专利名称：免疫原性组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及葡萄球菌免疫原性组合物和疫苗领域，它们的制备以及这些组合物在医学中的用途。更特别地，它涉及疫苗组合物，其包含来自金黄色葡萄球菌的5型和/或8型多糖，其中0-乙酰化的程度是30-100%。也提供了使用这些疫苗来治疗或预防葡萄球菌感染的方法。背景近年来，随着血管内设备的使用增加，在社区获得的和在医院获得的感染数量都已经增加。在医院获得的(医源性)感染是发病和死亡的主要原因，更特别是在美国，它们每年影响了超过200万患者。根据各种研究，美国患者的大约6%在他们住在医院期间将获得感染。估计1992年在美国的经济负担超过45亿美元(Emori和Gaynes，1993，Clin.Microbiol.Rev.6 ;428)。大多数频发感染是尿道感染(UT1-感染的33%)，接下来是肺炎(15.5%)，手术部位感染(14.8%)以及原发血流感染(13%) (Emori和Gaynes，1993，Clin.Microbiol.Rev.6 ;428)。金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性的葡萄球菌(大多数是表皮葡萄球菌)、肠球菌种、大肠杆菌以及绿脓杆菌是主要的医源性病原体。尽管那些病原体差不多引起同样数量的感染，但是它们可引起的病症的严重性再加上抗生素抗性的分离菌的频率，使这个排位朝向金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌进行平衡，它们成为了最重要的医源性病原体。金黄色葡萄球菌是有着显著发病率和死亡率的医源性感染的最通常原因(Romero-Vivas等人，1995，Infect.Dis.21 ;1417)。它是骨髓炎、心内膜炎、脓毒性关节炎、肺炎、脓肿以及中毒性休克综合征的一些病例的原因。
表皮葡萄球菌是正常的皮肤共生生物，也是引起植入的医疗设备的感染以及在手术部位的感染的重要机会致病菌。被金黄色葡萄球菌感染的医疗设备包括心脏起搏器、脑脊液分流器、连续流动的腹膜透析导管、整形外科设备以及人工心脏瓣膜。用抗生素治疗金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌感染，青霉素是选择的药物，而万古霉素用于甲氧苯青霉素抗性的分离菌。自1980年代以来，对抗生素呈现广谱抗性的葡萄球菌菌株的百分比已经变得日益普遍(Panlilo等人，1992, Infect.Control.Hosp.Epidemiol.13 ;582)，造成了对有效的抗菌治疗的威胁。此外，近来出现的万古霉素抗性的金黄色葡萄球菌已经引起了恐惧，害怕甲氧苯青霉素抗性的金黄色葡萄球菌菌株将会产生并扩散，对此还没有可用的有效治疗。已经研究了在被动免疫疗法中使用抗葡萄球菌抗原的抗体这一备选方法。包括给予多克隆抗血清的疗法(W000/15238，W000/12132),以及用抗脂磷壁酸质的单克隆抗体进行治疗(W098/57994)正在研发之中。备选方法将是使用主动接种来产生对葡萄球菌的免疫应答。已经确定了用作疫苗组分而包含的几种候选物。这些候选物包括纤连蛋白结合蛋白(US5840846)、MHC II类似物(US5648240)、纤维蛋白原结合蛋白(US6008341)、GehD(US2002/0169288)、胶原蛋白结合蛋白(US6288214)、SdrF、SdrG 和 SdrH (WOOO/12689)、突变 SEA 和 SEB 外毒素(W000/02523)以及52kDa玻连蛋白结合蛋白(W001/60852)。金黄色葡萄球菌基因组已经被测序，并已经确定了许多编码序列(EP786519，W002/094868)。对于表皮葡萄球菌同样如此(W001/34809)。作为该方法的改进，其他人已经确定了被来自患有葡萄球菌感染的患者的超免疫血清所识别的蛋白(W001/98499，W002/059148)。靶向金黄色葡萄球菌或靶向它所产生的外蛋白的疫苗的首次产生已经获得了有限成功(Lee1996TrendS Microbiol.4 ; 162)。仍然存在研发抗葡萄球菌感染的有效疫苗的需求。
图1-用于包括在免疫原性组合物中的蛋白的多肽序列。表I提供了有关每个SEQID代表哪个蛋白的信息。图2-编码用于包括在免疫原性组合物中的蛋白的核苷酸序列。表I提供了有关每个SEQ ID编码哪个蛋白的信息。图3-天然条件下a毒素的纯化。图A显示了 a毒素纯化期间所制备样品的考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE。第I道-分子量标志，第2道-含有过量表达a毒素的可溶性级分，第3道-从N1-NTA柱流过,第4道-用10%缓冲液B洗脱的级分，第5道-用20%缓冲液B洗脱的级分，第6道-用30%缓冲液B洗脱的级分，第7道-用50%缓冲液B洗脱的级分，第8道-用75%缓冲液B洗脱的级分,第9道和第10道-用100%缓冲液B洗脱的级分，第11道-诱导前在T=O时的细菌，第12道-诱导后在T=4小时的细菌，第13道-细胞溶胞产物，第14道-可溶性级分，第15道-不溶性级分。图B显示了 10、5、2和I ill纯化a毒素的考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE。图4-变性条件下的SdrC的纯化。图A显示了 a毒素纯化期间所制备样品的考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE。泳道M-分子量标志，泳道Start-由含有过量表达SdrC的不溶性级分所形成的上清液，泳道FTl-从N1-NTA柱流过，泳道C-用洗涤缓冲液C洗脱的级分，泳道D-用缓冲液D洗脱的级分，道E-用缓冲液E洗脱的级分。图B显示了 1、2、5和10 ill纯化SdrC的考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE。图5-在包被了纯化蛋白的平板中抗葡萄球菌蛋白抗血清的ELISA结果。合并小鼠pre_使用提取自接种前小鼠的合并的血清的结果。合并小鼠PostII1-使用免疫后提取的合并的小鼠血清的结果。合并兔Pre-使用提取自接种前兔的合并的血清的结果。合并兔Post II1-使用免疫后提取的合并的兔血清的结果。Blc-阴性对照。图6-在包被了杀死的葡萄球菌的平板上产生的抗葡萄球菌蛋白的小鼠抗血清的ELISA结果。
图A使用由金黄色葡萄球菌血清型5的杀死的完整细胞所包被的平板。图B使用由金黄色葡萄球菌血清型8的杀死的完整细胞所包被的平板。图C使用由表皮葡萄球菌的杀死的完整细胞所包被的平板。
用方块符号标记的线显示使用来自小鼠的抗血清的ELISA结果，所述小鼠用所标明的葡萄球菌蛋白免疫三次。用菱形符号标记的线显示免疫前小鼠血清的ELISA结果。图7-在包被了杀死的葡萄球菌的平板上产生的抗葡萄球菌蛋白的兔抗血清的ELISA结果。图A使用由金黄色葡萄球菌血清型5的杀死的完整细胞所包被的平板。图B使用由金黄色葡萄球菌血清型8的杀死的完整细胞所包被的平板。图C使用由表皮葡萄球菌的杀死的完整细胞所包被的平板。用方块符号标记的线显示使用来自兔的抗血清的ELISA结果，所述小鼠用所标明的葡萄球菌蛋白免疫三次(HarA除外，其中仅仅给出了一次免疫)。用菱形符号标记的线显示免疫前兔血清的ELISA结果。详细描述本发明公开了免疫原性组合物，其包含金黄色葡萄球菌5型和/或8型多糖，其中5型和/或8型荚膜多糖或寡糖是30%-100%乙酰化的。在特定实施方案中，本发明的免疫原性组合物还包含PNAG或葡萄球菌蛋白。PNAG在革兰氏阳性菌中是高度保守的，提供了抗大范围的细菌的保护，而5型和8型多糖是引起抗大多数金黄色葡萄球菌菌株的免疫应答的有效免疫原，金 黄色葡萄球菌是医源性感染最通常的原因。多糖本发明的免疫原性组合物包含PNAG和来自金黄色葡萄球菌的5型和8型多糖，其中之一或这两者是30%-100%乙酰化的。聚N-乙酰化葡糖胺(PNAG)PNAG是多糖胞间粘附素，由任选被N-乙酰和0_琥珀酰成分取代的P - (I — 6)连接的葡糖胺的聚合物组成。该多糖存在于金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌两者中，能够从所述任一来源分离(Joyce 等人，2003, Carbohydrate Research338 ；903 ;Maira_Litran等人,2002, Infect.1mun.70 ；4433)0例如，PNAG可从金黄色葡萄球菌菌株MN8m分离(W004/43407)。dPNAG 的制备描述于 W004/43405。该多糖在以前被称为聚-N-玻拍酸-P - (I — 6)-葡糖胺(PNSG),最近显不它不具有预期结构，因为确定了 N-琥拍酰化是不正确的(Maira-Litran等人,2002, Infect.1mun.70 ;4433)。因此，以前称为PNSG而现在发现是PNAG的多糖也被术语PNAG所包括。PNAG可以是不同大小的由最多达30个重复单元(任选被N-乙酰和0_琥珀酰成分取代的￠- (I —6)连接的葡糖胺的重复单元)所组成的寡糖，从超过400kDa、到75和400kDa之间、到10和75kDa之间变化。任何大小的PNAG多糖或寡糖都可用于本发明的免疫原性组合物中，例如可以使用超过40kDa的大小。大小分级可通过现有技术中已知的任何方法来获得，例如通过微流化、超声照射或者通过化学裂解(W003/53462，EP497524，EP497525)。PNAG 的大小范围是例如 40-400kDa、50-350kDa、40-300kDa、60-300kDa、50-250kDa和 60_200kDa。PNAG可由于氨基被乙酸酯取代而具有不同程度的乙酰化。体外产生的PIA几乎在氨基上被全部取代(95-100%)。作为选择，可以使用脱乙酰化的PNAG，其具有少于50%、40%、30%、20%、10%或5%的N-乙酰化。使用脱乙酰化PNAG使得能够调理性杀死革兰氏阳性菌，任选金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌(W004/43405)。在一个实施方案中，PNAG具有40kDa和300kDa之间的大小并且是脱乙酰化的，使得少于50%、40%、30%、20%、10%或5%氨基被乙酰化。术语脱乙酰化的PNAG (dPNAG)是指少于50%、40%、30%、20%、10%或5%的氨基被乙酰化的PNAG多糖或寡糖。如本文使用的，术语PNAG包括乙酰化的和脱乙酰化形式的该糖。在一种实施方案中，通过化学处理天然多糖来使PNAG脱乙酰化以形成dPNAG。例如，用碱性溶液处理天然PNAG，以使得pH上升到超过10。例如用0.1-5M、0.2_4M、0.3_3M、
0.5-2M、0.75-1.5M或IM NaOH,KOH或NH4OH处理PNAG。处理进行至少10或30分钟，或者
1、2、3、4、5、10、15或 20 小时，温度在 20-100、25-80、30_60 或 30-50 或 35-45。。。可按照W004/43405的描述来制备dPNAG。在一种实施方案中，包括在本发明免疫原性组合物中的多糖被如下文所述缀合到载体蛋白上，或者作为选择，不被缀合。来自金黄色葡萄球菌的5型和8型多糖在人体中引起感染的大多数金黄色葡萄球菌菌株含有5型或8型多糖。大约60%的人菌株是8型，大约30%是5型。5型和8型荚膜多糖抗原的结构描述于Moreau等人，Carbohydrate Res.201 ；285 (1990)以及 Fournier 等人，Infect.1mmun.45 ;87 (1984)中。两者都在它们的重复单元中具有FucNAcp以及具有ManNAcA，可用于引入巯基。最近(JonesCarbohydrate Research340,1097-1106 (2OO5)) NMR 谱将荚膜多糖的结构修正为:5 型— 4)_@ -D-ManNAcA-(I — 4)-a -L-FucNAc (30Ac )-(1 — 3)-@ -D-FucNAc-(I —8 型— 3) - ^ -D-ManNAcA (40Ac) - (I — 3) - a -L-FucNAc (I — 3) - a -D-FucNAc 可以使用本领域技术人员公知的方法从合适的金黄色葡萄球菌菌株中提取多糖，例如按照 US6294177 或 Infection and Immunity (1990) 58 (7) ;2367 中的描述。例如，ATCC12902是5型金黄色葡萄球菌菌株，ATCC12605是8型金黄色葡萄球菌菌株。多糖是天然大小，或者作为选择可以通过例如微流化、超声照射或者通过化学处理进行大小分级。本发明也包括衍生自金黄色葡萄球菌5型和8型多糖的寡糖。包括在本发明免疫原性组合物中的5型和/或8型荚膜多糖或寡糖是0-乙酰化的。在一个实施方案中，5型荚膜多糖或寡糖的0-乙酰化程度是10-100%、20-100%、30-100%、40-100%、50-100%、60-100%、70-100%、80-100%、90-100%、50-90%、60-90%、70-90%或80-90%。在一个实施方案中，8型荚膜多糖或寡糖的0-乙酰化程度是10-100%、20-100%、30-100%、40-100%、50-100%、60-100%、70-100%、80-100%、90-100%、50-90%、60-90%、70-90%或80-90%。在一个实施方案中，5型和8型荚膜多糖或寡糖的0-乙酰化程度是10-100%、20-100%,30-100%,40-100%,50-100%,60-100%,70-100%,80-100%,90-100%,50-90%,60-90%,70-90% 或 80-90%。可以通过本领域已知的任何方法，例如，通过质子MMR (Lemercinier和 Jonesl996, Carbohydrate Resarch296 ;83_96, Jones 和 Lemercinier2002, JPharmaceutical and Biomedical analysis30 ;1233-1247,W005/033148或W000/56357)确定多糖或寡糖的0-乙酰化程度。另一种常用的方法是Hestrin (1949)J.Biol.Chem.180 ；249-261描述的方法。可以通过水解除去0-乙酰基，例如，通过用诸如无水酰肼的碱处理(Konadu等人，1994 ；Infect.1mmun.62 ;5048_5054)或用 0.1N NaOH 处理 1-8 小时。为了保持 5 型和 / 或8型多糖或寡糖上的高水平0-乙酰化，使将导致0-乙酰基水解的处理最少化。例如，使在极端pH的处理最少化。包括在本发明免疫原性组合物中的5型和8型多糖任选被如下文所述缀合到载体蛋白上，或者作为选择，不被缀合。作为选择，本发明的免疫原性组合物含有5型或8型多糖。金黄色葡萄球菌336抗原在一种实施方案中，本发明·的免疫原性组合物包含US6294177中描述的金黄色葡萄球菌336抗原。336抗原包含@ -连接的己糖胺，不含0-乙酰基，并且特异性结合到针对保藏为ATCC55804的金黄色葡萄球菌336型的抗体上。在一种实施方案中，336抗原是天然大小，或者作为选择可以通过例如微流化、超声照射或者通过化学处理进行大小分级。本发明也包括来源于336抗原的寡糖。包括在本发明免疫原性组合物中的336抗原任选被如下文所述缀合到载体蛋白上，或者作为选择，不被缀合。
_0] 来自表皮葡萄球菌的1、II和III型多糖表皮葡萄球菌菌株ATCC-31432、SE-360和SE-10的特征分别在于三种不同的荚膜
1、11 和 III 型(Ichiman 和 Yoshidal981, J.Appl.Bacteriol.51 ;229)。提取自每种表皮葡萄球菌血清型的荚膜多糖构成1、II和III型多糖。可以通过几种方法提取多糖，包括描述于US4197290中的方法或者按照Ichiman等人，1991，J.Appl.Bacteriol.71 ；176中所描述的方法。在本发明的一个实施方案中，免疫原性组合物包含来自表皮葡萄球菌的I和/或II和/或III型多糖或寡糖。多糖是天然大小，或者作为选择可以通过例如微流化、超声照射或者通过化学裂解进行大小分级。本发明也包括提取自表皮葡萄球菌菌株的寡糖。这些多糖不被缀合，或者任选地被如下所述进行缀合。
_5] 多糖的缀合在与疫苗接种中使用多糖相关的问题中，其中之一是多糖本身为弱免疫原的这一事实。已经设计来克服这一免疫原性缺乏的策略包括将多糖连接到大的蛋白载体上，其提供了旁观T细胞辅助。在一个实施方案中，将本发明所利用的多糖连接到提供旁观T细胞辅助的蛋白载体上。目前用于与多糖或寡糖免疫原偶联的这些载体的例子包括白喉和破伤风类毒素(DT、DT Crml97和TT)、匙孔血蓝蛋白(KLH)、绿脓杆菌外蛋白A (rEPA)和结核菌素的纯化蛋白衍生物(PH))、来自流感嗜血杆菌的蛋白D、肺炎球菌溶血素或者上述任何之一的片段。适合使用的片段包括含有T辅助表位的片段。特别地，蛋白D片段将任选包含蛋白的N末端1/3。蛋白D是来自流感嗜血杆菌的IgD结合蛋白(EP0594610B1)。在本发明的免疫原性组合物中使用的备选载体蛋白是单一的葡萄球菌蛋白或其片段或其融合蛋白，其包含至少或正好1、2、3或4种或者更多下面部分所列出的葡萄球菌蛋白或其片段。特别有利于使用在葡萄球菌疫苗中的新载体蛋白是葡萄球菌a类毒素。可将天然形式缀合到多糖上，因为缀合步骤降低了毒性。任选地将遗传去毒的a毒素诸如His35Leu或His35Arg变体用作载体，因为残留毒性更低。作为选择，通过用交联试剂、甲醒或戊二醒处理将a毒素化学去毒。遗传去毒的a毒素被任选化学去毒,任选通过用交联试剂、甲醛或戊二醛处理以进一步降低毒性。可通过任何已知方法将多糖连接到载体蛋白上(例如通过Likhite的美国专利4，372，945, Armor等人的美国专利4，474，757以及Jennings等人的美国专利4，356，170)。任选地，实施CDAP缀合化学(参见W095/08348)。在CDAP中，氰化试剂1-氰基-二甲氨基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)被任选用于多糖-蛋白缀合物的合成。氰化反应可以在相对温和的条件下进行，这避免了碱敏感性的多糖的水解。这种合成法使得能够直接偶联到载体蛋白上。可将多糖溶于水中或盐溶液中。可将CDAP溶解在乙腈中，立即加入到多糖溶液中。CDAP与多糖的羟基反应形成氰酸酯。反应步骤之后，加入载体蛋白。赖氨酸的氨基与活化的多糖反应形成异脲共价连接。偶联反应之后，然后加入大大过量的甘氨酸以淬灭残留的活化官能团。然后将产物通过凝胶渗透柱以去除未反应的载体蛋白和残留试剂。蛋白本发明的免疫原性组合物任选进一步包含葡萄球菌蛋白，例如，来自金黄色葡萄球菌或者表皮葡萄球菌的蛋白。本发明的一些实施方案含有来自金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌两者的蛋白。本发明的免疫原性组合物包含分离的蛋白，其包含与图1的任意序列具有至少85%同一性、任选至少90%同一性、至少95%同一性、至少97-99%或完全同一性的氨基酸序列。本文在明确提及蛋白时，任选指天然或重组的、全长蛋白或者任选地已经去除了任何信号序列的成熟蛋白。蛋白可直接从葡萄球菌菌株中分离或者通过重组DNA技术生产。可将蛋白的免疫原性片段加入到本发明的免疫原性组合物中。这些片段是包含从蛋白的氨基酸序列连续选取的至少10个氨基酸、至少20个氨基酸、至少30个氨基酸、至少40个氨基酸、至少50个氨基酸、或至少100个氨基酸的片段。此外，这样的免疫原性片段典型地是与针对葡萄球菌蛋白而产生的抗体有免疫反应的，或者是与通过用葡萄球菌感染哺乳动物宿主而产生的抗体有免疫反应的，或者含有T细胞表位。在一个实施方案中，免疫原性片段也包括以有效剂量给予时 ，(单独或者作为结合到载体上的半抗原)，引起抗葡萄球菌感染的保护性免疫应答的片段，任选是对金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌感染有保护性的。这样的免疫原性片段可包括例如缺少N末端前导序列、和/或跨膜结构域和/或C末端锚定结构域的蛋白。在一个实施方案中，根据本发明的免疫原性片段包含蛋白基本上所有的胞外结构域，所述蛋白在片段序列的整个长度上具有与选自图1的序列的至少85%、90%、95%、97 或 99% 同一性。
在一种实施方案中，本发明的免疫原性组合物可含有葡萄球菌蛋白或者葡萄球菌蛋白的片段的融合蛋白。这样的融合蛋白可以重组制备，并且可包含至少2、3、4、5或6种葡萄球菌蛋白的一个部分，例如下文列出的葡萄球菌蛋白的组合。作为选择，融合蛋白可包含至少2、3、4或5种葡萄球菌蛋白的多个部分。这些融合蛋白可以将不同的葡萄球菌蛋白或其片段组合到同一蛋白中。作为选择，本发明也包括葡萄球菌蛋白或其片段的单个的融合蛋白，作为与异源序列诸如T细胞表位或纯化标志的提供者的融合蛋白，所述T细胞表位或纯化标志例如:P -半乳糖苷酶，谷胱苷肽-S-转移酶，绿色荧光蛋白(GFP)，表位标志诸如FLAG>myc标志、聚组氨酸,或者病毒表面蛋白诸如流感病毒血凝素,或者细菌蛋白诸如破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197。融合蛋白可以存在于本发明的免疫原性组合物中，作为游离蛋白，或它可以是与糖连接的载体蛋白。蛋白在一种实施方案中，本发明的免疫原性组合物进一步包含一种或多种下面提及的蛋白或其免疫原性片段。许多所述蛋白落入胞外成分结合蛋白、转运蛋白或者毒素以及毒力调节剂的范畴。本发明的免疫原性组合物任选进一步包含葡萄球菌胞外成分结合蛋白或者葡萄球菌转运蛋白或者葡萄球菌毒素或毒力调节剂。本发明的免疫原性组合物任选包含至少或正好1、2、3、4、5或6种葡萄球菌蛋白。表I下表列出了分别在图1和图2中发现的优选蛋白序列和DNA序列的SEQ ID号。SA表示来自金黄色葡萄球菌的序列，SE表示来自表皮葡萄球菌的序列。
权利要求
1.免疫原性组合物，包含来自金黄色葡萄球菌的5型和/或8型荚膜多糖或寡糖，其中所述5型荚膜多糖或寡糖是30%-100%0_乙酰化的，并且包含葡萄球菌蛋白或其片段，所述葡萄球菌蛋白或其片段是胞外成分结合蛋白，其选自层粘连蛋白受体、SitC/MntC/唾液结合蛋白、EbhA、EbhB、弹性蛋白结合蛋白(EbpS)、EFB (FIB), SBI,自溶素、ClfA、SdrC、SdrD、SdrE、SdrG> SdrH、脂肪酶 GehD、SasA、FnbA、FnbB、Cna、ClfB、FbpA、Npase、IsaA/PisA、SsaA、EPB、SSP-1、SSP-2、HBP、玻连蛋白结合蛋白、纤维蛋白原结合蛋白、凝固酶、Fig和MAP。
2.免疫原性组合物，包含来自金黄色葡萄球菌的5型和/或8型荚膜多糖或寡糖，其中所述8型荚膜多糖或寡糖是30%-100%0_乙酰化的，并且包含葡萄球菌蛋白或其片段，所述葡萄球菌蛋白或其片段是胞外成分结合蛋白，其选自层粘连蛋白受体、SitC/MntC/唾液结合蛋白、EbhA、EbhB、弹性蛋白结合蛋白(EbpS)、EFB (FIB), SBI,自溶素、ClfA、SdrC、SdrD、SdrE> SdrG> SdrH、脂肪酶 GehD、SasA、FnbA、FnbB、Cna、ClfB、FbpA、Npase、IsaA/PisA、SsaA、EPB、SSP-1、SSP-2、HBP、玻连蛋白结合蛋白、纤维蛋白原结合蛋白、凝固酶、Fig和MAP。
3.权利要求2的免疫原性组合物，其中所述5型荚膜多糖或寡糖是30%-100%0_乙酰化的。
4.权利要求1-3的任一项的免疫原性组合物，包含葡萄球菌PNAG。
5.权利要求 4的免疫原性组合物，其中所述PNAG是少于40%N乙酰化的。
6.权利要求1-5的任一项的免疫原性组合物，进一步包含来自表皮葡萄球菌的I型和/或II型和/或III型荚膜多糖或寡糖。
7.权利要求1-6的任一项的免疫原性组合物，进一步包含金黄色葡萄球菌336抗原。
8.权利要求1-7的任一项的免疫原性组合物，进一步包含葡萄球菌蛋白或其片段。
9.权利要求8的免疫原性组合物，包含两种或更多种选自至少两个下列不同组的葡萄球菌蛋白: a)至少一种葡萄球菌胞外成分结合蛋白或其片段，其选自层粘连蛋白受体、SitC/MntC/唾液结合蛋白、EbhA、EbhB、弹性蛋白结合蛋白(EbpS)、EFB (FIB),SBI,自溶素、ClfA、SdrC、SdrD、SdrE、SdrG、SdrH、脂肪酶 GehD、SasA、FnbA、FnbB、Cna、ClfB、FbpA、Npase、IsaA/PisA、SsaA、EPB, SSP-U SSP-2、玻连蛋白结合蛋白、纤维蛋白原结合蛋白、凝固酶、Fig和MAP ； b)至少一种葡萄球菌转运蛋白或其片段，其选自免疫优势的ABC转运蛋白、IsdA、IsdB, IsdC、HarA、Mg2+转运蛋白、SitC 和 NiABC 转运蛋白； c)至少一种葡萄球菌毒力调节剂、毒素或其片段，其选自a毒素(Hla)、a毒素H35R突变体、RNAIII激活蛋白(RAP)。
10.权利要求1-9的任一项的免疫原性组合物，其中葡萄球菌多糖缀合到蛋白载体上。
11.权利要求4-10的任一项的免疫原性组合物，其中PNAG缀合到载体蛋白上。
12.权利要求10或11的免疫原性组合物，其中载体蛋白包含葡萄球菌蛋白或其片段，其选自层粘连蛋白受体、SitC/MntC/唾液结合蛋白、EbhA、EbhB、弹性蛋白结合蛋白(EbpS), EFB (FIB)、SB1、自溶素、ClfA、SdrC、SdrD、SdrE, SdrG, SdrH、脂肪酶 GehD、SasA、FnbA、FnbB、Cna、ClfB、FbpA、Npase、IsaA/PisA、SsaA、EPB、SSP-l、SSP-2、HBP、玻连蛋白结合蛋白、纤维蛋白原结合蛋白、凝固酶、Fig、MAP、免疫优势的ABC转运蛋白、ISdA、IsdB、IsdC、Mg2+转运蛋白、SitC和NiABC转运蛋白、a毒素(Hla)、a毒素H35R突变体和RNAIII激活蛋白(RAP)。
13.权利要求10或11的免疫原性组合物，其中载体蛋白选自破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197、流感嗜血杆菌蛋白D、绿脓杆菌外蛋白A、肺炎球菌溶血素和a类毒素。
14.权利要求1-13的免疫原性组合物，其中针对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌两者，产生有效的免疫应答。
15.包含权利要求1-14的免疫原性组合物和药学可接受赋形剂的疫苗。
16.制备疫苗的方法，包括混合抗原以制备权利要求1-14的免疫原性组合物以及加入药学可接受赋形剂的步骤。
17.预防或治疗葡萄球菌感染的方法，包括给有此需要的患者施用权利要求15的疫苗的步骤。
18.权利要求1-14的免疫原性组合物在制备用于治疗或预防葡萄球菌感染的疫苗中的用途。
19.缀合来自金黄色葡萄球菌的5型或8型荚膜多糖或寡糖的方法，包括以下步骤: a)将所述5型或8型多糖或寡糖溶解在水或盐溶液中； b)加入氰化试剂(例如CDAP)以形成活化的多糖或寡糖； c)加入载体蛋白，使得氨基与活化的多糖反应，以形成异脲共价连接。
20.权利要求19 的方法，其中所述5型荚膜多糖或寡糖是30%-100%0_乙酰化的。
全文摘要
本申请涉及包含来自金黄色葡萄球菌的、具有30-100%O-乙酰化的5型和/或8型荚膜多糖或寡糖的免疫原性组合物。也描述了疫苗、使用包含具有30-100%O-乙酰化的5型和/或8型荚膜多糖的免疫原性组合物的治疗方法以及制备所述免疫原性组合物的方法。
文档编号A61K39/116GK103169960SQ20131009957
公开日2013年6月26日 申请日期2007年3月29日 优先权日2006年3月30日
发明者P.德内尔, J.普尔曼 申请人:葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司