乙醇注入-动态高压微射流制备茶多酚纳米脂质体的方法
【专利摘要】一种乙醇注入法结合动态高压微射流制备茶多酚纳米脂质体的方法，以茶多酚、卵磷脂、吐温-80和磷酸盐缓冲溶液为原材，采用乙醇注入-动态高压微射流法制备得到茶多酚纳米脂质体。本发明制备的茶多酚纳米脂质体平均粒径为67.4±3.0nm，zeta电位为-6.07±0.59mV，分布系数为0.220±0.010，包封率达到了79.7±5.4%，并表现出良好的缓释性，24h后仅有30.3±2.9%的茶多酚释放出来。在pH=7.4的小肠模拟环境中，茶多酚脂质体表现出良好的稳定性。
【专利说明】乙醇注入-动态高压微射流制备茶多酚纳米脂质体的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种水溶性药物纳米脂质体的制备方法，具体涉及一种乙醇注入-动态高压微射流制备茶多酚纳米脂质体的方法，可进一步应用于食品、药品、化妆品等领域。
【背景技术】
[0002]茶多酚具有抗氧化、抗癌等功能，是保健食品、药品等的潜在使用对象，但它对光、氧气敏感，使得其应用受到了限制。脂质体(liposome)是由磷脂双分子层形成的内部包含水相的封闭囊泡。研究表明，脂质体具有缓释性、细胞亲和性、组织相容性和靶向性等优点，已成功应用于生物医药、化工农业等领域。脂质体用于包裹营养素、酶、食品添加剂、食品抗菌剂等物质已显示出诱人前景。利用脂质体技术将茶多酚包封起来，可以克服茶多酚上述缺点。乙醇注入-动态高压微射流法制备的脂质体可以克服粗脂质体粒径大，不稳定等缺点，同时乙醇注入法也突破了薄膜法洗膜困难和小批量生产的障碍。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是针对现有技术的不足提供一种乙醇注入-动态高压微射流制备茶多酚纳米脂质体的方法，以提高茶多酚脂质体的稳定性，为茶多酚脂质体的开发提供理论依据和技术参考。
[0004]本发明所述一种乙醇注入-动态高压微射流制备茶多酚纳米脂质体的方法工艺步骤如下:
(1)茶多酚纳米脂质体的组份茶多酚、卵磷脂、胆固醇和吐温-80与pH=6.0浓度为0.05M/L的磷酸盐缓冲溶液的 质量体积比为:在100mLpH=6.0浓度为0.05M/L的磷酸盐缓冲溶液中:茶多酚0.25-0.75g、卵磷脂2.02-6.06g、胆固醇0.30-0.90g、吐温-80
0.51-1.53g ；
(2)按上述质量体积比称取茶多酚、卵磷脂、胆固醇和吐温-80，在40°C_50°C下溶于与磷酸盐缓冲溶液相同体积的无水乙醇中；
(3)将步骤(2)所得溶液加入到步骤(1)确定的质量体积比的pH=6.0浓度为0.05M/L的磷酸盐缓冲溶液中，搅拌形成乳液；
(4)将步骤(3)所得乳液在蒸发仪上蒸发除去乙醇得茶多酚粗脂质体；
(5)用动态高压微射流处理步骤(4)得到的粗脂质体，压力为llOMPa，处理一次得到茶多酚纳米脂质体。
[0005]本发明的有益效果是:
(1)包封率:乙醇注入-动态高压微射流法制备的茶多酚纳米脂质体具有比较高的包封率，包封率为79.7 ±5.4%。
[0006](2)粒径电位:乙醇注入-动态高压微射流法制备的茶多酚纳米脂质体的平均粒径为 67.4±3.0nm，分布系数为 0.22±0.010，电位为-6.07 ±0.59mV。
[0007](3)微观形貌图:乙醇注入-动态高压微射流法制备的茶多酚纳米脂质体，其原子力图(图1)，可以看出脂质体成球形，且粒径大小为lOOnm以下，且分布比较均匀。
[0008](4)乙醇注入-动态高压微射流法制备的茶多酚纳米脂质体表现出良好的缓释性能，透析24h后，茶多酚的释放率仅为30.3 ±2.9%。
[0009](5)碱性环境中稳定性实验:将茶多酚溶液和茶多酚纳米脂质体置于模拟胃肠道的碱性环境下，评估其稳定性，在430nm的波长下测定其氧化物的含量。具体步骤如下:将茶多酚溶液和茶多酚纳米脂质体分别用磷酸盐缓冲溶液(pH=7.4,0.05M/L)稀释，使它们的最终浓度为200μ g/mL，然后置于37°C保温。在预先设定的时间下观察颜色并其在430nm波长下测定其吸光度。在Oh时，茶多酚溶液和茶多酚纳米脂质体的吸光度都很小，分别为
0.083和0.062。到24h时后，茶多酚溶液的和茶多酚脂质体的吸光度分别达到了 1.304和
0.827。并且在相同的时间下，茶多酚纳米脂质体的吸光度远低于茶多酚溶液。如在4h时，茶多酚脂质体的吸光度为0.357，而茶多酚溶液的吸光度为0.613。并且随着时间的推移，两者之间的差值越来越大(图3)，这表明茶多酚纳米脂质体能显著提高茶多酚的稳定性。
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1:茶多酚纳米脂质体的粒径分布与原子力的微观图； 图2:茶多酚溶液和茶多酚纳米脂质体的体外释放；
图3:茶多酚溶液和茶多酚纳米脂质体在pH=7.4的环境中稳定性观察。
【具体实施方式】
[0011]实施例1
称取121.2g卵磷脂、18.lg胆固醇、30.6g吐温-80和15.0g茶多酚，45°C下完全溶解于3L无水乙醇中，将乙醇溶液缓慢注入到3L磷酸盐缓冲溶液(pH=6.0、0.05M/L)中，形成乳液，然后将其转移到圆底烧瓶中，在45°C水浴条件下真空旋转除去无水乙醇，形成均匀的悬浊液即为粗脂质体。将粗脂质体加入到动态高压微射流中，于llOMPa条件下微流化处理1次，即制备得到纳米脂质体。制得的纳米脂质体为较透明乳白色溶液。制得的茶多酚纳米脂质体的包封率为78.6%，平均粒径为68.5nm，分布系数为0.223，Zeta电位为-6.86mV,在体外释放试验中，24h后茶多酚的释放率仅为29.8%。
[0012]实施例2
称取82.5g卵磷脂、10.6g胆固醇、20.6g吐温-80和10.2g茶多酚，50°C下完全溶解于3L无水乙醇中，将乙醇溶液缓慢注入到3L磷酸盐缓冲溶液(pH=6.0、0.05M/L)中，形成乳液，然后将其转移到圆底烧瓶中，在45°C水浴条件下真空旋转除去无水乙醇，形成的均匀悬浊液即为粗脂质体。将粗脂质体加入到动态高压微射流中，于llOMPa条件下微流化处理1次，即制备得到纳米脂质体。制得的纳米脂质体为较透明乳白色溶液。制得的茶多酚纳米脂质体的包封率为75.2%，平均粒径为71.2nm，分布系数为0.219，Zeta电位为-6.08mV，在体外释放试验中，24h后茶多酚的释放率仅为26.8%。
[0013]实施例3
称取182.lg卵磷脂、28.4g胆固醇、46.8g吐温-80和22.5g茶多酚，50°C下完全溶解于3L无水乙醇中，将乙醇溶液缓慢注入到3L磷酸盐缓冲溶液(pH=6.0、0.05M/L)中，形成乳液，然后将其转移到圆底烧瓶中，在45°C水浴条件下真空旋转除去无水乙醇，形成均匀的悬浊液即为粗脂质体。将粗脂质体加入到动态高压微射流中，于llOMPa条件下微流化处理1次，即制备得到纳米脂质体。制得的纳米脂质体为较透明乳白色溶液。制得的茶多酚纳米脂质体的包封率为82.5%，平均粒径为65.4nm，分布系数为0.232，Zeta电位为-5.92mV，在体外释放试验中，24h后茶多酚的释放率仅为33.8%。
[0014]实施例4
称取138.4g卵磷脂、20.9g胆固醇、35.3g吐温-80和17.0g茶多酚，45°C下完全溶解于3L无水乙醇中，将乙醇溶液缓慢注入到3L磷酸盐缓冲溶液(pH=6.0、0.05M/L)中，形成乳液，然后将其转移到圆底烧瓶中，在45°C水浴条件下真空旋转除去无水乙醇，形成的均匀悬浊液即为 粗脂质体。将粗脂质体加入到动态高压微射流中，于llOMPa条件下微流化处理1次，即制备得到纳米脂质体。制得的纳米脂质体为较透明乳白色溶液。制得的茶多酚纳米脂质体的包封率为82.6%，平均粒径为64.5nm，分布系数为0.208，Zeta电位为-5.42mV，在体外释放试验中，24h后茶多酚的释放率仅为30.8%。
【权利要求】
1.一种乙醇注入法结合动态高压微射流制备茶多酚纳米脂质体的方法，其特征是:(1)茶多酚纳米脂质体的组份茶多酚、卵磷脂、胆固醇和吐温-80与pH=6.0浓度为0.05M/L的磷酸盐缓冲溶液的质量体积比为:在100mLpH=6.0浓度为0.05M/L的磷酸盐缓冲溶液中:茶多酚0.25-0.75g、卵磷脂2.02-6.06g、胆固醇0.30-0.90g、吐温-80.0.51-1.53g ；(2)按上述质量体积比称取茶多酚、卵磷脂、胆固醇和吐温-80，在40°C_50°C下溶于与磷酸盐缓冲溶液相同体积的无水乙醇中；(3)将步骤(2)所得溶液加入到步骤(1)确定的质量体积比的pH=6.0浓度为0.05M/L的磷酸盐缓冲溶液中，搅拌形成乳液；(4)将步骤(3)所得乳液在蒸发仪上蒸发除去乙醇得茶多酚粗脂质体；(5)用动态高压微射流 处理步骤(4)得到的粗脂质体，压力为llOMPa，处理一次得到茶多酚纳米脂质体。
【文档编号】A61K31/353GK103637989SQ201310546039
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年11月7日 优先权日:2013年11月7日
【发明者】刘伟, 邹立强, 周磊, 刘成梅, 梁瑞红, 牛静, 刘珍, 曹燕林, 彭盛峰 申请人:南昌大学