水杨酸酰胺衍生物及制备方法
【专利摘要】本发明公开了制备以下式1化合物的方法。包括步骤：使2,5-二甲氧基苯胺溶于有机溶剂中与O-烷酰基水杨酰氯的乙酸乙酯反应得到N-(2-烷酰氧基苯甲酰基)-2,5-二甲氧基苯胺；接着在二乙酰氧基碘苯存在下与R3OH反应得到3-(O-烷酰基水杨酰氨基)-4,4-二烷氧基-2,5-环己二烯酮；接着在有机溶剂(例如四氢呋喃、甲醇、二甲基甲酰胺，特别是例如二甲基甲酰胺)中，在过氧化氢水溶液及无机碱存在下反应得到5,6-环氧-4,4-二烷氧基-3-水杨酰氨基-2-环己烯酮；接着在三氟化硼乙醚络合物存在下反应生成5,6-环氧-2-水杨酰氨基-2-环己烯-1,4-二酮；最后经还原得到式(1)表示的5,6-环氧-4-羟基-3-水杨酰氨基-2-环己烯酮(DHM2EQ)。本发明还涉及制备5,6-环氧-4,4-二烷氧基-3-水杨酰氨基-2-环己烯酮的方法。。
【专利说明】水杨酸酰胺衍生物及制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及式I所示水杨酸酰胺衍生物及其药学上可接受的盐，以及其制备方法。该水杨酸酰胺衍生物可供治疗癌症、炎症、自身免疫疾病、糖尿病和糖尿病并发症、感染、心血管疾病和缺陷再灌注损伤。
【背景技术】
[0002]核因子kB(NF_kB, Nuclear factor-kappa B)活化参与各种疾病，包括癌症、糖尿病、心血管疾病、自身免疫疾病、病毒复制、脓毒性休克、神经变性疾病、运动失调性毛细血管扩张症(AT)、关节炎、哮喘、炎性肠病和其它炎性病症。例如，革兰氏阴性细菌脂多糖(LPS)活化NF-K B可产生脓毒性休克，因为NF-κ B过度激活许多细胞因子和修饰酶的转录，它们的表达延长可不利地影响关键器官，例如心脏和肝脏的功能(Arcaroli等.，2006 ；Niu 等.，2008)。
[0003]类似地，自身免疫疾病，例如全身性红斑狼疮也可能涉及NF-K B的活化。NF-κ B转录因子对于适当的树突细胞成熟至关重要，其丧失是全身性红斑狼疮的标志(Kalergis等.,2008 ;Kurylowicz和Nauman, 2008),此外,在慢性阿尔茨海默病中，淀粉样蛋白β肽导致反应活性氧中间体的产生，通过NF-kB位点间接活化基因表达(Giri等.，2005)。
[0004]骨的破坏性侵蚀或骨质溶解是炎性病症，例如类风湿性关节炎(RA)、牙周病和假体周围骨质溶解的主要并发症。RA是影响约1.0%美国成年人的自身免疫疾病，女性和男性之比是2.5到I (Lawrenc e等.,1998)。其标志是导致主要病态的渐进性关节破坏。牙周病非常普遍，影响全球高达90%的人口。众所周知其是成年人牙齿丧失的主要原因(Pihlstrom等.，2005)。尽管很普遍，但牙周骨侵蚀的发生机制仍不清楚，虽然看来是宿主对口腔中存在的病原微生物的反应触发该过程。外源性植入物器件周围的慢性骨再吸收作用导致假体周围骨质溶解，直至丧失固定作用(Harris，1995)，据信其是针对磨损碎片颗粒的先天免疫反应所致，获得性免疫系统影响不大(Goldring等.，1986)。
[0005]虽然这些病症由不同原因引发，通过各种途径而进展，但这些病症的病理性过程中的重要共同因素是发炎组织中NF-κ B途径的组成型活化驱动的促炎性细胞因子过度产生。与全身性、激素调控的骨病理状况，例如骨质疏松症不同，这些病症中发现的骨侵蚀大多定位于发炎的组织。在许多这些疾病中发现，这些发炎组织还产生促炎细胞因子，即，TNF-α、IL-1和IL-6，这些促炎细胞因子进而参与破骨细胞分化信号传导和骨再吸收活性。因此，炎性骨质溶解是发炎组织中NF- K B驱动促炎细胞因子推动的破骨细胞募集和活化增强所致。
[0006]炎性肠病(IBD)包括涉及胃肠道的许多慢性复发性炎性疾病。IBD的两种最常见的形式是克罗恩病和溃疡性结肠炎，二者的区别在于独特的组织病理学特性和免疫应答(Atreya等.，2008 ;Bouma和Strober，2003)。目前的治疗疗效有限，还可能有副作用使得患者和医生渴望能控制这些疾病的慢性复发性炎症性质的新疗法。
[0007]虽然导致克罗恩病和溃疡性结肠炎的确切病因尚未知，但通常认为是粘膜免疫系统对正常肠菌群的不当和正进行的活化导致(Tilg等.，2008)。因此，驻留型巨噬细胞、树突细胞和T细胞活化并开始主要分泌NF- K B-依赖性趋化因子和细胞因子。NF- K B介导关键促炎介质的过度产生导致人IBD和结肠炎动物模型的启动和进展(Neurath等.，1998 ；Wirtz和Neurath，2007)。具体地说，IBD患者的巨噬细胞表现出高水平的NF- κ B DNA结合活性并伴有白介素(IL) 1、IL6和肿瘤坏死因子TNFa的产生增加(Neurath等.，1998)。此外，NF-κ B在活化T辅助细胞I(Thl)和T辅助细胞2(Th2)细胞因子中起到关键作用，二者是促进和维持炙症所需(Barnes，1997)。由于NF- κ B在IBD中起到的核心作用，人们付出大量努力试图开发靶向该途径的疗法。
[0008]NF-KB显示在来自乳腺、卵巢、结肠、胰腺、甲状腺、前列腺、肺、头颈、膀胱和皮肤肿瘤的许多癌症衍生细胞系中组成型表达(Calzado等.，2007)。B-细胞性淋巴瘤、霍奇金病、T-细胞性淋巴瘤、成人T细胞白血病，急性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病和急性骨髓性白血病中也观察到。NF-κ B作为防御性应答的一部分是正常炎症的关键介质；然而，慢性炎症可导致癌症、糖尿病和许多上述其它疾病。己鉴定了几种促炎基因产物在致癌过程、血管发生、侵袭和肿瘤细胞转移中介导关键作用。这些基因产物有 TNF- α 及其超家族的成员，IL-1 a、IL-1D、IL-6、IL-8、IL-18、趋化因子、ΜΜΡ-9、VEGF,C0X-2和5-L0X。所有这些基因的表达主要由转录因子NF- κ B调控，其在大多数肿瘤中有组成型活性并由致癌物(例如香烟的烟)、肿瘤促进剂、致癌性病毒蛋白(HIV-tat、KHSV,EBV-LMPl、HTLVl-tax、HPV、HCV 和 HBV)、化疗剂和 Y 射线诱导(Aggarwal 等.，2006)。这些观察结果暗示抑制NF-κ B的抗炎剂应该可能用于预防和治疗癌症。
[0009]流感病毒蛋白血凝素还活化NF- κ B,该活化可导致细胞因子的病毒诱导和一些流感相关症状(Flory 等.，2000 ；Pahl 和 BaeueR1e, 1995)。
[0010]动脉粥样硬化相关的低密度脂蛋白的氧化脂质活化NF-K B，然后活化其它基因，例如炎性细胞因子(Liao等.，1994)。此外，动脉粥样硬化易感小鼠在喂食致动脉粥样硬化饮食时显示NF- κ B活化，因为 它们对脂质过氧化产物累积、炎性基因诱导和NF- κ B转录因子活化相关的动脉粥样硬化病损形成敏感(Liao等.，1994)。动脉粥样硬化的另一重要原因是凝血酶，其通过NF- κ B活化而刺激血管平滑肌细胞增殖(Maruyama等.，1997)。I κ B阻遏蛋白的截短形式(IkBci)显示是电离辐射超敏性的原因，在组成型水平NF-κ B-活化的运动失调性毛细血管扩张症(AT)细胞中其对DNA合成调控有缺陷(Jung等.，1995)。AT细胞的I κ Ba中的该突变显示导致NF-κ B途径组成型活化的阻遏蛋白灭活。鉴于所有这些发觋，NF-κΒ的异常活化或表达明显与各种病理学状况相关。
[0011]人单核细胞中，Hiv-1的感染和生命周期与NF-K B途径紧密相连。病毒感染导致NF- κ B活化，从而产生AIDS标志性的T细胞过度刺激和最终耗尽(综述见(Argyropoulos和Mouzaki，2006)。例如，NF-κ B调节作为HIV-1关键受体的CCR5的表达(Liu等.，1998)。CCR-5启动子的缺失分析证明3’ -远端NF-κ Β/ΑΡ-1位点的丧失使得转录降低>95%(Liu等.，1998)。这些研究提示NF-κ B的组成型表达导致CCR-5受体信息急剧降低。由于靶T-细胞表面上CCR5的表达水平影响HIV-1进入动力学特性(Ketas等.，2007 ；Platt等.，1998 ；Reeves等.，2002)，下调CCR5可约束大量产生病毒库的感染细胞群扩散。还有报道说NF- κ B影响CXCR4表达(Helbig等.，2003)，提示NF- κ B抑制剂可能同样有效抗感染后期期间出现的Χ4-向性分离物。整合的DNA-前-病毒的转录需要NF-κ B(Baba，2006 ；1rdanskiy 等.,2002 ；Mukerjee 等.,2006 ；Palmieri 等.,2004 ；Rizzi 等.,2004 ；Sui等.，2006 ；ffilliams等.，2007)。事实上，缺乏NF-κ B活化导致具有潜伏病毒的细胞群产生，这是消除受感染患者的病毒的主要障碍(Williams等.，2006)。
[0012]NF-κΒ促进超过150种靶基因对炎性刺激物起反应而表达。这些基因包括白介素-1、-2、-6和肿瘤坏死因子受体(TNF-R)(这些受体介导凋亡并起到炎症调节剂的作用)以及编码免疫受体、绌胞粘附分子和酶，例如环加氧酶-1I和诱生型-氧化氮核酶(iNOS)的基因(Karin，2006 ;Tergaonkar，2006)。其还在病毒感染，例如HCV和HIV-1相关疾病的进展中起关键作用。
[0013]NF-κ B 家族的成员包括 RelA/p65、RelB, c_Rel、p50/pl05 (NF_ κ BI)和 ρ52/plOO (NF- κ B2) (Hayden 和 Ghosh, 2004 ；Hayden 等.，2006a ；Hayden 等.，2006b)。Rel 家族成员作为同源二聚体或异源二聚体起作用，对位于NF-κ B-调苄基因的启动子结构域内的顺式结合兀件的特异性不同(Bosisio等.，2006 ；Natoli等.，2005 ；Saccani等.，2004)。经典NF- κ B-由RelAlp65和p50异源二聚体构成，是NF- κ B研究得最清楚的形式(Burstein和Duckett，2003 ;Hayden和Ghosh，2004)和其中的参考文献)。细胞刺激前，经典NF-κ B驻留在细胞质中作为与I κ Ba抑制蛋白结合的无活性复合物。NF-κΒ的诱导剂，例如细菌脂多糖、炎性细胞因子或HIV-1Vpr蛋白通过活仳磷酸化I κ Ba的I κ B-激酶复合物(IKK)而从细胞质复合物释放活性 NF-κ B (Greten 和 Karin, 2004 ；Hacker 和 Karin, 2006 ; Israel,2000 ；Karin, 1999 ；Scheidereit, 2006)。I κ B的磷酸为随后的泛素化和通过26S蛋白酶体降解提供了标记。游离NF-κ B 二聚体移位进入核，在核中刺激它们的靶基因转录。
[0014]外消旋脱羟基甲基环氧醌霉素(DHMEQ)的分子设计是依据从拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis)分离的抗生素环氧醌霉素C(Chaicharoenpong等.2002)。DHMEQ是采用五步骤从2，5-二甲氧基苯胺合成的外消旋物。利用手性柱分离对映体产生(+)和(_)对映体。(_)-对映体显示抑制NF- κ B强于(+)-对映体(Umezawa等.2004)。DHMEQ经鉴定为特异性抑制NF-κ B移位入核(·Ariga等.2002)。具体地说，其以1:1的化学计量比共价修饰ρ65和其它Rel同源蛋白中的特定半胱氨酸残基(Yammamoto等.2008)。作为NF-κ B抑制剂，在各种疾病的动物模型中广泛测试了 DHMEQ，证明包括洽疗实体瘤、血液恶性肿瘤、关节炎、肠缺血和动脉粥样硬化在内的广谱效力(Watanabe等.2006)。因此，DHMEQ可用作癌症和炎症的治疗(Takeuchi等.2003)。CN1368954A(中国专利申请号00811487.0)公开了DHMEQ(即其中的DHM2EQ，DHM2EQ和DHMEQ 二者在本文中具有相同的含义，可互换使用，在本发明中亦可称为式I化合物或式I化合物)的合成方法，其中在步骤3中，在溶剂四氢呋喃中、在过氧化氢和氢氧化钠的存在下，3- (O-乙酰基水杨酰氨基)_4，4- 二甲氧基-2，5-环己二烯酮反应生成5，6-环氧-4，4- 二甲氧基-3-水杨酰氨基-2-环己烯酮，反应物需要通过繁杂的处理工艺并且所得产物品质较差。为其后续工艺增加了障碍。
[0015]因此，本领域技术人员仍然期待有一种以具有良好工艺特征的新方法来制备DHMEQ0
【发明内容】
[0016]本发明目的在于提供一种具有良好工艺特征的新方法以制备DHMEQ(即:5，6_环氧-4-羟基-3-水杨酰氨基-2-环己烯酮)。本发明人发现在形成5，6-环氧环己烯酮的过程中使用特定的工艺条件在以获得极为有益的工艺特征，例如收率高、产物品质高、和/或易于后处理等。本发明基于此发现而得在完成。
[0017]为此，本发明的第一方面提供了制备以下式I化合物的方法:
【权利要求】
1.制备以下式I化合物的方法:
2.根据权利要求1的方法，其包括以下步骤: 步骤a:N- (2-烷酰氧基苯甲酰基)_2，5- 二甲氧基苯胺的制备
3.根据权利要求1的方法，其包括以下步骤:步骤a:N-(2-烷酰氧基苯甲酰基)_2，5- 二甲氧基苯胺的制备
4.制备以下式I化合物的方法:
5.根据权利要求4的方法，其包括以下步骤: 步骤c:5，6-环氧-4，4- 二烷氧基-3-水杨酰氨基-2-环己烯酮的制备
6.根据权利要求4的方法，其包括以下步骤: 步骤c:5，6-环氧-4，4- 二烷氧基-3-水杨酰氨基-2-环己烯酮的制备
7.制备以下式4化合物的方法:
8.根据权利要求7的方法，其包括以下步骤: 使式(3)表示的3-(0-烷酰基水杨酰氨基)_4，4- 二烷氧基-2，5-环己二烯酮溶于有机溶剂(例如四氢呋喃、甲醇、二甲基甲酰胺，特别是例如二甲基甲酰胺)中； 在-20~50°C的温度下(例如在冰冷却下)，在其中添加过氧化氢水溶液及无机碱(例如氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠，特别是例如碳酸钠)，搅拌使反应进行； 然后在反应液中加入乙酸乙酯，反应液依次用盐酸溶液、硫代硫酸钠水溶液和食盐水洗涤后干燥，再进行真空干燥； 使干燥所得物料溶解于丙酮-石油醚(二者体积比为6~10:1)的混合溶剂中，加入等体积的饱和食盐水萃取(重复萃取2~3次)，弃水层，有机层干燥(例如用芒硝干燥)，减压浓缩，真空干燥，获得式(4)表示的5，6-环氧_4，4-二烷氧基-3-水杨酰氨基-2-环己烯酮。
9.根据权利要求7的方法，其包括以下步骤: 使式(3)表示的3-(0-烷酰基水杨酰氨基)_4，4- 二烷氧基-2，5-环己二烯酮溶于有机溶剂(例如四氢呋喃、甲醇、二甲基甲酰胺，特别是例如二甲基甲酰胺)中； 在-20~50°C的温度下(例如在冰冷却下)，在其中添加过氧化氢水溶液及无机碱(例如氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠，特别是例如碳酸钠)，搅拌使反应进行； 然后在反应液中加入乙酸乙酯，反应液依次用盐酸溶液、硫代硫酸钠水溶液和食盐水洗涤后干燥，再进行真空干燥； 使干燥所得物料溶解于丙酮-石油醚(二者体积比为6~10:1)的混合溶剂中，加入等体积的饱和食盐水萃取3次，弃水层，有机层干燥(例如用芒硝)，减压浓缩，真空干燥，获得式(4)表示的5，6-环氧-4，4- 二烷氧基-3-水杨酰氨基-2-环己烯酮。
10.根据权利要求1-9任一项的方法，其中在制备5，6-环氧-4，4-二烷氧基-3-水杨酰氨基-2-环己烯酮的过程中，过氧化氢的用量是式3化合物用量的8~12倍(摩尔)。
【文档编号】A61P35/00GK103588731SQ201310633680
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年12月2日 优先权日:2013年12月2日
【发明者】马俊, 余卫麟 申请人:深圳万和制药有限公司