一种羊胎盘转移因子溶液的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种羊胎盘转移因子溶液的制备方法，包括以下步骤：将处理过的羊胎盘与pH为2.5-3.5的纯化水按照质量比为1∶（1-3）的比例混合，置于缝隙为8-9μm的胶体磨中研磨得匀浆液，用盐酸调节匀浆液pH为2.5-3.5，再进行研磨，得羊胎盘匀浆；加热羊胎盘匀浆至78-82℃，保温时间≥10min，冷却后用NaOH调节羊胎盘匀浆pH为6.5-6.8，然后在4000-6000r/min下离心30-45min，取上清液；用6000道尔顿的超滤膜对上清液进行超滤，得羊胎盘转移因子溶液。本发明方法简单便捷，可直接从羊胎盘中提取大量的转移因子，并且能够在常温下保存，给使用和运输节约大量的时间和金钱。
【专利说明】一种羊胎盘转移因子溶液的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物工程【技术领域】，具体涉及一种羊胎盘转移因子溶液的制备方法。【背景技术】 [0002]随着现代化养殖规模的不断扩大，目前病毒性疾病已成为困扰养殖户的一大难题，同时，由于各种原因，有时免疫往往会失败，爆发非典型性传染病，给诊断和治疗带来一定困难，依赖抗生素治疗会造成的耐药菌株的增加和交叉感染的产生，以及药物残留的严重爆发。转移因子作为免疫调节剂，在防治疾病方面发挥重要作用，提高免疫后的免疫效果，有效提高机体的抗病能力，是未来兽类免疫药物的发展方向。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种羊胎盘转移因子溶液的制备方法。
[0004]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案:
一种羊胎盘转移因子溶液的制备方法，包括以下步骤:
(1)将处理过的羊胎盘与pH为2.5-3.5的纯化水按照质量比为1: (1-3)的比例进行混合，置于缝隙为8-9Mm的胶体磨中研磨得匀浆液，用盐酸调节匀浆液pH为2.5-3.5，再进行研磨，得羊胎盘匀浆；
(2)加热羊胎盘匀浆至78-82°C，保温时间不小于lOmin，冷却后用NaOH调节羊胎盘匀浆pH为6.5-6.8，然后在4000-6000r/min下离心30_45min，取上清液；
(3)用6000道尔顿的超滤膜对上清液进行超滤，得羊胎盘转移因子溶液。
[0005]上述方法中，步骤(I)所述羊胎盘处理方法为:将冷冻健康的新鲜羊胎盘置于纯化水中融化，水温< 40°C，再用纯化水冲洗至无明显血色，控干水分，剥离脂肪、筋膜及结缔组织后，用纯化水漂洗，控干水分。
[0006]较好的，步骤(I)中纯化水的pH用盐酸进行调节；羊胎盘和纯化水的质量比为
I: 1
[0007]上述方法步骤(2)中所述NaOH为10wt%的NaOH水溶液，所述加热在水浴罐中进行，冷却为水浴冷却，冷却温度至25°C。
[0008]本发明方法简单便捷，可直接从羊胎盘中提取大量的转移因子，并且能够在常温下保存，给使用和运输节约大量的时间和金钱。
【具体实施方式】
[0009]下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不仅限于此。
[0010]实施例1
(1)取5kg冷冻的新鲜羊胎盘置于40°C纯化水中融化，再用纯化水冲洗至无明显血色，控干水分，剥离脂肪、筋膜及结缔组织后，用纯化水漂洗3次，控干水分；
(2)将处理过的羊胎盘与pH为3.5的纯化水按照质量比为1: 3的比例进行混合，置于缝隙为9Mm的胶体磨中研磨得匀浆液，用30%盐酸(v/v)调节匀浆液pH为3.5，再进行研磨一次，得羊胎盘匀浆；
(3)在水浴罐中加热羊胎盘匀浆至82°C，保温时间lOmin，冷却后用质量浓度为10%的NaOH水溶液调节羊胎盘匀浆pH为6.8，然后在6000r/min下离心30min，弃去沉淀，取上清液；
(4)用6000道尔顿的超滤膜对上清液进行超滤，得羊胎盘溶液。所得羊胎盘溶液的浓度为 18mg/ml。
[0011]实施例2
(1)取IOkg冷冻的新鲜羊胎盘置于30°C纯化水中融化，再用纯化水冲洗至无明显血色，控干水分，剥离脂肪、筋膜及结缔组织后，用纯化水漂洗4次，控干水分；
(2)将处理过的羊胎盘与pH为2.5的纯化水按照质量比为1:1的比例进行混合，置于缝隙为SMffl的胶体磨中研磨得匀浆液，用20%盐酸(v/v)调节匀浆液pH为2.5，再进行研磨一次，得羊胎盘匀浆；
(3)在水浴罐中加热羊胎盘匀浆至78°C，保温时间20min，冷却后用质量浓度为10%的NaOH水溶液调节羊胎盘匀浆pH为6.5，然后在4000r/min下离心45min，弃去沉淀，取上清液；
(4)用6000道尔顿的超滤膜对上清液进行超滤,得羊胎盘溶液,该溶液浓度为25mg/ml 。
[0012]实施例3
(1)取8kg冷冻的新鲜羊胎盘置于35°C纯化水中融化，再用纯化水冲洗至无明显血色，控干水分，剥离脂肪、筋膜及结缔组织后，用纯化水漂洗3次，控干水分；
(2)将处理过的羊胎盘与pH为3.0的纯化水按照质量比为1: 2的比例进行混合，置于缝隙为8.5Mm的胶体磨中研磨得匀衆液,用25%盐酸(v/v)调节匀衆液pH为3.0,再进行研磨一次，得羊胎盘匀浆；
(3)在水浴罐中加热羊胎盘匀浆至80°C，保温时间18min，冷却后用NaOH固体调节羊胎盘匀衆pH为6.7,然后在5000r/min下离心40min,弃去沉淀,取上清液；
(4)用6000道尔顿的超滤膜对上清液进行超滤,得羊胎盘溶液,该溶液浓度为20mg/
ml ο
[0013]利用福林酚测定法对实施例1所得羊胎盘溶液进行检测，确定羊胎盘溶液中转移因子含量，具体步骤如下:
试剂:碱性铜试液:取氢氧化钠IOg,碳酸钠50g，加水400ml使溶解,作为甲液；取酒石酸钾0.5g,加水50ml使溶解,另取硫酸铜0.25g,加水30ml使溶解,将两液混合,作为乙液。临用前，合并两液，并加水至500ml。
[0014]操作方法:(I)对照品溶液的制备取牛血清白蛋白对照品，加水制成每Iml中含
0.3mg的溶液；
(2)供试品溶液的制备:取实施例1所得羊胎盘溶液，稀释50倍得供试品溶液；
(3)标准曲线的制备:精密量取对照品溶液0.0ml,0.1mU0.3ml,0.5ml,0.7ml,0.9ml，分别置具塞试管中(分别命名为0-5号管)，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml,摇匀，各加入福林酚试液(取福林试液中的贮备液I — 16)4.0ml，立即混匀，置55°C水浴中准确反应5分钟，置冷水浴中10分钟，在650nm的波长处测定吸收度；同时以O号管作为空白。以吸收度为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标绘制标准曲线；
(4)测定法:精密量取供试品溶液1.0ml， 照标准曲线的制备项下的方法，自“加入碱性铜试液”起，依法测定，自标准曲线上查得供试品溶液的浓度，并乘以稀释倍数，得羊胎盘溶液浓度为18mg/ml。
【权利要求】
1.一种羊胎盘转移因子溶液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将处理过的羊胎盘与pH为2.5-3.5的纯化水按照质量比为1: (1-3)的比例进行混合，置于缝隙为8-9Mm的胶体磨中研磨得匀浆液，用盐酸调节匀浆液pH为2.5-3.5，再进行研磨，得羊胎盘匀浆； (2)加热羊胎盘匀浆至78-82°C，保温时间>lOmin，冷却后用NaOH调节羊胎盘匀浆pH为6.5-6.8，然后在4000-6000r/min下离心30_45min，取上清液； (3)用6000道尔顿的超滤膜对上清液进行超滤，得羊胎盘转移因子溶液。
2.如权利要求1所述的羊胎盘转移因子溶液的制备方法，其特征在于，步骤(I)所述羊胎盘处理方法为:将冷冻健康的新鲜羊胎盘置于纯化水中融化，水温< 40°C，再用纯化水冲洗至无明显血色，控干水分，剥离脂肪、筋膜及结缔组织后，用纯化水漂洗，控干水分。
3.如权利要求1所述的羊胎盘转移因子溶液的制备方法，其特征在于，步骤(I)中纯化水的PH用盐酸进行调节；羊胎盘和纯化水的质量比为1:1。
4.如权利要求1所述的羊胎盘转移因子溶液的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述NaOH为10wt%的NaOH水溶液，所述加热在水浴罐中进行，冷却为水浴冷却，冷却温度至25。。。
【文档编号】A61K35/50GK103463131SQ201310434286
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月23日 优先权日:2013年9月23日
【发明者】杨春辉, 李灵娟, 柴保国, 吕凤霞, 张军强 申请人:河南牧翔动物药业有限公司