一种美洲大蠊的超高压提取方法
【专利摘要】本发明公开了一种美洲大蠊的超高压提取方法，包括如下步骤：（1）取美洲大蠊粉末，加入水或浓度为50%～90%乙醇溶液，超高压提取1～5次，每次5～20min，即得提取液，其中，超高压提取的压强为100-800MPa，温度为20～80℃；（2）过滤步骤（1）的提取液，得上清液，浓缩，得浓缩液；（3）将步骤（2）的浓缩液冷藏24～48h，去除上层油脂，离心，得上清液，浓缩，干燥，粉碎，即可。本发明超高压提取方法可以有效提取美洲大蠊的有效成分，收率高，操作简便，应用前景良好。
【专利说明】一种美洲大蠊的超高压提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种美洲大蠊的超高压提取方法。
【背景技术】
[0002] 美洲大蠊（Periplaneta americana)为昆虫纲有翅亚纲蜚蠊目蜚蠊科大蠊属昆 虫，俗称"蟑螂"，其入药始载于《神农本草经》，其中把它列为中品，谓"味：咸、寒；治：血瘀 证坚寒热、破积聚、喉咽闭、内寒无子"。近些年来随着我国对传统中医药资源研究开发的重 视，有些学者其进一步研究并取得了可喜的成就，以美洲大蠊醇提物纯化制成的产品"康复 新液"，在烧伤、烫伤等外伤创面的治疗上取得的良好疗效。
[0003] 美洲大蠊的有效成分有氨基酸、肽类、蜚蠊酮以及微量元素等。目前，美洲大蠊的 提取通常采用浸提法、回流提取法、闪式提取法等常规方法，如专利号：ZL200610021993. 6， 发明名称："美洲大蠊提取物、含该提取物的药物组合物及其制备方法"的专利中公开了 一种美洲大蠊提取的制备方法，包括如下步骤：a、取美洲大蠊粉碎，加石油醚，在温度5? 20°C下浸泡，过滤，滤渣挥干；b、取步骤a所得滤渣，采用水提醇沉或醇提水沉法提取，静 置；静置后的药液，弃上层油脂，过滤，得下层药液；其中，水提醇沉法中醇沉时，加入的乙 醇浓度为：75?95%w/w ;或，醇提水沉法时，加入的乙醇浓度为：60?80%w/w ;c、所得b步 骤所得药液，浓缩至相对密度为1. 20?1. 25,得清膏；d、按每IOOOg美洲大蠊使用40? 60ml甘油的用量取甘油，与c步骤所述的清膏混合，即得美洲大蠊提取物。然而，现有提取 方法难以有效保留氨基酸和肽等有效成分。
[0004] 超高压提取（u ltrah igh-pressure ex traction, UHPE)，也称超高冷等静压提 取，是指用100?IOOOMPa的流体静压力作用于提取溶剂和中药的混合液上，并在预定压力 下保持一段时间，使植物细胞内外压力达到平衡后迅速卸压。由于细胞内外渗透压力忽然 增大，细胞膜的结构发生变化，使得细胞内的有效成分能够穿过细胞的各种膜而转移到细 胞外的提取液中，达到提取中药有效成分的目的。超高压提取可以有效提取黄酮类、皂苷 类、多糖类和生物碱类等有效成。
[0005] 目前，未见采用超高压方法提取美洲大蠊的报道。
【发明内容】
[0006] 本发明提供了一种新的美洲大蠊的超高压提取方法。
[0007] 本发明美洲大蠊的超高压提取方法，包括如下步骤：
[0008] (1)取美洲大蠊粉末，以水或浓度为50%?90%乙醇溶液为溶剂，超高压提取1? 5次，每次5?20min，即得提取液，其中，超高压提取的压强为100-800MPa，温度为20? 80 0C ；
[0009] (2)过滤步骤（1)的提取液，得上清液，浓缩，得浓缩液；
[0010] (3)将步骤（2)的浓缩液冷藏24?48h，去除上层油脂，离心，得上清液，浓缩，干 燥，粉碎，即可。
[0011] 步骤（I)中，美洲大蠊粉末的粒度为20?80目。
[0012] 步骤（1)中，所述溶剂的用量为美洲大蠊的6?10倍（v/w)。优选地，所述溶剂的 用量为美洲大蠊的6?8倍（v/w)。
[0013] 步骤（1)中，所述乙醇溶液的浓度为65%?75%。优选地，所述乙醇溶液的浓度为 70%。
[0014] 步骤（1)中，所述超高压提取的次数为2?3次，提取时间为15?20min。
[0015] 步骤（1)中，所述超高压提取的压强为200?600MPa。
[0016] 步骤（1)中，所述超高压提取的温度为55?70°C。优选地，所述超高压提取的温 度为60°C或70°C。
[0017] 步骤（2)中，所述上清液浓缩至相对密度为1. 05?1. 25 (50°C测）。
[0018] 步骤（3)中，所述冷藏的温度为0?15°C。
[0019] 步骤（3)中，所述离心的温度为5?15°C，转速10000r/min。
[0020] 本发明还提供了前述方法制备的美洲大蠊提取物，以及所述提取物在制备促伤口 愈合的药物以及治疗烧伤或烫伤的药物中的用途。
[0021] 目前通常采用的浸提、回流提取、闪式提取方法，制得的美洲大蠊提取物有效成分 含量低，其中，氨基酸含量最高仅为8. 6% (专利申请号：201310030233. 1)。
[0022] 而本发明采用超高压提取方法，可以高效提取美洲大蠊的有效成分，收率高，制得 的提取物中，氨基酸含量最高可达19. 4%，显著高于现有方法制得的美洲大蠊提取物，低聚 肽含量最高可达31. 2%，促进创面愈合的效果显著，可以治疗烧伤和烫伤，具有良好的应用 前景。
【专利附图】
【附图说明】 图1氨基酸的标准图谱
[0023] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明权利要 求书记载的内容所实现的技术均属于本发明的范围。
【具体实施方式】
[0024] 实施例1本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0025] 称取美洲大蠊lOOOg，粉碎，加入6倍量（v/w)60%乙醇，于柔性容器装袋密封。置于 超高压提取器中，升压至300MPa，循环加压5次，每次5min，温度为40°C，卸压，开盖取样， 过滤。滤液于60°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为I. 05(50°C测)，浓缩液于(TC冷藏24小 时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为5°C，转速IOOOOr/ min。离心后上清液于60°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明美洲大蠊提取物452g。
[0026] 实施例2本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0027] 称取美洲大蠊1000g，粉碎，加入7倍量（v/w) 75%乙醇，于柔性容器装袋密封。置 于超高压提取器中，升压至400MPa，循环加压3次，每次10min，温度为50°C，卸压，开盖取 样，过滤。滤液于70°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为1.08 (50°C测)，浓缩液于5°C冷 藏36小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为1(TC，转 速lOOOOr/min。离心后上清液于70°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明美洲大蠊提取物 465g〇
[0028] 实施例3本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0029] 称取美洲大蠊lOOOg，粉碎，加入8倍量（v/w) 70%乙醇，于柔性容器装袋密封。置 于超高压提取器中，升压至400MPa，循环加压3次，每次15min，温度为60°C，卸压，开盖取 样，过滤。滤液于75°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为1.10 (50°C测)，浓缩液于KTC冷 藏48小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为15°C，转 速lOOOOr/min。离心后上清液于75°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明美洲大蠊提取物 491g。
[0030] 实施例4本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0031] 称取美洲大蠊l〇〇〇g，粉碎，加入10倍量（v/w) 80%乙醇，于柔性容器装袋密封。 置于超高压提取器中，升压至500MPa，循环加压2次，每次20min，温度为45°C，卸压，开盖 取样，过滤。滤液于80°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为1.20 (50°C测)，浓缩液于15°C 冷藏48小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为8°C，转 速lOOOOr/min。离心后上清液于80°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明美洲大蠊提取物 432g。
[0032] 实施例5本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0033] 称取美洲大蠊lOOOg，粉碎，加入8倍量（v/w)50%乙醇，于柔性容器装袋密封。置于 超高压提取器中，升压至600MPa，循环加压2次，每次10min，温度为80°C，卸压，开盖取样， 过滤。滤液于75°C减压浓缩无乙醇味，相对密度为I. 18(50°C测)，浓缩液于TC冷藏36小 时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为5°C，转速IOOOOr/ min。离心后上清液于75°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明美洲大蠊提取物416g。
[0034] 实施例6本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0035] 称取美洲大蠊lOOOg，粉碎，加入6倍量（v/w)65%乙醇，于柔性容器装袋密封。置 于超高压提取器中，升压至500MPa，循环加压3次，每次5min，温度为30°C，卸压，开盖取 样，过滤。滤液于70°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为1.07 (50°C测)，浓缩液于12°C冷 藏24小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为12°C，转 速lOOOOr/min。离心后上清液于70°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明美洲大蠊提取物 457g。
[0036] 实施例7本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0037] 称取美洲大蠊lOOOg，粉碎，加入8倍量（v/w) 75%乙醇，于柔性容器装袋密封。置 于超高压提取器中，升压至200MPa，循环加压3次，每次20min，温度为55°C，卸压，开盖取 样，过滤。滤液于65°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为1. 16 (50°C测)，浓缩液于6°C冷 藏48小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为1(TC，转 速lOOOOr/min。离心后上清液于65°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明美洲大蠊提取物 481g。
[0038] 实施例8本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0039] 称取美洲大蠊lOOOg，粉碎，加入6倍量（v/w)85%乙醇，于柔性容器装袋密封。置 于超高压提取器中，升压至400MPa，循环加压4次，每次10min，温度为20°C，卸压，开盖 取样，过滤。滤液于60°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为1.21 (50°C测)，浓缩液于5°C 冷藏36小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为8°C，转 速lOOOOr/min。离心后上清液于60°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明美洲大蠊提取物 446g。
[0040] 实施例9本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0041] 称取美洲大蠊lOOOg，粉碎，加入6倍量（v/w)65%乙醇，于柔性容器装袋密封。置 于超高压提取器中，升压至400MPa，循环加压2次，每次15min，温度为70°C，卸压，开盖 取样，过滤。滤液于80°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为1.25 (50°C测)，浓缩液于：TC 冷藏48小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为6°C，转 速lOOOOr/min。离心后上清液于80°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明美洲大蠊提取物 472g。
[0042] 实施例10本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0043] 称取美洲大蠊1000g，粉碎，加入8倍量（v/w)水，于柔性容器装袋密封。置于超高 压提取器中，升压至400MPa，循环加压2次，每次15min，温度为70°C，卸压，开盖取样，过 滤。滤液于75°C减压浓缩，相对密度为I. 10(50°C测)，浓缩液于KTC冷藏48小时，将上层 油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为KTC，转速10000r/min。离心 后上清液于80°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为本发明美洲大蠊提取物439g。
[0044] 实施例11本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0045] 称取美洲大蠊lOOOg，粉碎，加入8倍量60%乙醇，于柔性容器装袋密封。置于超高 压提取器中，升压至150MPa，循环加压3次，每次5min，温度为65°C，卸压，开盖取样，过滤。 滤液于70°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为I. 12(50°C测)，浓缩液于12°C冷藏48小时， 将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为15°C，转速IOOOOr/ min。离心后上清液于70°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为美洲大蠊提取物305g。
[0046] 实施例12本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0047] 称取美洲大蠊1000g，粉碎，加入8倍量70%乙醇，于柔性容器装袋密封。置于超 高压提取器中，升压至lOOMPa，循环加压3次，每次5min，温度为65°C，卸压，开盖取样，过 滤。滤液于70°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为I. 15(50°C测)，浓缩液于5°C冷藏48小 时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为5°C，转速IOOOOr/ min。离心后上清液于70°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为美洲大蠊提取物268g。
[0048] 实施例13本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0049] 称取美洲大蠊lOOOg，粉碎，加入8倍量80%乙醇，于柔性容器装袋密封。置于超高 压提取器中，升压至700MPa，循环加压3次，每次5min，温度为65°C，卸压，开盖取样，过滤。 滤液于70°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为I. 09(50°C测)，浓缩液于15°C冷藏48小时， 将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为l〇°C，转速IOOOOr/ min。离心后上清液于70°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为美洲大蠊提取物254g。
[0050] 实施例14本发明美洲大蠊的超高压提取方法
[0051] 称取美洲大蠊l〇〇〇g，粉碎，加入8倍量90%乙醇，于柔性容器装袋密封。置于超 高压提取器中，升压至800MPa，循环加压3次，每次5min，温度为65°C，卸压，开盖取样，过 滤。滤液于70°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为I. 06(50°C测)，浓缩液于8°C冷藏48小 时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为6°C，转速lOOOOr/ min。离心后上清液于70°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为美洲大蠊提取物221g。
[0052] 参比实施例1
[0053] 称取美洲大蠊lOOOg，粉碎，加入8倍量70%乙醇，于柔性容器装袋密封。置于超 高压提取器中，升压至900MPa，循环加压2次，每次60min，温度为60°C，卸压，开盖取样， 过滤。滤液于70°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为1. 10 (50°C测)，浓缩液于5°C冷藏 48小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为1(TC，转速 lOOOOr/min。离心后上清液于70°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为美洲大蠊提取物176g。
[0054] 参比实施例2
[0055] 称取美洲大蠊lOOOg，粉碎，加入8倍量95%乙醇，于柔性容器装袋密封。置于超 高压提取器中，升压至400MPa，循环加压2次，每次60min，温度为65°C，卸压，开盖取样， 过滤。滤液于70°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为1. 10 (50°C测)，浓缩液于8°C冷藏 48小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为1(TC，转速 lOOOOr/min。离心后上清液于70°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为美洲大蠊提取物169g。
[0056] 参比实施例3
[0057] 称取美洲大蠊1000g，粉碎，加入8倍量70%乙醇，于柔性容器装袋密封。置于超高 压提取器中，升压至400MPa，循环加压3次，每次60min，温度为65°C，卸压，开盖取样，过 滤。滤液于70°C减压浓缩至无乙醇味，相对密度为I. 15(50°C测)，浓缩液于12°C冷藏48小 时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度为5°C，转速IOOOOr/ min。离心后上清液于70°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为美洲大蠊提取物143g。
[0058] 参比实施例4
[0059] 称取美洲大蠊lOOOg，粉碎，加入70%的乙醇回流提取3次，每次分别加入8倍、6 倍、6倍，过滤，滤液于70°C减压回收乙醇。回收至无乙醇味，相对密度为1.05(50°C测)，浓 缩液于〇°C冷藏48小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温度 为l〇°C，转速lOOOOr/min。离心后上清液于75°C减压浓缩、干燥、粉碎，即为美洲大蠊提取 物 125g。
[0060] 参比实施例5
[0061] 称取美洲大蠊lOOOg，碎成粉，加入95%的乙醇回流提取3次，每次分别加入8倍、 6倍、6倍，过滤，滤液于70°C减压回收乙醇。回收至无乙醇味，相对密度为1.05 (50°C测)， 浓缩液于5°C冷藏48小时，将上层油脂用滤纸吸去，将下层液于高速冷冻离心机里离心，温 度为l〇°C，转速lOOOOr/min。离心后上清液于75°C减压浓缩、干燥、粉碎。即为美洲大蠊提 取物73g。
[0062] 实验例1各种方法制备的美洲大蠊提取物中低聚肽和氨基酸含量的检测
[0063] 一、实验方法
[0064] 取实施例1?14和参比实施例1?5制备的美洲大连提取物，分别按照如下方法 测定提取物中低聚肽和氨基酸的含量：
[0065] 低聚肽：指含2?10个氨基酸残基的肽，其相对分子量在3000以下，具有可直接 被消化道吸收、转运速度快、耗能低和不易饱和等特点。
[0066] I、低聚肽的含量测定方法
[0067] I、试剂试药：
[0068] 牛血清白蛋白国药集团化学试剂有限公司
[0069] 碱性铜试液、福林酚试液均按照《中国药典》2010年版有关项下配制
[0070] 2.仪器：
[0071] UV2450岛津紫外可见分光光度计
[0072] 3、试验方法：
[0073] 采用福林酚比色法测定提取物中低聚肽的含量。精密量取牛血清白蛋白对
[0074] 照品溶液（0· 245g · L - 1) (λ 0，(λ 2，(λ 4，(λ 6，(λ 8，L OmL 分别置试管中，加水至 I. OmL,加碱性铜试液5. OmL,摇勻，室温放置lOmin。快速加入福林酚试液0. 5mL，立即混勻， 置30°C水浴中准确反应30min，取出，放冷，照紫外-可见分光光度法，在650nm的波长处测 定吸光度，以牛血清白蛋白加入量为横坐标（X)，吸光度为纵坐标（Y)绘制标准曲线，回归 方程为Y=2. 9345X+0. 0367 (r=0. 9994)，牛血清白蛋白加入量在0. 04736?0. 23680mg线性 关系良好。
[0075] 供试品的测定：称取取实施例1?14和参比实施例1?5制备的美洲大连提取 物，加水定容至25ml，摇匀，超声提取20min，放置，吸取上清液2. 0ml，置IOml容量品中，力口 入19%三氯乙酸溶液至10ml，摇匀，放置lOmin，离心15min，精密量取上清液Iml至50买了 容量瓶中，加水至刻度，摇匀，取供试品Iml，碱性铜试液5. OmL，摇匀，室温放置lOmin。快速 加入福林酚试液〇. 5mL，立即混匀，置30°C水浴中准确反应30min，取出，放冷，照紫外-可见 分光光度法，在650nm的波长处测定吸光度。带入回归方程计算样品中低聚肽含量。
[0076] II、氨基酸的含量测定方法(方法来源：食品中氨基酸的测定方法GB/ T5009. 124-2003)
[0077] 1.原理
[0078] 食品蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后， 与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。
[0079] 2.试剂
[0080] 全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。
[0081] 2.1浓盐酸：优级纯。
[0082] 2. 2 6mol/L盐酸：浓盐酸与水1 :1混合而成。
[0083] 2.3苯酚：需重蒸馏。
[0084] 2. 4混合氨基酸标准液(仪器制造公司出售）：0· 0025mol/L
[0085] 2. 5 缓冲液：
[0086] 2. 5. 1 ρΗ2· 2的柠檬酸钠缓冲液：称取19. 6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7. 2H20)和16. 5ml 浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2. 2。
[0087] 2. 5. 2 pH3. 3的柠檬酸钠缓冲液：称取19. 6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到 1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3. 3。
[0088] 2. 5. 3 pH4. 0的柠檬酸钠缓冲液：称取19. 6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到 1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4. 0。
[0089] 2. 5. 4 pH6. 4的柠檬酸钠缓冲液：称取19. 6g柠檬酸钠和46. 8g氯化钠(优级纯） 加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6. 4。
[0090] 2. 6茚三酮溶液
[0091] 2. 6. I pH5. 2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂（LiOH. H20)168g，加进冰乙酸(优级纯） 279ml，加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠调节pH至5. 2。
[0092] 2. 6. 2茚三酮溶液：取150ml二甲基亚砜（C2H60S)和乙酸锂溶液（2. 6. l)50ml加 进4g水合茚三酮（C9H403. H20)和0. 12g还原茚三酮（C18HltlO6. 2H20)搅拌至完全溶解。
[0093] 2. 7高纯氮气：纯度99. 99%。
[0094] 2. 8冷冻剂：市售食盐与冰按1 :3混合
[0095] 3.仪器和设备
[0096] 3. 1真空泵
[0097] 3. 2恒温干燥箱
[0098] 3. 3水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20?30ml。用往离子水冲洗干 净并烘干。
[0099] 3. 4真空干燥器(温度可调节）
[0100] 3. 5日本日立（Hitachi, Japan)L-8900型全自动氨基酸分析仪天美（中国）科 学仪器有限公司
[0101] 4.检测方法
[0102] 4.1试样处理
[0103] 样品采集后用匀浆机打成匀浆(或者将样品尽量粉碎）于低温冰箱中冷冻保存，分 析用时将其解冻后使用。
[0104] 4. 2分析步骤
[0105] 4. 2. 1 称样
[0106] 正确称取一定量样品，精确到0. OOOlg。均匀性好的样品如奶粉等，使样品蛋白质 含量在10?20mg范围内；均匀性差的样品如鲜肉等，为减少误差可适当增大称样量，测定 前再稀释。将称好的样品防于水解管中。
[0107] 4. 2. 2 水解
[0108] 在水解管内加6mol/L盐酸10?15ml (视样品蛋白质含量而定)，含水量高的样 品（如牛奶）可加进等体积的浓盐酸，加进新蒸馏的苯酚3?4滴，再将水解管放进冷冻 剂中，冷冻3?5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空(接近Opsi)，然后充进高纯氮气； 再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在 110 ± I °C的恒温干燥箱内，水解22h后，取出冷却。
[0109] 打开水解管，将水解液过滤后，用往离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到 50ml容量瓶内，用往离子水定容。吸取滤液Iml于5ml容量瓶内，用真空干燥器在40? 50°C干燥，残留物用1?2ml水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用lmlpH2. 2的缓冲 液溶解，供仪器测定用。
[0110] 4. 2. 3 测定
[0111] 正确吸取〇. 200ml混合氨基酸标准，用pH2. 2的缓冲液稀释到5ml，此标准稀释浓 度为5. 00nmol/50 μ L,作为上机测定用的氨基酸标准,用氨基酸自动分析仪以外标法测定 样品测定液的氨基酸含量。
[0112] 4. 2. 4结果计算
[0113] 按下式计算
【权利要求】
1. 一种美洲大蠊的超高压提取方法，其特征在于：包括如下步骤： (1) 取美洲大蠊粉末，以水或浓度为50%?90%乙醇溶液为溶剂，在温度为20?80°C， 压强为100-800MPa条件下，超高压提取1?5次，每次5?20min，即得提取液； (2) 过滤步骤（1)的提取液，得上清液，浓缩，得浓缩液； (3) 将步骤（2)的浓缩液冷藏24?48h，去除上层油脂后，离心，得上清液，浓缩，干燥， 粉碎，即可。
2. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1)中，美洲大蠊粉末的粒度为 20?80目。
3. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1)中，所述溶剂的用量为美洲 大蠊的6?10倍（v/w); 优选地，所述溶剂的用量为美洲大蠊的6?8倍（v/w)。
4. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1)中，所述乙醇溶液的浓度为 65% ?75% ; 优选地，所述乙醇溶液的浓度为70%。
5. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1)中，所述超高压提取的次数 为2?3次，提取时间为15?20min。
6. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1)中，所述超高压提取的压强 为 200 ?600MPa ; 优选地，所述超高压提取的压强为200?400MPa。
7. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1)中，所述超高压提取的温度 为 55 ?70°C ; 优选地，所述超高压提取的温度为60°C或70°C。
8. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（2)中，所述上清液浓缩至相对 密度为1.05?1.25 (50°C测）。
9. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（3)中，所述冷藏的温度为0? 15。。。
10. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（3)中，所述离心的温度为5? 15°C，转速 10000r/min。
11. 权利要求1?10任意一项所述方法制备的美洲大蠊提取物。
12. 权利要求11所述美洲大蠊提取物在制备促伤口愈合的药物或制备治疗烧伤或烫 伤的药物中的用途。
【文档编号】A61P17/02GK104434987SQ201310456001
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2013年9月29日 优先权日:2013年9月18日
【发明者】舒梅 申请人:舒梅