从鲑科鱼卵孵化液生产美容组合物的方法以及所述组合物改善皮肤美容外观的用途

从鲑科鱼卵孵化液生产美容组合物的方法以及所述组合物改善皮肤美容外观的用途
【专利摘要】本发明涉及从鲑科（Salmonidae）孵化液获得或可以从其获得的美容组合物，生产所述组合物的方法以及它们在各种针对皮肤的美容应用中的用途，尤其是用于减少或防止哺乳动物皮肤中在外观上出现或盛行皱纹、细纹、色素沉着过度、松弛、皮肤干燥、起皮和/或经皮水分散失。
【专利说明】从鲑科鱼卵孵化液生产美容组合物的方法以及所述组合物改善皮肤美容外观的用途
[0001]本发明涉及包含可源自于鲑科(Salmonidae)孵化液的多肽或多肽部分的组合物在用于皮肤的各种应用中的用途。具体来说，所述组合物可用于改变、优选改善老化皮肤的美容外观。
[0002]皮肤是更易受伤的人体器官之一。皮肤总是与外界刺激直接或间接地相互作用，并且常常暴露于环境因素并受其影响。事实上，皮肤可以被看做与外部世界接触的前线。这种持续的暴露能够引起皮肤、特别是皮肤美容外观的令人不快和/或不想要的物理和可见变化。尽管这样的变化可能不危及个体的健康，但这样的变化可能令人身体不适或看起来不舒服。事实上，由于皮肤清晰可见，因此皮肤外观的变化能够引起心理压力。因此，对维持、恢复或改善皮肤状况、特别是恢复皮肤的青春外观的有效处理，存在着持续不断的需求。
[0003]皮肤形成人体的最大器官，占个人重量的约12-16%。它作为外部世界和我们体内受控环境之间的屏障和调节势力两者，执行许多至关重要的作用。
[0004]皮肤由3层构成，即表皮、真皮和皮下组织。表皮是皮肤最外部的上皮层。它充当物理屏障，防止身体水分流失，并防止物质和有机体进入体内。它的厚度随身体部位而变。
[0005]表皮由分层的鳞状上皮构成，即它由扁平细胞的层构成。皮肤、毛发和指甲是角质化的，意味着它们具有由被称为角蛋白的蛋白质构成的死亡的、硬化的疏水表面。由于表皮的与角化细胞相关的细胞外脂类的含量，使表皮不具有渗透性，尤其是在表皮的中间层(透明层)中。粘膜(例如食道、口咽腔、生殖器官等的粘膜)主要是非角质化且潮湿的。表皮具有三种主要细胞类型，即角化细胞(皮肤细胞)、黑素细胞(产色素细胞)和朗氏细胞(免疫细胞)。梅克尔细胞是第四种表皮细胞，其较不普遍。
[0006]角化细胞随着向外移动而成熟和分化，并伴有角蛋白的累积。它们最终起皮或擦落。它们形成四个或五个明显不同的组织层，从最浅表到最深处为:(i)角质层，其具有无细胞核的死亡干透的坚硬细胞；(ii)颗粒层，其具有含有嗜碱性颗粒的细胞并在向外方向上通过薄的透明层与角质层隔开；(iii)有棘层(多刺、刺状或棘细胞层)，其中细胞随着向上移动变得越来越扁平，以及(iv)基底层，其具有柱状(长的)再生细胞。
[0007]紧靠表皮下方的是基膜，其是位于表皮与真皮之间的特化结构。
[0008]真皮是皮肤的纤维结缔组织或支持层。主要纤维是交织的胶原蛋白纤维和弹性蛋白。
[0009]皮下组织是紧靠真皮和表皮下方的脂肪层。它也被称为皮下的组织、下皮或膜。皮下组织主要由脂肪细胞、神经和血管构成。
[0010]在皮肤的下层，颗粒层中产生新的上皮皮肤细胞。细胞随时间向皮肤表面迁移并变得更加酸性。在其30天的迁移期间，它们死亡并被角蛋白饱和。角蛋白和相关的脂类是重要的，因为它们保护皮肤抵御外部因素。
[0011]许多因素可能造成皮肤美容外观劣化，这些因素包括疾病、受伤、环境因素、年龄、激素水平、药物、外部施加的或摄入的材料、遗传状况或这些与其他因素的组合。与衰老相关的皮肤美容外观劣化是普遍的因素，特别是光老化即皮肤日射病(Dermatoheliosis)。这种劣化可以在皮肤中的不规则或异常处看到，其可能表现为例如皮肤干燥、皱纹、细纹、松弛加重(松垂)或色素沉着改变。
[0012]光老化是用于由长期UVA和UVB暴露引起的特征性变化的术语。生物功能和管控代谢应激的能力的降低，是所述老化过程的主要结果之一。老化是复杂的渐进性过程，其也引起皮肤的功能和美观变化。
[0013]光老化是归因于皮肤连续长期暴露于约245_290nm的紫外(UV)辐射的皮肤老化过程，所述紫外辐射可以来自于自然光或合成光。因此，光老化也被称为由UVA和UVB射线引起的皮肤老化，特别是面部、耳、颈部和手的皮肤老化。
[0014]皮肤干燥和/或起皮是老化皮肤的最常见征兆之一。尽管某些个体更易于发生皮肤干燥和/或起皮，但皮肤干燥和/或起皮的出现能够影响任何人，而与年龄、性别或皮肤类型无关。
[0015]当皮肤外层(具有透明层的角质层)的水通过例如经皮水分散失(TEWL)而耗尽时，发生皮肤干燥。当这一层被良好保湿时，它使通过皮肤的失水最小并有助于抵御刺激物、过敏原和微生物。然而，当角质层干透时，其保护功能下降。这使得失水更多，导致皮肤易于受到环境因素的影响。
[0016]理想情况下，角质层具有10%至30%的水含量。这种水使得皮肤柔软、平滑并具有柔性质地，即与皮肤的青春外观相关的特征。所述水来自大气、皮肤的基底层和汗。由皮肤腺产生的油和由皮肤细胞产生的脂肪物质充当天然保湿剂，允许角质层锁住水分。
[0017]身体通过蒸发从皮肤表面连续损失水(TEWL)。在正常条件下，损失速率缓慢，且水可充分更替。当失水超过水的更替且角质层的水含量降低至低于10%时，出现皮肤干燥的特征性迹象和症状。
[0018]改善或消除皮肤干燥`和/或起皮，从而改善皮肤的美容外观的保湿剂，是非常合乎需要的。尽管在本领域内已知许多保湿剂，但对有效且温和的天然产品仍存在需求。
[0019]表现出不想要或过量色素沉着、即色素沉着过度的表皮细胞，例如黄褐斑，是老化皮肤的另一种常见征兆。传统上，可以使用去角质处理来除去对皮肤的美容外观不利的表皮细胞。
[0020]去角质处理移除表皮的外层以露出下面更新的皮肤细胞。去角质可以通过物理手段(例如磨皮)或通过化学手段来实现。化学去角质剂包括含有水杨酸、乙醇酸、水果酶、柠檬酸或苹果酸的磨砂剂，并且可由皮肤科医生以高浓度使用，或在非处方产品中以较低浓度应用。化学去角质可涉及使用含有α-羟基酸(AHA)或羟基酸(BHA)或酶的产品，其起到使在细胞连接处将细胞保持在一起的胶状物质松散而使其渐渐松开的作用。这种类型的去角质被推荐用于人们处理痤疮。
[0021]去角质处理的最大缺点是用于实现所述去角质处理的一些产品和方法的高价格。去角质在开始时将导致皮肤有些变红。在化学剥皮接近结束时，皮肤将产生霜层(frost)，其颜色在皮肤表面上从亮白色到灰色不等。
[0022]因此，与去角质处理相比对皮肤更加温和的减少皮肤色素沉着过度的有效方法，是合乎需要的。
[0023]因此，对适合于促进皮肤美观的处理仍存在需求。换句话说，改善皮肤美容外观的方法是合乎需要的。具体来说，对于恢复老化皮肤的青春外观和/或对抗皮肤老化征兆的方法，存在需求。
[0024]现在已经令人吃惊地发现，包含在鲑科孵化液中发现的某些分子、即多肽或多肽部分的组合物，对于改善皮肤的美容外观，特别是减少与皮肤老化相关的物理征兆或症状来说，是显著有效的。
[0025]鱼胚的孵化通过被称为孵化酶的能够降解蛋白质卵壳的各种酶来实现。所有脊椎动物的卵母细胞具有被称为卵黄被膜、卵壳或蛋壳的细胞外被膜，其由各种多肽的交联构成。具有不同特异性的蛋白酶作用于蛋壳以分解卵壳并促进鱼胚的释放。因此，胚胎在其中孵化的流体包含大量多肽和多肽部分，即降解产物。 [0026]已令人吃惊地发现，包含源自于鲑科孵化液的蛋白质和多肽部分的组合物对皮肤的美容外观具有显著效果。尽管不希望受到理论限制，但实施例证实，包含鲑科孵化液多肽和多肽部分的组合物能够恢复皮肤的青春外观。据认为，在本文定义的组合物中多肽和多肽部分的组合(其被认为包含至少50种不同的多肽或多肽部分)，可以与皮肤的真皮和表皮中存在的不同类型的蛋白质相互作用。据信，多肽和多肽部分的组合可以协同作用，并且这些相互作用可能至少部分造成了所述组合物对皮肤的美容/美学外观的效果。
[0027]因此，在最广泛意义上，本发明可以被视为提供了一种包含可源自于鲑科孵化液的多肽和多肽部分的组合物，所述组合物用于促进皮肤的美观或用于促进皮肤美观的方法中。换句话说，一种如本文所描述的包含可源自于鲑科孵化液的多肽和多肽部分的组合物，所述组合物用于改善皮肤的美容外观或用于改善皮肤美容外观的方法中。在特别优选情况下，本发明可以被视为提供了本文中描述的包含可源自于鲑科孵化液的多肽和多肽部分的组合物，所述组合物用于恢复老化皮肤的青春外观和/或对抗皮肤老化的征兆，或用于获得这种效果的方法中。上面提到的组合物在本文中也被称为“鲑科孵化液提取物”。除了多肽和多肽部分之外，所述提取物还可以包含本源的非蛋白质材料。
[0028]从下面的公开内容可以明显看出，本文中描述的包含可源自于鲑科孵化液的多肽和多肽部分的组合物可以被提供为美容组合物，其包含一种或多种药学可接受的赋形剂和/或稀释剂。
[0029]因此，一方面，本发明提供了从鲑科孵化液(例如鲑鱼孵化液)制备本文中描述的美容组合物的方法，所述方法至少包括下列步骤:
[0030]a)将鲑科鱼卵悬浮在最小体积(例如等于卵的体积或更少)的水中；
[0031]b)诱导所述卵的同步快速孵化(优选地使对于超过95%的胚胎来说，孵化在不到2小时内完成)；
[0032]c)任选地，对所述孵化的卵进行过滤以获得孵化液；以及
[0033]d)对所述孵化液进行过滤以获得所述多肽和/或组合物，其中过滤所述孵化液的步骤至少包括下列步骤:
[0034](i)使用孔径大小为至少5 μ m、优选地5-15 μ m、特别优选地孔径大小为7 μ m的滤器过滤所述孵化液，并收集滤液；
[0035](ii)使用孔径大小为0.30-0.60 μ m、优选地孔径大小为0.35-0.55 μ m、特别优选地0.40-0.50 μ m、最优选地0.45 μ m的滤器过滤来自于步骤(i )的滤液，并收集滤液；
[0036](iii)用药学可接受的缓冲液交换来自于步骤(ii)的滤液中的水；[0037](iv)使用孔径大小为0.15-0.30 μ m、优选地孔径大小为0.22 μ m的滤器过滤来自于步骤(iii)的溶液，并收集滤液；以及
[0038](V)从来自于步骤(iv)的滤液制备所述美容组合物。
[0039]交换所述滤液中的水的步骤可以使用本领域已知的任何适合方法例如渗滤或透析来进行。在特别优选实施方式中，这一步骤使用排除尺寸小于15kDa、优选地IOkDa或更小例如9、8、7、6、5、4、3kDa或更小的滤器，通过渗滤来进行。
[0040]渗滤使用超滤膜从溶液中移除例如盐类或其他不想要或不需要的微小溶质，或者作为交换溶液的溶剂例如缓冲剂的方式。小分子与溶液分离，同时较大分子保留在渗余物(不通过滤膜的材料)中。微小溶质和溶剂例如水一般容易地洗过膜。约3倍体积的渗滤溶剂通常将排除95%的微小溶质。因此，上面来自于步骤(ii )的滤液首先通过渗滤进行处理，随着一定比例的溶液(其含有孵化液的可溶性杂质/不想要的级分)通过膜，这导致渗余物浓缩。然后将渗余物用药学可接受的缓冲液例如0.5mM磷酸钠和ImM氯化钠、磷酸盐缓冲盐水等稀释。如果需要，可以对稀释的渗余物进行重复的多轮渗滤。通常，在步骤(iv)之前将渗余物稀释，使得来自于步骤(iv)的滤液具有3000-5000mU/L、优选地3000_4000mU/L、更优选地约3400mU/L的酶活性。滤液的酶活性可以通过滤液切开因子Xa发色底物(CH30C0-D-CHA-Gly-Arg-pNA-Ac0H, Sigma aldrich 产品号:F3301_25MG)的能力来测量。在渗滤步骤之前，孵化液可能包含10至150，000mU/L范围内的酶活性。
[0041 ] 因子Xa发色底物(Sigma-Aldrich )被孵化液中存在的酶切割，产生可以使用分光光度分析法在405nm处方便地测量的黄色产物。典型的测定方法包括向包含10 μ I因子Xa发色底物(10mg/ml)、70y 10.2M Tris-HCl ρΗ8.5 和 520 μ I dH20 的 600 μ I 底物溶液添加可以从上述方法的步骤(iii)获得的100 μ I孵化液。方便的是，可以对吸光值的变化进行5-20分钟，通常10分钟的测量。将结果乘以适合的因数例如10 (对于10分钟测定来说)，以获得每Iml样品的酶活性。可以使用其他适合且等同的底物来测定孵化液的活性。
[0042]同步孵化可以通过本领域已知的任何适合方法来获得。例如，可以使用光操控，例如将卵从光照条件(其抑制孵化)转移到无光条件，使卵同步化。也可以使用溶液温度的操控、脱氧合作用(Oppen-Berntsen 等，1990, Aquaculture, 86, pp.417-430)和使用电刺激来引起同步孵化。正如上面指出的，水的极小体积可以等于卵的体积或更小，例如对于每Iml卵来说可以使用≤1、0.75,0.5,0.25ml的悬浮液体，例如0.5至1ml。
[0043]上述制备美容组合物的方法产生富集的制备物，其优选地基本上不含源自于源材料或分离程序中使用的材料的任何污染性组分，例如粗品孵化液中包含的所述多肽或多肽部分之外的组分。在优选实施方式中，组合物可以被富集到纯度超过30、40、50或60%，例如>70、80或90%的程度，所述纯度以与起始孵化液相比多肽和多肽部分的w/w (干重)来评估，即90%的纯度是指通过制备方法的过程失去90%的起始原料(污染性组分)。然而，可以使用具有较低纯度，例如保留超过40、50、60、70、80或90%的起始原料的组合物。
[0044]尽管滤液本身可以形成美容组合物，但任选地，可以将从上述方法获得或可以从上述方法获得的产物(步骤(iv)的滤液)稀释(或浓缩)至适合的浓度，然后将其用于本发明的方法和用途中。因此，方法可以包含另一个稀释(或浓缩)所述组合物的步骤。优选地，可以将滤液稀释(或浓缩)至少1.5、2、3、4、5、10、15、20、50、100、1000、5000或10000倍。在特别优选的实施方式中，将来自于上述方法步骤(iii)的溶液稀释或浓缩，以获得当通过上述方法测量时酶活性为1000-10000mU/L的溶液。优选地，所述溶液以及因此来自于步骤(iv)的滤液包含 2000-10000、3000-9000、3000-7000、3000-6000、3000-5000 或 3000_4000mU/L的活性。最优选地，所述溶液包含约3400mU/L的活性。
[0045]任选地，可以向从或可以从上述方法获得的产物添加一种或多种药学可接受的赋形剂和/或稀释剂。因此，方法可以包括向组合物添加一种或多种药学可接受的赋形剂和/或稀释剂，或者将组合物与一种或多种药学可接受的赋形剂和/或稀释剂合并的另一个步骤。可选的或附加的制备方法步骤包括改变或修改溶剂，例如pH、离子浓度等。
[0046]可以向从或可以从上述方法获得的产物添加其他药学可接受的组分或成分。一种或多种其他组分可以是活性组分，即对皮肤有效果，优选地也在例如本文描述的美容适应症中起到促进皮肤的美观或改善皮肤的美容外观的作用的组分。因此，可选替地或另外，方法可以包括向组合物添加一种或多种药学可接受的活性组分或将组合物与一种或多种药学可接受的活性组分合并的另一个步骤。药学可接受的活性组分可以包括矿物质、维生素、酶、蛋白质、肽、氨基酸、脂质、抗氧化剂、多糖、适合作为防晒过滤物的物质、化学去角质剂、提取物、或其混合 物，正如在下面更详细描述的。
[0047]从或可以从上述方法获得的美容组合物适合用于本文中别处描述的本发明的方法中。具体来说，美容组合物用于在哺乳动物中改善皮肤的美容外观。
[0048]本发明还提供了用于改善哺乳动物皮肤的美容外观的方法，在所述方法中向所述动物施用如上所定义的美容组合物。
[0049]本发明的另一方面是如上所定义的美容组合物在制造用于改善哺乳动物皮肤的美容外观的药物中的应用。
[0050]当在本文中提到时，“多肽”是具有优选地超过50、100、150、200或250个残基和/或少于500、400、300、200或100个残基或选自其中的范围的分子。当在本文中提到时，“部分”优选地包含它所源自的序列的至少30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240个或更多氨基酸。所述部分可以从所需序列
的中央或N-端或C-端部分获得。
[0051]本文中所定义的组合物可以从任何鲑科鱼卵获得，所述鲑科鱼卵可以被视为起始材料的天然生物学变化。特别优选的鲑科鱼卵是来自于斑鳟(Salmo)或钩吻鲑(Oncorhynchus)亚科的卵。用于上述方法的特别优选的起始原料是来自于大西洋鲑(Salmosalar)或太平洋鲑(Oncorhynchus masou)的卵。
[0052]本文描述的美容组合物用在体内，正如本文中讨论的。
[0053]“药学可接受的”或“生理上可接受的”是指成分必须适用于美容应用和组合物。成分还必须与组合物中的其他成分相容，并且对于接受者来说是生理上可接受的。
[0054]用于施用的活性成分、即可以通过上述方法获得的组合物，可以被适当地修饰以用于美容组合物中。例如，通过例如使用适合的添加剂例如盐类或非电解质、乙酸盐、SDS、EDTA、柠檬酸盐或乙酸盐缓冲液、甘露糖醇、甘氨酸、HSA或聚山梨醇酯，可以使根据本发明来使用的组合物稳定以抵抗降解。
[0055]通过本文描述的方法获得的组合物，可以作为唯一活性成分存在于美容用途的组合物中，或者可以与其他成分、特别是其他活性成分组合，以例如增强美容效果(如上所述)或使组合物更吸引消费者。[0056]正如上面提到的，本文中描述的组合物表现出可用于改善皮肤、特别是老化皮肤例如光老化的皮肤的美容外观的性质。
[0057]本文描述的组合物在例如从上述天然来源之一制备所述组合物后，可能还包含杂质。在本文所述的组合物中，可以源自于鲑科孵化液的各种多肽或多肽部分，可以以0.0001至50%w/w的范围(组合地)存在于按照上述方法制备的美容组合物中。优选地，所述可以源自于鲑科孵化液的多肽或多肽部分，以0.0001至10%w/w的范围(组合地)存在于美容组合物中(或高达10-40%)，例如按照上述方法制备的或者如下文中所述在例如稀释后的美容组合物的 0.0001 至 5%、0.0001 至 3%、0.0001 至 2%、0.0001 至 1%、0.0001 至 0.5%、0.0001 至0.l%w/w。因此，可源自于鲑科孵化液的单个多肽或多肽部分可以1χ10_6至10%w/w的范围存在于美容组合物中。在某些实施方式中，所述可源自于鲑科孵化液的单个多肽或多肽部分可以以美容组合物的lxl0_6至5%w/w的范围存在，例如美容组合物的1χ10_6至4%、1χ10_6至 3%、1χ10-6 至 2%、1χ10-6 至 1%、1χ10-6 至 0.5%、1χ10-6 至 0.1% 或 1χ10-6 至 0.01%。
[0058]美容组合物中可源自于鲑科孵化液的多肽或多肽部分的比例，可以相对于组合物中的其他溶质，即不包括溶剂例如水来定义。因此，所述多肽或多肽部分合起来可以以组合物的干物质的l_100%w/w的范围存在。在某些实施方式中，多肽或多肽部分合起来可以以组合物的干物质的l_90%w/w的范围存在，例如组合物的干物质的5-80%、10-70%、20-60%、30-50%w/w。在其他实施方式中，多肽或多肽部分合起来可以以组合物的干物质的1_40%、2-39%、3-38%、4-37%w/w等的范围存在。因此，单个多肽或多肽部分可以以组合物的干物质的0.0001至50%w/w的范围存在，例如组合物的干物质的0.0001至40%、0.001至30%、0.01至25%w/w。正如在后文中描述的，组合物可以被稀释用于本发明的应用。
[0059]尽管本发明涉及用于改善皮肤的美容外观的方法，这可以包括障碍、异常或病症的处理，但在所有情形中所述处理在本质上是美容的。
[0060]当在本文中提 到时，“美容”是指不治愈、治疗或预防疾病或障碍，而是起到皮肤护理产品的作用或起到修改或改善皮肤的外观，例如皮肤的颜色、质地或水分含量的作用的处理。
[0061]本文描述的处理的基础是本文中公开的美容组合物的皮肤抗老化效果。这些效果在本文提供的实施例中示出。
[0062]因此，设想了基于美容组合物的抗老化性质的处理。
[0063]因此，本发明提供了用于改善哺乳动物皮肤的外观的美容方法，在所述方法中向所述动物施用上文中描述的美容组合物。
[0064]在特别优选的实施方式中，皮肤是老化的皮肤。
[0065]“老化的皮肤”是指显示出老化的一种或多种征兆或症状，即出现皱纹、细纹、色素沉着过度、松弛(松垂)、皮肤干燥、起皮或经皮水分散失(TEffL)的皮肤。具体来说，“老化的皮肤”相对于正常的最适皮肤，即健康、水合、正常色素沉着和未老化的皮肤来确定。就此而言，老化的皮肤不一定与对象的年龄相关，并且可能例如由于长期暴露于日光(光损伤)而过早老化。因此，“正常最适皮肤”的相关参数可以被确定为从与所讨论的对象相同或类似年纪的大量对象、如未接受长期日光暴露的对象获得的上述老化征兆的平均测量值。或者，“正常最适皮肤”的相关参数可以取为从比所讨论的对象更年轻的对象获得的测量值。换句话说，本文描述的组合物可用于相对于较早年龄时对象的皮肤，恢复皮肤的青春外观。[0066]因此，本发明提供用于在哺乳动物中处理皮肤日射病的美容方法，在所述方法中向所述动物施用上文中描述的美容组合物，其中所述组合物优选表面施用。
[0067]从另一个角度来看，本发明提供了用于在哺乳动物中处理皮肤日射病的上文中描述的美容组合物，其中所述美容组合物优选地施用到所述动物的皮肤。在特定实施方式中，组合物用于表面施用。
[0068]在特别优选的实施方式中，改善皮肤的美容外观(例如老化或光损伤的皮肤)包括减少或防止在外观上出现或盛行皱纹、细纹、色素沉着过度、松弛、皮肤干燥、起皮和/或经皮水份散失。可以改善这些参数中的一种或多种。优选地，减少细纹和/或皱纹。
[0069]减少或防止在外观上出现或盛行例如老化的皮肤或皮肤日射病的征兆或症状，可以意味着所述征兆或症状的数量和/或严重性的降低。例如，可以减少细纹和皱纹的数量，和/或可以减小或最小化皱纹或细纹的尺寸例如深度。此外，减少或防止可以包括停止或降低新征兆或症状出现的速率。
[0070]当在本文中提到时，“皮肤干燥”是指表皮缺乏水分或皮脂，其通常以细纹图案、起皮和瘙痒和/或灼烧感为特征。皮肤干燥可以作为皮肤状况本身而发生(例如由于老化)，或者可以是皮肤障碍或病症例如晒伤的症状。
[0071 ] 就此而言，通过上述组合物的保湿效果，可以实现皮肤干燥、起皮、细纹或经皮水分散失的减少。[0072]因此，本发明可以被视为提供了一种对哺乳动物皮肤进行保湿的美容方法，在所述方法中向所述动物施用本文中定义的美容组合物。
[0073]换句话说，本发明提供了本文中描述的用于对哺乳动物皮肤进行保湿的美容组合物。(所述组合物也可用于制备用于此目的的美容性药物)。
[0074]当在本文中提到时，“保湿”涵盖防止皮肤水分流失(例如TEWL)的保湿剂以及当施用于皮肤时吸引并持留水的保湿剂(润湿剂)和润肤剂(其改善缺陷性脱皮)。
[0075]正如上面提到的，这样的保湿形式对于改善皮肤的美容外观是有利的。在特别优选实施方式中，皮肤是面部、耳、颈部、手的皮肤或头皮。
[0076]“皱纹”是皮肤中的折叠、隆起或皱褶。皮肤皱纹通常作为老化过程的结果而出现。就此而言，真皮包含皮肤的许多结构元件，其包括为皮肤提供强度的胶原蛋白、使皮肤饱满的糖胺聚糖和为皮肤提供弹力或弹性的弹性蛋白纤维。
[0077]当皮肤老化时，真皮层变得越来越薄，并且皮肤也产生更少的胶原蛋白。此外，提供弹性的弹性蛋白纤维耗尽。这些皮肤支架的变化导致皮肤出现皱纹和松垂。真皮-表皮接合处的表皮突变平，使皮肤更加脆弱并且使皮肤更容易发生切变。这一过程还通过减少与真皮接触的表面积并干扰皮肤的正常修复过程，减少可用于表皮的营养物质的量。
[0078]在皮下层中，随着衰老脂肪细胞变得更小。这引起更加明显的皱纹和松垂(松弛)，因为脂肪细胞不能“填充到”来自于其他层的损伤中。
[0079]暴露于UVA和UVB辐射即日光，引起与仅仅时光衰老相比，胶原蛋白更高速率的分解。日光损坏胶原蛋白纤维，并引起异常弹性蛋白的积累。当这种日光诱导的弹性蛋白积累时，基质金属蛋白酶(MMP)大量产生。正常情况下，金属蛋白酶通过制造和重新形成胶原蛋白来重塑日光损伤的皮肤。然而，这一过程不总是良好工作，并且某些金属蛋白酶事实上分解胶原蛋白。这导致被称为日光瘢痕的组织混乱的胶原蛋白纤维的形成。这种不完美的重建/再生过程的重复，引起皱纹发生和皮肤松弛。
[0080]在另一种优选情况下，待美容性处理或预防的皮肤状况是色素沉着状况、障碍或异常。
[0081]皮肤的色素沉着障碍或异常，即色素沉着过度，可以作为老化的结果发生，或者可以由例如日光损伤造成的过早老化引起。色素沉着改变可能由黑素细胞的局部过量或黑素细胞活性的增加或两者引起。色素沉着障碍包括肝斑、晒斑或老年斑(日光斑)和其他斑点例如雀斑。
[0082]当在本文中提到时，“改善”皮肤的美容外观相对于正常的最适皮肤，即健康、水合、正常色素沉着和非老化的皮肤来确定。因此，对于老化的皮肤来说，优选地当改善是减轻老化的一种或多种征兆或症状时，可以按照实施例中所述测量老化的一种或多种征兆或症状，并与时间或生理上更年轻的皮肤的相同征兆进行比较。
[0083]在优选情况下，美容用途通过向皮肤表面施用来实现。
[0084]当在本文中使用时，“处理”是指相对于在所述个体的皮肤没有罹患所述状况或障碍且没有进行所述处理的不同身体部位上或者在没有进行所述处理的相应的正常个体中所存在的症状或影响，所述状况或障碍的一种或多种美容症状或影响降低、减轻或消除、优选地到正常水平，所述症状或影响如皮肤干燥的存在或程度、色素沉着的程度或面积等。
[0085]“预防”或“减少”是指绝对防止、或者降低或减轻所述症状或影响发作的程度或时间(例如延迟)。例如，通过在以干燥、色素沉着异常、有皱纹的皮肤为特征的状况出现之前定期施用本文描述的组合物，可以预防这样的状况。
[0086]本发明的美容性处理或预防方法可以有利地与一种或多种活性成分的施用相组合，所述活性成分能够有效处理或预防所述障碍或状况和/或实现例如保湿。因此，本文描述的美容组合物可以另外含有一种或多种这样的活性成分。
[0087]根据本发明的另一方面，我们提供了本文中所定义的组合物和任选的一种或多种其他活性成分作为联合制剂，用于在本文所述的人类或哺乳动物疗法中同时、分别或顺序使用。
[0088]本文描述的组合物，可以按照本领域公知的技术，使用易于获得的成分，以常规方式，使用一种或多种生理上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂来配制。
[0089]因此，可以将组合物、任选地与作为联合制剂的其他活性物质一起，与一种或多种常规载体、稀释剂和/或赋形剂合并，以制备常规的盖伦制剂如粉剂、袋剂、扁囊剂、酏剂、悬液(输注液)、乳液、溶液、糖浆、气溶胶(作为固体或在液体介质中)、软膏、无菌包装粉剂等。可以通过使用冷冻干燥、过冷或派酶(Permazyme ),使组合物稳定。
[0090]适合的赋形剂、载体或稀释剂是乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、碳酸钙、乳酸钙、玉米淀粉、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水糖浆、水、水/乙醇、水/乙二醇、水/聚乙烯、乙二醇、丙二醇、甲基纤维素、羟基 苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、矿物油或者脂肪物质例如固体脂肪，或其合适的混合物。还可以使用用于获得持续释放配方的试剂，如羧基聚亚甲基、羧甲基纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素或聚乙酸乙烯酯。
[0091]组合物可以另外包括润滑剂、润湿剂、乳化剂、增粘剂、成粒剂、崩解剂、粘合剂、渗透活性剂、悬浮剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、吸附增强剂(例如表面渗透剂如胆盐、卵磷脂、表面活性剂、脂肪酸、螯合剂)、褐变剂、有机溶剂、抗氧化剂、稳定剂、软化剂、硅酮、α -羟基酸、缓和剂、消泡剂、保湿剂、维生素、香精、离子型或非离子型增稠剂、表面活性剂、填充剂、离子型或非离子型增稠剂、多价螯合剂、聚合物、推进剂、碱化剂或酸化剂、遮光剂、着色剂和脂肪化合物等。这些组分中的一些在下面更详细描述。
[0092]美容组合物中的其他活性成分或组分可以选自矿物质、维生素、酶、蛋白质、肽、氨基酸、脂质、多糖、适合作为防晒过滤物的物质、化学去角质剂、提取物、皮肤调理剂、抗氧化剂中的任一种或多种及其混合物。
[0093]可以与本发明的组合物合并的蛋白质的实例包括胶原蛋白和/或其衍生物(例如其部分，如上定义)、能够促进细胞生长的蛋白质或肽、糖蛋白1、糖蛋白2和层粘连蛋白。
[0094]本发明的组合物可以与酶合并，所述酶包括但不限于水果酶(例如菠萝蛋白酶)、超氧化物歧化酶、过氧化物酶、透明质酸酶和粘多糖酶中的任一种或多种。
[0095]肽可以选自但不限于D, L-肌肽、D-肌肽、L-肌肽，鹅肌肽和基肽(Matrixyl)(五肽衍生物)中的任一种或多种。
[0096]氨基酸可以选自但不限于L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-半胱氨酸、L-胱氨酸、甘氨酸、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸和L-缬氨酸及其衍生物中的任一种或多种，所述衍生物包括表1中所定义的非天然存在的氨基酸。作为抗氧化剂的特别优选的氨基酸可以选自甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、组氨酸、酪氨酸和色氨酸中的任一种或多种。
[0097]表1
[0098]`
【权利要求】
1.一种用于在哺乳动物皮肤中减少或防止皱纹、细纹、色素沉着过度、松弛、皮肤干燥、起皮和/或经皮水分散失的美容外观或普遍程度的方法，所述方法包括向所述动物施用美容组合物，其中所述组合物通过或可以通过至少包括下列步骤的方法获得: a)将鲑科(Salmonidae)鱼卵、优选为鲑鱼卵悬浮在最小体积的水中； b)诱导所述卵的同步快速孵化，优选地使对于超过95%的胚胎来说，孵化在不到2小时内完成； c)对孵化的卵进行过滤以获得孵化液；以及 d)对所述孵化液进行过滤以获得组合物，其中过滤所述孵化液的步骤至少包括下列步骤: (i)使用孔径大小为至少5μ m的滤器过滤所述孵化液，并收集滤液； (ii)使用孔径大小为0.30-0.60 μ m的滤器过滤来自于步骤(i)的滤液，并收集滤液； (iii)用药学可接受的缓冲液交换来自于步骤(ii)的滤液中的水； (iv)使用孔径大小为0.15-0.30μπι的滤器过滤来自于步骤(iii)的溶液，并收集滤液；以及 (v)从来自于步骤(iv)的滤液制备所述美容组合物。
2.权利要求2的方法，其中:` a)步骤(i)中的滤器的孔径大小为5_15μπι，其中所述孔径大小优选地为7μπι; b)步骤(ii)中的滤器的孔径大小为0.35-0.55 μ m，其中所述孔径大小优选地为0.45 μ m ;和 / 或 c)步骤(V)中的滤器的孔径大小为0.22 μ m。
3.权利要求1或2的方法，其中步骤(iii)包含渗滤。
4.权利要求1至3任一项的方法，其中所述鲑科鱼卵来自于大西洋鲑或太平洋鲑。
5.权利要求1至4任一项的方法，其中所述皮肤是老化的皮肤。
6.权利要求1至5任一项的方法，其中所述动物的皮肤被保湿。
7.权利要求1至5任一项的方法，其中所述美容组合物用于表面施用到所述皮肤。
8.一种美容组合物，其如权利要求1至4任一项中所定义，并用于减少或防止哺乳动物的皮肤的皱纹、细纹、色素沉着过度、松弛、皮肤干燥、起皮和/或经皮水分散失的美容外观或普遍程度，优选地其中所述皮肤如权利要求5中所定义，所述皮肤的美容外观如权利要求6中所定义，和/或所述施用如权利要求7中所定义。
9.权利要求1至4任一项中定义的美容组合物在制造药物中的应用，所述药物用于减少或防止哺乳动物的皮肤的皱纹、细纹、色素沉着过度、松弛、皮肤干燥、起皮和/或经皮水分散失的美容外观或普遍程度，优选地其中所述皮肤如权利要求5中所定义，所述皮肤的美容外观如权利要求6中所定义，和/或所述施用如权利要求7中所定义。
10.一种制备美容组合物的方法，所述方法至少包括下列步骤: a)将鲑科鱼卵、优选为鲑鱼卵悬浮在最小体积的水中； b)诱导所述卵的同步快速孵化，优选地使对于超过95%的胚胎来说，孵化在不到2小时内完成； c)对孵化的卵进行过滤以获得孵化液；以及 d)对所述孵化液进行过滤以获得组合物，其中过滤所述孵化液的步骤至少包括下列步骤: (i)使用孔径大小为至少5μπι的滤器过滤所述孵化液，并收集滤液；(ii)使用孔径大小为0.30-0.60 μ m的滤器过滤来自于步骤(i)的滤液，并收集滤液； (iii)用药学可接受的缓冲液交换来自于步骤(ii)的滤液中的水； (iv)使用孔径大小为0.15-0.30 μ m的滤器过滤来自于步骤(iii)的溶液，并收集滤液；以及 (v)从来自于步骤(iv)的滤液制备所述美容组合物。
11.权利要求1至9任一项的方法、应用或美容组合物，其中所述美容组合物被涂布、浸溃或化学键合在产品、材料或装置`上。
【文档编号】A61K35/68GK103732292SQ201280031250
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2012年6月25日 优先权日:2011年6月24日
【发明者】贝恩特·斯·沃瑟尔, 汉斯·克里斯蒂安·莱伦 申请人:阿克生物科技公司