一种混合菌株的固体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法
【专利摘要】本发明涉及一种混合菌株的固体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，依次包括步骤斜面培养、液体菌种生产、固体发酵和干燥粉碎，其特征在于，所述发酵的菌株为中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌。本发明利用中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌三种不同的菌株，并结合各自的发酵、生长特点，共同通过固体发酵制得了组成更接近于天然冬虫夏草、功效更加齐全的冬虫夏草菌粉，给冬虫夏草的人工产业化带来了良好的经济效益。
【专利说明】—种混合菌株的固体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种固体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，具体涉及一种混合菌株的固体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法。
【背景技术】
[0002]冬虫夏草又称虫草，是我国传统名贵中药，具有止咳、化痰、降低血清胆固醇、调节和增强免疫力、抗肿瘤等多种药理作用。近年来，国内外对冬虫夏草需求剧增。但由于冬虫夏草有其严格的寄生性和特殊的生长地理环境，产量相当有限，药源比较紧缺。为缓解市场的供需矛盾，冬虫夏草的人工发酵产品越来越重要。
[0003]目前国内外冬虫夏草的液体深层发酵研究及生产，大部分采用的菌株是蝙蝠蛾拟青霉、中华头孢菌、蝙蝠蛾被孢霉、中华束丝孢菌或中国被毛孢等。这些菌株中蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌(即虫草头孢菌)属于常温菌，对生长环境和培养基的要求不高；而中国被毛孢则属于低温菌，生长缓慢，对人工发酵的技术条件要求较高。多篇现有技术公开了利用上述菌株进行的发酵工艺。
[0004]专利申请CN01106767公开了一种冬虫夏草菌粉，其通过固体发酵生产法制得，使用的菌种为中华束丝孢。
[0005]专利申请CN03135622公开了一种冬虫夏草无性阶段固体发酵工艺，专利申请CN200910197957公开了一种冬虫夏草菌的固体发酵法，其中都具体公开了中国被毛孢的固体发酵条件。
[0006]专利申请CN200910114886公开了一种真菌发酵物饲料添加剂，其包括蝙蝠蛾拟
青霉的固体发酵产物。
[0007]专利申请CN201210283373公开了一种虫草饲料添加剂的制备方法，包括菌种扩培、菌种发酵、后期熟化，所用的菌种为蝙蝠蛾拟青霉。
[0008]由此可见，现有技术都是利用单一菌株发酵制备天然冬虫夏草的人工替代品的。但由于天然冬虫夏草含有多种无性系菌株，所以采用单一菌株发酵制备的人工替代品的组成难以接近天然冬虫夏草，并且由单一菌株发酵生产的冬虫夏草菌粉产品的功能单一，效果不够全面，例如百令片/胶囊、金水宝片/胶囊、至灵胶囊、宁心宝胶囊和心肝宝胶囊等。
[0009]目前，为解决上述问题，已有现有技术将两种或三种菌株发酵的冬虫夏草菌粉通过简单的物理混合，来制备多功能的产品，包括CN200710301690、CN200710308028和200710307526等。但这种通过简单物理混合制得的产品在组成上仍然难以接近天然冬虫夏草，其功效仍然是有限的。
【发明内容】
[0010]为克服现有技术的不足，本发明的发明人根据多年来在冬虫夏草菌发酵工艺的研究，利用中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌三种不同的菌株，并结合各自的发酵、生长特点，共同通过固体发酵制得了组成更接近于天然冬虫夏草、功效更加齐全的冬虫夏草菌粉。
[0011]本发明提供了一种混合菌株的固体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，还提供了通过该方法制得的冬虫夏草菌粉。具体是按以下技术方案来实现的:
[0012]一种混合菌株的固体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，依次包括步骤斜面培养、液体菌种生产、固体发酵和干燥粉碎，其特征在于，所述发酵的菌株为中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌。
[0013]优选地，上述方法中，所述液体菌种生产包括中国被毛孢菌株的2-4次扩大生产，以及蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌的I-3次扩大生产。
[0014]优选地，上述方法中，所述液体菌种生产包括中国被毛孢单独扩大生产后，再与蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌混合继续扩大生产。
[0015]优选地，上述方法中，所述液体菌种生产时中国被毛孢单独扩大生产7-9天。
[0016]优选地，上述方法中，所述液体菌种生产时中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌混合后共进行I-3次扩大生产，每次扩大生产2-3天。
[0017]优选地，上述方法中，所述液体菌种生产的培养基含有碳源、氮源和无机盐，按重量体积比计，含有碳源2.0-15.0%，氮源1.0-15.0%，无机盐0.1-5.0%。
[0018]优选地，上述方法中，所述液体菌种生产和固体发酵的温度为15-18°C。
[0019]优选地，上述方法中，所述固体发酵培养基含有谷物、辅料和水，所述谷物为大米、小米、玉米、小麦、大麦或荞麦的一种或多种,含量为固体发酵培养基的35-40% w/w ;所述辅料为蛋白胨、酵母膏、磷酸二氢钾和硫酸镁中的一种或多种。
`[0020]优选地，上述方法中，所述固体发酵采用接种法或拌种法。
[0021]本发明的优点在于:利用中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌三种不同的菌株，并结合各自的发酵、生长特点，共同通过固体发酵制得了组成更接近于天然冬虫夏草、功效更加齐全的冬虫夏草菌粉，给冬虫夏草的人工产业化带来了良好的经济效益。
【具体实施方式】
[0022]实施例1
[0023]取购买或分离的中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌三种菌株，分别进行斜面培养，其中中国被毛孢接种后于12°C培养30天，蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌常温培养8天，斜面培养基的组成按重量体积比计为:蚕豆粉5 %、葡萄糖2 %、玉米粉3 %、蛋白胨0.75%、琼脂2%、麸皮1.5%、硫酸镁I %、磷酸氢二钾0.2%和水84.55%。
[0024]将完成培养的中国被毛孢接种于扩大生产培养基上，接种量5-10%，15°C下进行第一次扩大生产，时间为7天；扩大生产培养基的组成按重量体积比计为:葡萄糖2%、酵母膏0.5%、蛋白胨I %、硫酸镁0.1 %、磷酸氢二钾0.8%、水95.6%。
[0025]将第一次扩大生产后的中国被毛孢与完成培养的蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌混合，共同接种于扩大生产培养基上，接种量5-10%，15°C下再进行I次扩大生产，3天后制得冬虫夏草菌的液体菌种，扩大生产培养基的组成按重量体积比计为:蚕豆粉2%、葡萄糖2.5%、玉米粉I %、蛋白胨2%、酵母膏5%、硫酸镁0.05%、磷酸氢二钾I %、水86.95%。
[0026]将液体菌种接种于灭菌的固体发酵培养基上，接种量5-10%，15°C下发酵8天，固体发酵培养基的组份含有大米lOOKg、玉米粉10Kg、蛋白胨5g，酵母浸出粉2g，磷酸二氢钾0.5g和硫酸镁0.2g。
[0027]待固体发酵室物料内外均长满菌丝，停止发酵，将物料烘干粉碎得冬虫夏草菌粉。
[0028]实施例2
[0029]取购买或分离的中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌三种菌株，分别进行斜面培养，其中中国被毛孢接种后于14°C培养28天，蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌常温培养10天，斜面培养基的组成按重量体积比计为:蚕豆粉3 %、葡萄糖4 %、玉米粉I %、蛋白胨
0.5%、琼脂I %、麸皮4%、硫酸镁0.1 %、磷酸氢二钾0.05%、水86.35%。
[0030]将完成培养的中国被毛孢接种于扩大生产培养基上，接种量5-10%，18°C下进行第一次扩大生产，时间为7天；扩大生产培养基的组成按重量体积比计为:葡萄糖3%、酵母膏4%、蛋白胨0.5%、硫酸镁I %、磷酸氢二钾I %、水90.5%。
[0031]将第一次扩大生产后 的中国被毛孢与完成培养的蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌混合，共同接种于扩大生产培养基上，接种量5-10%，18°C下再进行3次扩大生产，2天后制得冬虫夏草菌的液体菌种，扩大生产培养基的组成按重量体积比计为:蚕豆粉3%、葡萄糖
4%、玉米粉4 %、蛋白胨0.5 %、酵母膏I %、硫酸镁0.1%、磷酸氢二钾0.05%、水87.35 %。
[0032]将液体菌种与灭菌的固体发酵培养基拌种混匀，接种量5-10%，15°C下发酵6天，固体发酵培养基的组份含有大米80Kg、玉米粉20Kg、蛋白胨10g，酵母浸出粉20g，磷酸二氢钾0.3g和硫酸镁0.5g。
[0033]待固体发酵室物料内外均长满菌丝，停止发酵，将物料烘干粉碎得冬虫夏草菌粉。
[0034]实施例3
[0035]取购买或分离的中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌三种菌株，分别进行斜面培养，其中中国被毛孢接种后于13°C培养29天，蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌常温培养9天，斜面培养基的组成按重量体积比计为:蚕豆粉4 %、葡萄糖2.5 %、玉米粉4%、蛋白胨2%、琼脂0.5%、麸皮I %、硫酸镁0.8%、磷酸氢二钾I %、水84.2%。
[0036]将完成培养的中国被毛孢接种于扩大生产培养基上，接种量5-10%，16°C下进行第一次扩大生产，时间为8天；扩大生产培养基的组成按重量体积比计为:蚕豆粉4%、葡萄糖5%、玉米粉3%、蛋白胨I %、酵母膏2%、硫酸镁0.9%、磷酸氢二钾0.2%、水83.9%。
[0037]将第一次扩大生产后的中国被毛孢与完成培养的蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌混合，共同接种于扩大生产培养基上，接种量5-10%，16°C下再进行2次扩大生产，3天后制得冬虫夏草菌的液体菌种，扩大生产培养基的组成按重量体积比计为:葡萄糖4%、酵母膏3%、蛋白胨1.5 %、硫酸镁0.05%、磷酸氢二钾0.1 %、水91.35%。
[0038]将液体菌种与灭菌的固体发酵培养基拌种混匀，接种量5-10%，15°C下发酵7天，固体发酵培养基的组份含有大米90Kg、玉米粉30Kg、蛋白胨Sg，酵母浸出粉15g，磷酸二氢钾0.6g和硫酸镁0.4g。
[0039]待固体发酵室物料内外均长满菌丝，停止发酵，将物料烘干粉碎得冬虫夏草菌粉。
[0040]实施例4
[0041]取购买或分离的中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌三种菌株，分别进行斜面培养，其中中国被毛孢接种后于13°C培养30天，蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌常温培养8天，斜面培养基的组成按重量体积比计为:蚕豆粉3%、葡萄糖2.5%、玉米粉1.5%、蛋白胨I %、琼脂0.75%、麸皮1.5%、硫酸镁0.1 %、磷酸氢二钾0.2%、水89.45%。[0042]将完成培养的中国被毛孢接种于扩大生产培养基上，接种量5-10%，16°C下进行第一次扩大生产，时间为8天；扩大生产培养基的组成按重量体积比计为:葡萄糖5%、蛋白胨2%、酵母膏0.1 %、硫酸镁0.8%、磷酸氢二钾0.05%、水92.05%。
[0043]将第一次扩大生产后的中国被毛孢与完成培养的蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌混合，共同接种于扩大生产培养基上，接种量5-10%，15°C下再进行3次发酵，2天后制得冬虫夏草菌的液体菌种，扩大生产培养基的组成按重量体积比计为:葡萄糖5%、蛋白胨2%、酵母膏0.1 %、硫酸镁0.8%、磷酸氢二钾0.05%、水92.05%。
[0044]将液体菌种与灭菌的固体发酵培养基拌种混匀，接种量5-10%，15°C下发酵7天，固体发酵培养基的组份含有大米lOOKg、玉米粉20Kg、蛋白胨10g，酵母浸出粉15g，磷酸二氢钾0.3g和硫酸镁0.5g。
[0045]待固体发酵室物料内外均长满菌丝，停止发酵，将物料烘干粉碎得冬虫夏草菌粉。
[0046]对照例I
[0047]取购买或分离的中国被毛孢菌株，按照实施例1的培养和发酵条件(培养基、温度、时间等)进行斜面培养、2次扩大生产和固体发酵。待固体发酵室物料内外均长满菌丝，停止发酵，将物料烘干粉碎得冬虫夏草菌粉。
[0048]对照例2
[0049]取购买或分离的蝙蝠蛾拟青霉菌株，按照实施例2的培养和发酵条件(培养基、温度、时间等)进行斜面培养、4次扩大生产和固体发酵。待固体发酵室物料内外均长满菌丝，停止发酵，将物料烘干粉碎得冬虫夏草菌粉。
[0050]对照例3``[0051]取购买或分离的中华头孢菌菌株，按照实施例3的培养和发酵条件(培养基、温度、时间等)进行斜面培养、3次扩大生产和固体发酵。待固体发酵室物料内外均长满菌丝，停止发酵，将物料烘干粉碎得冬虫夏草菌粉。
[0052]对照例4
[0053]按照专利申请CN200710301690中实施例1的条件制得的冬虫夏草菌粉，过程为:取92克中国被毛孢虫草菌粉，4克蝙蝠蛾拟青霉虫草菌粉，4克中华头孢虫草菌粉，再将上述三种原料混匀可制得发酵虫草混合粉产品。
[0054]试验例I
[0055]按照以下指标对实施例1-4和对照组1-4的冬虫夏草菌粉进行对照，其中各成分含量为冬虫夏草菌粉中的重量百分含量，具体结果见下表(各数值为10批样品的均值):
[0056]
堆生睪和
【权利要求】
1.一种混合菌株的固体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，依次包括步骤斜面培养、液体菌种生产、固体发酵和干燥粉碎，其特征在于，所述发酵的菌株为中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液体菌种生产包括中国被毛孢菌株的2-4次扩大生产，以及蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌的I-3次扩大生产。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述液体菌种生产包括中国被毛孢单独扩大生产后，再与蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌混合继续扩大生产。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述液体菌种生产时中国被毛孢单独扩大生产7-9天。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述液体菌种生产时中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉和中华头孢菌混合后共进行I-3次扩大生产，每次扩大生产2-3天。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的方法,其特征在于,所述液体菌种生产的培养基含有碳源、氮源和无机盐，按重量体积比计，含有碳源2.0-15.0%，氮源1.0-15.0%，无机盐0.1-5.0%。
7.根据权利要求1-5任意一项所述的方法，其特征在于，所述液体菌种生产和固体发酵的温度为15-18°C。
8.根据权利要求1-5任意一项所述的方法，其特征在于，所述固体发酵培养基含有谷物、辅料和水，所述谷物为大米、小米、玉米、小麦、大麦或荞麦的一种或多种，含量为固体发酵培养基的35-40% w/w;所述辅料为蛋白胨、酵母膏、磷酸二氢钾和硫酸镁中的一种或多种。
9.根据权利要求1-5任意一`项所述的方法，其特征在于，所述固体发酵采用接种法或拌种法。
10.通过权利要求1-9任意一项所述的方法制备得到的冬虫夏草菌粉。
【文档编号】A61K36/068GK103446190SQ201310392235
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年8月27日 优先权日:2013年8月27日
【发明者】王玉花, 王辉, 杨成香, 王晓燕 申请人:王辉