血小板裂解物凝胶的制作方法
【专利摘要】本发明涉及包含血小板裂解物的药物组合物及其在治疗创伤、肛裂、阴道萎缩或皱纹中的应用。
【专利说明】血小板裂解物凝胶
【技术领域】
[0001] 本发明涉及包含血小板裂解物的药物组合物及其在治疗创伤、肛裂、阴道萎缩或 皱纹中的应用。
【背景技术】
[0002] 约15%的糖尿病患者在其一生中会具有溃疡。每年，患有1型或2型糖尿病的人 中有1 %至3. 6%的基于人口的发病率。到2030年，每年将有约1300万人患有糖尿病性足 部溃疡。足部溃疡之后是超过84%的非创伤性下肢截肢。此外，首次截肢后的3年死亡率 据估计高达20%?50%。治愈单个溃疡的平均成本为$8, 000,治愈受感染的溃疡的平均成 本是$17, 000,而大截肢术的平均成本是$45, 000。出现溃疡后2年期间由足部溃疡及其后 遗症导致的高额成本是平均每个患者$27, 987 (美国糖尿病协会；美国卫生与公共服务部； 糖尿病护理；Journal of Clinical investigations ;JAMA293:217_228, 2005 ;Diabetes Care22:157-162, 1999)〇
[0003] 流向受伤部位的自由的血流为信号传导分子和营养物质提供了通道。对胶原 蛋白形成的增殖和重塑的调控需要分子过程的协调配合（例如蛋白酶和蛋白酶抑制 剂的平衡）。免疫和炎症反应确保细菌和碎片被吞噬和除去，以预防感染（J Invest Dermatol. 2007年5月；127 (5) : 1018-29)。如果不治疗，糖尿病性溃疡可能从受刺激但未破 损的小皮肤斑块发展为潜在威胁生命的涉及大范围组织坏死和感染的创伤。对糖尿病性皮 肤溃疡的治疗可包括使创伤干燥、对坏死组织进行清创（切除）和施用全身性抗生素（美 国足踝外科医生学院；Medscape网站；Clinical Diabetes Spring2009,第27卷，第2期， 52-58)。
[0004] 对于在化妆品中使用血小板裂解物，众所周知健康的皮肤需要生理、细胞和分子 水平上的紧密协调。持续健康的皮肤所需要的三个关键功能包括有功能的结缔组织细胞、 完好的皮肤细胞外基质（ECM)和对增殖与重塑过程的严密分子调控。
[0005] 形成新组织的过程需要包括蛋白酶、组织抑制剂和促炎及抗炎分子在内的许多因 素的作用和平衡。这些因素的协调调控确保了在临时支架降解时可产生永久的胶原蛋白组 织。
[0006] 有功能的结缔组织细胞
[0007] 细胞外基质（ECM)发挥皮肤结构框架功能，其合成、维护和提供都需要皮肤内的 细胞，例如成纤维细胞和角质形成细胞。特别重要的是，产生皮肤中大部分胶原蛋白的成 纤维细胞能够保持健康和弹性[1]。基于血小板和生长因子的溶液通过增加有益因子的局 部浓度来促进创伤愈合[2, 3]。目前的疗法是侵入性的，或最低限度地加速创伤愈合过程。 先进的敷料（例如水状胶体凝胶）相对于糖尿病溃疡治疗中传统的非贴附性纱布的改进有 限[6]。在过去15年中创伤愈合方面的技术突破也是有限的，就病人的质量调整寿命年数 (QALY)结果而言，几乎没有改善[7]。
[0008] 在健康的皮肤中，真皮中的完好的I型胶原蛋白原纤维为成纤维细胞提供机械稳 定性和附着位点。成纤维细胞表面上的受体（整联蛋白）附着至胶原蛋白（以及真皮细胞 外基质中的其他蛋白）。成纤维细胞内的细胞骨架机构（肌动蛋白-肌球蛋白微丝，未示 出）在完整的胶原基质上拉动，进而提供机械阻力。所产生的动态机械张力促进细胞内支 架（微管/中间丝，未显示）的组装，细胞内骨架向外推从而使成纤维细胞伸展。这种伸展 是成纤维细胞产生正常水平的胶原蛋白和蛋白酶所需的。
[0009] 完好的皮肤细胞外基质（ECM)
[0010] 对于健康的、无皱纹的皮肤而言，完好的胶原蛋白（ECM中最丰富的蛋白质）、弹性 蛋白、透明质酸、蛋白聚糖、纤连蛋白和层粘连蛋白的健康平衡是必需的。这些成分产生了 支撑皮肤的支架并赋予其均匀分布的纹理[8]。
[0011] 对增殖与重塑过程的严密分子调控
[0012] 新组织的形成需要包括蛋白酶、组织抑制剂和促炎及抗炎分子在内的多种因子的 作用和平衡。这些因子的协调调控确保产生永久性的胶原组织、确保受损的分子被切割和 清除，并且确保结缔组织的整体健康[9]。
[0013] 所有的原纤维胶原蛋白都由以三螺旋结构相互缠绕的三条多肽链组成。该可溶性 三螺旋称为前胶原，在成纤维细胞的内部组装。前胶原由成纤维细胞分泌，并且在胞外空间 中通过两种酶去除肽的末端[10]。除去末端后产生胶原蛋白，胶原蛋白自发地组装（即成 熟）成酶促交联的较大纤维。该交联对于正常结构支撑而言是必需的[11]。I型胶原蛋白 通过酶促降解而发生自然分解；然而，这种降解在人类皮肤中极为缓慢[12]。人仅表达四 种能够引发I型胶原分解的酶[13]。
[0014] 这些胶原蛋白酶是基质蛋白降解酶（称为基质金属蛋白酶（MMP))家族的成员
[14] 。MMP负责多种胞外基质蛋白的生理降解[12]。在人类所表达的4种胶原蛋白酶中， 只有间质胶原酶（MMP-1)参与皮肤胶原蛋白的正常周转[14]。在健康的年轻皮肤中，MMP-1 的表达极低，接近最灵敏的测量方法的检测极限。
[0015] 一旦被MMP-1切割，胶原就会解开，然后解开的胶原蛋白（称为明胶）由MMP家族 的其他成员（称为明胶酶）进一步降解。在正常皮肤中这些明胶酶也以非常低的水平表达 [14，15]。此外，皮肤还表达这些MMP的天然抑制剂。这种基质金属蛋白酶的组织抑制剂 (TIMP)进一步作用以延缓胶原蛋白的分解。因此，人皮肤中的I型胶原蛋白非常稳定，需要 平均约30年来更换[1，12]。
[0016] 皱纹
[0017] 皱纹由习惯性的面部表情、衰老、晒伤、吸烟、水化较差以及其他各种因素造成。在 应激下，成纤维细胞产生更少的ECM分子和更多的分解已有基质的分子。这在反馈回路中 导致结缔组织细胞的进一步功能失调。
[0018] 结缔组织细胞的功能失调
[0019] 在人皮肤中，在机械张力、胶原蛋白的合成和由胶原蛋白酶（COLase)导致的胶原 碎片化之间，存在着精密的关系。在老化的人皮肤中，丧失了成纤维细胞与整联蛋白的附 着，并且碎片化的胶原蛋白原纤维不能提供足够的机械稳定性来维持正常的机械张力。降 低的机械张力使成纤维细胞塌缩，塌缩的成纤维细胞产生更少的前胶原和更多的胶原酶 (COLase)。胶原蛋白的产量下降和胶原酶催化的胶原碎片化的增加导致机械张力的进一步 降低，从而引起胶原蛋白的持续丧失[1]。
[0020] 已有ECM的分角军
[0021] 已有ECM分子（特别是胶原纤维）因物理、化学或蛋白水解性破坏而分解，从而在 整个ECM中留下胶原蛋白和其他分子碎片。
[0022] I型胶原蛋白周转的速度缓慢，这使得损害其功能的年龄依赖性修饰得以积累。这 些改变包括形成由糖衍生的新交联[14]。重要的是，在MMP介导的周转的缓慢的正常过程 中，这些交联不能被高效地分解和去除，从而使碎片化的胶原蛋白在细胞外基质中随皮肤 老化而积累[15,16]。交联阻止了胶原蛋白片段的彻底清除。这些片段不能被修复，也不能 并入新产生的胶原蛋白原纤维中，因此在三维胶原蛋白基质中造成缺陷。这些缺陷破坏了 真皮的结构和机械完整性，从而有害地改变了其功能。碎片化胶原蛋白的积累成为人皮肤 外观的年龄相关变化的核心[1]。
[0023] 失调的分子信号传导
[0024] 塌缩的成纤维细胞和降解的ECM不成比例地提高了皱纹部位的基质金属蛋白酶 相对于金属蛋白酶组织抑制剂（--ΜΡ)的浓度，从而阻碍了组织再生[1，10-20]。
[0025] 活性氧物种（R0S)是环境诱发的老化和固有的老化的副产物，其在皮肤内引起生 化反应级联,导致基质金属蛋白酶（MMP)和促炎细胞因子的产生。由成纤维细胞和角质形 成细胞分泌的MMP减少胶原蛋白的形成并加剧胶原蛋白的降解，从而促进了真皮基质的分 解[19]。
[0026] 现有的皱纹疗法
[0027] 市场上现有的治疗均是失败的，这些治疗并不能重建具有持久效果的年轻外表。 这些治疗的目的是治疗皱纹症状，但未解决根本成因。毒素暂时放松拉紧皮肤的面部肌肉， 但不会修复底层的细胞外基质。Botox?和Dysport?可导致"冻脸"，但具有吞咽、讲话和呼 吸问题。填料（例如透明质酸、胶原蛋白、聚L-乳酸和羟磷灰石）可短期"填补空隙"，但不 能使皮肤恢复至正常的生理状态或阻止退化周期。
[0028] 化妆品行业的技术突破在过去的30年里十分有限，在过去的十年仅有零星的进 步。第一代和第二代注射疗法起效快，但效果持续时间有限。
[0029] 血小板裂解物疗法
[0030] 几个长期存在的问题影响了血小板裂解物（PL)在临床上的大泛围适应和使用。 主要问题有（但不局限于）以下方面：供体来源的样品在处理过程中面临污染风险；在计 数和分泌有益生长因子的能力方面，患者与患者之间的血小板质量存在差异，这使得制品 不一致；需要在医师办公室试剂盒中进行血小板定量；由于血小板计数的固有差异，治疗 性制品导致患者与患者间的差异性较高，影响功效；现有方法不方便，临床医生必须离心血 液以从血液中分离出血小板，而这个可持续25分钟?30分钟的过程的差异性同样导致误 差；而且，现有的过程成本效益低，估计每次治疗成本为130美元（Plateltex)。本发明是 对这些长期持续存在的问题的一种非显而易见的解决方案。
【专利附图】
【附图说明】
[0031] 图1显示了用于制备本发明的血小板裂解物和本发明的药物组合物的规程的流 程图。
[0032] 图2和3显示出本发明提供了方便、始终一致并且符合cGMP标准的具有成本效益 的差异化产品。
[0033] 图4至7显示出本发明解决了长期持续存在的对提供质量可控制、使用方便且具 有成本效益的始终一致的创伤护理产品的需求。
【发明内容】
[0034] 本发明提供了一种包含血小板裂解物的药物组合物。所述组合物可以治疗性地应 用于创伤（例如溃疡性创伤）、肛裂、阴道萎缩或皱纹。
[0035] 发明人还设计了裂解血小板的更高效的方法，从而使血小板将其生长因子释放到 溶液中成为血小板裂解物。该新型血小板裂解物自身可用作治疗剂，或可以配制成本发明 的药物组合物。
[0036] 本发明的组合物或裂解物可被冻干，从而产生稳定的含有所述生长因子的冷冻干 燥粉末，其可用于创伤愈合方面的治疗性应用，还可用于对递送天然生长因子的需求日益 增加的其他治疗性应用。
[0037] 本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含：(a)治疗性血小板裂解物， (b)至少一种药物可接受的聚合物，和（c)至少一种药物可接受的带正电荷的化学物种，所 述化学物种选自由赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、 丝氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、聚氨基酸、鱼精蛋白、氨基胍、锌离子和镁离子组成的组，其中 所述组合物是室温下粘度为l〇〇〇mPa · s(cP)至500, OOOmPa · s(cP)的水性凝胶。
[0038] 本发明还提供：
[0039] --种制备血小板裂解物的方法，所述方法包括对血小板群进行至少1个冷冻-解 冻循环，其中，每个循环的冷冻部分在等于或小于_78°C的温度下进行；
[0040] -一种制备血小板裂解物的方法，所述方法包括：对血小板群进行机械均化（"韦 林氏搅切器"）、液体匀化、超声处理、利用醇和干冰或其他方式的冷冻-解冻、液氮中的机 械磨碎从而以>75%、但通常>90%裂解，由此使生长因子从血小板和α颗粒中释放到溶液 中，而旋转刀片则将细胞和组织磨碎和分散；通过强迫细胞或组织悬液通过狭窄空间而对 细胞或组织悬液进行剪切；高频声波剪切细胞；反复的冷冻和解冻循环通过冰晶形成而破 坏细胞；磨碎组织，在液氮中冷冻，其中裂解使生长因子从血小板和α颗粒中释放到溶液 中；
[0041] -利用本发明的方法制备的血小板裂解物；
[0042] -本发明的药物组合物或本发明的血小板裂解物，用于治疗有需要的患者的创伤、 肛裂、阴道萎缩或皱纹；
[0043]-一种治疗有需要的患者的创伤、肛裂、阴道萎缩或皱纹的方法，所述方法包括向 所述患者施用治疗有效量的本发明的药物组合物或本发明的血小板裂解物；
[0044] --种制备本发明的药物组合物的方法，所述方法包括将血小板裂解物与至少一 种药物可接受的聚合物和至少一种药物可接受的带正电荷的化学物种混合，以使所得到的 组合物是室温下粘度为l〇〇〇mPa · s(cP)至500, OOOmPa · s(cP)的水性凝胶；和
[0045] --种制备本发明的药物组合物的方法，所述方法包括：(a)利用权利要求14至 20中任一项所述的方法制备血小板裂解物，和（b)将所述血小板裂解物与至少一种药物可 接受的聚合物和至少一种药物可接受的带正电荷的化学物种混合，以使所得到的组合物是 室温下粘度为lOOOmPa · s(cP)至500, OOOmPa · s(cP)的水性凝胶。
【具体实施方式】 [0046] 发明详情
[0047] 本发明的药物组合物或本发明的血小板裂解物会进入应用，并且所有成分均将接 受严格测试以确保本发明的产品对患者安全且有效。这些过程包括血小板筛选和可以制备 无菌血小板凝胶的方法。本发明执行安全、有效且无菌的工艺。在优选的实施方式中，将无 菌血小板裂解物与无菌甲基纤维素凝胶混合，以产生本发明的治疗性血小板组合物。本发 明规程流程图可见于图10。
[0048] 本发明的药物组合物对皱纹的有效性
[0049] 本发明提供了一种再生疗法，其直接解决与皱纹有关的各种问题，并且增强皮肤 和下层支架。用本发明的药物组合物或本发明的血小板裂解物进行的治疗会使受伤皮肤的 退行性循环逆转为正常皮肤中所见的健康生理学。本发明的药物组合物或本发明的血小板 裂解物通过使结缔组织中的细胞重获均衡、使分子信号传导达到平衡和恢复细胞外基质来 发挥作用。自然愈合及组织再生过程导致胶原蛋白的合成增加、胶原蛋白细胞外基质的再 生以及基质内成纤维细胞的增殖。
[0050] 结缔组织中重获均衡的细胞
[0051] 由于本发明的药物组合物源自血小板，其通常包含源自血小板并促进细胞生长的 各种生长因子。本发明的药物组合物或本发明的血小板裂解物通常包含以下生长因子中的 一种以上、优选全部：roGF、VEGF、FGF、EGF、TGF(尤其是TGF-β)和CTGF。所述组合物优选 包含2、3、4、5或6种上述生长因子。
[0052] 血小板源性生长因子（PDGF)促进细胞生长和生成、血管修复和胶原蛋白产生。血 管内皮生长因子（VEGF)促进血管内皮细胞的生长和产生。成纤维细胞生长因子（FGF)促 进组织修复、细胞生长、胶原蛋白产生和透明质酸产生。上皮生长因子（EGF)促进上皮细胞 的生长、血管发生和创伤愈合。转化生长因子（TGF)，尤其是TGF-β，促进上皮细胞的生长 和新生以及创伤愈合。结缔组织生长因子（CTGF)促进创伤修复。
[0053] 本发明的药物组合物或本发明的血小板裂解物因此促进新成纤维细胞的形成。这 些新成纤维细胞开始是弹性和健康的，产生新胶原蛋白和更少的金属蛋白酶。成纤维细胞 (合成、保持和提供结构支架的主要细胞）的恢复导致更健康的恢复的皮肤[1]。
[0054] 还已经显示TOGF增加了成纤维细胞的移动力，使得成纤维细胞可再定位至施用 位点。
[0055] 恢复的细胞外基质（ECM)
[0056] 存在于血小板的α -颗粒中的天然生长因子（如TOGF，VEGF，FGF，EGF和TGF)促 进胶原蛋白和透明质酸的产生、组织修复、内皮细胞和上皮细胞的生长和再生、以及新血管 形成（其储存氧，并清除不需要的分子）。所有这些因子都有助于使有皱纹和损伤的ECM再 生回到其健康状态。这些生长因子中的每一种均在皮肤再生和恢复中发挥作用，既单独作 用又相互协作地一同作用。刺激产生未碎片化的新胶原蛋白的治疗将为老化部位的外观和 健康提供大幅改善[1]。
[0057] 经平衡的分子信号传导
[0058] 在皱纹下施加血小板裂解物提供了浓缩剂量的--ΜΡ蛋白以解决金属蛋白酶失 衡，防止ECM的进一步降解，并提高皮肤再生速度。向皮肤直接施加血小板裂解物提供了浓 缩剂量的TIMF蛋白以解决金属蛋白酶失衡，从而支持胶原组织增殖和重塑。血小板含有 例如--ΜΡ-2, --ΜΡ-2抑制大部分ΜΜΡ，但优先抑制ΜΜΡ-2和ΜΜΡ-9 [20]。本发明的药物组合 物或本发明的血小板裂解物通常包含--ΜΡ金属肽酶抑制剂2 0?ΜΡ-2)。
[0059] 本发明的优点
[0060] 本发明的药物组合物或本发明的血小板裂解物将容易适应慢性创伤愈合市场，并 相对于富含血小板的血浆以及其他自体再生细胞疗法具有以下优点。
[0061] 1.制备
[0062] 内部的按比例扩大的符合cGMP标准的体外血小板制备平台，提供高产量的安全、 纯净且具有活性的血小板。
[0063] 2.制剂
[0064] 裂解血小板以释放重要的生长因子。裂解物被浓缩至标准功效的治疗剂量，并冷 冻干燥以在冷冻温度下长期贮存。人造皮肤测定中的QC测试确保在所有批次中获得一致 的高浓度生长因子，并且对于富含自体血小板的血浆，未见患者间差异性。
[0065] 3.施用
[0066] 高效的一步工序：(a)施用本发明的药物组合物或本发明的血小板裂解物、（b)使 冷冻干燥的本发明的血小板裂解物再水化、（c)将冷冻干燥的本发明的血小板裂解物与聚 合物凝胶化因子混合、或（d)使本发明的药物组合物再水化，这为临床医师简化了现有过 程并标准化了患者给药剂量。
[0067] 现有的富含血小板的血浆疗法的工序包括离心血液并分离未浓缩的未表征的血 浆，该血浆的生长因子浓度随患者而有所不同。不同于其他的真皮刺激剂（例如，聚L-乳 酸），血小板疗法迅速产生其效果。其是可重复的且易于使用。
[0068] 其他优点如下表1所示。
[0069] 表1.与之前各代产品相比，本发明的治疗性组合物（标为第4代）的优点。
[0070]
【权利要求】
1. 一种药物组合物，所述药物组合物包含：(a)治疗性血小板裂解物，（b)至少一种药 物可接受的聚合物，和（c)至少一种药物可接受的带正电荷的化学物种，所述化学物种选 自由赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、丝氨酸、天冬酰 胺、半胱氨酸、聚氨基酸、鱼精蛋白、氨基胍、锌离子和镁离子组成的组，其中，所述组合物是 室温下粘度为lOOOmPa · s(cP)至500, OOOmPa · s(cP)的水性凝胶。
2. 如权利要求1所述的药物组合物，其中，所述血小板裂解物的浓度为0. 1 μ g/g组合 物至1，〇〇〇 μ g/g组合物。
3. 如权利要求1或2所述的药物组合物，其中，所述聚合物是纤维素聚合物。
4. 如权利要求3所述的药物组合物，其中，所述纤维素聚合物是羧甲基纤维素、羟丙基 甲基纤维素或甲基纤维素。
5. 如权利要求3或4所述的药物组合物，其中，所述纤维素聚合物的浓度是1. 5 % (w/ w)至4. 0% (w/w)，并且所述聚合物的分子量为450, 000至4, 000, 000。
6. 如权利要求1或2所述的药物组合物，其中，所述聚合物是普流尼克酸，可选地为 Pluronic F_127〇
7. 如权利要求1、2和6中任一项所述的药物组合物，其中，所述聚合物的浓度为15% (w/w)至 30% (w/w)。
8. 如前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中，带电荷的所述物种的浓度为 0· 1% (w/w)至 3. 0% (w/w)。
9. 如前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中，所述粘度在25 °C为 50, OOOmPa · s(cP)至 150, OOOmPa · s(cP)。
10. 如前述权利要求中任一项所述的药物组合物，所述组合物还包含选自由对羟基苯 甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和间甲酚组成的组的防腐剂。
11. 如前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中，所述血小板裂解物来自人。
12. -种制备血小板裂解物的方法，所述方法包括对血小板群进行至少1个冷冻-解冻 循环，其中，每个循环的冷冻部分在等于或小于_78°C的温度下进行。
13. 如权利要求12所述的方法，其中，所述方法包括对所述血小板群进行3个或4个冷 冻-解冻循环。
14. 如权利要求12或13所述的方法，其中，使用液氮作为制冷手段，由此，在每个循环 的冷冻部分中，浸入液氮导致了 95%以上的血小板裂解，从而导致更多的生长因子释放以 及改进的细胞生长、修复和再生功能，这可通过成纤维细胞和PGDF测定来测量，但不限于 成纤维细胞和P⑶F测定。
15. 如权利要求12至14中任一项所述的方法，其中，使用干冰（固态二氧化碳）和有 机溶剂作为每个循环的冷冻部分中的制冷手段。
16. -种制备血小板裂解物的方法，所述方法包括：对血小板群进行机械均化（"韦林 氏搅切器")、液体匀化、超声处理、利用醇和干冰或其他方式的冷冻-解冻、在液氮中机械磨 碎从而以>75%、但通常>90%裂解，由此使生长因子从血小板和α颗粒中释放到溶液中， 而旋转刀片则将细胞和组织磨碎和分散；通过强迫细胞或组织悬液通过狭窄空间而对细胞 或组织悬液进行剪切；高频声波剪切细胞；反复的冷冻和解冻循环通过冰晶形成而破坏细 胞；磨碎组织，在液氮中冷冻，其中裂解使生长因子从血小板和α颗粒中释放到溶液中。
17. 如权利要求12至16中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括将所述血小板裂 解物冻干。
18. -种用权利要求12至17中任一项所述的方法制备的血小板裂解物。
19. 权利要求1至11中任一项所述的药物组合物或权利要求18所述的血小板裂解物， 其用于治疗有需要的患者的创伤、肛裂、阴道萎缩或皱纹。
20. -种治疗有需要的患者的创伤、肛裂、阴道萎缩或皱纹的方法，所述方法包括向所 述患者施用治疗有效量的权利要求1至11中任一项所述的药物组合物或权利要求18所述 的血小板裂解物。
21. -种制备权利要求1至11中任一项所述的药物组合物的方法，所述方法包括将血 小板裂解物与至少一种药物可接受的聚合物和至少一种药物可接受的带正电荷的化学物 种混合，从而使所得到的组合物是室温下粘度为lOOOmPa · s (cP)至500, OOOmPa · s (cP)的 水性凝胶。
22. -种制备权利要求1至11中任一项所述的药物组合物的方法，所述方法包括：(a) 用权利要求12至17中任一项所述的方法制备血小板裂解物，和（b)将所述血小板裂解物 与至少一种药物可接受的聚合物和至少一种药物可接受的带正电荷的化学物种混合，从而 使所得到的组合物是室温下粘度为l〇〇〇mPa · s(cP)至500, OOOmPa · s(cP)的水性凝胶。
【文档编号】A61K35/14GK104159569SQ201280067727
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2012年11月23日 优先权日:2011年11月23日
【发明者】T·A·霍泽, M·J·埃文斯, A·雷金纳德, I·L·彼佩尔, B·L·珀金斯 申请人:细胞治疗有限公司