西洋参茎叶总皂苷和漏芦总甾酮组合物及其作用的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种西洋参茎叶总皂苷和漏芦总甾酮的药物组合物，该组合物组成是：西洋参茎叶总皂苷和漏芦总甾酮4.0:1-5.0:1，组合物与药用赋形剂可制备成液体和固体的药物制剂。对两者最佳比例的有效部位复合物的药效学研究，包括对多种化学物质导致记忆障碍的影响、对脑缺血及脑缺血-再灌注损伤致动物学习记忆障碍的改善作用、对大鼠海马长时程突触增强现象的影响，促智作用机制研究和细胞分子生物学实验,可在制备治疗阿尔茨海默病和血管性痴呆的药物中的应用。本发明的组合物将两种有效部位合用，作用比单用其中任何一种显著增强，也显著强于两种药材的常规水煎液。
【专利说明】西洋参茎叶总皂苷和漏芦总留酮组合物及其作用
【技术领域】
[0001]本发明属于天然药物组合物，尤其涉及西洋参茎叶总皂苷和漏芦总留酮组合物及其在制备防治血管性痴呆药物中的应用。
【背景技术】
[0002]中医西洋参有“滋补强壮，养阴生津，宁神益智，除烦降火”，中药漏芦具有“清热解毒，舒筋通脉”，久服能“延年益寿，耳聪目明”作用。近代国内外研究报道已阐明人参中抗衰老抗疲劳提高学习记忆的主要活性成分是人参皂苷，漏芦中降血脂、防治动脉粥样硬化、清除体内自由基、免疫调节、抗缺氧、改善学习记忆、延缓衰老及预防老年病的主要活性成分是植物留酮类成分。最近，在临床上应用人参和漏芦为主要组成的方剂作为抗衰老制剂对与衰老关系密切的常见病和多发病存在明显的预防和治疗作用。
[0003]在分别对西洋参各部位(根、茎叶、果实)和漏芦的系统研究中，发现了西洋参茎叶总皂苷作用最强，而且找出了其中含量较高，作用最显著的有效单体PF11,在漏芦中发现了其主要活性成分为漏芦留酮，其代表性成分是β-蜕皮留酮。根据两者的作用机制不同，药效作用互补，我们对二者的复合物进行了药效学试验，发现了二者的增效作用。
【发明内容】
[0004]本发明所解决的技术问题是提供一种西洋参茎叶中提取有效成分-总皂苷和中药漏芦中提取的有效成分-漏芦总留酮两种多分子复合物，其重量比为4.0:1-5.0:1。经过系统的药理及作用机制、药效成分等研究证明其抗衰老、增强学习记忆、对血管性痴呆有增效作用。在临床上可作为抗衰老制剂及与衰老密切相关的常见病和多发病有预防和治疗作用。
[0005]所述的组合物可以与药学上可接受的药用赋性剂制备的制剂形式，主要包括液体制剂和固体制剂。固体制剂主要包括颗粒剂、片剂、胶囊剂(含软胶囊)、滴丸剂。液体制剂主要包括口服液体制剂和注射液体制剂。
[0006]所述制剂的给药形式主要包括口服给药或非肠道给药，优选口服给药。
[0007]本发明的另一个目的是提供该组合物在制备治疗阿尔茨海默病和血管性痴呆的药物中的应用。
[0008]试验结果表明，本发明的组合物对抗衰老、增强学习记忆、对血管性痴呆有增效作用。
[0009]本发明的有益效果是:
[0010]1.该组合物基于中医药理论，参考循证医学资料，选用了两种药材中具有宁神益智、舒缓通脉、延年益寿之功效的有效部位组合，因此具有我国独特的经历了长期用药证实的治疗作用理论基础，并能获相得益彰的作用。
[0011]2.该组合物在制备用于治疗和改善阿尔茨海默病和血管性痴呆药物中应用，可解决该类疾病治疗中，明显缺乏疗效肯定、不良反应轻微、用药方便的药物的问题。[0012]3.采用多种经典的生物评价系统，在细胞水平和基因水平证实组合物药物在治疗上述疾病中具有多层次、多靶点作用的依据。
[0013]4.经动物药效学实验证明，该组合物具有以下作用:
[0014]I)对脑缺血及脑缺血一再灌注损伤致动物学习记忆障碍的改善作用
[0015]2)对脑缺血损伤的保护作用
[0016]3)促智作用
[0017]5.经拆方研究，组合物将两种有效部位合用，比单一其中任何一种作用显著增强，并非简单作用叠加。该组合物的上述作用显著强于两种药材的常规水煎液。本组合物毒理作用研究结果表明，两种有效部位合用的小鼠急性毒性研究结果，与单用其中任何一种相仿，均未见出现死亡和明显的中毒症状。
[0018]6.本发明从西洋参和漏芦药材中提取有效部位西洋参茎叶总皂苷和漏芦留酮，各达到> 50%以上，并获得用于治疗阿尔茨海默病和血管性痴呆的两种有效部位最佳配比，可用于研制6类以上中药新药，拓展了单一药物用途。
【具体实施方式】
[0019]实施例1本发明西洋参茎叶总皂苷(S)和漏芦留酮(L)的制备方法
[0020](I)称取西洋参茎叶粉末(20-40目)，加7倍量50% — 60%乙醇回流提取3次，每次2小时，合并滤液，减压浓缩至一定体积，得上柱溶液。吸取该溶液上S^hadex LH-20柱，用8倍量70% — 90%乙醇洗脱，分段收集洗脱液。洗脱液水浴挥干，减压浓缩，真空干燥，称重并测定总阜苷含量，含量大于85%。
[0021](2)称取漏芦粉碎的原料(20-40目)，加乙醇回流提取3次，每次I小时，合并滤液，减压浓缩至一定体积，得上柱溶液。吸取该溶液上大孔树脂DM130 —蒸馏水洗脱杂质— 30% (浓度)洗脱杂质一90% (浓度)洗脱有效成分，洗脱液挥干，减压浓缩，真空干燥，称重并测定总皂苷含量，含量大于80%。
[0022]实施例2S及L最佳剂量的确定
[0023](I) S及L对东莨菪碱(SCPL)致大鼠记忆获得障碍的改善作用
[0024]试验方法:取健康昆明种小鼠，雌雄各半，体重20±2g，随机分为正常对照组、模型对照组、S20、10、5、2.5mg.kg' L3.2、2.4、1.2、0.6mg.kg' 尼莫地平(nimo)30mg.kg-1组。给药组分别灌服药物，正常对照组和模型对照组灌服等容积蒸馏水，连续给予5天，在末次给药后60min，除正常对照组腹腔注射生理盐水外，其余各组均腹腔注射SCPL3mg *kg_1, IOmin后进行跳台法训练,24h后测试,记录5min内小鼠的跳下潜伏期、错误次数和总电击时间。
[0025]试验结果:与正常对照组比较，模型对照组测试阶段错误次数显著增加。S20、IOmg *kg_1剂量组、L3.2mg *kg_1剂量组以及nimo组与模型对照组相比错误次数显著减少。
[0026](2) S及L对小鼠急性脑缺血的保护作用
`[0027]试验方法:取健康昆明种小鼠、雌雄各半，体积20±2g，随机分为正常对照组、模型对照组、S20、10、5、2.5mg.kg' L3.2、2.4、1.2、0.6mg.kg' nimo30mg.kg-1 组。给药组分别灌服不同剂量的S及L，正常对照组和模型对照组灌服等容积蒸馏水，连续给予5天，在末次给药后60min进行急性脑缺血实验。[0028]试验结果:S20mg.kg-1剂量组，L3.2mg.kg-1剂量组及nimo组与正常对照组相比均显著延长双侧颈总动脉结扎小鼠存活时间。
[0029]实施例3S和L的处方确定
[0030](I) S和L中S与L剂量的优化选择
[0031]试验方法:采用两因素四水平的正交实验设计，以S、L为两因素，S四个水平分别为 20、15、10、5mg.kg' L 四个水平分别为 3.2,2.4、1.2,0.6mg.kg'
[0032]取健康昆明种小鼠，雌雄各半，体重20 士 2g，随机分为正常对照组、模型对照组、S20/L3.2mg.kg \ S20/L2.4mg.kg \ S20/L1.2mg.kg \ S20/L0.6mg.kg \ S15/L3.2mg.kg \ S15/L2.4mg.kg \ S15/L1.2mg.kg \ S15/L0.6mg.kg \ S10/L3.2mg.kg \S10/L2.4mg.kg \ S10/L1.6mg.kg \ S10/L0.8mg.kg \ S5/L3.2mg.kg \ S5/L2.4mg.kg \S5/L1.2mg.kg' S5/L0.6mg.kg—1组。给药组分别灌服不同剂量组合的SL，正常对照组和模型对照组灌服等容积蒸馏水，连续给予5天，在末次给药后60min，除正常对照组腹腔注射生理盐水外，其余各组均腹腔注射SCPL3mg -kg^1, IOmin后进行跳台法训练。24h后测试，记录5min内小鼠的跳下潜伏期、错误次数和总电击时间。以其在跳台法中的错误次数为指标，并用方差分析法对各因素及水平进行分析，以考察各因素的主次及各水平的优劣。试验结果:S，L分别以A.B代表，四个水平分别以1，2，3.4代替，按照正交设计进行正交实验，结果进行方差分析。以SCPL致记忆获得障碍模型小鼠在跳台法中测试阶段错误次数为指标，结果表明:S以及L对药效均有显著影响，优化剂量组合为S第二水平S2，15mg.kg—1以及L 第一水平 LI, 3.2mg.kg—1。
[0033](2) S和L对SCPL致小鼠记忆获得障碍的改善作用
[0034]试验方法:取健康昆明种小鼠，雌雄各半，体重20±2g，随机分为正常对照组、模型对照组、SL 高(S30/L6.4mg.kg-1)、SL 中(S15/L3.2mg.kg-1).SL 低(S7.5/Ll.6mg.kg-1)、S15mg.kg'L3.2mg.kg'nimo30mg.kg-1组,给药组分别灌服药物，正常对照组和模型对照组灌服等容积蒸馏水，连续给予5天，在末次给药后60min，除正常对照组腹腔注射生理盐水外，其余各组均腹腔注射SCPL3mg.kg_\ IOmin后进行跳台法训练。24h后测试,记录5min内小鼠的错误次数。采用代数和相加法，以Q值为指标对复方与单味药物药效进行比较，Q值大于I表示合用效果大于单方效果之和。Q值计算公式如下:
[0035]Q=Ea+b/ (Ea+Eb-Ea*Eb)
[0036]其中Ea+b表示两药合用后的效果，Ea、Eb分别为表示两药单独使用时的效果。
[0037]表1SL在跳台试验中对SCPL致小鼠记忆获得障碍的影响
【权利要求】
1.西洋参茎叶总皂苷和漏芦总留酮组合物，其特征是:组合物的组成为西洋参茎叶总皂苷:漏芦总甾酮的重量比值为4.0:1-5.0:1。
2.一种药物制剂，其特征是:包含权利要求1所述的西洋参茎叶总皂苷和漏芦总甾酮组合物。
3.根据权利要求2所述的药物制剂，其特征是:所述制剂为液体制剂或固体制剂。
4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征是:固体制剂为颗粒剂、片剂、胶囊、软胶丸、滴丸剂或栓剂。
5.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征是:液体制剂为口服液体制剂或注射液体制剂。
6.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征是:所述制剂的给药形式为口服给药或非肠道给药。
7.权利要求1所述的西洋参茎叶总皂苷和漏芦总留酮组合物在制备治疗阿尔茨海默病和血管性痴呆的药物中的应用。
8.权利要求1所述的西洋参茎叶总皂苷和漏芦总留酮组合物在制备抗衰老、增强学习记忆、抗血管性痴呆药物中的应用。
9.权利要求2-6任何一项所述的药物制剂在制备治疗阿尔茨海默病和血管性痴呆的药物中的应用。
10.权利要求2-6任何一项所述的药物制剂在制备抗衰老、增强学习记忆、抗血管性痴呆药物中的应用。
【文档编号】A61P25/28GK103655659SQ201310690863
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月13日 优先权日:2013年12月13日
【发明者】张向荣, 生依灵, 赵余庆, 李巍, 李铣 申请人:沈阳药科大学