续断皂苷x在制备预防或治疗肺纤维化的药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了续断皂苷X的药物新用途，具体涉及续断皂苷X通过抑制上皮细胞间质转化和成纤维细胞增殖从而抑制肺纤维化的发生发展，达到预防或治疗肺纤维化。在上述应用中，续断皂苷X使用剂量范围是50mg～2000mg；优选50～1000mg。
【专利说明】续断皂苷X在制备预防或治疗肺纤维化的药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及续断皂苷X抑制肺纤维化的发生发展从而预防或治疗肺纤维化；具体涉及续断皂苷X通过抑制上皮细胞-间质转化(EMT)和抑制肺成纤维细胞异常活化从而抑制肺纤维化的发生发展，达到预防或治疗肺纤维化。
【背景技术】: [0002]特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)又称为隐源性致纤维化性肺泡炎(cryptogenicfibrosing alveolitis, CFA),是一种慢性炎症性间质性疾病，以普通型间质性肺炎(usual interstitialpneumonia,UIP)为特征性病理改变且病因不明。主要表现为成纤维细胞灶(fibroblastic foci)的出现致大量细胞外基质(extracellularmatrix, ECM)沉，胶原积聚，肺泡结构破坏，最终导致正常肺组织结构的破坏，是一种慢性、进行性、不可逆转也是最常见的一种致命性肺疾病[King TJ, Pardo A, SelmanM.1diopathic pulmonary fibrosis [J].Lancet.2011, 378 (9807): 1949-1961.]。临床表现为进行性呼吸困难并伴有刺激性干咳，肺功能限制性通气障碍，病情持续恶化，最终因呼吸衰竭而死亡。流行病学研究显示IPF发病率呈不断上升趋势，目前约为16.3/100, 000,且 3 年内急性恶化发生率为 20.7 [Navaratnam V, Fleming KM, West J et al.Therising incidence of idiopathic pulmonary fibrosis in the UK J.Thorax,2011,66(6):462-467.；Song Jff, Hong SB, Lim CM et al.Acute exacerbation of idiopathicpulmonary fibrosis !incidence, risk factors and outcome[J].Eur Respir J,2011,37(2):356-363.]。肺纤维化主要是肺组织受损后修复调节失控、重建异常所引起的病变，期间一系列细胞因子和生长因子等表达异常、炎症反应参与肺纤维化的发病过程。由此造成上皮细胞缺损、成纤维细胞增生和ECM积聚等主要病变，最终结果是成纤维细胞替代了行使正常功能的肺泡上皮细胞，导致了纤维化的发生。肺泡上皮细胞(AECs)的上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是一种完全分化的肺泡上皮细胞经历细胞表型改变转化成完全分化的间质细胞的过程，通常转化成肺成纤维细胞和肌纤维母细胞，与肺纤维化密切相关[Guarino M, Tosoni A, Nebuloni M.Direct contributionof epithelium to organ fibrosis:epithelial-mesenchymal transition.Hum Pathol,2009,40(10):1365-1376.].成纤维细胞异常活化分化成肌成纤维细胞，是肺纤维化合成大量的细胞外基质(ECM)的来源(Coward WR, Saini G, Jenkins G.The pathogenesis ofidiopathic pulmonary fibrosis.Ther Adv RespirDis.2010 ;4 (6):367-388.)。IPF 癒痕肌成纤维细胞参与失调伤口愈合反应，导致肺的结构扭曲和功能失调，破坏肺的气体交换(Selman M, King TE, Pardo A.1diopathic pulmonary fibrosis !prevailing andevolving hypotheses aboutits pathogenesis and implications for therapy.AnnIntern Med2001 ； 134(2):136-151；Sime PJ, 0' Reilly KM.Fibrosis of the lung andother tissues:new concepts in pathogenesis and treatment.Clin Immuno12001 ；99(3):308-319.)，所以抑制成纤维细胞异常增殖很有意义。[0003]中药续断具有补肝肾，强筋骨，续折伤，止崩漏的作用，用于腰膝酸软，风湿痹痛，崩漏，胎漏，跌扑损伤。酒续断多用于风湿痹痛，跌扑损伤，盐续断多用于腰膝酸软。续断皂苷X是从续断中提取获得的，为续断的有效成分，但续断皂苷X在制备预防或治疗肺纤维化的药理作用未见报道。本发明人通过大量的研究发现续断皂苷X可以通过抑制EMT和成纤维细胞异常活化从而在预防或治疗肺纤维化方面有明显的作用。基于此，本发明人发明了续断皂苷X通过抑制EMT和肺成纤维细胞异常活化从而抑制肺纤维化的发生发展，以达到预防或治疗IPF。
【发明内容】
[0004]本发明提供了续断皂苷X在制备预防或治疗肺纤维化的药物中的应用。
[0005]本发明提供了续断皂苷X通过抑制EMT达到预防或治疗肺纤维化的药物中的应用。
[0006]本发明提供了续断皂苷X通过抑制成纤维细胞异常活化达到预防或治疗肺纤维化的药物中的应用。
[0007]发明提供的药物在用于肺纤维化时，其使用剂量范围是50mg~2000mg;优选50 ~1000mg0
[0008]本发明还提供了由续断皂苷X和药学上可接受的载体或辅料组成的药物，该药物可以以药学常规方法制备成片剂、胶囊剂，优选以片剂形式存在。
【具体实施方式】
[0009]制备例1:制备川续断皂苷X·[0010]取川续断药材I公斤，将其粉碎，过10目筛，加10倍量(V/W) 70%乙醇浸泡过夜，回流提取两次，每次2小时，提取液过滤，回收乙醇至无醇味，加水形成混悬液，用正丁醇萃取3次，合并下层水层，上样于处理好的DlOl大孔树脂(树脂与药材重量比1: 1)，水洗3个柱体积，弃去，再用30%乙醇洗脱3个柱体积，弃去，最后用50%乙醇洗3个柱体积，收集50%乙醇洗脱液，浓缩，活性炭脱色，重结晶，即得含量为98%的川续断皂苷X6.5g。
[0011]制备例2:制备川续断皂苷X
[0012]取川续断药材I公斤，将其粉碎，过10目筛，加10倍量(V/W) 70%乙醇浸泡过夜，回流提取两次，每次2小时，提取液回收乙醇至无醇味，浓缩液加乙醇至醇浓度为80%，静置过夜；抽滤，滤液浓缩至无醇味，加5倍量水，静置过夜，抽滤，滤液上样于处理好的DlOl大孔树脂(树脂与药材重量比1:1)，0.5%氢氧化钠溶液洗2个柱体积后用水洗至中性，继用30%乙醇洗脱3个柱体积，弃去，最后用50%乙醇洗3个柱体积，收集50%乙醇洗脱液，浓缩蒸干得粗提物；取上述粗提物上硅胶柱，以三氯甲烷一甲醇(3: I)、(2: I)、(I: I)为溶剂进行梯度洗脱，收集三氯甲烧一甲醇(I: I)洗脱液，浓缩，结晶，即得含量为98%的川续断皂苷X 7.8g。
[0013]实施例3续断皂苷X片剂制备
[0014]称取50.0g续断皂苷X、55.0g糖粉、70.0g乳糖和23.0g羧甲基淀粉钠充分混合均匀后过100目筛，加入适量的3% PVPk3ci水溶液适量制软材，20目筛制粒，60°C干燥3小时，18目筛整粒，加入2.0g硬脂酸镁，混合均匀后浅凹冲压，调节片重约200mg，即得。【具体实施方式】
[0015]试验例I续断皂苷X对TGF- ^ I刺激A549细胞钙粘蛋白表达的影响
[0016]1.1实验材料
[0017]DMEM培养基为Gibco公司产品，新生牛血清为杭州四季青公司产品，TGF-P I购自PeproTech公司,A549细胞购自中国典型培养物保藏中心,用含10%胎牛血清(Hyclone公司)的低糖DMEM培养基(GIBC0公司)，常规培养于5%的C02，37°C人工培养箱中，细胞呈贴壁生长。E-cadherin —抗购买于sigma公司。
[0018]续断皂苷X(纯度98.5%，滨州医学院药物化学研究室制备)
[0019]1.2试验方法
[0020]当细胞生长融合至70% -80%，用无血清培养基饥饿24h，换新鲜培养液，将传代的A549细胞分为:(I)阴性对照组；(2) TGF- ^ I处理组(10 u g/L作用时间48h) ； (3)TGF- P I处理组(10 u g/L作用时间48h) +续断皂苷X 0.3 u M ； (4) TGF- ^ I处理组(10 u g/L作用时间48h) +续断皂苷X I u M ； (5) TGF- ^ I处理组(10 u g/L作用时间48h) +续断皂苷X 3Mm; (6) TGF-P I处理组(IOii g/L作用时间48h) +续断皂苷X 30 u M0 48h后收获并裂解细胞提取细胞总蛋白。BCA蛋白测定试剂盒(Pierce公司)测定蛋白浓度后，取50 y g样品蛋白进行10%的十二烷基磺酸钠2聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶变性电泳、然后转至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜,加入上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin) —抗，0-actin作内参，Westernblot检测细胞E-cadherin(上皮细胞标记物)蛋白的表达。以TGF-P I未刺激组作为对照，分析E-cadherin蛋白的表达差异。
[0021]1.3试验结果
[0022]表1续断皂苷X对TGF- ^ I刺激A549细胞的E-cadherin表达影响(n = 6)
[0023]
【权利要求】
1.续断皂苷X在制备预防或治疗肺纤维化的药物中的应用。
2.续断皂苷X是通过抑制上皮细胞-间质转化达到预防或治疗肺纤维化的药物中的应用。
3.续断皂苷X是通过抑制成纤维细胞异常活化达到预防或治疗肺纤维化的药物中的应用。
4.续断皂苷X在用于肺纤维化治疗时，其使用剂量范围是50mg~2000mg;优选使用剂量 50 ~lOOOmg。
5.由续断皂苷X和药学上可接受的载体或辅料组成的药物，该药物可以以药学常规方法制备成片剂、胶囊 剂；优选以片剂形式存在。
【文档编号】A61K31/704GK103622983SQ201310600880
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2013年11月18日 优先权日:2013年11月18日
【发明者】蒋王林, 吕长俊, 栾海云, 亢泽春 申请人:滨州医学院