土茯苓提取物在制备降脂减肥药物及保健食品中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于中药领域，涉及土茯苓提取物在制备降脂减肥药物及保健食品中的应用。该土茯苓提取物包含5-O-咖啡酰基莽草酸、落新妇苷、异落新妇苷、新落新妇苷、新异落新妇苷、花旗松素、黄杞苷、异黄杞苷、白藜芦醇。动物实验表明土茯苓提取物可显著减少小鼠腹腔脂肪重量，减轻小鼠体重，同时降低小鼠血清中甘油三脂和总胆固醇浓度，效果强于落新妇苷单一成分。本发明药物取自天然中药，组分间具有协同增效降脂减肥效果，减肥效果好，拓展了土茯苓应用的范围。
【专利说明】土茯苓提取物在制备降脂减肥药物及保健食品中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属于药物领域，尤其涉及一种中药提取物在降脂减肥药物及保健食品中的应用。
【背景技术】
[0002]随着人民生活水平的提高，因能量摄入过多(高脂、高糖膳食)而引起的肥胖、高血脂等问题日益严重。肥胖不仅影响体形，更重要的是它与糖尿病，高血压等疾病的发病正相关。高血脂是造成动脉粥样硬化的主要因素，进而可能引发血栓及心肌梗塞等多种心脑血管疾病。调查数据表明中国有11%的儿童及30%的成人超重，42%的儿童至少存在一种糖脂代谢指标异常，中国面临心血管疾病发病率剧增风险。因此，研究开发出安全有效的降脂减肥的药物或保健食品具有极为重要的社会意义。
[0003]土获茶是百合科菝葜属植物光叶菝葜(Smilax glabra Roxb.)的根莖,是中国药典收录的常用中药，也是卫生部允许在保健食品中使用的中草药之一。化学成分研究表明土茯苓主要含有落新妇苷、黄杞苷等黄酮物质；另外，它也含有白藜芦醇、莽草酸、5-0-咖啡酰莽草酸等芪类及酚酸类物质。但目前，尚未有土茯苓提取物降脂减肥方面的研究报道。我们研究发现土茯苓提取物可以显著减少小鼠腹腔脂肪重量，减轻小鼠体重，同时降低小鼠血清中甘油三脂和总胆固醇浓度，具有很好的降脂减肥作用，在降血脂及减肥药物和保健食品方面具有重要的应用价值。
【发明内容】
[0004]本发明目的在于提供土茯苓提取物在制备降脂减肥药物及保健食品中的应用。
[0005]具体包括如下技术方案:
土茯苓提取物在制备降脂减肥药物及保健食品中的应用。
[0006]所述土茯苓提取物中包含5-0-咖啡酰基莽草酸、落新妇苷、异落新妇苷、新落新妇苷、新异落新妇苷、花旗松素、黄杞苷、异黄杞苷、白藜芦醇；
所述的土茯苓提取物提取步骤包括:土茯苓药材粉碎，乙醇超声提取，减压回收乙醇，离心后获得上清液；往上清液中加入β -环糊精-淀粉树脂,震荡吸附后过滤,树脂用乙醇洗脱两次，收集洗脱液，回收乙醇后4(T50°C真空干燥，获得土茯苓提取物。
[0007]提取步骤优选为:土茯苓药材粉碎过40目筛，用10倍体积60%乙醇超声提取，60°c减压回收提取溶剂中乙醇，离心后获得上清液；往上清液中加入与土茯苓药材等重量的40-60目β -环糊精-淀粉树脂，震荡吸附30 min后过滤，树脂用60%乙醇洗脱两次，收集洗脱液，回收乙醇后4(T50°C真空干燥，获得土茯苓提取物。
[0008]该降脂减肥药物还包括药学上可接受的辅料，如淀粉、环糊精等。可依照剂型需要添加常用辅料。
[0009]该降脂减肥保健品可以依照保健品的制备需要加入常用的辅料，做成各种剂型。这是常规技术，不再赘述。[0010]本发明的有益效果是:(1)原料采用天然中药原料，更为安全。(2 )本土茯苓提取物制备的药物减肥效果好，拓展了土茯苓的用途。(3)落新妇苷经动物实验表明具有降脂减肥作用，同时结果也表明土茯苓提取物降脂减肥作用更强，表明落新妇苷与土茯苓提取物中的其他成分在降脂减肥上具有协同增效作用，具有意想不到的效果。
[0011]为更好的说明本发明的实质，下面用土茯苓提取物降脂减肥的实验及结果来进一步说明。
[0012]土茯苓提取物:土茯苓粉碎过40目筛，用10倍体积60%乙醇超声提取，60 °C减压回收提取溶剂中乙醇，离心后获得上清液。往上清液中加入与土茯苓药材等重量的40-60目环糊精-淀粉树脂，震荡吸附30 min后过滤，树脂用60%乙醇洗脱两次，收集洗脱液，回收乙醇后40-50°C真空干燥，获得土茯苓提取物。
[0013]图1为该土茯苓提取物的高效液相色谱图(HPLC)。所用HPLC系统为Waters 600，配备双波长检测器及在线脱气系统。色谱柱为Agilent Zorbax SB C18柱(250 mmX4.6mm 1.d., 5 μ m)。流动相为乙腈(A)及0.1%醋酸水溶液(B)。线性梯度程序为0 - 15min，16 - 21% A; 15-40 min, 21 -40% A。流速为 1 mL/min。进样量为 10 μ L，检测波长为291 nm。图中峰I为5_0_咖啡酰基莽草酸，峰3为落新妇苷，峰2、5、6为落新妇苷异构体(异落新妇苷、新落新妇苷、新异落新妇苷)，峰4为花旗松素，峰7、8为黄杞苷和异黄杞苷，峰9为白藜芦醇，各化合物分子结构见图2。峰2，3，4，5，6，7，8为黄酮化合物，将它们峰面积之和代入落新妇苷标准曲线，计算得到提取物中总黄酮含量(以落新妇苷计)。分析结果表明提取物中落新妇苷所占比例很大，约为50%。
[0014]其降脂减肥效果实验如下:
落新妇苷:纯度>98%，购自上海同田生物技术有限公司。
[0015]取土茯苓提取物1份，加入环糊精两份，混匀后提高其水溶性。取落新妇苷I份，加入环糊精两份，混匀。
[0016]70只4周龄雌性ICR小鼠随机分为7组(I、II、III、IV、V、VI和VII组)，每组
10只。其中，I组为基础对照组，喂食基础饲料；II组为高脂对照组，喂食高脂饲料；III、IV和V喂食高脂饲料，并且在饮用水中添加土茯苓提取物，以其中总黄酮计，总黄酮浓度分别为I mg/ml (III组)、2 mg/ml (IV组)和4 mg/ml (V组)；VI和VII组喂食高脂饲料，并且在饮用水中添加落新妇苷，浓度分别为I mg/ml (VI组)、2 mg/ml (VII组)。所述高脂饲料组成为85%基础饲料+10%猪油+5%蔗糖。所有小鼠自由采食和饮水，饲养8周，每周称体重。实验结束后,从心脏采血,分离血清,分析小鼠血清中甘油三酯和胆固醇浓度；解剖动物采集小鼠腹腔内脂肪组织、脾、肾、肝脏等组织并称重。
[0017]表一为不同处理组小鼠体重与饲养时间关系。由表一知，高脂对照组小鼠体重增加显著快于基础饲料对照组，体重差异有统计学意义(P〈0.05)。与高脂对照组相比，在饮用水中添加土茯苓提取物可显著降低小鼠体重增加，体重差异有统计学意义(p〈0.05)，并且浓度越高，效果越显著。与高脂对照组相比，添加落新妇苷也可降低小鼠体重，但体重差异无统计学意义(P>0.05)。表二为不同处理组小鼠在第三周和第七周的平均摄食量和饮水量。由表二可知，与高脂对照组相比，在饮用水中添加土茯苓提取物或落新妇苷不会减少小鼠的摄食量和饮水量，说明各组小鼠体重增加不同不是由摄食量引起的。
[0018]小鼠解剖后，取腹腔脂肪、肝脏、肾脏及脾脏称重，统计结果见表三。实验结果表明，与基础饲料组相比，高脂对照组小鼠腹腔脂肪重量显著增加(P〈0.05)。与高脂对照组相t匕，在饮用水中添加土茯苓提取物可显著减少小鼠腹腔脂肪重量(P〈0.05)。与高脂对照组相比，添加落新妇苷也可减少小鼠腹腔脂肪重量，但差异无统计学意义(P>0.05)。肝脏、肾脏及脾脏称重结果表明各组之间无显著差异，说明土茯苓提取物和落新妇苷均对小鼠器脏无影响，不影响小鼠健康。
[0019]血清中甘油三脂和总胆固醇指标测定结果表明(表四)，与基础饲料组相比，高脂对照组小鼠血清中甘油三脂和总胆固醇浓度显著升高(P〈0.05)。与高脂对照组相比，在饮用水中添加土茯苓提取物可显著降低小鼠血清中甘油三脂和总胆固醇浓度(P〈0.05)。与高脂对照组相比，添加落新妇苷也可降低小鼠血清中甘油三脂和总胆固醇浓度，但差异无统计学意义(P>0.05)。
[0020]以上实验结果表明，土茯苓提取物可以显著减少小鼠腹腔脂肪重量，减轻小鼠体重，同时降低小鼠血清中甘油三脂和总胆固醇浓度，差异具有统计学意义(P〈0.05)。而落新妇苷单一组分，虽然也可以减轻小鼠体重，降低小鼠血清中甘油三脂和总胆固醇浓度，但差异不显著(p>0.05)。
[0021]HPLC分析结果表明土茯苓提取物中，除主要含有落新妇苷外，还含有落新妇苷异构体、花旗松素、黄杞苷和异黄杞苷等黄酮成分，另外也含有5-0-咖啡酰基莽草酸、白藜芦醇等酚酸和芪类成分。这些成分中落新妇苷经动物实验表明具有降脂减肥作用，同时结果也表明土茯苓提取物降脂减肥作用更强，表明落新妇苷与土茯苓提取物中的其他成分在降脂减肥上具有协同增效作用，赋予土茯苓提取物更好的降脂减肥作用，效果强于其中主要成分落新妇苷单一组分。土茯苓是国家卫生部允许在保健食品中使用的中草药之一，因此土茯苓提取物在降脂减肥保健品及药品方面具有广阔的应用前景。
[0022]表一不同饲养时间小鼠体重表(平均值土SE，n=10)
【权利要求】
1.土茯苓提取物在制备降脂减肥药物及保健食品中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于含有5-0-咖啡酰基莽草酸、落新妇苷、异落新妇苷、新落新妇苷、新异落新妇苷、花旗松素、黄杞苷、异黄杞苷、白藜芦醇。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的土茯苓提取物提取步骤包括:土茯苓药材粉碎，乙醇超声提取，减压回收乙醇，离心后获得上清液；往上清液中加入β -环糊精-淀粉树脂，震荡吸附后过滤，树脂用乙醇洗脱两次，收集洗脱液，回收乙醇后4(T50°C真空干燥，获得土茯苓提取物。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述提取步骤:土茯苓药材粉碎过40目筛，用10倍体积60%乙醇超声提取，60 °C减压回收提取溶剂中乙醇，离心后获得上清液；往上清液中加入与土茯苓药材等重量的40-60目β-环糊精-淀粉树脂，震荡吸附30 min后过滤，树脂用60%乙醇洗 脱两次，收集洗脱液，回收乙醇后4(T50°C真空干燥，获得土茯苓提取物。
【文档编号】A61K36/896GK103463531SQ201310445918
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月27日 优先权日:2013年9月27日
【发明者】张清峰, 付莹娟, 郭玉显 申请人:张清峰