脂质衍生的中性纳米颗粒的制作方法
【专利摘要】本发明公开了新型脂质、使用该化合物制备的脂质体组合物以及中和或以其他方式改性此类脂质体组合物的相关方法。本文所述的脂质可用作例如脂质体媒介物来促进囊封的多核苷酸向靶细胞的传递，以及随后此类靶细胞的转染。在某些实施方案中，包括脂质体传递媒介物的一种或多种化合物可以被中和或进一步改性，使得脂质体传递媒介物的性质被改性。
【专利说明】脂质衍生的中性纳米颗粒
[0001] 相关申请
[0002] 本申请要求2012年3月29日提交的美国临时申请No. 61/617,478的权益，该申 请的公开内容以引用方式并入本文。
【背景技术】
[0003] 使用脂质体传递媒介物来促进治疗剂的位点特异性传递代表了快速发展的药品 传递领域；然而治疗剂高效传递至靶细胞和组织、以及随后转染这些靶细胞和组织仍具有 技术上的挑战。尽管多种脂质和脂质体基传递系统在促进治疗剂向靶细胞和组织的传递中 具有可利用性，但是在体内和体外应用中仍有许多挑战。例如脂质体基传递系统的突出缺 点涉及脂质体的构建，其中所述的脂质体具有足够的稳定性，以及此类脂质体能够高效地 将它们囊封的内容物释放至靶细胞和组织的能力。
[0004] 就用于传递核酸的脂质体传递媒介物的研发而言，引入阳离子脂质作为脂质体媒 介物的成分代表了重要的进步。阳离子脂质体的性质（包括例如它们的稳定性、尺寸和表 面电荷）使得它们成为用于将负电荷核酸囊封并传递至靶细胞和组织的理想载体。包括此 类阳离子脂质体媒介物的阳离子成分（例如阳离子脂质和/或阳离子聚合物）会促进脂质 体的脂质双层与负电荷核酸之间的相互作用，并由此增加此类阳离子脂质体媒介物的囊封 效率。所制备的包括阳离子脂质（例如1，2_二油酰基-3-三甲基铵-丙烷（DOTAP))的脂 质体部分由于它们的正的表面电荷，已经证明了高效地装载负电荷核酸的能力，并且使用 阳离子脂质体媒介物可以促进浓度适当超过使用中性脂质体媒介物所取得的浓度的核酸 被囊封。例如在某些情况下，阳离子脂质纳米颗粒系统可以表征为当装载负电荷核酸时，囊 封效率接近 100% (例如参见Li,etal.PharmRes.，2007, 24:438-449)。
[0005] 但是，用于构建此类脂质体媒介物的许多阳离子脂质通常是有毒的，因此特别在 传递治疗有效量的囊封内容物（例如核酸）所需的量方面，可以限定使用。进一步限定电 荷脂质体系统的使用，则在将它们给予受试对象后，此类电荷系统可以快速地由系统性的 循环中清除，由此限制了它们在靶细胞和组织中的分布和累积。为了克服与阳离子脂质体 媒介物的使用相关的技术挑战，已经使用了多成分脂质体传递系统。具体而言，使用可电离 的脂质来制备脂质体媒介物已经用作响应于脂质体所暴露的环境PH(例如生理pH)的变化 来调控脂质体电荷的手段。因此，此类可电离的脂质容许它们表面电荷中的变化，这种变化 可以被操纵，从而例如增加脂质体的囊封效率。
[0006] 尽管之前所述的限制，以及脂质体基的媒介物促进囊封物质向靶细胞的传递的能 力，脂质体基的媒介物是用于治疗剂的有吸引力的载体，并将该主题保持为不断研发的努 力。尽管就囊封和稳定性而言，包括阳离子成分的脂质体基媒介物已经显示出有前途的结 果，但是仍非常需要改善的脂质体基传递系统。
[0007] 与电荷脂质体基媒介物相反，中性脂质体媒介物通常表征为具有相对改善的药代 动力学性质。而且，部分由于使用中性脂质体观察到囊封的效率低，所以实施有限的研究来 调查中性脂质体将治疗剂传递至靶细胞的用途。仍需要新型的脂质，该脂质引入了用于传 递囊封的核酸和多核苷酸的多功能方法。特别需要保持了中性和电荷脂质体传递系统的一 些有利特征的脂质纳米颗粒。
[0008] 发明概述
[0009] 本发明描述了新型脂质及包括此类脂质的脂质体组合物。此外，本发明公开了使 用此类脂质（例如可切割的阳离子脂质）作为脂质体组合物的成分、从而有助于将一种或 多种治疗剂（例如治疗多核苷酸）囊封于此类脂质体组合物中的方法。此外，本发明还公 开了制备中性脂质体组合物的方法，其中所述的中性脂质体组合物可表征为具有高的囊封 效率（例如相对传统的中性脂质体组合物而言）。本发明所述的新方法、脂质和组合物使用 了多功能策略来促进将一种或多种治疗剂囊封于中性脂质体组合物中，以及随后使用此类 脂质体组合物转染一种或多种靶细胞。
[0010] 本发明公开了新型脂质及使用此类脂质来调控例如脂质体媒介物（例如脂质纳 米颗粒）（其中引入了此类新型脂质）的性质（例如表明电荷）的相关方法。例如在某些 实施方案中，本发明涉及操纵脂质体媒介物（例如脂质纳米颗粒）的方法，其中所述的脂质 体媒介物包括至少一种具有可释放的极性头部基团的脂质，所述的方法包括脂质体媒介物 与一种或多种试剂接触从而使极性头部基团由所述的至少一种脂质上释放的步骤。在一些 实施方案中，在此类极性头部基团由脂质上释放时，剩余脂质体媒介物的表面电荷被改变。 例如在极性头部基团由脂质上释放后，脂质体媒介物可以具有总体为中性的表面电荷（例 如大约-2. 5至大约+2. 5mV的净表面电荷或zeta电位）。备选地，在极性头部基团由脂质 上释放后，脂质体媒介物可以具有总体为负的表面电荷（例如低于大约_25mV的净表面电 荷或zeta电位）。
[0011] 在某些实施方案中，本发明公开的脂质通常包括极性头部基团（例如以R1基团表 示），其通过连接基团与亲脂性尾部基团（例如以R2基团表示）结合。在一些实施方案中， 连接基团（或者包括功能基团，该功能基团）在暴露于一种或多种试剂或环境（例如在暴 露于酸性环境或还原条件时）时容易进行化学或酶切割（例如通过还原或水解）。在一个 实施方案中，本发明涉及中和或以其他方法改变脂质体组合物的方法。通常，此类脂质体组 合物包括至少一种脂质，该脂质具有可释放的头部基团、尾部基团以及具有式I结构的可 切割的连接基团：
[0012]
【权利要求】
1. 一种中和脂质纳米颗粒的方法，其中所述的脂质纳米颗粒包括至少一种具有可释放 的极性头部基团的脂质，所述的方法包括使所述的脂质纳米颗粒与一种或多种试剂接触的 步骤，从而使所述的极性头部基团由所述的脂质上释放并使所述的脂质纳米颗粒由此被中 和。
2. 权利要求1所述的方法，其中所述的脂质具有以下结构：
其中&为所述的可释放的极性头部基团，并且选自咪唑、胍盐、亚胺、烯胺、氨基、可任 选地取代的烷基氨基和可任选地取代的吡啶基；其中R2选自可任选地取代的、可变的饱和 或不饱和的烷基，可任选地取代的、可变的饱和或不饱和的酰基，可任选地取代的吡啶基，
其中馬和1?4均独立地选自可任选地取代的、可变的饱和或不饱和的C6-C2(l烷基，和可 任选地取代的、可变的饱和或不饱和的C6-C2(l酰基；并且 其中n为0或任何正整数。
3. 权利要求2所述的方法，其中所述的一种或多种试剂能够以还原方式切割所述的脂 质的-硫键。
4. 权利要求3所述的方法，其中在以还原方式切割所述的脂质的二硫键时，由所述的 脂质上释放： 并且所述的脂质由此被中和。
5. 权利要求3所述的方法，其中在以还原方式切割所述的脂质的二硫键时，剩余的中 性脂质具有以下结构：
6. 权利要求5所述的方法，其进一步包括改性所述的剩余的中性脂质的步骤，从而形 成改性的脂质； 其中所述的改性的脂质具有以下结构：
其中R5选自聚合物，肽，靶向配体，可任选地取代的、可变的饱和或不饱和的烷基，及加 帽结构；以及 其中n为0或任何正整数。
7. 权利要求6所述的方法，其中所述的改性中性脂质的步骤包括在氧化条件下使所述 的中性脂质与具有以下结构的第二化合物接触，从而形成二硫键并由此使所述的中性脂质 被改性：
8. 权利要求6所述的方法，其中所述的改性中性脂质的步骤包括使所述的中性脂质与 具有以下结构的第二化合物接触：
其中R5选自聚合物，肽，靶向配体，可任选地取代的、可变的饱和或不饱和的烷基，及加 帽结构；以及 其中n为0或任何正整数。
9. 权利要求6所述的方法，其中所述的改性中性脂质的步骤包括使所述的中性脂质与 具有以下结构的第二化合物接触：
其中R5选自聚合物，肽，靶向配体，可任选地取代的、可变的饱和或不饱和的烷基，及加 帽结构；以及 其中n为0或任何正整数。
10. 权利要求6所述的方法，其中R5为靶向配体，其选自肽、适体、维生素和寡核苷酸。
11. 权利要求6所述的方法，其中R5为靶向配体，其选自阿朴脂蛋白-B、阿朴脂蛋白-E、 葡萄糖、半乳糖和甘露糖。
12. 权利要求6所述的方法，其中R5为聚乙二醇。
13. 权利要求6所述的方法，其中R5为可任选地取代的、可变的饱和或不饱和的Ci-C% 烧基。
14. 权利要求1所述的方法，其中所述的一种或多种试剂为还原剂。
15. 权利要求14所述的方法，其中所述的还原剂选自三（2-羧基乙基）膦（TCEP)、 巯基乙醇（P-ME)、二硫苏糖醇（DTT)、谷胱甘肽、二硫赤藓醇和它们的组合。
16. 权利要求15所述的方法，其中所述的还原剂为溶液形式。
17. 权利要求15所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒与所述的还原剂接触至少大约 5分钟。
18. 权利要求15所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒与所述的还原剂接触至少大约 1小时。
19. 权利要求15所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒与所述的还原剂接触至少大约 3小时。
20. 权利要求15所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒与所述的还原剂接触至少大约 24小时。
21. 权利要求15所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒的zeta电位在该脂质纳米颗粒 与所述的还原剂接触之前为至少大约25mV，而在该脂质纳米颗粒与所述的还原剂接触之后 为低于大约5mV。
22. 权利要求15所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒的zeta电位在该脂质纳米颗粒 与所述的还原剂接触之后为大约-25.OmV至大约5.OmV。
23. 权利要求21所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒的zeta电位在该脂质纳米颗粒 与所述的还原剂接触之后为大约-5.OmV至大约5.OmV。
24. 权利要求1所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒进一步包括选自PEG改性的脂 质、非阳离子脂质和辅助脂质中的一种或多种化合物。
25. 权利要求1所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒囊封了一种或多种治疗剂。
26. 权利要求1所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒在中和该脂质纳米颗粒之前装 载一种或多种治疗剂。
27. 权利要求25所述的方法，其中所述的治疗剂包括一种或多种多核苷酸。
28. 权利要求27所述的方法，其中所述的一种或多种多核苷酸包括mRNA。
29. 权利要求28所述的方法，其中所述的mRNA包括选自锁核酸（LNA)、2' -0-烷基-RNA 单元、2' -OMe-RNA单元、2' -氨基-DNA单元和2' -氟代-DNA单元中的一种或多种核苷酸改 性。
30. 权利要求27所述的方法，其中所述的中和的脂质纳米颗粒包括至少0. 1iig囊封的 多核苷酸。
31. 权利要求27所述的方法，其中所述的中和的脂质纳米颗粒包括至少0. 5yg囊封的 多核苷酸。
32. 权利要求27所述的方法，其中所述的一种或多种多核苷酸选自反义寡核苷酸、 siRNA、miRNA、snRNA、snoRNA和它们的组合。
33. 权利要求27所述的方法，其中所述的一种或多种多核苷酸包括一种或多种LNA。
34. 权利要求27所述的方法，其中所述的一种或多种多核苷酸包括DNA。
35. 权利要求27所述的方法，其中所述的一种或多种多核苷酸包括RNA。
36. 权利要求35所述的方法，其中所述的RNA选自mRNA、siRNA、snoRNA、microRNA和 它们的组合。
37. 权利要求35所述的方法，其中所述的RNA编码了蛋白质或酶。
38. 权利要求37所述的方法，其中所述的蛋白质或酶选自人类生长激素、红细胞生 成素、a1-抗胰蛋白酶、酸性a葡萄糖苷酶、芳基硫酸酯酶、羧基肽酶N、a半乳糖苷酶 A、a-L-艾杜糖苷酸酶、艾杜糖酸酯-2-硫酸酯酶、艾杜糖酸酯硫酸酯酶、N-乙酰葡糖 胺-1-磷酸转移酶、N-乙酰氨基葡糖苷酶、a-氨基葡糖苷乙酰基转移酶、N-乙酰葡糖胺 6_硫酸酯酶、N-乙酰半乳糖胺-4-硫酸酯酶、0 -葡萄糖苷酶、半乳糖-6-硫酸硫酸酯酶、 3 -半乳糖苷酶、3 -葡萄糖醛酸酶、葡萄糖脑苷脂酶、硫酸乙酰肝素硫酸脂酶、肝素-N-硫 酸酯酶、溶酶体酸脂酶、透明质酸酶、半乳糖脑苷脂酶、编码鸟氨酸转氨甲酰酶（0TC)、氨甲 酰磷酸合成酶1(CPS1)、精氨酸琥珀酸合成酶（ASS1)、精氨酸代琥珀酸裂解酶（ASL)、精氨 酸酶1 (ARG1)、囊性纤维化跨膜转运调节因子（CFTR)、存活运动神经元（SMN)、因子IX、因子VIII和低密度脂蛋白受体。
39. -种根据权利要求1所述的方法制备的中性脂质纳米颗粒。
40. 权利要求39所述的中性脂质纳米颗粒，其进一步包括一种或多种治疗剂。
41. 一种根据权利要求9所述的方法制备的改性的脂质纳米颗粒。
42. 权利要求41所述的改性的脂质纳米颗粒，其进一步包括一种或多种治疗剂。
43. -种治疗方法，其包括将权利要求40或42所述的脂质纳米颗粒给予受试对象。
44. 一种将一种或多种治疗剂囊封于中性脂质纳米颗粒中的方法，该方法包括以下步 骤：(a)使用所述的一种或多种治疗剂装载包括至少一种可还原的阳离子脂质的脂质纳米 颗粒；以及（b)使所述的脂质纳米颗粒与一种或多种还原剂接触，使得所述的脂质纳米颗 粒被中和。
45. 权利要求44所述的方法，其中所述的中性脂质纳米颗粒的囊封效率为至少50%。
46. 权利要求44所述的方法，其中所述的中性脂质纳米颗粒的囊封效率为至少75%。
47. 权利要求44所述的方法，其中所述的中性脂质纳米颗粒的囊封效率为至少90%。
48. 权利要求44所述的方法，其中所述的可还原的阳离子脂质具有以下结构：
49. 权利要求44所述的方法，其中所述的可还原的阳离子脂质具有以下结构：
50. 权利要求44所述的方法，其中所述的可还原的阳离子脂质具有以下结构：
51. 权利要求44所述的方法，其中所述的一种或多种还原剂选自三（2-羧基乙基）膦 (TCEP)、0-巯基乙醇（0-ME)、二硫苏糖醇（DTT)、谷胱甘肽、硫赤藓醇和它们的组合。
52. 权利要求44所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒与所述的还原剂接触至少大约 5分钟。
53. 权利要求44所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒与所述的还原剂接触至少大约 1小时。
54. 权利要求44所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒与所述的还原剂接触至少大约 3小时。
55. 权利要求44所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒与所述的还原剂接触至少大约 24小时。
56. 权利要求44所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒的zeta电位在该脂质纳米颗粒 与所述的一种或多种还原剂接触之前为至少大约25mV，而在该脂质纳米颗粒与所述的一种 或多种还原剂接触之后为低于大约5mV。
57. 权利要求56所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒的zeta电位在该脂质纳米颗粒 与所述的一种或多种还原剂接触之后为大约-25.OmV至大约5.OmV。
58. 权利要求56所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒的zeta电位在该脂质纳米颗粒 与所述的一种或多种还原剂接触之后为大约-10.OmV至大约5.OmV。
59. 权利要求44所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒进一步包括选自PEG改性的脂 质、非阳离子脂质和辅助脂质中的一种或多种化合物。
60. 权利要求44所述的方法，其中所述的治疗剂包括一种或多种多核苷酸。
61. 权利要求60所述的方法，其中所述的一种或多种多核苷酸选自反义寡核苷酸、 siRNA、miRNA、snRNA、snoRNA和它们的组合。
62. 权利要求60所述的方法，其中所述的一种或多种多核苷酸包括一种或多种LNA。
63. 权利要求60所述的方法，其中所述的一种或多种多核苷酸包括DNA。
64. 权利要求60所述的方法，其中所述的一种或多种多核苷酸包括RNA。
65. 权利要求64所述的方法，其中所述的RNA为mRNA并且其中所述的mRNA包括选自 锁核酸（LNA)、2' -0-烷基-RNA单元、2' -OMe-RNA单元、2' -氨基-DNA单元和2' -氟代-DNA 单元中的一种或多种核苷酸改性。
66. 权利要求64所述的方法，其中所述的RNA选自mRNA、siRNA、snoRNA、microRNA和 它们的组合。
67. 权利要求64所述的方法，其中所述的RNA编码了蛋白质和酶。
68. -种根据权利要求44所述的方法制备的中性脂质纳米颗粒。
69. -种治疗方法，其包括将权利要求68所述的中性脂质纳米颗粒给予受试对象。
70. -种中和脂质纳米颗粒的方法，其中所述的脂质纳米颗粒包括至少一种具有可释 放的极性头部基团的脂质，所述的方法包括使所述的脂质纳米颗粒与一种或多种试剂接触 的步骤，从而使所述的极性头部基团由所述的脂质上释放并使所述的脂质纳米颗粒由此被 中和；其中所述的脂质具有以下结构：
其中&为所述的可释放的极性头部基团，并且选自咪唑、胍盐、亚胺、烯胺、氨基、可任 选地取代的烷基氨基和可任选地取代的吡啶基；其中R2选自可任选地取代的、可变的饱和 或不饱和的烷基，可任选地取代的、可变的饱和或不饱和的酰基，可任选地取代的吡啶基，
其中馬和1?4均独立地选自可任选地取代的、可变的饱和或不饱和的C6-C2(l烷基，和可 任选地取代的、可变的饱和或不饱和的C6-C2(l酰基； 其中x为可切割的连接基团，其选自二硫化物、酯、腙、亚胺、缩醛、缩酮、cis-乌头 酰基、原酸酯、酐、硫代丙酸酯、乙烯醚、氨基磷酸酯、GLFG、Val-Cit、GG、AA、GGGF和PVGLIG;以及 其中n为0或任何正整数。
71. 权利要求70所述的方法，其中所述的可切割的连接基团为二硫化物。
72. 权利要求71所述的方法，其中所述的一种或多种试剂为还原剂。
73. 权利要求72所述的方法，其中所述的还原剂选自三（2-羧基乙基）膦（TCEP)、 巯基乙醇（P-ME)、二硫苏糖醇（DTT)、谷胱甘肽、二硫赤藓醇和它们的组合。
74. 权利要求72所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒与所述的还原剂接触至少大约 5分钟。
75. 权利要求72所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒与所述的还原剂接触至少大约 1小时。
76. 权利要求72所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒与所述的还原剂接触至少大约 3小时。
77. 权利要求72所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒与所述的还原剂接触至少大约 24小时。
78. 权利要求72所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒的zeta电位在该脂质纳米颗粒 与所述的一种或多种还原剂接触之前为至少大约25mV，而在该脂质纳米颗粒与所述的一种 或多种还原剂接触之后为低于大约5mV。
79. 权利要求78所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒的zeta电位在该脂质纳米颗粒 与所述的还原剂接触之后为大约-25.OmV至大约5.OmV。
80. 权利要求78所述的方法，其中所述的脂质纳米颗粒的zeta电位在该脂质纳米颗粒 与所述的还原剂接触之后为大约-5.OmV至大约5.OmV。
81. 权利要求71所述的方法，其中所述的一种或多种试剂为酶。
82. 权利要求81所述的方法，其中所述的酶选自碱性磷酸酶、羧基肽酶G2、胞嘧啶脱氨 酶、硝基还原酶、葡萄糖苷酸酶、a-半乳糖苷酶、硫氧还蛋白和Y干扰素诱导的溶酶体 巯基还原酶（GILT)。
83. 权利要求71所述的方法，其中所述的脂质具有以下结构：
84. 权利要求71所述的方法，其中所述的脂质具有以下结构：
85. 权利要求71所述的方法，其中所述的脂质具有以下结构：
86. 权利要求70所述的方法，其中所述的可切割的连接基团为酯。
87. 权利要求86所述的方法，其中所述的一种或多种试剂在接触所述的脂质纳米颗粒 时水解所述的酯。
88. -种根据权利要求70所述的方法制备的脂质纳米颗粒。
89. 权利要求88所述的脂质纳米颗粒，其中所述的脂质纳米颗粒的囊封效率为至少 50%。
90. 权利要求88所述的脂质纳米颗粒，其中所述的脂质纳米颗粒的囊封效率为至少 75%。
91. 权利要求88所述的脂质纳米颗粒，其中所述的脂质纳米颗粒的囊封效率为至少 90%。
92. 权利要求88所述的脂质纳米颗粒，其进一步包括一种或多种治疗剂。
93. 权利要求92所述的脂质纳米颗粒，其中所述的治疗剂为mRNA。
94. 权利要求92所述的脂质纳米颗粒，其中所述的脂质纳米颗粒包括至少0. 1yg囊封 的治疗剂。
95. 权利要求92所述的脂质纳米颗粒，其中所述的脂质纳米颗粒包括至少0. 5yg囊封 的治疗剂。
96. 权利要求93所述的脂质纳米颗粒，其中所述的mRNA包括选自锁核酸（LNA)、 2' -0-烷基-RNA单元、2' -OMe-RNA单元、2' -氨基-DNA单元和2' -氟代-DNA单元中的一种 或多种核苷酸改性。
97. 权利要求93所述的脂质纳米颗粒，其中所述的mRNA包括一种或多种硫代磷酸酯核 苷酸间连键基团。
98. 权利要求93所述的脂质纳米颗粒，其中所述的mRNA包括所有硫代磷酸酯核苷酸间 连键基团。
99. 权利要求93所述的脂质纳米颗粒，其中所述的mRNA包括独立地选自5-甲基胞核 嘧啶、异胞核嘧啶、假异胞核嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶、6-氨基嘌呤、2-氨基嘌 呤、肌苷、假尿苷、2-硫脲嘧啶、二氨基嘌呤和2-氯-6-氨基嘌呤胞核嘧啶中的至少一种改 性的核苷酸。
100. -种调控脂质体媒介物的表面电荷的方法，其中所述的脂质体媒介物包括至少一 种含有可释放的极性头部基团的脂质；所述的方法包括使所述的脂质体媒介物与至少一种 试剂接触的步骤；其中在所述的脂质体媒介物与所述的至少一种试剂接触时，所述的极性 头部基团由所述的脂质上释放，并且所述的脂质体媒介物的表面电荷由此被调控。
101. 权利要求100所述的方法，其中所述的脂质体媒介物进一步包括选自PEG改性的 脂质、非阳离子脂质和辅助脂质中的一种或多种化合物。
102. 权利要求101所述的方法，其中所述的脂质体媒介物的净表面电荷在该脂质体媒 介物与所述的至少一种试剂接触之前为至少大约+25mV，而在该脂质纳米颗粒与所述的至 少一种试剂接触之后为低于大约-5.OmV。
103. 权利要求101所述的方法，其中所述的脂质体媒介物为脂质纳米颗粒。
104. 权利要求100所述的方法，其中所述的经调控的脂质体媒介物的净表面电荷为低 于大约-25mV。
105. 权利要求100所述的方法，其中所述的经调控的脂质体媒介物的净表面电荷为低 于大约_50mV至大约_10mV。
106. 权利要求100所述的方法，其中所述的经调控的脂质体媒介物的净表面电荷为低 于大约_5.OmV至大约+5.OmV。
107. 权利要求100所述的方法，其中所述的试剂为选自三（2-羧基乙基）膦（TCEP)、 巯基乙醇（P-ME)、二硫苏糖醇（DTT)、谷胱甘肽、二硫赤藓醇和它们的组合中的还原 剂。
108. 权利要求100所述的方法，其中所述的脂质具有以下结构：
109. 权利要求100所述的方法，其中所述的脂质具有以下结构：
110. 权利要求100所述的方法，其中所述的脂质具有以下结构：
【文档编号】A61K9/127GK104487055SQ201380026368
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2013年3月29日 优先权日:2012年3月29日
【发明者】F·德罗莎, B·C·吉尔德, M·哈特莱因 申请人:夏尔人类遗传性治疗公司