用于预防或治疗上呼吸道感染的鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的制作方法

用于预防或治疗上呼吸道感染的鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的制作方法
【专利摘要】本发明涉及包含鼠李糖乳杆菌、优选菌株ATCC53103和动物双歧杆菌乳亚种、优选菌株DSM15954的组合物，其用于降低青少年和成人的上呼吸道感染(URI)的持续时间和/或严重程度。本发明的其它方面涉及包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物，其用于提高患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的健康相关生活质量(HRQL)，用于降低患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的咽喉痛、咽喉刺痒、咳嗽、沙哑、胸闷的症状中的至少一种且优选若干种，例如两种、三种、四种或全部，并且用于降低患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的中值严重程度评分。
【专利说明】用于预防或治疗上呼吸道感染的鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种

【技术领域】
[0001]本发明涉及包含鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)(例如以ATCC53103保藏的菌株)和动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animal is subsp.lactis)(例如以DSM15954保藏的菌株)的组合物，其用于降低青少年和成人的上呼吸道感染(URI)(例如感冒)的持续时间和严重程度并且用于提高患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的健康相关生活质量(Health-Related Quality of Life, HRQL)。

【背景技术】
[0002]定义为呼吸道的任何感染的呼吸道感染(RTI)是非机构性(non-1nstitut1nalized)疾患的主要原因并且导致对卫生保健系统的负担和相关成本。上呼吸道感染(URI)是影响上气道的RTI。URI是RTI的最常见类型并且主要是病毒性的，其中小于15%的归因于细菌。居住在美国(U.S.)的成人的病毒性URI的估计发生率是每人每年发作大约2.5次，这增加了卫生保健系统的负担并且负面地影响工作和上学的生产率。
[0003]公众通常将术语“感冒”与URI互换使用；然而，医学界将感冒定义为其中症状的表现源于病毒诱导性URI的临床疾患(Barrett等人，2009)。关于医学诊断，ICD9编码术语将急性鼻咽炎/感冒分类为编码460。已将心理应激和差的心理健康状态(例如，抑郁、焦虑和衰竭)与较高的获得URI的风险关联。URI的典型症状包括打喷嚏、流鼻涕或鼻塞、咽喉痛或咽喉刺痒、沙哑和咳嗽；还可能存在头痛、肌痛、不适和发热。症状严重程度通常在感染后2-3日达到高峰，平均持续时间为大约I周，25%的病例持续更长时间。URI可加重例如哮喘的现有病况，或可导致例如中耳炎、鼻窦炎或下RTI (即支气管炎、细支气管炎、气管炎和肺炎)的其它疾患。
[0004]尽管多数URI有病毒病因，但通常开抗生素处方来治疗症状，这是一种促成抗生素药物抗性菌株的做法。没有证据表明非处方(OTC)药物对病毒性感染的持续时间具有任何作用，并且它们对于症状的缓和仅提供了微小的益处。此外，OTC药物可能具有不想要的副作用，例如困倦、口腔干燥(xerostomia、dry mouth)、神经过敏、应激性、睡眠困难和血压升高。OTC药物产生更严重的后果也是可能的。例如:因共同摄入扑热息痛(acetaminophen)和酒精所致的肝毒性以及响应阿斯匹林(aspirin)和非类固醇类抗炎剂的胃肠出血或肾毒性。
[0005]URI症状的特性(例如，持续时间和严重程度)和响应症状的功能障碍影响URI期间的健康相关生活质量(HRQL) (Barrett等人，2009)。在URI期间，HRQL的各个方面可受到负面地影响，例如:身体功能、躯体痛、生活力、社交功能和心理健康状态。因此,业内对于可改进罹患URI的人的HRQL的策略感兴趣。
[0006]施用由世界卫生组织定义为“当以足够量施用时赋予宿主益处的活生物体”的益生菌是对大体健康的群体的安全营养干预。益生菌是在人类肠道中被发现的并且通常存在于酸奶和其它食品(例如，饮料、谷类和巧克力糖块)中。
[0007]已对益生菌调节免疫功能的能力进行了研究，并且其积极地影响与特应性过敏、呼吸性过敏、RT1、胃肠疾病、牙周感染和女性泌尿生殖道病况有关的临床结果。经口补充某些益生菌菌株已证明对健康成人具有免疫调节作用。
[0008]益生菌菌株可帮助预防和治疗儿童和成人的RTI。然而，现有技术发现有一些局限性。例如:样本大小太小而无法检测发生率在组间的差异；一些研究不区分URI与下RTI ;益生元的使用使结果混淆；和仅在两个正常健康成人研究中对严重程度进行了评价(Bergren 等人，2011 ;和 de Vrese 等人，2005)。
[0009]关于鼠李糖乳杆菌GG与动物双歧杆菌乳亚种的组合物用于治疗呼吸道感染的唯一公开研究涉及婴儿(Rautava等人，2009和W02006007526)。Rautava等人，2009的研究是在81名婴儿中使用含有乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)Bb_12和鼠李糖乳杆菌GG的婴儿配方达最长12个月和不含益生菌的配方作为对照进行的随机、双盲、安慰剂对照试验。相对于安慰剂，响应益生菌的复发性(≥3) RTI的发生率较低(P = 0.031)。Rautava等人，2009发现，相对于安慰剂，响应益生菌的因URI所致的急性中耳炎的发生率较低(P =0.027)。没有登记持续时间或严重程度。
[0010]所述研究没有报道RTI的严重程度。此外，由于儿童、特别是婴儿与成人的免疫系统之间的固有差异而不可将所述研究推广到成人群体。
[0011]多个公开研究已研究了益生菌在降低成人的URI的发生率、持续时间和严重程度方面的功效。这些研究提供了以下证据:当与非益生菌对照相比时，某些益生菌菌株可有效降低大体健康的成人的URI和RTI的持续时间和严重程度。这些研究都不是利用包含鼠李糖乳杆菌GG与动物双歧杆菌乳亚种的组合的组合物进行的。
[0012]公开益生菌研究的混合结果强调了以下观点:并非所有益生菌都生而相同，益生菌对URI结果的有益作用似乎具有菌株特异性并且可在组合时以最佳方式起作用。


【发明内容】

[0013]所述研究的主要目的是评价包含特定益生菌鼠李糖乳杆菌GG和动物双歧杆菌乳亚种(BB-12?)的组合物对患有上呼吸道感染的青少年和成人的HRQL的作用和这一组合是否会有益于改进罹患URI的人的HRQL。保证评价URI期间HRQL的多个因素-包括症状状态(严重程度和持续时间)和功能状态，因为URI负面地影响生产率。
[0014]研究了 URI期间HRQL的多个量度，例如:自我报告的持续时间、症状和功能状态。次要结果探索了自我报告的URI发生率和因URI而导致的缺学日数和缺席的工作日数。发现包含鼠李糖乳杆菌GG和动物双歧杆菌乳亚种(BB-12?)的组合物可用于降低青少年和成人的上呼吸道感染(URI)的持续时间和严重程度，并且包含LGG?和BB-12?的组合物还有益地影响URI期间的HRQL并将因URI导致的缺学日数减到最少。
[0015] 所述研究的关于URI的频率和发生率在组间没有差异的发现与先前所公开的对成人的研究相比是类似的(de Vrese等人,2005),而Berggren等人(2011)发现益生菌组中的URI (≥IURI)的频率与安慰剂组相比显著更低(分别为76例URI对91例URI)。Berggren等人(2011)与当前研究之间的冲突结果可归因于不同的益生菌菌株(分别为干酿乳杆菌(L.casei)DN_114和植物乳杆菌(L.plantarum)/副干酿乳杆菌(L.paracasei)对1^30@和:68-12?)。
[0016]一个现有研究没有在组间检测到总严重程度评分的显著差异(Berggren等人，2011)，而de Vrese等人(2005)报道了响应益生菌的总严重程度评分与安慰剂相比更低(分别为P = 0.056，P = 0.057，且P〈0.01)。本研究中严重程度评分的降低与上述试验相比更显著(分别为52%对20-40% ) (de Vrese等人，2005)。益生菌菌株在研究之间是不同的，这可以解释相异的结果。

【专利附图】

【附图说明】
[0017]图1.安慰剂组和益生菌组中的URI的平均持续时间
[0018]图2.安慰剂组和益生菌组中的URI的平均严重程度
[0019]图3.单个URI症状的频率。柱条的高度反映了指示存在URI症状的调查百分比。
[0020]图4.根据7分李克特式量表(7-point Likert-Type scale)分级的单个URI症状的频率(I =非常轻微，7 =严重)。柱条的高度反映了每一分级下的调查百分比。图形并没有显示没有报告症状的受试者的百分比。百分比代表了可用于安慰剂组(η = 475)和益生菌组(η = 518)的总调查数。对于“流鼻涕”来说，安慰剂组和益生菌组中分别有29.7%和36.6 %的调查指示“ I ”的分级。
[0021]图5.因URI所致的受损的功能性任务的频率。柱条的高度反映了指示受损的功能性任务的调查百分比。
[0022]图6.根据7分李克特式量表分级的因URI所致的受损的功能性任务的频率(I =非常轻微地；7=严重地)。柱条的高度反映了每一分级下的调查百分比。图形并没有显示没有报告功能性任务的受试者的百分比。百分比代表了可用于安慰剂组(η = 475)和益生菌组(η = 518)的总调查数。对于“睡眠良好”来说，安慰剂组和益生菌组中分别有21.2%和22.1 %的调查指示“I”的分级。对于“呼吸轻松”来说，安慰剂组和益生菌组中分别有
23.7%和26.0 %的调查指示“I”的分级。
[0023]图7.受试者的招募和保留。
[0024]a26名部分完成者包括在弟12周如退出研究的18名受试者和仍在研究中但没有参与部分数据收集的8名受试者。
[0025]图8.来自每日WURSS-21的可用数据。
[0026]注意:实线指示从每个框到下属框的流向；虚线指示促成用于计算URI的持续时间、严重程度和发生率的总病例的数据。
[0027]1完整数据=URI期间没有数据缺失；在URI记录前一日或后一日没有数据缺失；
[0028]2不完整数据=URI期间数据缺失或在URI记录前一日或后一日数据缺失；
[0029]3仅用于计算发生率且排除用于持续时间和严重程度分析的调查数据
[0030]4使用来自缺席调查前一日和缺席调查后一日的数据插补的缺失严重程度评分
[0031]5排除用于严重程度分析的调查数据
[0032]定义
[0033]为了本发明说明书和权利要求书的目的，将以下术语定义如下:
[0034]“成人”是指年龄为18岁和以上的大体健康的人类。
[0035]“感冒”定义为症状的表现源于病毒诱导性URI的临床疾患(Barrett等人，2009)。为了本专利申请的目的，通过对WURSS-21的I号问题连续两日肯定响应来获取自我报告的“感冒”发生率。因此，在本发明上下文中，这一术语与下文所定义的术语“URI”同义使用。
[0036]以两种方式将“URI发作期间的HRQL”测量为:1)通过WURSS-21确定的自我报告的URI发作的持续时间；和2)通过WURSS-21确定的自我报告的症状严重程度评分与功能状态评分的组合。关于持续时间的HRQL是以日表示的并且关于症状严重程度和功能状态的HRQL是以曲线下面积表示的，所述曲线下面积是通过将所有患病日内的每日WURSS-21评分相加确定的(Barrett等人,2009)。
[0037]“婴儿”一般是指从大约出生到年龄为12个月的人类。
[0038]“婴儿配方”是指通过作为人乳的替代品来满足婴儿的营养需求的呈液体或粉末化形式的组合物。这些配方通过界定大量营养素、维生素、矿物和其它成分的水平的欧盟和美国的条例来规定以力图模拟人类母乳的营养和其它性质。
[0039]“缺学日数”定义为受试者因URI而缺席给定日内的任何课程的总日数。
[0040]“缺席的工作日数”定义为受试者因URI而缺席任何有偿工作、实习期或实习课的总日数。
[0041]“预防”意指通过某种作用来终止或阻碍疾病、病症或疾病或病况的症状。
[0042]“自我报告的URI发作的持续时间”定义为如WURSS-21所指示的受试者经历URI发作的日数。疾患的开始是通过对WURSS-21上的I号问题连续两日肯定响应指示的，而疾患的结束是通过对WURSS-21的I号问题连续两日否定响应指示的(Barrett等人,2009)。URI发作的持续时间是从肯定响应的第一日到否定响应的第一日计算的。
[0043]“自我报告的功能状态”定义为URI干扰受试者完成日常生活活动(例如睡眠和锻炼)和社会角色活动(例如与他人互动)的能力的程度，所述程度在如WURSS-21所指示的在“非常轻微地”到“严重地”的范围内。
[0044]“自我报告的URI发作的发生率”定义为每个受试者在数据收集期内所经历的URI发作次数，以分类(O次、至少一次、至少两次、至少三次等)和作为连续变量(每个受试者的平均URI发作次数)表示。
[0045]“自我报告的URI症状的严重程度”定义为如WURSS-21所指示的在“非常轻微”到“严重”范围内的URI症状的不适程度。
[0046]“治疗有效量”是指导致疾病、病症或疾病或病况的症状的改进或改善的量。
[0047]“治疗”意指减轻、改进或改善疾病、病症或疾病或病况的症状。
[0048]“上呼吸道感染(URI) ”定义为对WURSS-21的I号问题(“你今天感觉有多不舒服？ ”)肯定地报告达连续2日。因此，在本发明上下文中，这一术语与术语“感冒”同义使用。
[0049]“威斯康星上呼吸道症状调查(Wisconsin Upper Respiratory Symptom Survey)(WURSS-21) ”是设计用于测量可响应干预而变更的HRQL指数随时间的变化的21项调查，具体地是由患者评价的与感冒有关的疾患领域(Barrett等人,2009)。WURSS的开发人员在由保健专业人员使用作为“疾病”分类的URI与由公众使用作为“疾患”术语的感冒之间进行了区分。这一语义差异是设计用于评价对于患者在感冒发作期间重要的症状状态和功能状态指标的调查的基石。完整的44项形式(WURSS-44)和较短的21项形式(WURSS-21)被设计成每日执行并通过考虑症状状态和功能状态来评价感冒发作期间的HRQL。WURSS-44包含WURSS-21中的21项，但具有21个额外的症状和功能状态项目。在确定WURSS-44的构想效度的过程中，出现了称为WURSS-21的21项形式的调查。在WURSS-21中包括WURSS-44的具有最高“重要性”等级评定的症状和功能状态项目(Barrett等人，2009)。WURSS似乎是用于在本专利申请的研究中评价感兴趣的结果的最适当的工具。由于WURSS-21的表现与WURSS-44相比类似，并且完成所费时间更少，因此在本专利申请的研究中选择这一较短的形式来评价结果。
[0050]“青少年”是指年龄为13到19岁的大体健康的人类。

【具体实施方式】
[0051]为了确定包含特定益生菌鼠李糖乳杆菌GG和动物双歧杆菌乳亚种(BB-丨2?)的组合物对HRQL的作用，在考虑症状严重程度和功能状态受损两者的情况下使用WURSS-21来评价URI的持续时间和严重程度。发现益生菌组中URI的中值持续时间与安慰剂组相比显著短了 2日。因此，在第一方面，本发明涉及包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物，其用于减少青少年和成人的上呼吸道感染(URI)的持续时间。
[0052]在这一研究中，URI的频率和发生率在安慰剂与益生菌组之间并无不同。这些发现与在儿童中进行的一些现有研究相反，这些儿童已被记录URI症状或RTI发作的发生率降低。当前研究与这一现有试验在研究样本方面不同(婴儿对成人)，这妨碍了对发现进行比较。
[0053]为了确定URI期间的HRQL，这一研究使用WURSS-21对症状严重程度和症状对日常生活的影响两者进行了评价。在这一研究中，安慰剂组的中值严重程度评分是88分，而在益生菌组中，中值严重程度评分是58分。发现益生菌组与安慰剂组相比，益生菌组具有显著更少的患病日数和显著更低的严重程度评分，从而指示更高的HRQL。同样，益生菌组与安慰剂组相比具有显著更少的缺学日数。
[0054]因此，本发明的第二方面涉及包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物用于降低青少年和成人的上呼吸道感染(URI)的严重程度并且本发明的第三方面涉及包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物用于提高患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的健康相关生活质量(HRQL)。
[0055]不可能将这些结果与采用益生菌的其它研究进行比较，因为现有试验没有使用WURSS-21。
[0056]当前研究发现，益生菌组的URI的中值持续时间与安慰剂组相比低了大约两日(50% ) (P = 0.001)。安慰剂组的URI的平均持续时间是6日；因此，这一发现具有实际意义，因为两日的减少占总URI持续时间的33%。
[0057]当前研究还发现，益生菌组中的URI的中值严重程度与安慰剂组相比显著低了大约52% (P = 0.0003)。这些发现具有实际意义，因为严重程度评分考虑了症状严重程度和URI症状对功能任务的负面影响两者。当前研究中严重程度评分的降低与使用其它菌株的研究(de Vrese等人，2005)相比更显著。这些结果强调了益生菌的有益作用似乎具有菌株特异性的观点。
[0058]尽管患有URI，学生仍然去上学是可行的，因为缺学日数的发生率低于URI感染率(84%);然而，也有可能受试者在他们生病日期间没有预先安排的课。当前研究发现益生菌组与安慰剂组相比具有显著更少的缺学日数(平均差异=0.2日)。
[0059]在这一研究中，大约有6%的受试者(η = 12)报告因URI而缺席工作，且总共有19个工作日缺席工作。要得出因URI而导致的缺席的工作日数的结论太早了，因为在数据收集期内没有询问受试者的职业状况。可能学生有赚钱的动机并从事工作，而与URI无关。
[0060]与益生菌组相比，安慰剂组中有更高百分比的受试者报告了对功能任务的干扰；并且与益生菌组相比，安慰剂组中有更高百分比的受试者报告了大多数单个症状。同样，相对于安慰剂组，益生菌组中有更高百分比的受试者将症状分级为不太严重(根据7分李克特式量表，评分为I分、2分、3分或4分)；并且相对于益生菌组，安慰剂组中有更高百分比的受试者将症状和功能任务分级为较严重(根据7分李克特式量表，评分为5分、6分或7分)。其它研究均未使用WURSS-21来评价响应益生菌与安慰剂的症状严重程度和功能状态受损的差异，因此没有进行比较。这些观察结果可能是安慰剂组相对于益生菌组有显著更高的WURSS-21评分的原因(ρ = 0.0003)。这些发现具有实际意义。例如，与安慰剂相比，URI似乎对服用益生菌的受试者的日常生活活动具有更小的影响。
[0061]本发明的其它方面涉及包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物用于降低患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的咽喉痛、咽喉刺痒、咳嗽、沙哑、胸闷的症状中的至少一种且优选若干种，例如两种、三种、四种或全部。
[0062]本发明还涉及包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物用于降低患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的中值严重程度评分。
[0063]不可将发现推广到其它益生菌菌株。然而，预期可将其推广到组合使用的菌株的突变体和变体。动物双歧杆菌乳亚种的菌株的示例是选自由保藏号为DSM15954的
CHCC5445 (ΒΒ-12?)和其突变体和变体(例如CHCC7158(ΗΝ019，保藏号为DSM17280))
组成的组的菌株。这一菌株是从2000年于台湾出售的标记为Fernleaf DR-10双歧杆菌(bifidus)的商购婴儿配方产品中分离的。
[0064]在本发明上下文中，术语“突变体”应当理解为借助于例如辐射和/或化学处理从组合使用的一种菌株得到的菌株。所述突变体应当是以DSM15954保藏的动物双歧杆菌乳亚种或以ATCC53103保藏的鼠李糖乳杆菌的功能等同突变体。尤其地，术语“突变体”是指通过使菌株(这是组合的菌株)经历任何常规使用的诱变处理(包括用例如乙烷甲烷磺酸盐(EMS)或N-甲基-N’-硝基-N-硝基胍(NTG)等化学诱变剂、UV光处理)而获得的菌株，或自然发生的突变体。突变体可能已经历数次诱变处理(单次处理应当理解为一个诱变步骤，接着是筛选/选择步骤)，但目前优选实施不超过20次或不超过10次或不超过5次处理。在目前优选的突变体中，与母菌株相比，细菌基因组中小于5%或小于1%或甚至小于0.1 %的核苷酸已被另一核苷酸替换,或缺失。突变体或变体应当属于与母菌株相同的菌种。
[0065]另外，因为当前研究评价了鼠李糖乳杆菌GG与动物双歧杆菌乳亚种(BB-12?)的组合，因此不可将发现推广到彼此独立的益生菌菌株。
[0066]本专利申请中所报告的发现是基于年龄为18到25岁的大体健康的成人的亚组，但被认为适用于大体健康的青少年和成人，包括老人，即年龄超过70岁的成人。所述研究是对未怀孕的妇女进行的，但预期结果也将适用于怀孕妇女。所述组合物可特别用于具有获得URI的风险的人，例如处于心理应激或具有如上文所概述的差的心理健康状态的人。
[0067]在本发明中，鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的施用形式并不重要，只要向有需要的人施用治疗有效量即可。
[0068]根据本发明制备的组合物可以食物或饮食补充剂的形式施用。它们可为例如乳制品，且特别是至少包含所述菌株的发酵乳制品，任选地与其它乳酸细菌组合，例如与酸乳酵素组合；或其它食品，例如点心棒(snack bar),或饮料,例如果汁。
[0069]动物双歧杆菌乳亚种和鼠李糖乳杆菌还可作为饮食补充剂以下列形式提供:粉末、片剂(例如锭剂或泡腾片剂)形式、以胶囊形式、作为乳液或糊剂的组分或以由所属领域技术人员确定为活微生物的有效载体的任何其它合适载体形式。包含动物双歧杆菌乳亚种和鼠李糖乳杆菌的组合物可在单个药囊、胶囊、口香糖中或在例如油滴等更一般的组合物中。
[0070]根据本发明使用的组合物优选包含以菌株ATCC53103保藏的鼠李糖乳杆菌GG和以DSM15954保藏的动物双歧杆菌乳亚种(BB-12?)。鼠李糖乳杆菌GG和动物双歧杆菌乳亚种BB-12?分别商购自Chr.Hansen A/S(Hoersholm, Denmark)以及美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collect1n,ATCC)及德国微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, DSMZ)。
[0071]可在预防和治疗上呼吸道感染(URI)且特别是感冒的背景下使用根据本发明制备的组合物。优选地，为了获得最佳效果，它们应当以对应于至少16个(例如至少17个、优选至少18个、通常19个到112个)的鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种两者的量每日施用一次达至少一周，且有利地达更长时间，例如至少2周、至少4周、至少6周、至少9周且优选12周，如在本研究中。
[0072]在另一方面，本发明涉及降低青少年和成人的上呼吸道感染(URI)的持续时间和/或严重程度的方法，所述方法包含向青少年或成人施用治疗有效量的鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种。显然，上文所述的所有方面和实施方案也涉及这一方面。
[0073]实施例
[0074]所述研究是前瞩性、随机、双盲、安慰剂对照试验。这一研究的主要目的是评价URI期间和BB-12对HRQL的作用。群体样本是于2011年I月17日与2011年5月11日之间生活在FSU (Framingham, MA)校园内学生宿舍的大学生的随机样本。研究者遵守FSU有关在研究中使用人类受试者的政策(Log#ACC07-08/030A004)(弗雷明翰州立大学伦理审查委员会(Framingham State University Insitut1nal Review Board), 2010)和 UMDNJ关于人类受试者的保护的政策(UMDNJ’ s Policy on Protect1n of Human Subjects)(00-01-05-10:10)(新泽西医科和牙科大学伦理审查委员会(University of Medicineand Dentistry of New Jersey Institut1nal Review Board),2006a)。
[0075]于2011年I月生活在FSU(Framingham, MA)校园内学生宿舍的所有学生均受邀参与研究。如果受试者出现以下情况，则将其排除在参与之外并要求其不签署同意书:1)其驾驶证或身份证指示其年龄未满18岁或年龄超过25岁；2)他们经历了慢性常年性过敏(例如，粉尘或霉菌过敏)；3)他们已怀孕；或4)他们已被诊断患有哮喘、I型糖尿病、慢性疲劳综合征、人免疫缺陷病毒(HIV)或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)(因为这些医学病况影响免疫功能)。医学相关排除准则也陈述于筛选表格中，要求学生在签署同意书之后且在进行基线数据收集之前完成所述筛选表格。
[0076]如果受试者出现以下情况，则将其排除在参与之外并要求其不签署同意书:1)其驾驶证或身份证指示其年龄未满18岁或年龄超过25岁；2)他们经历了慢性常年性过敏(例如，粉尘或霉菌过敏)；3)他们已怀孕；或4)他们已被诊断患有哮喘、I型糖尿病、慢性疲劳综合征、人免疫缺陷病毒(HIV)或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)(因为这些医学病况影响免疫功能)。医学相关排除准则也陈述于筛选表格中，要求学生在签署同意书之后且在进行基线数据收集之前完成所述筛选表格。如果学生患有急性胰腺炎；如果学生正在经历癌症治疗；或者服用用于自身免疫疾病或移植后的免疫抑制药物，那么也将他们排除在参与之外并且要求其不签署同意书。要求受试者在研究期间克制不要食用与研究无关的含有益生菌的饮食补充剂(例如，Cukurelle?)和特制酸乳(例如，DanActive?或Activia?)
以及Airborne?和含有以下成分的任何草药制剂:紫锥花、槲皮素、白毛茛、蜂胶和乌恰罗泊(umchaloabo)。将这一信息列于同意书上并且在初始研究简介期间予以陈述。提醒受试者在完成每周一次的问卷后进行每周一次的饮食限制。
[0077]保持两个研究招募期(在本文中称作招募期I和招募期2)以使参与最大化。在12周内每日要求受试者食用益生菌条或安慰剂条并完成WURSS-21。还每周一次要求受试者完成每周一次的问卷。受试者通过在线应用程序“Survey Monkey” (www.surveymonkey.com)来完成所有上述调查。受试者在 2011年春季学期期间每两周到三周(以适应校历)与研究人员会面一次以获得两周或三周的益生菌/安慰剂供给。每日要求受试者将文本消息发送到指定的移动号码，陈述他们已服用其益生菌/安慰剂且完成了所述调查。如果受试者发送文本消息的能力受到限制或者其移动电话出现问题，则允许他们通过电子邮件报告每日的顺从性。研究人员在他们收到文本消息或电子邮件时，在数据收集记录(DataCollect1n Record)上记录与益生菌/安慰剂的顺从性和问卷。顺从性还由受试者通过每日在线调查的以下问题来记录:“你今天食用了益生菌/安慰剂吗？ ”
[0078]每日(每周7日，包括周末、假日和小休息期)提醒受试者他们必须服用其益生菌/安慰剂并在每日的7PM之前完成问卷。研究人员对到7PM还没有发送文本消息或电子邮件的所有受试者通过向他们发送含有以下语句的文本消息或电子邮件进行随访:“请食用益生菌并接受所述调查[调查链接]，如果你还没有这样做的话。请回复这一消息以确认完成”。将受试者的顺从性和随访通信记录在数据收集记录上。如果受试者到午夜仍没有应答，则认为他或她该日不顺从。将益生菌和安慰剂作为草莓味粉末施用。所述粉末包装在小箔“条”中。每个益生菌条含有大约各10亿个菌落形成单位(CFU)的呈粉末形式的鼠李糖乳杆菌亚种ZGG?:和动物双歧杆菌乳亚种(M-U?)。安慰剂条在口味和外观上类似于益生菌条，但不含有任何益生菌。Chr.Hansen A/S制造了益生菌条和安慰剂条并且用数字编码标记了每个条以标识安慰剂或活性成分。受试者、主要研究者(PD或研究助理不知道哪个编码代表益生菌且哪个编码代表安慰剂。将所述编码提供给独立机构(Combat Feeding Directorate, Natick Soldier Research, Development, andEngineering Center, Natick, MA),所述机构持有所述编码达数据收集期的持续时间。当数据整理和描述分析完成时，将盲法编码给予PI。现有的储存研究已指示这些特定的益生菌菌株在室温(大约70华氏度)下稳定贮存至少12个月；然而，在这一研究结束后的两周内重复活LGX7?和计数以确保质量控制。
[0079]将受试者随机化以每日接收益生菌或对照/安慰剂达12周。PI使用了 “ GraphPad ” ( 一种基于互联网的随机数字生成器)(GraphPad Random NumberGenerator, 2005)来生成随机化列表。根据所述程序的网址，这一程序“随一日的时间而增长，因此每次你在使用它时，它都会以不同方式运行。首先将每个受试者非随机地分配给一组。然后将每个受试者的分配与随机选择的受试者的分配交换”(GraphPad Random NumberGenerator，2005)。整个过程重复两次以确保随机化。在受试者同意参与后并且在数据收集开始前，PI生成用于第一招募期的一个随机化列表和用于第二招募期的另一个随机化列表。这确保了将相等数量的受试者随机分配给益生菌组和安慰剂组。将每个受试者的两周和三周供给包装在塑料拉链袋中并且使用随机化列表利用在001到最高达231范围内的唯一研究标识号进行单独地标记。这些编号对应于每个受试者的数据收集表格上的受试者编号。并非研究人员一部分的被标识者(即，FSU的学生健康服务协调人员)持有指示益生菌或安慰剂分配的随机化列表，以防受试者必须为非盲的情况(例如，在严重不良事件的情况下)。
[0080]受试者的随机分配是以受试者登记于所述研究中的顺序依序进行的。PI以同意书被签署并返回给PI的顺序以001开始且以231结束向每个受试者分配序列号，将所述序列号记录在“总标识列表”上。这一编号充当唯一受试者标识号。在数据收集期内所有益生菌和安慰剂均储存在冷的干燥地点(小于70华氏度)。
[0081]告知受试者将其益生菌/安慰剂条储存在冷的干燥地点(小于70华氏度)。告知受试者每日仅食用一条。如果受试者在给定日忘记服用其益生菌/安慰剂，则通过同意书和食用益生菌/安慰剂用说明书(Instruct1ns for Consuming Prob1tic/Placebo)告知他们在下一日不要服用弥补剂量。还通过同意书和说明书通知受试者每日食用超过一条可能导致胀气(gas boating)和恶心。在受试者接收其新的益生菌/安慰剂供给时的周日，要求他们返回来自前两周或三周的空的和未打开的益生菌/安慰剂条。如果受试者忘记带来其空的或未打开的条，则要求他们立即返回其宿舍以找回它们。如果这是不可能的，则受试者安排与研究人员的另一次会面时间以上交其空的或未打开的条。受试者在4月28日星期四(招募期I)或5月11日星期三(招募期2)返回其最后一次空的或未打开的益生菌/安慰剂条供给，并且提取其最后的礼物卡。
[0082]使用WURSS-21来确定研究参与者是否正罹患URI ;并且随后确定其在URI过程期间的 HRQL。通过在线应用程序(www.SurveyMonkey.com)执行 WURSS-21。WURSS-21 是由一个整体严重程度项目(首先列出)、一个整体变化项目(最后列出)、10个基于症状的项目(第2个到第11个列出)和9个功能状态项目(第12个到第20个列出)构成的(Barrett等人，2009)。所有受试者均在数据收集期内每日回答WURSS-21的I号问题:“你今天感觉有多不舒服？ ”。当且仅当受试者对I号问题没有回答“没有不舒服”时，提示他们回答剩余的20个问题。
[0083]如果受试者连续两日肯定地回答I号问题，则记录URI发作。如果受试者在从前一次URI发作恢复(通过连续两日对I号问题回答为“否”来指示)的7日内报告URI发作，则将这一次发作视为前一次感染的一部分。然而，如果受试者在从前一次发作恢复后超过?日才报告URI发作,则将这一次发作记录为新的感染(Barrett等人,2009)。
[0084]从WURSS-21生成两次HRQL评分。第一次HRQL评分与URI发作的持续时间有关。自我报告的URI发作的持续时间是使用对WURSS-21上的I号问题的响应确定的。疾患的开始是通过对I号问题连续两日肯定响应指示的，而疾患的结束是通过对I号问题连续两日否定响应指示的(Barrett等人,2009)。持续时间是从肯定响应的第一日直到(但不包括)否定响应的第一日计算的。
[0085]从WURSS-21生成的第二次HRQL评分评价了症状严重程度与功能状态两者；并且以曲线下面积(AUC)表示，所述曲线下面积是通过将所有患病日内的每日WURSS-21评分(可能范围为0-133)相加确定的(Barrett等人,2009)。
[0086]如果受试者出现以下情况，则他们通过每周一次的问卷进行自我报告:由于URI而缺席任何的上学或工作(包括实习期或实习课)；或者出于任何原因而服用抗生素或皮质类固醇。询问受试者他们是否因URI而缺席了前面7日内的任何课程。如果他们回答“是”，则提醒他们指出他们缺席了任何课程多少日。还询问受试者他们是否因URI而缺席了前面7日的任何工作(包括有偿工作、实习期或实习课)；如果他们回答“是”，则提醒他们指出他们缺席了多少日工作。
[0087]所有受试者无论顺从研究干预和完成问卷与否均留在研究中。如果PI确定继续参与对他们不是最有利的，例如，如果受试者报告他们被新诊断患有排除准则中所规定的医学病况，则受试者退出研究。
[0088]使用IBM SPSS统计软件19.0版(IBM公司，Somers，NY)来分析所有研究数据。在整个数据收集期内定期地输入研究数据。以P <0.05确定显著性。基于来自报告试验的统一标准(Consolidated Standards of Reporting Trials, CONSORT)声明的指导使用意向-治疗(intent-to-treat)分析来分析子问题2到4的结果(Schulz等人，2010)。意向-治疗分析(末次观察值结转(last observat1n carried forward))包括所有结果数据，无论顺从益生菌/安慰剂和退出与否。例如，如果受试者于第8周退出研究，则在退出前发生的所有URI病例均包括在分析中。使用在完整12周干预期内获得的数据实施分析，并且再次使用在干预期的第2-12周获得的数据实施分析，因为第一周期间的URI发作可能并未充分地反映干预。
[0089]如果受试者在数据收集期的任何时间食用了任何抗生素或类固醇，则排除其数据。对于有关与干预的顺从性的分析来说，包括在数周期间的受试者数据，在此期间他们食用其益生菌/安慰剂至少5次。如果受试者连续两日或更多日未能完成调查，并且没有传达在那些日他们是否罹患URI，则将所述数据视为“缺失”。
[0090]健康相关生活质量:URI的持续时间
[0091]如果受试者在URI发作期间未能完成调查，但指出他们在缺席调查日的前一日和后一日正罹患URI，则假设他们在缺席调查日罹患URI ;并且然后将所述缺席调查日包括在持续时间计算中。基于三个因素做出这种假设:1)临床观察结果指示症状通常每日持续直到消失；2) ‘疾患结束’是通过受试者对I号问题连续两日回答‘没有不舒服’来定义的(Barrett等人，2009);和3)所述假设同样地适用于两个组，因此限制了偏倚。
[0092]健康相关生活质量:URI的严重程度
[0093]如果受试者在URI发作期间连续两日或更多日缺席调查，或在URI发作的第一日或最后一日未能完成调查，则不计算该URI的症状严重程度/功能状态评分。在其中受试者在URI发作期间的一或多个非连续日缺席调查的其它病例下，通过对来自缺失数据点前一日和后一日的严重程度评分取平均值来内插缺席调查日的严重程度评分。做出这种假设的原因在于URI症状的严重程度似乎以线性方式随时间而变化(Barrett等人，2009);并且所述假设同样地适用于两个组，因此限制了偏倚。
[0094]从WURSS-21生成两次HRQL评分。第一次HRQL评分与URI发作的持续时间有关并且第二次HRQL评分评价了症状严重程度与功能状态两者。报告了总样本中和每个连续变量内的第一次和第二次HRQL评分，其分别表示为每次URI发作的日数和平均AUC。通过将所有患病日内的每日评分(响应可在0-133范围内)相加来计算AUC (Barrett等人,2009)。将每次URI视为单独的病例，例如，如果受试者50在数据收集期间具有两次URI，则单独地报告每次URI。报告了这些连续变量的描述性统计(平均值、中值、范围和标准偏差)。连续变量的正态分布是使用夏皮罗-威尔克统计(Shapiro-Wilk)评价的。小于或等于0.05的P值指示与正态的偏差。如果数据是正态分布的，则使用独立样本T检验来确定益生菌组与安慰剂组之间的差异。如果数据不是正态分布的，则使用曼-惠特尼U检验(Mann-WhitneyU test)(独立T检验的非参数等同物)来对数据进行分析。
[0095]结果
[0096]231名受试者同意参与研究，并且被随机分配给安慰剂组或益生菌组。在初始登记于研究中的231名受试者中，14% (η = 33 ;安慰剂，η = 20,61% ;益生菌，η = 13,39% )未能参加基线测试阶段和/或未能食用至少一剂量的安慰剂或益生菌。上述33名受试者不包括于任何数据分析中。在初始登记的231名受试者中，86% (η = 198 ;安慰剂，η = 97,49% ;益生菌，η = 101，51%)参加了基线测试并且食用了至少一剂量的安慰剂或益生菌；并且这描述了称作这一记录的剩余部分的总样本的意向-治疗样本。在这198名受试者中，保留率是91% (N = 180 ;安慰剂，η = 85，47%益生菌，η = 95,53% )0
[0097]在总样本中的198名受试者中,4% (η = 8 ;安慰剂，η = 4, 50% ;益生菌，η = 4,50%)没有参与数据收集期的某段(即，他们未能接收新的益生菌/安慰剂供给和/或未进行每日调查)。这8名受试者选择不退出研究；并且将其来自主动参与周的数据包括在统计分析中。
[0098]在研究期内报告了总共43起不良事件(AE)。所述不良事件均未满足标题为“致IRB的人类受试者研究报告中的未预料到的问题/不良事件(Unanticipated Problems/Adverse Events in Human Subjects Research Report to IRB)，，的 UMDNJ IRB 的表格(新泽西医科和牙科大学伦理审查委员会，2006b)描述的45CFR第46部分中所规定的未预料到的问题的准则。
[0099]在所报告的43起AE中，自我诊断的病毒性胃肠感染是最常报告的(η = 19，44%;安慰剂，η = 9，47%;益生菌，η = 10，53% )，这是可以预测到的，因为所述研究是在急性病毒性胃肠炎的发生率最高的冬季月份期间进行的。增加的肠胃气胀和胃气胀是已知与食用益生菌相关的潜在副作用，并且是发生在16%受试者(η = 7 ;安慰剂，η = 4，57%;益生菌，η = 3,43% )中的第二大常见的不良事件。
[0100]来自曼-惠特尼U检验的关于ΒΜΙ、年龄、重量和腰围的结果证明这些特性在组间没有显著差异(P>0.05)。来自独立样本t检验的结果指示高度在组间没有显著差异。(t=1.344(196) ,P = 0.181)。
[0101]总样本中76% (η = 151)的受试者是女性；并且费希尔精确检验(Fisher’s exacttest)指示男性和女性的分布在益生菌组与安慰剂组之间没有显著差异(P = 0.242)。
[0102]费希尔精确检验指示种族的分布在益生菌组与安慰剂组之间没有显著差异(P =
0.185)。总样本(N = 198)中的绝大多数受试者(83%，n = 165)将他们自己分类为‘白人或高加索人’。皮尔逊卡方检验(Pearson ch1-square test)指示种族性(即，‘白人或高加索人’、‘黑人或非洲裔美国人’和‘其它’)的分布在组间没有显著差异(x 2 = 0.283(2)，P = 0.868) ο
[0103]在总样本中的198名受试者中，39% (η = 77 ;安慰剂，η = 39，51 % ;益生菌，η =38,49% )没有经历过任何URI。在剩余的61% (η = 121 ;安慰剂，η = 58,48% ;益生菌，η = 63,52% )中，在数据收集期期间报告了 167例URI(安慰剂=83例，50%，益生菌，η=84例，50% )。这167例URI用于评价总样本中以及组内和组间的URI发作的发生率。有36例(安慰剂=13，36%，益生菌=23，64% )受试者至少连续两日缺席调查，并且没有通过电话、文本消息或电子邮件传达他们在那些日是否罹患URI ;因此，将这些数据视为缺失。
[0104]为了检查在研究进程内URI的发生率，自我报告的发生率是以周呈现并审查的。绝大多数URI病例发生于数据收集期的前5周期间(η = 105,63% ;安慰剂，η = 51,49% ；益生菌，η = 54,51% ),而仅有 16% (η = 27 ;安慰剂,η = 14,17%;益生菌,η = 13,15% )的URI病例发生于所述研究的最后4周期间。
[0105]在数据收集期内，在总共198名受试者中，42% (η = 84)经历过一次URI，而所有受试者中的19% (η = 37)经历过超过一次的URI。URI的发生率在安慰剂组与益生菌组之间无显著差异。
[0106]问卷有三项亚指标(鼻部症状、咽喉症状和活动/功能项目)。因此，为了确认调查的可靠性，在自我报告的URI的第三日使用严重程度评分单独地计算每个亚指标的CronbachjSQ。鼻部症状、咽喉症状和活动/功能项目的Cronbach’s α在0.900-0.964范围内，指示良好可靠性。此外，每个项目与每个亚指标的总评分之间的相关性全部大于0.6，指示良好相关性。
[0107]使用自我报告数据来评价URI的局限性在于一些URI症状类似于过敏症状(例如，鼻溢液)；因此，这一研究可能将过敏发作不正确地分类为URI。所述研究尝试通过在冬季和早春期间收集绝大多数数据、排除患有慢性过敏的受试者并且将受试者随机地分配给治疗组和比较组来将对于内在效度的这一威胁降到最低。另外，在研究期间报告的167例URI中，仅16%发生于过敏季节期间；并且过敏季节期间报告的URI的百分比在安慰剂组与益生菌组之间是类似的(分别为17%和15% )。
[0108]图8详细描述了来自总样本(N= 198)中每日的可用数据。益生菌对URI期间的HRQL的作用考虑了疾患的持续时间。在数据收集期报告的167例URI (安慰剂，η = 83例，50% ;益生菌，η = 84例，50% )中，计算了 158例(95% ;安慰剂=79例，50% ;益生菌=79例，50% )的持续时间并且计算了 143例(86% ;安慰剂=69例，48% ;益生菌=74例，52% )的严重程度。
[0109]在这167例中，有119例(71% ;安慰剂=55例，46% ;益生菌=64例，54% )具有完整数据，其中是在URI的所有连续日且在URI前一日和URI的后一日完成的。计算了具有完整数据的所有URI例的发生率、持续时间和严重程度。
[0110]具有不完整数据(也就是说，在URI期间或在URI记录前一日或后一日数据缺失，η = 48例，29% )的所有URI均包括在发生率的计算内，但在这些病例的一些中仅计算了持续时间和严重程度，如方法部分(第109-110页)中所指示和下文所概述的:
[0111]在具有不完整数据的48例中，总共有15例(31%;安慰剂，η = 10，67%;益生菌，η = 5,33%)受试者在URI期间的两个或更多个连续日和/或URI的第一日或最后一日缺席调查，并且传达他们在缺席调查日‘不舒服’或‘没有不舒服’。这15例用于计算持续时间，而非严重程度。在具有不完整数据的48例URI中，有24例(50% ;安慰剂，η = 14，58%;益生菌，η = 10,42% )受试者在URI期间的一或多个非连续日缺席调查。在这24例的8例(33% ;安慰剂，η = 4,50% ;益生菌，η = 4,50% )中，受试者传达他们在缺席调查日‘不舒服’或‘没有不舒服’。在其它16例(67%，安慰剂，η = 10,63% ;益生菌，η = 6，38%)中，假设受试者在缺席调查日正罹患URI。上述24例URI用于计算持续时间与严重程度两者，因为每日严重程度评分是通过对来自缺席调查前一日和后一日的严重程度评分取平均值内插的。
[0112]上呼吸道感染期间的健康相关生活质量
[0113]在总样本(N = 198)中，有总共1003日URI (安慰剂，η = 562,56% ;益生菌，η=441,44% )。图1和相应的表提供了关于总样本中和按组的URI的持续时间的描述性统计。图1中还展示了安慰剂组和益生菌组的平均URI持续时间。安慰剂组的平均URI持续时间与益生菌组相比长1.5日。夏皮罗-威尔克统计指示安慰剂或益生菌组的URI的持续时间都不是正态分布的(分别为0.865，ρ〈0.0001，和0.745，ρ〈0.0001)。因此，使用非参数检验来确定益生菌组与安慰剂组之间的差异。曼-惠特尼U检验指示，与益生菌组(Mdn =4)相比,安慰剂组(Mdn = 6)中的URI持续时间显著更大，U = 2530.00, z = -2.07, p =
0.001 (单尾的)。安慰剂组具有86.97的平均等级并且益生菌组具有72.03的平均等级。
[0114]图2和相应的表详细描述了总样本中和按组的通过WURSS-21生成的URI的严重程度评分。图2中还展示了每组的平均严重程度评分。安慰剂组(157.30)与益生菌组(100.43)之间的平均严重程度评分有57%差异(即，57分)。夏皮罗-威尔克统计指示安慰剂组或益生菌组的严重程度评分都不是正态分布的(分别为0.743，p〈0.0001，和0.660，p〈0.0001)。因此，使用非参数检验来确定所述组间的差异。曼-惠特尼U检验指示，与益生菌组(Mdn = 58)相比，安慰剂组(Mdn = 88)中的URI严重程度评分显著更高，U =1965.00, z = -2.38, P = 0.0003 (单尾的)。安慰剂组具有80.52的平均等级并且益生菌组具有64.05的平均等级。
[0115]使用仅在第2-12周获得的数据重复对持续时间和严重程度的分析。与第140-143页上的结果一致，这些额外的分析指示益生菌组与安慰剂组相比，URI的持续时间更短，并且URI的严重程度更低(p〈0.01)。发现表明益生菌组与安慰剂组相比，HRQL更高。
[0116]在发生于数据收集期内的167例URI中，有993日调查(安慰剂，η = 518,52% ；益生菌，η = 475,48% )用于探索单个URI症状(WURSS-21的项目2_11)和功能任务受损(WURSS-21的项目12-20)对总严重程度评分的作用。安慰剂组和益生菌组最频繁报告的症状似乎为‘流鼻涕’ (η = 709,71% ;安慰剂，η = 356,50% ;益生菌，η = 353,50% )和‘疲倦的’ (η = 704,71% ;安慰剂，η = 370,53% ;益生菌，η = 334,47% )0
[0117]如图3中所展示的，与益生菌组相比，安慰剂组中有更高百分比的受试者报告了绝大多数单个症状。一般来说，分级向左倾斜(正倾斜的)，且多数受试者以I (非常轻微)的评分对单个症状进行分级。然而，如图4a中所展示的，与安慰剂组相比，益生菌组中有更高百分比的受试者将症状分级为不太严重(评分为I分、2分、3分或4分)，而与益生菌组相比，安慰剂组中有更高百分比的受试者将症状分级为较严重(评分为5分、6分或7分)。
[0118]图5和6中呈现了与URI对功能任务的干扰有关的响应频率。受URI损害的最不常报告的功能任务是‘在外工作’(η = 217,22% ;安慰剂，η = 133,61% ;益生菌，η = 84，39% )和‘在家工作’(η = 189,19% ;安慰剂，η = 123,65% ;益生菌，η = 66，35%。与益生菌组相比，安慰剂组中有更高百分比的受试者报告了对功能任务的干扰。一般来说，分级向左倾斜(正倾斜的)，且多数受试者以I (非常轻微地)的评分对功能任务进行分级。然而，如图5a中所展示的，与益生菌组相比，安慰剂组中有更高百分比的受试者将功能任务分级为较严重(评分为4分、5分、6分或7分)。
[0119]在总样本中的198名受试者中，报告了 19个缺席的工作日(10%，安慰剂，η = 11，58% ;益生菌，η = 8,42% )和49个缺学日(25%，安慰剂，η = 34,69% ;益生菌，η = 15，31% )。总样本中有两名受试者(1%，安慰剂，η = 1,50% ;益生菌，η = 1,50% )在经历URI后缺席了小于7日的每周调查，并且没有指出他们是否因URI而缺席了工作或上学。在总共198名受试者中，94% (η = 186 ;安慰剂，η = 92，50%;益生菌，η = 94,51% )指出他们没有因URI而缺席任何工作日。
[0120]在总样本中的198名受试者中，绝大多数(η = 171,86% ;安慰剂，η = 79，46% ；益生菌，η = 92,54% )指出他们没有因URI而缺席任何上学。与安慰剂组相比，益生菌组中有更多受试者实现了 O缺学日(η的差异=13，9.7%)。曼-惠特尼U检验指示，与益生菌组(Mdn = O)相比，安慰剂组(Mdn = O)中缺学日数显著更高,U = 4421.00, ζ = -0.45,P = 0.002 (单尾的)。安慰剂组具有104.42的平均等级并且益生菌组具有94.77的平均等级。
[0121]使用仅在第2-12周期间获得的数据重复对因URI发作而缺席的工作和上学日的分析。这些额外的分析指示，缺席的工作日数在组间是相同的(ρ>0.05)，而与安慰剂组相t匕，益生菌组中缺席的上学日数显著更低，p〈0.05 (单尾的)。
[0122]参考文献
[0123]Barrettj B.，Brown, R.L，Mundtj M.P.，Thomas, G.R.，Barlow, S.K.，Highstromj A.D., &Bahrainian, M.(2009).Validat1n of a short form Wisconsin Upper RespiratorySymptom Survey(WURSS-21).Health Quality of Life Outcomes，7，76-96.
[0124]Berggren，A.，Lazou，A.，I，Larsson，N.，&0nning，G.(2011).Randomised, double-blind and placebo-controlled study using new prob1ticlactobacilli for strengthening the body immune defence against viralinfect1ns.European Journal of Nutrit1n, 50, 203-210.
[0125]de Vrese M.，Rautenbergj P.，Lauej C.，Koopmansj M.，Herremansj T.，&Schrezenmeir,J.(2005).Prob1tic bacteria stimulate virus-specific neutralizingantibodies following a booster pol1 vaccinat1n.European Journal ofNutrit1n, 44，406-413.
[0126] Rautavaj S.E., Salminenj S., &Isolauri, E.(2009).Specific prob1tics inreducing the risk of acute infect1ns in infancy—a randomised, double-blind, piacebo-controlled study.Br J Nutrj 101，1722-1726.
【权利要求】
1.一种包含鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)和动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animal is subsp.lactis)的组合物，其用于减少青少年和成人的上呼吸道感染(URI)的持续时间。
2.一种包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物，其用于降低青少年和成人的上呼吸道感染(URI)的严重程度。
3.一种包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物，其用于提高患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的健康相关生活质量(HRQL)。
4.一种包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物，其用于减轻患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的咽喉痛的症状。
5.一种包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物，其用于减轻患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的咽喉刺痒的症状。
6.一种包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物，其用于减轻患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的咳嗽的症状。
7.一种包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物，其用于减轻患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的沙哑的症状。
8.一种包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物，其用于减轻患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的胸闷的症状。
9.一种包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物，其用于降低患有上呼吸道感染(URI)的青少年和成人的中值严重程度评分。
10.根据权利要求1到9中任一权利要求所述的供使用的组合物，其中所述鼠李糖乳杆菌是保藏为ATCC53103的菌株并且所述动物双歧杆菌乳亚种是保藏为DSM15954的菌株。
11.根据权利要求1到11中任一权利要求所述的供使用的组合物，其中将施用约16个cfu到112个cfu的每日量的鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种。
12.根据权利要求1到12中任一权利要求所述的供使用的组合物，其中所述组合物将每日施用。
13.根据权利要求1到10中任一权利要求所述的供使用的组合物，其中所述包含鼠李糖乳杆菌和动物双歧杆菌乳亚种的组合物将施用至少一周时期。
【文档编号】A61P11/02GK104080465SQ201380005369
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2013年1月14日 优先权日:2012年1月13日
【发明者】T·J·史密斯 申请人:科.汉森有限公司