专利名称：一种丹参、三七复方的纳米混悬剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有机有效成分的医药配制品，具体涉及与碳环化合物相连的含有通过配糖键与非糖化合物连接的糖基的化合物的医药配制品。
背景技术：
现代 药理研究表明，脂溶性的二萜醌类化合物(丹参酮类)和水溶性的酚酸类成分(丹酚酸类)都是丹参的有效成分，其中代表性成分分别是丹参酮IIa和丹酚酸B，《中国药典》将其作为检测的法定项目。三七总皂苷是三七的有效成分，根据其苷元结构的不同，可分为以人参皂苷Rbl为代表的20⑶-原人参二醇型和以人参皂苷Rgl为代表的20⑶-原人参三醇型，而三七皂苷R1为三七总皂苷中具代表性的特征化合物，是其区别于人参皂苷的活性成分。丹参和三七是最常用的活血化瘀中药之一，常作为中药药对配伍于多种中药方齐U，两者相辅相成，使活血散瘀、通经止痛之功倍增，临床常用于治疗心脑血管疾病如脑中风等。但体内试验发现，丹参酮IIA和丹酚酸B在体内代谢迅速，半衰期短且生物利用度低，体内代谢消除快，且丹参酮IIA水溶性差，限制了其在疾病治疗中的应用；三七总皂苷膜渗透性差，且易被胃肠道分泌的酸和酶降解，生物利用度低，这些也都影响了二者复方疗效的充分发挥。传统的有关丹参和三七的剂型有片剂、颗粒剂、滴丸等，以上传统剂型均存在一定缺点，或生物利用度差，或服用量大、易潮解、易霉，或工艺条件不易控制等缺点。因此，为了增加丹参、三七复方在治疗心脑血管系统疾病方面的作用，目前急需新的药物剂型。公开号为CN101214275专利申请公开了一种复方丹参缓释制剂，该缓释制剂是先用天然峰蜡将冰片包埋起来，再将所制得的包埋物与丹参、三七提取物和缓释剂一起制成丸剂，最后喷雾包衣液制成，虽然具有一定的缓释效果，但是仍然存在上述现有口服制剂的不足。注射剂不仅药效迅速，作用可靠，而且克服了口服制剂存在首过效应的缺点，尤其是注射剂还可以穴位注射发挥特有的疗效。因此，采用丹参、三七研制治疗心脑血管疾病(如中风)的复方注射剂成为本领域技术人员的研究热点。如公开号为CN1583131的专利申请公开了一种复方丹参冻干粉针剂，它由丹参、三七水溶性有效部位和冰片羟丙基β_环糊精包合物组成。公开号为CN1586492的专利申请公开了一种以丹参素为主要有效成分的丹参提取物、以三七总皂苷为主要有效部位的三七提取物和冰片的羟丙基β —环糊精包合物以及药用辅料组成的复方丹参冻干粉针剂。公开号为CN101084997的专利申请公开了一种丹参提取物、三七提取物，冰片的β -环糊精包合组成的冻干粉针剂。上述申请专利虽然可弥补口服制剂所存在的不足，但根据现代医学研究可知，丹参、三七复方中的有效成分丹酚酸B (丹参素)和三七总皂苷都是水溶性成分，且三七皂苷的分子量较大，较难透过体内生物屏障如血脑屏障发挥药效；丹参酮虽是脂溶性成分，比较容易透过血脑屏障，但这种单一成分的过量摄入有副作用，甚至导致药物中毒。因此，丹参、三七中的有效成分如果不进行适当的处理，就不能发挥复方成分在治疗中风等心脑血管疾病方面的协同作用，从而降低药物的疗效。综上，寻求一种理想的方式，将丹参和三七的有效成分制成便于人体吸收、容易透过体内生物屏障的制剂，对于提高药物的生物利用度及疗效具有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种丹参、三七复方的纳米混悬剂，该纳米混悬剂中的有效成分能透过体内生物屏障，显著提高药物的生物利用度，充分发挥治疗作用。本发明解决上述问题的技术方案如下:一种治疗中风的丹参、三七复方的纳米混悬剂，该纳米混悬剂由有效成分和辅料组成，其特征在于，所述的有效成分的用量为0.28 2.65w%，且由丹酚酸B8 27w%、丹参酮IIA5 15w%和三七总皂苷58 84w%组成；其中所述的三七总皂苷中含有，三七皂苷Rj 27w%，人参皂苷RgfO 50w%，人参皂苷Rb^O 40w% ；所述的 辅料的用量为97.35 99.72w%，且由复合乳化剂0.47 0.8w%、聚乳酸-羟基乙酸共聚物0.6 2.85w%、聚乙烯醇1.1 1.9w%和水94.5 97.8w%组成；所述的纳米混悬剂采用W/0/W复乳法制成，所述的W/0/W复乳中，油相由丹酚酸B、丹参酮IIA、聚乳酸-羟基乙酸共聚物和复合乳化剂混合组成，内水相由三七总皂苷溶于水形成，外水相由聚乙烯醇溶于水形成；所述的复合乳化剂由质量比为油酸聚乙二醇甘油酯:司盘-80=5:1 1: 2的油酸聚乙二醇甘油酯和司盘-80组成。本发明所述的纳米混悬剂中，所述的复合乳化剂最佳方案由质量比为油酸聚乙二醇甘油酯:司盘-80=1: I的油酸聚乙二醇甘油酯和司盘-80组成。上述纳米混悬剂的制备方法包括以下步骤:(A)分别，将丹酚酸B、丹参酮IIA和聚乳酸-羟基乙酸共聚物加入到用有机溶剂溶解的复合乳化剂中混均制得油相；将三七皂总苷溶于水制得内水相；将聚乙烯醇溶于水制得外水相；其中所述的有机溶剂由二氯甲烷60 90v%和乙酸乙酯10 40v%组成；(B)先将所述的内水相加入油相制成W/0型初乳，再将初乳加入外水相制成W/0/W型复乳，然后挥去有机溶剂，即得。为了更利于所述纳米混悬剂的制备，上述制备方法的改进方案还包括稀释的步骤，即所述的步骤(B)在挥去有机溶剂前先将所得的W/0/W型复乳转移至另配的质量浓度为1%的聚乙烯醇水溶液中稀释。为了去除所述纳米混悬剂中析出的脂溶性成分，提高药物的安全性，上述纳米混悬剂的制备方法的进一步改进方案还包括离心纯化步骤，即，所述的步骤(B)在挥去有机溶剂后，1000 10000r/min离心分层,取上层即得所述纳米混悬剂。本发明所述的纳米混悬剂可按常规的方法采用微孔滤膜过滤除菌后制成注射液，也可以按常规的方法进行冷冻干燥制成粉针剂。本发明所述纳米混悬剂所含的丹参酮IIA、丹酚酸B、三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl等多种药物成分，理化性质各不相同。其中，丹参酮IIA为水难溶性成分，置于油相有利于药物分散在油中并被外水相保护；丹酚酸B虽为水溶性成分，实验发现若将其置于内水相，药物将很快扩散进入外水相，包封率低，故将其放入油相，在所述乙酸乙酯和二氯甲烷比例中，丹酚酸B能较好分散，且不易扩散进入外水相，包封率高；三七皂苷类为水溶性成分，将其置于内水相有利于其分散在内水相中而被油相保护，从而形成的纳米混悬剂将性质各异的各类药物成分装载，不仅能充分发挥复方多成分的配伍协同作用，而且能促进药物穿过体内生物屏障(血脑屏障)，提高其局部生物利用度，具有显著的治疗优越性。此外，本发明所述的复合乳化剂特异性地选择油酸聚乙二醇甘油酯与司盘-80复配，显著提高了包封率，从而更进一步改善了药物的生物利用度。
图1为一个具体实施例所制得的本发明所述纳米混悬剂的透射电镜照片。图2为一个具体实施例所制得的本发明所述纳米混悬剂的粒径分布图。
具体实施方式
下述实施例1 3所用丹酚酸B和丹参酮IIA购自深圳美荷生物有限公司，其中，所述丹酚酸B的纯度> 95%，所述丹参酮IIA的纯度> 98%。下述实施例1所用三七总皂苷购自成都曼思特生物科技有限公司，生产批号为080823，其中含，三七皂苷RP6.1%，人参皂苷Rgl36.5%，人参皂苷RbJl.8% ;下述实施例2所用三七总皂苷购自昆明骏兴科技开发有限公司，生产批号为091017，其中含，三七皂苷Rj.2%，人参皂苷Rgl20.1%，人参皂苷RbJl 6% ；下述实施例3所用三七总皂苷购自四川杰象药材原料有限公司，生产批号为100311，其中含,三七皂苷R1I0.1%，人参皂苷1^49.6%，人参皂苷Rbf0.2%。例I1、处方(I)有效成分:取丹酚酸B18mg，丹参酮IIAlOmg，三七总皂苷40mg。(2)辅料:油酸聚乙二醇甘油酯 50mg，司盘-8050mg，PLGA(LA/GA=50:50) 125mg,PVA4-88229mg，水 20ml。2、制备方法(I)制备复合乳化剂取油酸聚乙二醇甘油酯和司盘-80涡旋混匀，即可。(2)纳米混悬剂(2.1)将制备的复合乳化剂加入由二氯甲烷0.7ml和乙酸乙酯0.3ml组成的有机溶剂中，涡旋混匀；(2.2)另取PVA169mg溶于16.9ml水中，制成质量浓度为1%的PVA水溶液；(2.3)分别，将丹酚酸B、丹参酮IIA和聚乳酸-羟基乙酸共聚物加入到用有机溶剂溶解的复合乳化剂中超声作用混均制得油相；将三七皂总苷溶于0.1ml水制得内水相；将PVA60mg溶于3ml水制得外水相；(2.4)先将所述的内水相加入油相，超声作用制成W/0型初乳，再将初乳加入外水相，超声作用制成W/0/W型复乳，然后，将所制得的W/0/W型复乳转移至步骤(2.2)另配的PVA水溶液中稀释，挥去有机溶剂后，8000r/min离心分层，取上层即得纳米混悬剂。例21、处方(I)有效成分:取丹酚酸B5mg，丹参酮IIA5mg，三七总皂苷50mg。
(2)辅料:油酸聚乙二醇甘油酯 83mg，司盘-8017mg，PLGA(LA/GA=75:25) 150mg,PVA5-88380mg，水 20ml。2、制备方法(I)制备复合乳化剂取油酸聚乙二醇甘油酯和司盘-80涡旋混匀，即可。(2)纳米混悬剂(2.1)将制备的复合乳化剂加入由二氯甲烷0.9ml和乙酸乙酯0.1ml组成的有机溶剂中，涡旋混匀；(2.2)分别，将丹酚酸B、丹参酮IIA和聚乳酸-羟基乙酸共聚物加入到用有机溶剂溶解的复合乳化剂中超声作用混均制得油相；将三七皂总苷溶于0.5ml水制得内水相；将PVA380mg溶于19.5ml水制得外水相；(2.3)先将所述的内水相加入油相，超声作用制成W/0型初乳，再将初乳加入外水相，超声作用制成W/0/W型复乳，挥去有机溶剂后，2000r/min离心分层，取上层即得纳米混悬剂。例31、处方(I)有效成分:取丹酚酸B40mg，丹参酮IIA20mg，三七总皂苷280mg。
(2)辅料:油酸聚乙二醇甘油酯 35mg，司盘-8065mg，PLGA(LA/GA=80:20) 360mg,PVA17-88226mg，水 12ml。2、制备方法(I)制备复合乳化剂取油酸聚乙二醇甘油酯和司盘-80涡旋混匀，即可。(2)纳米混悬剂(2.1)将制备的复合乳化剂加入由二氯甲烷0.6ml和乙酸乙酯0.4ml组成的有机溶剂中，涡旋混匀；(2.2)分别，将丹酚酸B、丹参酮IIA和聚乳酸-羟基乙酸共聚物加入到用有机溶剂溶解的复合乳化剂中超声作用混均制得油相；将三七皂总苷溶于0.7ml水制得内水相；将PVA226mg溶于11.3ml水制得外水相；(2.3)先将所述的内水相加入油相，超声作用制成W/0型初乳，再将初乳加入外水相，超声作用制成w/0/w型复乳，挥去有机溶剂后，即得纳米混悬剂。例4 (乳化剂对包封率影响的研究)1、实验样品实验组I为实施例1所制得的纳米混悬剂。实验组2为实施例2所制得的纳米混悬剂。实验组3为实施例3所制得的纳米混悬剂。对照组I为下述方法所制得的纳米混悬剂:1.1、处方(I)有效成分:取丹酚酸B18mg，丹参酮IIAlOmg，三七总皂苷40mg。(2)辅料:油酸甘油酯 50mg，司盘 _8050mg，PLGA(LA/GA=50:50) 125mg,PVA4-88229mg，水 20ml。1.2、制备方法(I)制备复合乳化剂取油酸甘油酯和司盘-80涡旋混匀，即可。(2)纳米混悬剂(2.1)将制备的复合乳化剂加入由二氯甲烷0.7ml和乙酸乙酯0.3ml组成的有机溶剂中，涡旋混匀；(2.2)另取PVA169mg溶于16.9ml水中，制成质量浓度为1%的PVA水溶液；(2.3)分别，将丹酚酸B、丹参酮IIA和聚乳酸-羟基乙酸共聚物加入到用有机溶剂溶解的复合乳化剂中超声作用混均制得油相；将三七皂总苷溶于0.1ml水制得内水相；将PVA60mg溶于3ml水制得外水相；(2.4)先将所述的内水相加入油相，超声作用制成W/0型初乳，再将初乳加入外水相，超声作用制成W/0/W型复乳，然后，将所制得的W/0/W型复乳转移至步骤(2.2)另配的PVA水溶液中稀释，挥去有机溶剂后，8000r/min离心分层，取上层即得纳米混悬剂。对照组2为下述方法所制得的纳米混悬剂:
1.1、处方(I)有效成分:取丹酚酸B5mg，丹参酮IIA5mg，三七总皂苷50mg。(2)辅料:油酸聚乙二醇甘油酯 100mg，PLGA(LA/GA=75:25) 150mg, PVA5-88380mg,水 20ml。1.2、制备方法(2.1)将油酸聚乙二醇甘油酯加入由二氯甲烷0.9ml和乙酸乙酯0.1ml组成的有机溶剂中，涡旋混匀；(2.2)分别，将丹酚酸B、丹参酮IIA和聚乳酸-羟基乙酸共聚物加入到用有机溶剂溶解的复合乳化剂中超声作用混均制得油相；将三七皂总苷溶于0.5ml水制得内水相；将PVA380mg溶于19.5ml水制得外水相；(2.3)先将所述的内水相加入油相，超声作用制成W/0型初乳，再将初乳加入外水相，超声作用制成W/0/W型复乳，挥去有机溶剂后，2000r/min离心分层，取上层即得纳米混悬剂。对照组3为下述方法所制得的纳米混悬剂:1.1、处方(I)有效成分:取丹酚酸B40mg，丹参酮IIA20mg，三七总皂苷280mg。(2)辅料:司盘-80100mg，PLGA(LA/GA=80:20) 360mg, PVA17_88226mg，水 12ml。1.2、制备方法(2.1)将司盘-80加入由二氯甲烷0.6ml和乙酸乙酯0.4ml组成的有机溶剂中，涡旋混匀；(2.2)分别，将丹酚酸B、丹参酮IIA和聚乳酸-羟基乙酸共聚物加入到用有机溶剂溶解的复合乳化剂中超声作用混均制得油相；将三七皂总苷溶于0.7ml水制得内水相；将PVA226mg溶于11.3ml水制得外水相；(2.3)先将所述的内水相加入油相，超声作用制成W/0型初乳，再将初乳加入外水相，超声作用制成w/0/w型复乳，挥去有机溶剂后，即得纳米混悬剂。2、实验方法分别取上述三个实验组和三个对照组的纳米混悬剂，采用反透析法按下述步骤测定包封率:(I)将纳米混悬剂用等量0.2%SDS的生理盐水稀释作为重建液；(2)取透析袋，分别取重建液25mL置于透析袋外，制备浓度为0.2%的SDS生理盐水2mL置于透析袋内，平衡12小时，取透析袋内溶液过滤后，高效液相进样测定游离药物浓
i G游离；(3)另取ImL重建液，加适量乙腈溶解，再用适量甲醇稀释定容至5mL，高效液相进样测定重建液中药物总浓度C & ；( 4 )采用下式计算包封率:
权利要求
1.一种治疗中风的丹参、三七复方的纳米混悬剂，该纳米混悬剂由有效成分和辅料组成，其特征在于， 所述的有效成分的用量为0.28 2.65w%，且由丹酚酸B8 27w%、丹参酮IIA5 15w%和三七总皂苷58 84w%组成；其中所述的三七总皂苷中含有，三七皂苷Rj 27w%，人参皂苷RgfO 50w%，人参皂苷RbfO 40w% ； 所述的辅料的用量为97.35 99.72w%，且由复合乳化剂0.47 0.8w%、聚乳酸-羟基乙酸共聚物0.6 2.85w%、聚乙烯醇1.1 1.9w%和水94.5 97.8w%组成； 所述的纳 米混悬剂采用W/0/W复乳法制成，所述的W/0/W复乳中，油相由丹酚酸B、丹参酮IIA、聚乳酸-羟基乙酸共聚物和乳化剂混合组成，内水相由三七总皂苷溶于水形成，外水相由聚乙烯醇溶于水形成；所述的复合乳化剂由质量比为油酸聚乙二醇甘油酯:司盘-80=5:1 1: 2的油酸聚乙二醇甘油酯和司盘-80组成。
2.根据权利要求1所述的治疗中风的丹参、三七复方的纳米混悬剂，其特征在于，所述的复合乳化剂由质量比为油酸聚乙二醇甘油酯:司盘-80=1: I的油酸聚乙二醇甘油酯和司盘-80组成。
3.一种制备权利要求1或2所述的纳米混悬剂的方法，该方法包括以下步骤: (A)分别，将丹酚酸B、丹参酮IIA和聚乳酸-羟基乙酸共聚物加入到用有机溶剂溶解的复合乳化剂中混均制得油相；将三七皂总苷溶于水制得内水相；将聚乙烯醇溶于水制得外水相；其中所述的有机溶剂由二氯甲烷60 90v%和乙酸乙酯10 40v%组成； (B)先将所述的内水相加入油相制成W/0型初乳，再将初乳加入外水相制成W/0/W型复乳，然后挥去有机溶剂，即得。
4.根据权利要求3所述的一种制备权利要求1或2所述的纳米混悬剂的方法，其特征在于，还包括稀释的步骤，即，所述的步骤(B)在挥去有机溶剂前先将所得的W/0/W型复乳转移至另配的质量浓度为1%的聚乙烯醇水溶液中稀释。
5.根据权利要求3所述的一种制备权利要求1或2所述的纳米混悬剂的方法，其特征在于，还包括离心纯化步骤，即，所述的步骤(B)在挥去有机溶剂后，1000 10000r/min离心分层，取上层即得所述纳米混悬剂。
6.根据权利要求4所述的一种制备权利要求1或2所述的纳米混悬剂的方法，其特征在于，还包括离心纯化步骤，即，所述的步骤(B)在挥去有机溶剂后，1000 10000r/min离心分层，取上层即得所述纳米混悬剂。
全文摘要
本发明涉及一种治疗中风的丹参、三七复方的纳米混悬剂，其特征在于，所述的有效成分的用量为0.28～2.65w%，且由丹酚酸B8～27w%、丹参酮IIA5～15w%和三七总皂苷58～84w%组成；其中所述的三七总皂苷中含有，三七皂苷R15～27w%，人参皂苷Rg120～50w%，人参皂苷Rb120～40w%；所述的辅料的用量为97.35～99.72w%，且由复合乳化剂0.47～0.8w%、聚乳酸-羟基乙酸共聚物0.6～2.85w%、聚乙烯醇1.1～1.9w%和水94.5～97.8w%组成；所述的纳米混悬剂采用W/O/W复乳法制成，所述的W/O/W复乳中，油相由丹酚酸B、丹参酮IIA、聚乳酸-羟基乙酸共聚物和复合乳化剂混合组成，内水相由三七总皂苷溶于水形成，外水相由聚乙烯醇溶于水形成。本发明所述的纳米混悬剂具有生物利用度高、疗效显著的优点。
文档编号A61K36/258GK103070898SQ20131003487
公开日2013年5月1日 申请日期2013年1月29日 优先权日2013年1月29日
发明者陈钢, 温露, 李霞, 张晓 , 龙伟 申请人:广东药学院