一种用于治疗阿尔兹海默症的h102肽鼻腔溶液型喷雾剂的制作方法
【专利摘要】本发明属药物制剂领域，涉及一种用于治疗阿尔茨海默症的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂及其制备方法；该鼻腔溶液型喷雾剂包含H102肽、吸收促进剂、稳定剂以及其它药剂学上有效的辅料。本发明所述鼻腔溶液型喷雾剂制成冻干粉末形式，临用前溶解成溶液后以喷雾方式给药。试验结果表明，所述鼻腔溶液型喷雾剂能明显延长H102肽的体内作用时间、显著增加药物的入脑量，可用于治疗阿尔兹海默症，改善阿尔兹海默症患者记忆障碍、缓解病理症状。
【专利说明】一种用于治疗阿尔兹海默症的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂
【技术领域】
[0001] 本发明属药物制剂领域，涉及一种用于治疗阿尔茨海默症的H102肽鼻腔溶液型 喷雾剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 阿尔茨海默症（Alzheimer' s disease,AD)是一种进行性发展的致死性神经退行 性疾病，目前已成为继心血管病、癌症和脑卒中后，第四位老年人的致死病因。随着人口老 龄化进程的加剧，AD的发病率日益上升，预计到2025年，AD患者的人数将达到3400万。AD 已成为人类健康和生存质量的严重威胁，是日益严重的公共卫生问题。
[0003] 目前已知，β片层结构是普遍存在于蛋白质中、重复出现的二级结构之一；有研 究发现，在β-淀粉样肽（β-amyloid peptide，AP)的二级结构中，β片层结构的形成是 Αβ产生聚集的必要条件，过多的β片层结构会使Αβ的聚集加剧，产生神经毒性，进而引 发AD的进展和恶化；因此，有效阻断β片层的形成，已成为治疗AD的一个新策略。
[0004] Η102肽为一条人工合成的β片层阻断肽，体外研究证实，所述Η102肽能稳定Αβ 空间结构，抑制β片层形成，分解已形成的Αβ纤维；保护神经细胞，提高神经细胞的存活 率。有研究显示，APP转基因小鼠侧脑室注射Η102肽后，可显著改善其空间记忆障碍，表明 Η102肽具有治疗AD的潜力。相关研究已申请中国发明专利一项（申请号：200810006598. X)。
[0005] 然而，所述H102肽体内稳定性差、不能透过血脑屏障，静注无效；脑室注射给药虽 有效，但技术复杂、患者顺应性差。上述一系列问题限制了 H102肽的实际应用。
[0006] 近年来，鼻腔作为脑靶向递药途径取得了迅速发展，已被广泛用于多肽蛋白药物 脑内递送的研究。动物或人体鼻腔给予神经生长因子、霍乱毒素 B-神经生长因子共轭结合 物、胰岛素、胰岛素样生长因子-1等多肽蛋白药物，已证实可绕过血脑屏障，沿嗅通路和三 叉神经通路直接递送入脑，发挥治疗中枢神经系统疾病的作用。
[0007] 但迄今为止，尚未见有关用于治疗阿尔茨海默症的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂及 其制备方法的报道。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是提供一种用于治疗阿尔茨海默症的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂； 该喷雾剂是以H102肽为活性物质的鼻腔溶液型喷雾剂，具有给药方便、均一，生物利用度 1?、治疗效果好等优点。
[0009] 本发明所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂能解决目前多肽药物在鼻腔中不稳定、 易被鼻纤毛清除、透黏膜能力差的问题； 本发明所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，包含H102肽、吸收促进剂、稳定 齐[J，也可加入其它药剂学上有效的辅料，如生物黏附剂、防吸附剂、抑菌剂、等渗调节剂、PH 调节剂等，其用量为药剂学上所规定的常规用量； 本发明所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂中，所述H102肽的浓度为0. 0019Γ7. 5% (w/ v)，即每mL鼻腔喷雾剂中含H102肽10 mg?75 mg;优选浓度为0. 0059Γ5. 6% (w/v)，即每 mL鼻腔喷雾剂中含H102肽50mg ~ 56 mg; 本发明中，为增加 H102肽透鼻黏膜的能力，所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂可加入下 述一种或多种吸收促进剂：壳聚糖、环糊精、聚山梨酯； 本发明中，所述吸收促进剂为壳聚糖，其分子量为5000~500000,优选为 20000?200000 ;脱乙酰度为50%?97%，优选为70%?95% ; 所述壳聚糖为选自由硝酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、盐酸盐和乙酸盐 所组成的盐的形式；所述壳聚糖还优选为盐酸盐或谷氨酸盐的形式；所述壳聚糖的用量为 0· 1%?5% (w/v)，优选为 0· 2%?2% (w/v); 本发明中，所述吸收促进剂为环糊精，选自a-环糊精、b-环糊精、g-环糊精、二甲 基-b_环糊精、随机甲基化的b-环糊精、羟丙基-b-环糊精、磺丁基醚-b-环糊精中的 一种或多种；更优选的是，环糊精选自由二甲基-b_环糊精（DM-bCD)、羟丙基-b-环糊精 (HP-bCD)、磺丁基醚-b-环糊精（SBE-bCD)及其混合物所组成的组；所述环糊精的用量为 0· 1%?50% (w/v)，优选为 1%?25% (w/v); 本发明中，所述吸收促进剂为聚山梨酯（吐温），选自吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐 温-80和吐温-85的一种或多种，用量为0. 19Γ10% (w/v)，优选为0. 29T5%(w/v)。
[0010] 本发明中，为增加 H102肽在鼻腔环境中的稳定性，防止酶降解，所述的H102肽鼻 腔溶液型喷雾剂还可加入下述一种或多种稳定剂：杆菌肽、乙二胺四乙酸（EDTA);其中，杆 菌肽的用量为〇. 5%?5%(W/v) ;EDTA的用量为0. 05%?2% (w/v); 本发明中，为减少鼻腔纤毛的清除率，延长H102肽在鼻腔的滞留时间从而增加其吸收 量，所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂中可加入下述一种或多种生物黏附剂：纤维素类衍生 物、卡波普、聚维酮（PVP K29/32);其中，所述纤维素类衍生物选自甲基纤维素（MC)、羧甲 基纤维素钠（CMC-Na)、羟丙基甲基纤维素（HPMC)及其混合物；MC的粘度为400 mPa. s，用 量为 0.1%?2% (w/v) ;CMC-Na 的黏度为 600?1000 mPa.s，用量为 0.1%?2% (w/v) ;HPMC 的黏 度为 50?4000 mPa.s，用量为 0.25%?2% (w/v);卡波姆选自 Carbopol 934PXarbopol 940、 Carbopol 941、Carbopol 971P、Carbopol 974P 及其混合物；卡波姆的用量为 0.02%?2% (w/v)。PVP K29/32 的用量为 0· 1%?2% (w/v)。
[0011] 本发明中，所述的防吸附剂选自人血清白蛋白（HSA)、泊洛沙姆188 ;其中，HSA的 用量为0. 019Γ2% (w/v);泊洛沙姆188的用量为0. 01%?l%(w/v); 本发明中，所述的抑菌剂选自羟苯酯类、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯乙醇、醋酸洗必泰、硫 柳汞、苯扎氯胺、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钠（钾）及其混合物，但必须要求抑菌 剂不影响制剂的理化性质，在抑菌浓度范围内不产生或仅产生较小的、临床可以接受的鼻 黏膜刺激性和纤毛毒性； 本发明中，所述的等渗调节剂选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、硼酸、硼砂、甘油 等，加入后调节鼻腔喷雾剂的渗透压在28(T310 m〇S mol/L; 本发明中，所述的pH调节剂为缓冲溶液，选自以下几类：磷酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲 液、枸橼酸盐缓冲液；所述PH调节剂调节鼻腔喷雾剂的pH至6~7 ; 本发明所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂为制成冻干粉末形式，临用前加灭菌三蒸水 溶解后以喷雾方式给药。
[0012] 本发明中，为防止在冻干和复溶的过程中H102肽活性的丧失，所述的H102肽鼻腔 溶液型喷雾剂可加入下述一种或多种冻干支架剂：葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖、赤 藓糖，用量为29Γ20% (w/v)。
[0013] 本发明的另一目的是提供所述H102肽鼻腔溶液型喷雾剂的制备方法， 所述H102肽鼻腔溶液型喷雾剂的制备方法，其特征在于，步骤为： (1) 取处方量约70%的缓冲溶液，加入生物黏附剂，使其充分溶胀，直至完全溶解； (2) 向上述步骤（1)中加入吸收促进剂、抑菌剂、稳定剂、渗透压调节剂、冻干支架剂、 防吸附剂和H102肽，充分溶解后，添加缓冲液至全量； (3) 所述步骤（2)的药液于0.22 μπι微孔滤膜过滤除菌，分装至已灭菌的鼻喷雾瓶中 冷冻干燥； (4) 冻干完成后，取出，加带有喷雾定量泵的瓶盖，密闭低温贮存，贴签包装。
[0014] 本发明所述的Η102肽鼻腔溶液型喷雾剂无鼻腔刺激性、4°C条件下稳定，药物冻 干粉复溶后可连续使用2周个月。
[0015] 本发明中，制备的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂通过SD大鼠鼻腔给药实验，结果表 明，其绝对生物利用度达109Γ35%，且鼻腔喷雾剂显著促进了 H102肽向脑部的转运； 所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，经AD模型大鼠鼻腔给药，通过Morris水迷宫实验 评价其对大鼠空间记忆障碍的改善作用，结果显示，H102肽鼻腔溶液型喷雾剂能有效改善 AD模型大鼠的空间记忆能力，防止Ab斑块沉积、减少海马区神经元的缺失、使乙酰胆碱酯 酶和胆碱乙酰化酶活力恢复至假手术水平，表明其能有效缓解AD的病理特征。
[0016] 本发明的用于治疗阿尔茨海默症的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂还具有如下突出优 占· ① 所述鼻腔喷雾剂解决了 H02肽血中消除快（5min已检测不到）、不能透过血脑屏障， 静注无效的问题，使H102肽沿鼻-脑通路直接转运入脑，提高了脑内的药量，有利于对AD 的防治； ② 鼻腔喷雾剂给药方便，患者可自主用药，特别适于AD这种需长期用药的疾病。
【专利附图】
【附图说明】
[0017] 图1鼻腔给药后脑组织和血中药时曲线， 其中，A :处方7 ; B :处方10 ; C :处方13。
[0018] 图2大鼠在Morris水迷宫实验中的平均上台潜伏期（mean土S.E.M，n=10)， * /XO. 05，与AD模型组有显著差异。
[0019] 图3大鼠海马乙酰胆碱酯酶活力（mean土SD, n=3)， * /XO. 05，与AD模型组有显著差异。
[0020] 图4大鼠海马Αβ斑块染色结果（阳性斑块用黑色箭头指示）， 其中，A :AD模型组； B :假手术组； C :静注 H102 ; D :鼻腔处方5 ; E :鼻腔处方7 ; F :鼻腔处方13。
[0021] 图5鼻粘膜HE染色结果， 其中，A:生理盐水（阴性对照）； B :1%去氧胆酸钠溶液（阳性对照）； C :鼻腔处方4 ; D :鼻腔处方6 ; E :鼻腔处方8 ; F :鼻腔处方12。
【具体实施方式】
[0022] 本发明通过以下描述和实施例进行说明，以下描述为非限制性的，并不限制本发 明的权利要求范围。
[0023] 实施例1 根据表1制备以壳聚糖为吸收促进剂的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂。
[0024] 表I H102肽鼻腔溶液型喷雾剂处方（w/v %)
【权利要求】
1. 一种用于治疗阿尔茨海默症的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，包含H102 肽、吸收促进剂、稳定剂以及其它药剂学上有效的辅料； 其中， 所述H102肽的浓度为0. 0019Γ7. 5% w/v，即每mL鼻腔喷雾剂中含H102肽10 mg?75 mg ； 所述吸收促进剂选自壳聚糖、环糊精和聚山梨酯中的一种或多种； 所述稳定剂选自杆菌肽和乙二胺四乙酸中的一种或多种。
2. 按权利要求1所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述H102肽的浓度为 0. 0059Γ5. 6% w/v。
3. 按权利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的吸收促进 剂为壳聚糖。
4. 按权利要求3所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述壳聚糖的分子量 为5000?500000 ;脱乙酰度为50%?97%。
5. 按权利要求4所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述壳聚糖选自由硝 酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、乳酸盐、枸橼酸盐、盐酸盐和酒石酸盐所组成的盐的形式。
6. 按权利要求5所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述壳聚糖为盐酸盐 或谷氨酸盐的形式。
7. 按权利要求6所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述壳聚糖的用量为 0·1%?5% w/v。
8. 按权利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的吸收促 进剂选自环糊精，选自a-环糊精、b-环糊精、g-环糊精、二甲基-b-环糊精、随机甲基化的 b_环糊精、羟丙基-b-环糊精或磺丁基醚-b-环糊精中的一种或多种。
9. 按权利要求8所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述环糊精选自二甲 基-b_环糊精、羟丙基-b-环糊精或磺丁基醚-b-环糊精中的一种或多种。
10. 按权利要求9所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述环糊精的用量为 0·1%?50% w/v。
11. 按权利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的吸收促进 剂选自聚山梨酯，选自吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80和吐温-85中的一种或多种。
12. 按权利要求11所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述聚山梨酯的用 量为 0· 1%?10% w/v。
13. 按权利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的稳定剂中 杆菌肽的用量为〇. 5%?5% w/v ;EDTA的用量为0. 05%?2% w/v。
14. 按权利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的药剂学上 有效的辅料包括生物黏附剂、防吸附剂、抑菌剂、等渗调节剂、pH调节剂和冻干支架剂，其用 量为药剂学上所规定的常规用量。
15. 按权利要求14所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的生物粘附剂 选自纤维素类衍生物、卡波普、聚维酮PVP K29/32中的一种或多种。
16. 按权利要求15所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的生物黏附剂 为纤维素类衍生物，选自甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和羟丙基甲基纤维素中的一种或多 种。
17. 按权利要求16所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述MC的黏度为 400 mPa. s，用量为0· 1%?2% w/v ;所述CMC-Na的黏度为600?1000 mPa. s，用量为0· 1%?2% w/v ;所述HPMC的黏度为50?4000 mPa. s，用量为0· 25%?2% w/v。
18. 按权利要求15所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的生物黏附剂 为卡波姆，选自 Carbopol 934P、Carbopol 940、Carbopol 941、Carbopol 971P 和 Carbopol 974P中的一种或多种；卡波姆的用量为0. 029Γ2% w/w。
19. 按权利要求15所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的生物黏附剂 为聚维酮，用量为〇. 1%~2% w/v。
20. 按权利要求14所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的防吸附剂选 自人血清白蛋白和泊洛沙姆188中的一种或多种；其中，所述HSA的用量为0. 19Γ2% w/v ; 泊洛沙姆188的用量为0. 19Γ1% w/v。
21. 按权利要求14所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的抑菌剂选自 羟苯酯类、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯乙醇、醋酸洗必泰、硫柳汞、苯扎氯胺、苯甲酸、苯甲酸钠、 山梨酸和山梨酸钠（钾）中的一种或多种，所述的抑菌剂不影响制剂的理化性质，在抑菌 浓度范围内不产生或仅产生较小的、临床可接受的鼻黏膜刺激性和纤毛毒性。
22. 按权利要求14所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的等渗调节剂 选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、硼酸、硼砂和甘油中的一种或多种，加入后调节鼻腔 喷雾剂的渗透压在280?310 mOs mol/L。
23. 按权利要求14所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于所述的pH调节剂为 缓冲溶液，选自磷酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液；所述pH调节剂调节鼻腔 喷雾剂的pH至6~7。
24. 按权利要求14所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的冻干支架剂 选自葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖、赤藓糖中的一种或多种，用量为29Γ20% w/v。
25. 按权利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂，其特征在于，所述的鼻腔喷雾 剂制成冻干粉末形式，使用前加灭菌三蒸水溶解后以喷雾方式给药。
26. 权利要求1或2所述的H102肽鼻腔溶液型喷雾剂的制备方法，其特征在于，其包括 步骤： (1) 取配方量70%的缓冲溶液，加入生物黏附剂，使其充分溶胀，直至完全溶解； (2) 向上述步骤（1)中加入吸收促进剂、抑菌剂、稳定剂、渗透压调节剂、冻干支架剂、 防吸附剂和H102肽，充分溶解后，添加缓冲液至全量； (3) 所述步骤（2)的药液于0.22 μπι微孔滤膜过滤除菌，分装至已灭菌的鼻喷雾瓶中 冷冻干燥； (4) 冻干完成后，取出，加带有喷雾定量泵的瓶盖，密闭低温贮存，贴签包装。
【文档编号】A61K47/18GK104274818SQ201310279216
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2013年7月4日 优先权日:2013年7月4日
【发明者】张奇志, 邵夏炎, 谭远贞, 蒋新国, 徐淑梅 申请人:复旦大学