RNAi试剂、组合物及其用于治疗甲状腺素运载蛋白(TTR)相关疾病的使用方法
【专利摘要】本发明提供了靶向甲状腺素运载蛋白(TTR)基因的RNAi试剂(例如双链RNAi试剂)和使用这样的RNAi试剂用于治疗或预防TTR相关疾病的方法。
【专利说明】RNAi试剂、组合物及其用于治疗甲状腺素运载蛋白(TTR)相关疾病的使用方法
[0001]相关串请
[0002]本申请要求2011年11月18日提交的美国临时申请号61/561，710、2012年3月26日提交的美国临时申请号61/615，618以及2012年8月6日提交的美国临时申请号61/680，098的优先权，各自的全文内容特此通过引用结合在此。
[0003]序列表
[0004]本申请含有一个序列表，该序列表已经经由EFS-Web以ASCII格式提交并且特此通过引用以其全文结合在此。创建于2012年11月13日的所述ASCII拷贝被命名为121301W0.txt,并且大小是541，508字节。
[0005]发明背景
[0006]甲状腺素运载蛋白(TTR)(也称为前白蛋白)见于血清和脑脊髓液(CSF)中。TTR运载视黄醇结合蛋白(RBP)和甲状腺素(T4)，并且还通过其与血液和CSF中的RBP缔合而充当一种视黄醇(维生素A)载体。甲状腺素运载蛋白(Transthyretin)由于其运载(transport)甲状腺素(thyroxine)和视黄醇(retinol)而得名。TTR还充当一种蛋白酶，并且可以裂解蛋白质，包括apoA-1(主要的HDL载脂蛋白)、淀粉样β-肽以及神经肽Y。参看莉斯 Μ.Α.(Liz，M.A.)等人(2010)《IUBMB 生命》(IUBMB Life) ,62(6):429_435。
[0007]TTR是四种富含β片层结构的相同127-氨基酸亚单位(单体)的一种四聚体。每个单体具有两个4链β片层和长椭球的形状。反向平行β_片层相互作用将单体连接成二聚体。来自每个单体的一个短环形成主要二聚体-二聚体相互作用。这两对环将二聚体的相对的凸面片层分隔以形成一个内部通道。
[0008]肝脏是TTR表达的主要部位。其他显著表达部位包括脉络丛、视网膜(特别是视网膜色素上皮细胞)以及胰腺。
[0009]甲状腺素运载蛋白是至少27种不同类型的蛋白质之一，它是淀粉样原纤维形成中的一种前体蛋白。参看关J.(Guan，J.)等人(2011年11月4日)心脏淀粉样变性的当前看法(Current perspectives on cardiac amyloidosis),《美国生理学杂志-心脏与循环生理学》(Am J Phys1l Heart Circ Phys1l),do1:10.1152/ajpheart.00815.2011。淀粉样原纤维在器官和组织中的细胞外沉积是淀粉样变性的标志。淀粉样原纤维由错误折叠的蛋白聚集体构成，这些聚集体可以由前体蛋白的或者过量产生或者特异性突变而产生。TTR的成淀粉样可能性可能与其大量的β片层结构相关；X射线结晶研究表明，某些成淀粉样突变使蛋白质的四聚体结构不稳定。参看例如萨赖瓦Μ.J.Μ.(Saraiva Μ.J.Μ.) (2002)《分子医学专家评论》(Expert Reviews in Molecular Medicine), 4 (12):1_11。
[0010]淀粉样变性是用于由淀粉样沉积物表征的淀粉样疾病群组的一个通用术语。淀粉样疾病基于其前体蛋白来归类；举例来说，名称以用于淀粉样的“A”开始并且接着是前体蛋白的缩写，例如用于成淀粉样甲状腺素运载蛋白(amloidogenic transthyretin)的ATTR0同前。
[0011]存在众多TTR相关疾病，其中大多数是淀粉样疾病。正常序列TTR与老年人的心脏淀粉样变性相关，并且被称为老年全身性淀粉样变性(SSA)(也称为老年心脏淀粉样变性(SCA)或心脏淀粉样变性)。SSA通常在多种其他器官中伴随有微观沉积物。TTR淀粉样变性以不同形式显现。当周围神经系统更显著地受影响时，该疾病被称为家族性淀粉样多发性神经病(FAP)。当心脏主要受累但神经系统则不受累时，该疾病被称为家族性淀粉样心肌病(FAC)。TTR淀粉样变性的一种第三主要类型是软脑膜淀粉样变性，也称为软脑膜或脑膜脑血管淀粉样变性、中枢神经系统(CNS)淀粉样变性或淀粉样变性VII型。TTR的突变还可能会引起淀粉样玻璃体混浊、腕管综合征以及甲状腺功能正常的高甲状腺素血症，该疾病是一种非淀粉样疾病，被认为在由于一种突变TTR分子对于甲状腺素具有增加的亲和力而有所增加的甲状腺素与TTR的缔合之后发生。参看例如摩西(Moses)等人(1982)《临床研究杂志》(J.Clin.1nvest.)，86，2025-2033。
[0012]异常的成淀粉样蛋白质可以或者被遗传或者通过体细胞突变获取。关J.等人(2011年11月4日)心脏淀粉样变性的当前看法，《美国生理学杂志-心脏与循环生理学》，doi:10.1152/ajpheart.00815.2011。甲状腺素运载蛋白相关ATTR是遗传性全身性淀粉样变性的最常见形式。洛巴托L.(Lobato, L.)(2003)《肾脏学杂志》(J.Nephrol.), 16:438-442。TTR突变加速了 TTR淀粉样形成的过程，并且是ATTR发展的最重要的风险因素。已知多于85种成淀粉样TTR变体引起全身性家族性淀粉样变性。TTR突变通常引起全身性淀粉样沉积，特别累及周围神经系统，但一些突变与心肌病或玻璃体混浊相关。同前。
[0013]V30M突变是最普遍的TTR突变。参看例如洛巴托L.(2003)《肾脏学杂志》，16:438-442。非裔美国人群体中有3.9%携带V122I突变，并且它是FAC的最常见病因。雅各布森 D.R.(Jacobson, D.R.)等人(1997)《新英格兰医学杂志》(N.Engl.J.Med.) 336 (7):466-73。据估计，SSA影响了多于25%的超过80岁的群体。韦斯特马克P.(ffestermark,P.)等人(1990)《美国国家科学院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.)87(7):2843_5。
[0014]因此，在本领域中存在对用于TTR相关疾病的有效治疗的需要。
【发明内容】
[0015]本发明提供了靶向甲状腺素运载蛋白(TTR)基因的RNAi试剂(例如双链RNAi试剂)。本发明还提供了使用本发明的这些RNAi试剂(例如双链RNAi试剂)抑制TTR表达的方法和治疗或预防一名受试者中的一种TTR相关疾病的方法。本发明至少部分基于以下发现，包含具体化学修饰的RNAi试剂展示一种优越的抑制TTR表达的能力。包括某一模式的化学修饰(例如一种交替模式)和一个配体的试剂在此被展示为在使TTR基因的活性沉默方面是有效的。此外，包括一个或多个在三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的基序、在试剂的裂解位点处或附近包括一个这样的基序的试剂展示了出人意料地增强的TTR基因沉默活性。当一个这样的单个化学基序存在于该试剂中时，它优选在裂解区处或附近以便增强基因沉默活性。裂解区是环绕裂解位点(即该标靶mRNA上的裂解发生所处的位点)的区。
[0016]因此，在一个方面，本发明特征是RNAi试剂(例如双链RNAi试剂)，用于抑制一种甲状腺素运载蛋白(TTR)的表达。该双链RNAi试剂包括与一条反义链互补的一条有义链。该反义链包括与一种编码甲状腺素运载蛋白的mRNA的一部分互补的一个区。每条链具有14到30个核苷酸，并且该双链RNAi试剂由式(III)表示:
[0017]有义链:5'np-Na- (XXX) -Nb-YYY-Nb- (ZZZ) rNa-nq3,
[0018]反义链:3'n/ -Na' -(X' V V )k-N/ -V V V -Nb, -(Zf V V )1-N^ -V 5'
[0019](III)。
[0020]在式III中，1、j、k以及I各自独立地是0或I ;p、p'、q以及q'各自独立地是0-6 ;每个Na和Na'独立地表示包括0-25个或者被修饰或者未被修饰或者其组合的核苷酸的一个寡核苷酸序列，每个序列包括至少两个被不同地修饰的核苷酸；每个Nb和N/独立地表示包括0-10个或者被修饰或者未被修饰或者其组合的核苷酸的一个寡核苷酸序列；每个np、np'、nq以及n/独立地表示一个突出端核苷酸；XXX、YYY> ZZZ、V V V、
VV V以及Zi V V各自独立地表示在三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的一个基序；Nb上的修饰不同于Y上的修饰，并且N/上的修饰不同于y'上的修饰。在一些实施例中，该有义链与至少一个配体(例如至少一个配体，例如至少一个连接到该有义链的3'端的配体)结合。在其他实施例中，该配体可以与该反义链结合。
[0021]在一些实施例中，i是I ;j是I ;或i和j都是I。
[0022]在一些实施例中，k是I ;1是I ;或k和I都是I。
[0023]在一些实施例中，i是O ; j是I。
[0024]在一些实施例中，i是I ; j是O。
[0025]在一些实施例中，k是O ;1是I。
[0026]在一些实施例中，k是I ;1是O。
[0027]在一些实施例中，XXX与X' V V互补，YYY与Y' Y' Y'互补，并且ZZZ与
VV V互补。
[0028]在一些实施例中，该YYY基序存在于该有义链的裂解位点处或附近。
[0029]在一些实施例中，该y' Y' Y'基序存在于该反义链的从5’端起的11、12以及13位处。
[0030]在一些实施例中，该Y'是2' -O-甲基。
[0031]在一些实施例中，该Y'是2'-氟基。
[0032]在一些实施例中，式(III)被表示为式(IIIa):
[0033]有义链:5'np-Na-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3/
[0034]反义链:3'np' -Na' -Y' Y' Y' -N/ -V V V -Na' n/ 5'
[0035](Ilia)。
[0036]在式IIIa中，每个Nb和N/独立地表不包括1_5个被修饰的核苷酸的一个寡核苷酸序列。
[0037]在一些实施例中，式(III)被表示为式(IIIb):
[0038]有义链:5'np-Na-XXX-Nb-YYY-Na-nq3;
[0039]反义链:3'η/ -Na' -V V V -N/ -V V V -Na' -n/ 5'
[0040](IIIb)。
[0041]在式IIIb中，每个Nb和N/独立地表不包括1_5个被修饰的核苷酸的一个寡核苷酸序列。
[0042]在一些实施例中，式(III)被表示为式(IIIc):
[0043]有义链:5'np-Na-XXX-Nb-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3'
[0044]反义链:3'n/ -Na' -V V V -Nb' -V V V -Nb' -V V V -Na' -ηq'5'
[0045](IIIc)。
[0046]在式IIIc中，每个Nb和Nb'独立地表不包括1_5个被修饰的核苷酸的一个寡核苷酸序列，并且每个Na和Na'独立地表示包括2-10个被修饰的核苷酸的一个寡核苷酸序列。
[0047]在许多实施例中，该双链体区具有15-30个核苷酸对长度。在一些实施例中，该双链体区具有17-23个核苷酸对长度、17-25个核苷酸对长度、23-27个核苷酸对长度、19-21个核苷酸对长度或21-23个核苷酸对长度。
[0048]在某些实施例中，每条链具有15-30个核苷酸。
[0049]在一些实施例中，这些核苷酸上的这些修饰选自下组，该组由以下各项组成:LNA、HNA、CeNA、2' _甲氧基乙基、2' _0-烷基、2' -O-稀丙基、2' -C-稀丙基、2'-氣基、2'-脱氧、2'-羟基及其组合。在一些优选实施例中，这些核苷酸上的这些修饰是2' -O-甲基或2' _氣基。
[0050]在一些实施例中，该配体是通过一种二价或三价支链连接子连接的一种或多种N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)衍生物。在具体实施例中，该配体是
[0051]
【权利要求】
1.一种双链RNAi试剂，包含与一条反义链互补的一条有义链，其中所述反义链包含与一种编码甲状腺素运载蛋白(TTR)的mRNA的一部分互补的一个区，其中每条链具有约14到约30个核苷酸，其中所述双链RNAi试剂由式(III)表示:
有义链:5, np-Na- (XXX) -Nb-YYY-Nb- (ZZZ) rNa-nq3, 反义链:3, n/ -Na, -(X, V V )k-Nb, -Y, Y, V -Nb, _(Z, V V )Na151
(III) 其中: 1.j、k以及I各自独立地是O或I; P、P'、q以及q'各自独立地是0-6; 每个Na和Na'独立地表示包含0-25个或者被修饰或者未被修饰或者其组合的核苷酸的一个寡核苷酸序列，每个序列包含至少两个被不同地修饰的核苷酸； 每个Nb和N/独立地表示包含0-10个或者被修饰或者未被修饰或者其组合的核苷酸的一个寡核苷酸序列； 每个np、np/ >nq以及n/独立地表示一个突出端核苷酸； χχχ,yyy,ζζζ,χ/ V V、v Y' Y'以及ζ' V V各自独立地表示在三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的一个基序； Nb上的修饰不同于Y上的修饰，并且N/上的修饰不同于Y'上的修饰；并且 其中该有义链与至少一个配体结合。
2.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中i是I;j是I ;或i和j都是I。
3.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中k是I;1是I ;或k和I都是I。
4.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中XXX与x'V V互补，YYY与Y' Y' Y'互补，并且ZZZ与t Z' Z'互补。
5.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中该YYY基序存在于该有义链的裂解位点处或附近。
6.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中该Y'Y' Y'基序存在于该反义链的从5’端起的11、12以及13位处。
7.如权利要求6所述的RNAi试剂，其中该Y'是W-O-甲基。
8.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中式(III)被表示为式(IIIa):
有义链:5' np-Na-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3/ 反义链:3, n/ -Na, -Y, Y, Y, -Nb, -V V V -Na, n/ 5,
(IIIa) 其中每个Nb和N/独立地表不包含1-5个被修饰的核苷酸的一个寡核苷酸序列。
9.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中式(III)被表示为式(IIIb):
有义链:5, np-Na-XXX-Nb-YYY-Na-nq3, 反义链:3, n/ -Na, -V V V -Nb, -Y' Y' Y' -Na, -n/ 5,
(IIIb) 其中每个Nb和N/独立地表不包含1-5个被修饰的核苷酸的一个寡核苷酸序列。
10.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中式(III)被表示为式(IIIc):有义链:5' np-Na-XXX-Nb-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3' 反义链:3, np, -Na, -V V V -Nb, -V V Y, -Nb, -V V V -Na, -ηq 0
(IIIc) 其中每个Nb和N/独立地表不包含1-5个被修饰的核苷酸的一个寡核苷酸序列，并且每个Na和Na'独立地表不包含2-10个被修饰的核苷酸的一个寡核苷酸序列。
11.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中该双链体区具有15-30个核苷酸对长度。
12.如权利要求11所述的RNAi试剂，其中该双链体区具有17-23个核苷酸对长度。
13.如权利要求11所述的RNAi试剂，其中该双链体区具有17-25个核苷酸对长度。
14.如权利要求11所述的RNAi试剂，其中该双链体区具有23-27个核苷酸对长度。
15.如权利要求11所述的RNAi试剂，其中该双链体区具有19-21个核苷酸对长度。
16.如权利要求13所述的RNAi试剂，其中该双链体区具有21-23个核苷酸对长度。
17.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中每条链具有15-30个核苷酸。
18.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中这些核苷酸上的这些修饰选自下组，该组由以下各项组成:LNA、HNA、CeNA、2'-甲氧基乙基、2' -O-烷基、2' -O-烯丙基、2' -C-烯丙基、2' _氟基、2' _脱氧、2' _羟基及其组合。
19.如权利要求18所述的RNAi试剂，其中这些核苷酸上的这些修饰是W-O-甲基、2'-氟基或两者。
20.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中该配体是通过一种二价或三价支链连接子连接的一种或多种GalNAc衍生物。
21.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中该配体是
22.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中该配体连接到该有义链的3'端。
23.如权利要求22所述的RNAi试剂，其中该RNAi试剂与如以下示意图中所示的配体结合:
其中X是O或S。
24.如权利要求23所述的RNAi试剂，其中该RNAi试剂与如以下示意图中所示的配体结合:
25.如权利要求1所述的RNAi试剂，进一步包含至少一个硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间键联。
26.如权利要求25所述的RNAi试剂，其中该硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间键联在一条链的3'末端处。
27.如权利要求26所述的RNAi试剂，其中所述链是该反义链。
28.如权利要求26所述的RNAi试剂，其中所述链是该有义链。
29.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中该双链体的反义链的5'端的I位处的该碱基对是一个AU碱基对。
30.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中这些Y核苷酸含有一个2'-氟基修饰。
31.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中这些y核苷酸含有一个W-O-甲基修饰。
32.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中V>0。
33.如权利要求1所述的RNAi试剂，其中V=2。
34.如权利要求33所述的RNAi试剂,其中q'= O, p = O, q = O,并且p'突出端核苷酸与该标靶mRNA互补。
35.如权利要求33所述的RNAi试剂,其中q'= O, p = O, q = O,并且p'突出端核苷酸与该标IE mRNA不互补。
36.如权利要求33所述的RNAi试剂，其中该有义链具有总共21个核苷酸，并且该反义链具有总共23个核苷酸。
37.如权利要求32到36中任一项所述的RNAi试剂，其中至少一个np^经由一个硫代磷酸酯键联而键联到一个相邻核苷酸。
38.如权利要求37所述的RNAi试剂，其中所有np'都经由硫代磷酸酯键联而键联到相邻核苷酸。
39.如权利要求1所述的RNAi试剂，选自表1中列出的RNAi试剂的群组。
40.如权利要求1所述的RNAi试剂，选自下组，该组由以下各项组成:AD-51544、AD-51545、AD-51546 以及 AD-51547。
41.如权利要求40所述的RNAi试剂，其中该RNAi试剂是AD-51547。
42.一种细胞，含有如权利要求1到41中任一项所述的该双链RNAi试剂。
43.一种药物组合物，包含一种如权利要求1到41中任一项所述的RNAi试剂。
44.如权利要求43所述的药物组合物，其中RNAi试剂在一种非缓冲溶液中给予。
45.如权利要求44所述的药物组合物，其中所述非缓冲溶液是生理盐水或水。
46.如权利要求43所述的药物组合物，其中所述siRNA与一种缓冲溶液给予。
47.如权利要求46所述的药物组合物，其中所述缓冲溶液包括乙酸盐、柠檬酸盐、醇溶谷蛋白、碳酸盐或磷酸盐或其任何组合。
48.如权利要求47所述的药物组合物，其中所述缓冲溶液是磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)。
49.如权利要求43所述的药物组合物，其中所述药物组合物是一种脂质体。
50.如权利要求43所述的药物组合物，其中所述药物组合物是一种脂质配制品。
51.—种抑制细胞中的一种甲状腺素运载蛋白(TTR)表达的方法,包括使所述细胞与一种如权利要求1到41中任一项所述的RNAi试剂或与一种如权利要求43到50中任一项所述的药物组合物以有效抑制所述细胞中的所述TTR表达的一个量接触,从而抑制所述细胞中的所述甲状腺素运载蛋白(TTR)表达。
52.如权利要求51所述的方法，其中所述TTR表达被抑制至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%或至少约90%。
53.如权利要求51所述的方法，其中所述细胞在体外与所述RNAi试剂接触。
54.如权利要求51所述的方法，其中所述细胞存在于一名受试者内。
55.如权利要求54所述的方法，其中所述受试者是一个人。
56.如权利要求54所述的方法，其中所述受试者罹患一种TTR相关疾病，并且所述有效量是一个治疗有效量。
57.如权利要求54所述的方法，其中所述受试者是有风险患上一种TTR相关疾病的一名受试者，并且所述有效量是一个预防有效量。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述受试者携带与一种TTR相关疾病的发展相关的一种TTR基因突变。
59.如权利要求56或57所述的方法，其中所述TTR相关疾病选自下组，该组由以下各项组成:老年全身性淀粉样变性(SSA)、全身性家族性淀粉样变性、家族性淀粉样多发性神经病(FAP)、家族性淀粉样心肌病(FAC)、软脑膜/中枢神经系统(CNS)淀粉样变性以及高甲状腺素血症。
60.如权利要求54所述的方法，其中所述受试者具有一种TTR相关淀粉样变性，并且所述方法减少所述受试者中的一种淀粉样TTR沉积物。
61.如权利要求54所述的方法，其中所述RNAi试剂通过一种选自下组的给药手段给予给所述受试者，该组由以下各项组成:皮下、静脉内、肌肉内、支气管内、胸膜内、腹膜内、动脉内、经淋巴、经脑脊髓及其任何组合。
62.如权利要求54所述的方法，其中所述RNAi试剂经由皮下、肌肉内或静脉内给药而给予给所述受试者。
63.如权利要求62所述的方法，其中所述皮下给药包括经由一个皮下泵或皮下储槽给药。
64.如权利要求54所述的方法，其中所述RNAi试剂被给予给所述受试者，以使得所述RNAi试剂被递送到所述受试者内的一个具体部位。
65.如权利要求64所述的方法，其中所述部位选自下组，该组由以下各项组成: 肝脏、脉络丛、视网膜以及胰腺。
66.如权利要求64所述的方法，其中所述部位是肝脏。
67.如权利要求64所述的方法，其中所述RNAi试剂的递送由肝细胞中存在的一种脱唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)介导。
68.如权利要求54所述的方法，其中所述RNAi试剂以0.05-50mg/kg的一个剂量给予。
69.如权利要求54所述的方法，其中所述RNAi试剂在两个或更多个剂量中给予。
70.如权利要求69所述的方法，其中所述RNAi试剂以选自下组的时间间隔给予，该组由以下各项组成:每隔约12小时一次、每隔约24小时一次、每隔约48小时一次、每隔约72小时一次以及每隔约96小时一次。
71.如权利要求54所述的方法，进一步包括评估来源于该受试者的一种样品中的TTRmRNA表达或TTR蛋白质表达的水平。
72.如权利要求54所述的方法，其中给予所述RNAi试剂不在所述受试者中产生一种炎症应答，如基于来自所述受试者的一种样品中的一种选自下组的细胞因子或趋化因子的水平而评估，该组由以下各项组成:G-CSF、IFN- Y、IL-10、IL-12 (p70)、ILl β、IL-lra、IL-6、IL-8、IP-10、MCP-UMIP-1 a ,MIP-1 β、TNF a 及其任何组合。
73.如权利要求54所述的方法，其中所述RNAi试剂使用一种药物组合物给予。
74.如权利要求73所述的方法，其中所述siRNA在一种非缓冲溶液中给予。
75.如权利要求74所述的方法，其中所述非缓冲溶液是生理盐水或水。
76.如权利要求73所述的方法，其中所述siRNA与一种缓冲溶液给予。
77.如权利要求76所述的方法，其中所述缓冲溶液包括乙酸盐、柠檬酸盐、醇溶谷蛋白、碳酸盐或磷酸盐或其任何组合。
78.如权利要求77所述的方法，其中所述缓冲溶液是磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)。
79.如权利要求73所述的方法，其中所述药物组合物是一种脂质体。
80.一种治疗或预防受试者中的一种TTR相关疾病的方法，包括给予所述受试者一个治疗有效量或一个预防有效量的一种如权利要求1到41中任一项所述的RNAi试剂或一种如权利要求43到50中任一项所述的药物组合物，从而治疗或预防所述受试者中的所述TTR相关疾病。
81.如权利要求80所述的方法,其中来源于所述受试者的一种样品中的TTR表达被抑制至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%或至少约90%。
82.如权利要求80所述的方法，其中所述受试者是一个人。
83.如权利要求80所述的方法，其中所述受试者是罹患一种TTR相关疾病的一名受试者。
84.如权利要求80所述的方法，其中所述受试者是有风险患上一种TTR相关疾病的一名受试者。
85.如权利要求80所述的方法，其中所述受试者携带与一种TTR相关疾病的发展相关的一种TTR基因突变。
86.如权利要求80所述的方法，其中所述TTR相关疾病选自下组，该组由以下各项组成:老年全身性淀粉样变性(SSA)、全身性家族性淀粉样变性、家族性淀粉样多发性神经病(FAP)、家族性淀粉样心肌病(FAC)、软脑膜/中枢神经系统(CNS)淀粉样变性以及高甲状腺素血症。
87.如权利要求80所述的方法，其中所述受试者具有一种TTR相关淀粉样变性，并且所述方法减少所述受试者中的一种淀粉样TTR沉积物。
88.如权利要求80所述的方法，其中所述RNAi试剂通过一种选自下组的给药手段给予给所述受试者，该组由以下各项组成:皮下、静脉内、肌肉内、支气管内、胸膜内、腹膜内、动脉内、经淋巴、经脑脊髓及其任何组合。
89.如权利要求80所述的方法，其中所述RNAi试剂经由皮下、肌肉内或静脉内给药而给予给所述受试者。
90.如权利要求89所述的方法，其中所述皮下给药包括经由一个皮下泵或皮下储槽给药。
91.如权利要求80所述的方法，其中所述RNAi试剂被给予给所述受试者，以使得所述RNAi试剂被递送到所述受试者内的一个具体部位。
92.如权利要求91所述的方法，其中所述部位选自下组，该组由以下各项组成:肝脏、脉络丛、视网膜以及胰腺。
93.如权利要求91所述的方法，其中所述部位是肝脏。
94.如权利要求91所述的方法，其中所述RNAi试剂的递送由肝细胞中存在的一种脱唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)介导。
95.如权利要求80所述的方法，其中所述RNAi试剂以0.05_50mg/kg的一个剂量给予。
96.如权利要求80所述的方法，其中所述RNAi试剂在两个或更多个剂量中给予。
97.如权利要求96所述的方法，其中所述RNAi试剂以选自下组的时间间隔给予，该组由以下各项组成:每隔约12小时一次、每隔约24小时一次、每隔约48小时一次、每隔约72小时一次以及每隔约96小时一次。
98.如权利要求80所述的方法，进一步包括评估来源于该受试者的一种样品中的TTRmRNA表达或TTR蛋白质表达的水平。
99.如权利要求80所述的方法，其中给予所述RNAi试剂不在所述受试者中产生一种炎症应答，如基于来自所述受试者的一种样品中的一种选自下组的细胞因子或趋化因子的水平而评估，该组由以下各项组成:G-CSF、IFN- Y、IL-10、IL-12 (p70)、ILl β、IL-lra, IL-6,IL-8、IP-10、MCP-UMIP-1 α ,MIP-1 β ,TNFa 及其任何组合。
100.如权利要求80所述的方法，其中所述RNAi试剂使用一种药物组合物给予。
101.如权利要求100所述的方法，其中所述siRNA在一种非缓冲溶液中给予。
102.如权利要求101所述的方法，其中所述非缓冲溶液是生理盐水或水。
103.如权利要求100所述的方法，其中所述siRNA与一种缓冲溶液给予。
104.如权利要求103所述的方法，其中所述缓冲溶液包括乙酸盐、柠檬酸盐、醇溶谷蛋白、碳酸盐或磷酸盐或其任何组合。
105.如权利要求104所述的方法，其中所述缓冲溶液是磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)。
106.如权利要求100所述的方法，其中所述药物组合物是一种脂质体。
107.一种抑制细胞中的甲状腺素运载蛋白(TTR)表达的方法，包括使所述细胞与一种双链RNAi试剂以有效抑制所述细胞中的TTR表达的一个量接触，其中所述双链RNAi试剂选自表1中列出的RNAi试剂的群组，从而抑制所述细胞中的甲状腺素运载蛋白(TTR)表达。
108.一种抑制细胞中的甲状腺素运载蛋白(TTR)表达的方法，包括使所述细胞与一种双链RNAi试剂以有效抑制所述细胞中的TTR表达的一个量接触，其中所述双链RNAi试剂选自下组，该组由以下各项组成:AD-51544、AD-51545、AD-51546以及AD-51547，从而抑制所述细胞中的甲状腺素 运载蛋白(TTR)表达。
109.一种抑制细胞中的甲状腺素运载蛋白(TTR)表达的方法，包括使所述细胞与一种双链RNAi试剂以有效抑制所述细胞中的TTR表达的一个量接触，其中所述双链RNAi试剂是AD-51547，从而抑制所述细胞中的甲状腺素运载蛋白(TTR)表达。
110.一种治疗或预防受试者中的一种TTR相关疾病的方法，包括给予所述受试者一个治疗有效量或一个预防有效量的一种双链RNAi试剂，其中所述双链RNAi试剂选自表1中列出的试剂的群组，从而治疗或预防所述受试者中的一种TTR相关疾病。
111.一种治疗或预防受试者中的一种TTR相关疾病的方法，包括给予所述受试者一个治疗有效量或一个预防有效量的一种双链RNAi试剂，其中所述双链RNAi试剂选自下组，该组由以下各项组成:AD-51544、AD-51545、AD-51546以及AD-51547，从而治疗或预防所述受试者中的一种TTR相关疾病。
112.—种治疗或预防受试者中的一种TTR相关疾病的方法，包括给予所述受试者一个治疗有效量或一个预防有效量的一种双链RNAi试剂，其中所述双链RNAi试剂是AD-51547，从而治疗或预防所述受试者中的一种TTR相关疾病。
113.一种用于执行如权利要求46所述的方法的试剂盒，包括 a)所述RNAi试剂，和 b)使用说明书。
114.一种用于执行如权利要求74所述的方法的试剂盒，包括 a)所述RNAi试剂， b)使用说明书，以及 c)任选地用于将所述RNAi试剂给予给所述受试者的工具。
【文档编号】A61K31/7088GK104080794SQ201280066622
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2012年11月16日 优先权日:2011年11月18日
【发明者】R·G·卡兰索塔瑟尔, T·齐默尔曼, M·马诺哈伦, M·梅尔, S·库奇曼奇, K·查里斯 申请人:阿尔尼拉姆医药品有限公司