一种痰瘀互结型卵巢囊肿动物模型的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种痰瘀互结型卵巢囊肿动物模型的制备方法，包括如下步骤：（1）将苯甲酸雌二醇溶液施用于发情期大鼠，施用剂量为1.5ml/100g，每5天施用一次，连续4次，所述苯甲酸雌二醇溶液的浓度为3.75mg/ml；（2）从第一次施用苯甲酸雌二醇溶液当天开始，灌胃1ml/100g的高脂乳，每天灌胃一次，连续20次，所述高脂乳每100ml包含如下重量配比的原料：胆固醇20g、胆酸钠3g、动物油脂35g、丙二醇20ml、吐温-8010ml，其余为水。本发明采用皮下注射雌二醇与灌胃高脂乳联合造模的方式，成功地诱导痰瘀互结型卵巢囊肿动物模型，应用前景良好。
【专利说明】一种痰瘀互结型卵巢囊肿动物模型的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种痰瘀互结型卵巢囊肿动物模型的制备方法。
【背景技术】
[0002]卵巢囊肿(ovarian cysts, 0C)指卵巢内部或表面生成肿块,肿块内的物质通常是液体，有时也可能是固体，或是液体与固体的混合。卵巢囊肿是最常见的妇科疾病，可发生于任何女性年龄，尤其多发于育龄期妇女。卵巢囊肿的发病机制有多个方面，主要是下丘脑-垂体-卵巢功能紊乱导致病理性地促性腺激素分泌，影响卵泡的产生、发育、释放等环节，最终形成卵巢囊肿。卵巢囊肿在中医属于“积聚”、“症瘕”和“肠覃”的范畴，其形成多因经期或产后六淫外邪入侵，七情损伤，房事不慎及饮食劳倦，以致正气虚弱，气血津液失调，久则脏腑失和，气滞血瘀，血脉受阻，痰湿凝结，久积成为卵巢囊肿。
[0003]痰淤互结型卵巢囊肿主要表现是卵巢病变，血脂升高，血流变各指标升高，并伴有雌二醇含量的增多，中医认为痰淤互结型卵巢囊肿主由外感湿热之邪以及情志内伤，致气滞、痰饮、淤血停滞郁久化热而致。当今社会，生活节奏快，生活习惯不规律，心理压力大，造成卵巢囊肿发病率高，因此，开发新型痰淤互结型卵巢囊肿药物具有重要的临床意义和社会价值。
[0004]目前，未见痰淤互结型卵巢囊肿的动物模型，难以有效进行新药筛选。
【发明内容】
[0005]为了解决上述问题，本发明提供了一种痰瘀互结型卵巢囊肿动物模型的制备方法。
[0006]本发明痰瘀互结型卵巢囊肿动 物模型的制备方法，包括如下步骤:
[0007](I)将苯甲酸雌二醇溶液施用于发情期大鼠，施用剂量为1.5ml/100g，每5天施用一次，连续4次,所述苯甲酸雌二醇溶液的浓度为3.75mg/ml ；
[0008](2)从第一次施用苯甲酸雌二醇溶液当天起，灌胃lml/100g的高脂乳，每天灌胃一次,连续20次，所述高脂乳每IOOml包含如下重量配比的原料:胆固醇20g、胆酸钠3g、动物油脂35g、丙二醇20ml、吐温-8010ml，其余为水。
[0009]步骤(I)中，所述的施用方式是皮下注射。
[0010]步骤(2)中，所述动物油脂是猪油。
[0011]本发明还提供了一种建立痰瘀互结型卵巢囊肿动物模型的组合物，每IOOml包含如下重量配比的原料:胆固醇20g、胆酸钠3g、动物油脂35g、丙二醇20ml、吐温-8010ml，其余为水。
[0012]所述动物油脂是猪油。
[0013]本发明还提供了前述动物模型在筛选治疗痰瘀互结型卵巢囊肿的药物中的用途。
[0014]本发明还提供了筛选治疗痰瘀互结型卵巢囊肿药物的方法，它包括如下步骤:
[0015]a、按照前述方法，建立痰瘀互结型卵巢囊肿动物模型；[0016]b、将候选药物施用于动物模型；
[0017]C、用动物模型评价潜在的治疗痰瘀互结型卵巢囊肿的药物。
[0018]本发明造模方法可以诱导大鼠卵巢病变，血脂升高、血流变各指标升高，并伴有雌二醇含量的增多，出现痰淤互结型卵巢囊肿的临床表现，成功地建立了痰瘀互结型卵巢囊肿动物模型，并且，给药方法简单，可重复性强。
[0019]显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0020]以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
【专利附图】
【附图说明】
[0021]图1空白组卵巢HE染色X4 ;
[0022]图2模型组卵巢HE染色X 4，A—卵泡内卵母细胞缺失；
[0023]图3模型组卵巢HE染色X 4，A—卵泡内卵母细胞缺失，颗粒细胞层减少；B—完全黄体化的卵泡；C—有卵母细胞的卵泡。
【具体实施方式】
[0024]实施例1本发明痰瘀互结型卵巢囊 肿动物模型的建立方法
[0025]I材料与方法
[0026]1.1实验动物
[0027]健康SD清洁雌性未孕大鼠，体重150±10g。由四川大学实验动物中心提供(动物合格证号=SCXK川2008-24)，适应性喂养I周后备用。
[0028]1.2主要试剂
[0029]苯甲酸雌二醇注射液，苯甲酸雌二醇的浓度为5mg/ml (天津金耀氨基酸有限公司，国药准字H12020529);橄榄油(成都市科龙化工制剂厂)；胆固醇(上海伯奥生物科技有限公司)；药用吐温-80 (南京威尔化工有限公司)；快速改良巴氏染液(南京建成科技有限公司)；雌二醇EISA试剂盒(上海晶研生物科技有限公司)；总胆固醇(CHO)试剂盒、甘油三酯(TG)试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒，均由北京北化康泰临床试剂有限公司提供。
[0030]1.3主要仪器
[0031]切片机(Leica有限公司);ZPJ-1展片机(天津天利航空机有限公司)；101_2A型电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；Biotek酶标仪(Gene Company有限公司)；D系列全自动生化仪(Sinnowa有限公司)；BX41正置突光显微镜(Olympus有限公司)。
[0032]1.4实验方法
[0033]取胆固醇20g、胆酸钠3g、动物油脂35g、丙二醇20ml、吐温_8010ml，加蒸馏水至100ml，混匀，配制成为高脂乳，备用。
[0034]用橄榄油稀释苯甲酸雌二醇注射液，苯甲酸雌二醇注射液与橄榄油的比例为3:1(v/v),得浓度为3.75mg/ml的苯甲酸雌二醇溶液,备用。[0035]将SD大鼠按照体重随机分成空白对照组和模型组，每组10只。空白对照组不做处理。模型组:在大鼠的发情期，皮下注射苯甲酸雌二醇溶液，注射剂量为1.5ml/100g，在第5天，10天，15天时各加注I次；从第I次注射苯甲酸雌二醇溶液当天开始，每天按大鼠体重灌胃高脂乳，灌胃剂量为lml/100g，总共造模20天。
[0036]造模给药第20天，股静脉取全血3ml检测血流变学，另取3ml离心得血清用试剂盒采用D系列全自动生化仪测定CHO、TG、LDL-C, HDL-C ;取血清E2试剂盒采用Biotek酶标仪测定E2含量；剖取双侧卵巢称重并计算脏器系数，用排水法测定体积；取左侧卵巢，匀浆，离心取上清，用E2试剂盒采用Biotek酶标仪测定E2含量；留存右侧卵巢，固定、脱水、石腊包埋、切片、HE染色观察卵巢组织病理学变化。
[0037]1.5统计学方法
[0038]采用SPSS13.0统计软件包进行分析，正态分布计量资料数据以均数土标准差(X土S)表示。各组间采用单因素方差分析，检验标准以p〈0.05为有显著性差异，P〈0.01及P〈0.001为有极显著性差异。
[0039]2 结果
[0040]2.1卵巢组织HE染色结果
[0041]如图1所示，空白组卵巢内见各期发育阶段的卵泡，未见明显病变。
[0042]如图2?3所示，模型组卵巢多出现典型的卵巢囊肿病变特征:较多早期发育的小卵泡和闭锁卵泡，囊状扩张卵泡明显增加，各种发育阶段卵泡减少，颗粒细胞层减少至2-3层，一些大的囊状卵泡几乎没有颗粒细胞，卵泡膜增厚；卵泡内卵母细胞缺失，放射冠消失；间质细胞明显增生，很多外覆卵泡的卵泡内膜黄素化，卵巢间质有时可见黄素化间质细胞。
[0043]2.2卵巢脏器系数
[0044]卵巢脏器系数和卵巢体积的检测结果见下表1:
[0045]表I各组大鼠卵巢脏器系数及体积的比较(又土SD，n=10)
【权利要求】
1.一种痰瘀互结型卵巢囊肿动物模型的制备方法，其特征在于:包括如下步骤: (1)将苯甲酸雌二醇溶液施用于发情期大鼠，施用剂量为1.5ml/100g,每5天施用一次，连续4次，所述苯甲酸雌二醇溶液的浓度为3.75mg/ml ； (2)从第一次施用苯甲酸雌二醇溶液当天开始，灌胃lml/100g的高脂乳，每天灌胃一次,连续20次，所述高脂乳每IOOml包含如下重量配比的原料:胆固醇20g、胆酸钠3g、动物油脂35g、丙二醇20ml、吐温-8010ml，其余为水。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:步骤(I)中，所述的施用方式是皮下注射。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:步骤(2)中，所述动物油脂是猪油。
4.一种建立痰瘀互结型卵巢囊肿动物模型的组合物，其特征在于:每IOOml包含如下重量配比的原料:胆固醇20g、胆酸钠3g、动物油脂35g、丙二醇20ml、吐温_8010ml，其余为水。
5.根据权利要求4所述的饲料，其特征在于:所述动物油脂是猪油。
6.权利要求1?3任意一项所述方法制备的动物模型在筛选治疗痰瘀互结型卵巢囊肿的药物中的用途。
7.一种筛选治疗痰瘀互结型卵巢囊肿的药物的方法，其特征在于:它包括如下步骤: a、按照权利要求1?3任意一项所述方法，建立痰瘀互结型卵巢囊肿动物模型； b、将候选药物施用于动物模型； c、用动物模型评价潜在的治疗痰瘀互结型卵巢囊肿的药物。
【文档编号】A61K31/575GK103432166SQ201310377265
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年8月26日 优先权日:2013年8月26日
【发明者】张仲林, 凌保东, 钟玲, 臧志和, 袁明勇, 辛志伟, 彭延娟, 颜晓燕, 盛艳梅 申请人:成都医学院