评价人角质层翻覆的改进的荧光染色技术》)，B.J.Dermatol.(《英国皮肤病学杂志》)第90卷第9_12页)预先获得角质层翻覆和因而获得的不同剥离皮层。以随机的方式应用包含CN-HA纳米粒子(带正电荷)或HA-CN纳米粒子(带负电荷)的纳米乳液对所有主体处理I个月。通过玻璃压舌板分别地在右或左前臂施用纳米乳液(2g/100cm2)。在应用产品30分钟之后进行精确的净化，净化后对经处理区域进行各种剥离。所有剥离按顺序进行，通过相同的操作者以相同方式进行操作，以均匀除去SC。分析评估同时在经处理和未处理区域的10个剥离中的5个，检查存在的叶黄素的浓度。
[0120]始终通过相同的方法产生所有的纳米粒子，其包含始终在相同浓度下使用的叶黄素。使用分光光度计在490nm波长下确定使用有机溶剂(丙酮/乙醇1:1)从皮肤提取的叶黄素浓度和通过剥离或擦洗获得的叶黄素浓度。图10和11报告了获得的结果。不得不强调使用我们的实验方法如何使我们能够产生两种不同的纳米粒子类型:当将CN逐滴倾入HA悬液中时，它们的外表面带正电荷(第一种情况)，或当将HA倾入CN悬液中时，带负电荷。此外，液滴的尺寸还决定纳米粒子的最终尺寸。因此，独立于使用的该方法以及如图10和11显而易见的，通过使用带正电荷的纳米粒子(第一种情况)，可以检测叶黄素是如何一直以较大的量存在于SC的第一种的5个剥离中(第二剥离=大约20层)，其代表它的最深部分。相反，带负电荷的纳米粒子在SC的最外的表面被发现(90%在第一剥离上)，它也是带负电荷的。考虑到剥离强度和用包含纳米原纤维的乳状液进行治疗的不同次数，显而易见的是，依赖于治疗的天数(4秒对12秒)，角质细胞水平发现的叶黄素的量如何较高以及在不断增加的深度如何存在。更多强迫擦洗和重复的剥离还能够控制存在于与活性的角化细胞交界处的角质细胞。使用带正电荷的CN-HA纳米粒子时，这种现象更加显而易见。相反，带负电荷的纳米粒子仅位于角质层的最表层中。因此，取决于电荷和进行的剥离及擦洗数量，100%叶黄素在非常浅表的水平或在最深的SC层被发现，但无论如何总是在真皮外侧。纳米粒子根据它们的表面电荷带有不同的活性，这表明了正电荷如何能够干扰脂质薄层和角质细胞的均匀排列。看起来，这些电荷能够引起实际渗透通道的形成，类似于例如使用超声产生的那些。因此，纳米粒子的渗透和被绑定或被俘获入相同纳米粒子中的活性成分的释放将被促进。总之，似乎可以产生包含具有正或负电荷以及具有不同尺寸的纳米粒子的纳米结构载体，其不仅能够结合生物活性成分，而且能够在不同的时间在不同的皮肤层水平选择性地释放它们。基于CN的使用，这些新的纳米粒子似乎能够临时改变SC的物理性质，提高活性化合物的扩散率，并且不需要使用或多或少的侵入技术。
[0121]生物降解性
[0122]使不同的纳米粒子经历不同酶例如纤维素酶、果胶酶、淀粉酶和胶原酶的水解作用，测定它们的重量变化，由此评价不同纳米粒子的较高或较低的降解性。图8报告了获得的结果。如从获得的数据显而易见的，所有纳米粒子均无差别地被使用的所有酶水解。这些结果突出显示了基于CN的使用以及用我们的技术产生的纳米粒子如何容易地和完全地被通常同时存在于人和周围环境中的酶降解。对于这些特征，它们可以考虑用作生态和生物相容性载体，用于标准药学或美容或生物医学用途。
[0123]体外CN和CN复合物的细胞毒性(citotoxicity)
[0124]细胞毒性研究在从自愿主体收集的角化细胞和成纤维细胞的离体培养物上进行，并突出显示了这些纳米粒子如何完全无任何细胞毒性作用，相反，它们为所述细胞利用，作为它们的生长介质。
[0125]实例2:包含褪黑激素、维生素Effg-葡聚糖的CN-HA复合物对皮肤影响的评价
[0126]在下面示例性的实验中，纳米壳多糖复合物被制成包含作为带负电荷分子的透明质酸和作为活性成分的褪黑激素、维生素E和3 -葡聚糖。复合物配制成用于局部给药和用于口服给药的组合物，并在表现皮肤衰老症状的健康病人身上对其进行体内分析。临床分析组合物对皮肤水化、皮肤表面脂质的存在、皮肤脂质过氧化和皮肤弹性的影响。
[0127]以独立的组局部地、口服地和以组合的局部+ 口服途径给予组合物。相对于用单独的安慰剂处理的对照组，比较不同给药途径的作用。同时，复合物的功效跟不与本发明壳多糖纳米原纤维复合的 相同活性成分的混合物进行比较。
[0128]以下报告的分析测定显示了本发明的复合物如何以统计学上显著的方式增加活性成分的功效并改进它们穿过皮肤的渗透性。较大的功效和改进的渗透能力归因于本文描述的复合物的结构，并因此与配制在本发明复合物中的活性成分类似，是可转移的，不同于本文示例的那些。
[0129]材料和方法
[0130]按照合适的道德规范委员会批准的方案，以及在知情同意以后，在70名健康的妇女自愿者(年龄22-45岁)上进行了 12周的临床试验。
[0131]将包含壳多糖纳米原纤维复合物和透明质酸的、含有褪黑激素、维生素E和(6-葡聚糖的(口服或局部给药的)组合物(用CN-MEB表示)的作用与未复合的相同的活性成分的混合物(用MEB表示)的作用以及没有CN-MEB复合物或活性成分MEB的安慰剂组合物的作用进行比较。根据非侵入的生物物理学参数，临床评估口服、局部或以组合的口服+局部途径给予的MEB (不复合)和CN-MEB (复合的)的作用。局部应用在自愿主体的面部和/或右臂进行。所有主体表现出光老化的影响。该测试由皮肤学者控制进行以检查皮肤状况，总结于表1中。
[0132]表12天的示例性给药方式
[0133]
【权利要求】
1.壳多糖纳米原纤维和至少一种带负电荷的聚合物和一种或以上活性成分的复合物，其中带负电荷的聚合物选自:透明质酸、胶原蛋白、磷脂、硅胶聚合物或寡聚物、选自包含聚多酚类肽、聚糖苷的自然或合成的肽。
2.根据权利要求1的复合物，其中所述一种或以上活性成分选自:激素、免疫刺激剂、抗氧化剂、消炎剂、抗细菌剂、抗真菌剂、愈合剂、维生素、寡聚矿物。
3.根据权利要求2的复合物，其中所述一种或以上活性成分选自:褪黑激素、植物雌激素、四氢嘧啶、(6-葡聚糖、羧甲基(6-葡聚糖、葡萄糖酸锌、乳酸、吡啶甲酸、多元不饱和脂肪酸(PUFA)、(6-胡萝卜素、叶黄素、玉米黄质、番茄红素、原花色甙、黄酮类、多酚、硫辛酸、维生素A、C、E、生育三烯酚类、辅酶Q10、肌酸、烟碱、甘草次酸、植物鞘氨醇、多元不饱和脂肪酸(PUFA)、皮质激素类、吡啶硫酮锌和吡啶硫酮乙醇胺、酮康唑、植物鞘氨醇、葡萄糖酸氯己定、甘氨酸、过氧化苯甲酰、银。
4.根据权利要求1-3任一项的复合物，其中所述一种或以上活性成分选自:褪黑激素、维生素E、(6-葡聚糖，或褪黑激素、叶黄素、葡聚糖，或褪黑激素、硫辛酸、四氢嘧啶，或褪黑激素、(6-胡萝卜素、(6-葡聚糖，或单独的叶黄素。
5.根据权利要求1-4任一项的复合物，其中所述带负电荷的分子是透明质酸。
6.根据权利要求1-5任一项的复合物在医学治疗中的用途。
7.根据权利要求6的复合物在治疗皮肤病状中的用途。
8.根据权利要求6或7的复合物，其中所述治疗是用于局部、口服、皮内、皮下、阴道、眼睛、鼻、直肠的给药或它们的组合。
9.根据权利要求1-8任一项的复合物在需要的病人中在皮肤慢性衰老、皮肤光老化、临时或明确的皮肤改变，例如`痤疮、油性或干性皮肤、皮肤角化症、红斑痤疮、对光敏感、来自色素脱失或色素沉着过多的皮肤斑点、干燥和/或皮肤发炎过程；过敏或者自身免疫反应，例如皮肤病和光照性皮肤病；不规则的皮肤瘢痕形式，例如肥厚性瘢痕或瘢痕瘤的形成；皮肤萎缩状态；弹性损失的医学治疗中的用途；和/或在减少皱纹、细纹、萎缩纹或蜂窝织炎的出现的治疗中的用途；在治疗皮肤角化过度形式，例如痤疮、湿疹、红斑狼疮、特应性皮炎、牛皮癣、过敏性和/或接触性皮炎、超敏性反应、皮肤癌、皮肤黑素瘤、阴道和/或眼睛黏膜干燥，或治疗白内障和眼睛黄斑变性形式中的用途，其中所述复合物以治疗有效剂量给予所述病人。
10.包含权利要求1-9任一项的复合物、合适的赋形剂和可选的合适的佐剂和/或添加剂的组合物。
11.根据权利要求10的组合物，其中所述组合物是药学或美容组合物。
12.根据权利要求10或11的组合物，其配制用于局部、口服、皮内、皮下、阴道、眼睛、鼻、直肠的给药或它们的组合。
13.根据权利要求12的组合物，其形式为溶液、胶体溶液、洗液、乳霜、粗乳状液、微乳状液或纳米乳状液、分散剂、凝胶、喷雾、泡沫、薄膜、面膜、贴片、生物活性织物或无纺组织、片剂、硬或软胶囊、粉末、颗粒、冻干物、糖浆、酏剂。
14.包含根据权利要求11配制用于口服给药的组合物等份和配制用于局部给药用于伴随或连续使用的相同组合物等份的试剂盒。
15.根据权利要求10-13任一项的组合物，或根据权利要求14的试剂盒在需要的病人中在皮肤慢性衰老、皮肤光老化、临时或明确的皮肤改变，例如对光敏感、由于色素沉着过多或色素沉着不足引起的皮肤斑点、干燥和/或发炎形式；过敏或者自身免疫反应例如皮肤病和光照性皮肤病；萎缩形式和/或皮肤弹性损失，例如肥厚性瘢痕或瘢痕瘤的治疗方法中的用途；和/或在治疗油性或干性皮肤，需要减少皱纹、细纹、萎缩纹或蜂窝织炎出现的皮肤中的用途、在治疗与非正常角化有关的皮肤病状中的用途，例如痤疮、湿疹、红斑狼疮、特应性皮炎、牛皮癣、过敏性皮炎、超敏性反应、皮肤癌、皮肤黑素瘤、伴随有阴道炎、白内障或眼睛黄斑变性、口腔炎和舌部发炎发生的阴道、眼睛或口部粘膜干燥，其中所述复合物以治疗有效剂量给予所述病人。
16.根据权利要求1-5任一项的壳多糖纳米原纤维和至少一种带负电荷的聚合物和一种或一种以上活性成分的复合物的制备方法，包含以下步骤: a)在壳多糖纳米原纤维和可选的一种或以上所述活性成分的含水介质中搅拌混合物5min_2h,制备第一组分； b)将至少一种带负电荷的聚合物和可选的一种或以上所述活性成分悬于含水介质中，制备第二组分； c)将第一和第二组分混合大约I小时，获得复合物的沉淀和上清液， 假设组分(a)或组分(b)之一包含至少一种活性成分。
17.根据权利要求16的方法，其中第一组分中壳多糖的量为0.1%-10%，以及第二组分中带负电荷的聚合物的量为0.1%-10%。
18.根据权利要求16或17的方法，其中将步骤(c)获得的沉淀与上清液分离开。
19.根据权利要求16-18任一项的方法，其中使步骤c)获得的混合物或沉淀在压力下通过涡轮机、圆筒经历进一步的步骤，从而获得微米或纳米尺寸的粒子。
20.根据权利要求16-19任一项的方法，其中至少一种活性成分是脂溶性的以及其中包含它的组分包含表面活性剂。
21.包含壳多糖纳米原纤维复合物的药学或美容组合物的制备方法，其中根据权利要求1-5任一项所述壳多糖纳米原纤维复合物与至少一种带负电荷的聚合物和一种或以上活性成分结合，包括一步骤，其中在所述复合物中引入合适的赋形剂，以及由此获得的混合物可选地进行进一步精制。
22.根据权利要求21的方法，其中所述组合物配制用于局部、口服、眼睛、鼻、直肠、阴道给药或用于联合的局部/ 口服给药，其中所述局部途径包括通过无纺组织上的生物织物或薄膜进行给药。
23.根据权利要求14的试剂盒的制备方法，其中将配制用于口服给药的组合物等份和配制用于局部给药的相同组合物等份引入一水包用于它们的附随或连续使用。
【文档编号】A61K9/48GK103607998SQ201280029843
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2012年4月19日 优先权日:2011年4月19日
【发明者】P·摩尔甘蒂 申请人:马威苏德公司